聚合酶链反应结合斑点杂交技术检测伤寒沙门氏菌的临床应用研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因Ⅵ区一段特异性的ＤＮＡ片断，再用地高辛标记探针与之杂交检测，并用非伤寒沙门氏菌作对照，结果仅伤寒沙门氏菌阳性。实验表明，当标本中伤寒沙门氏菌含量达１０ｃｆｕ／ｍｌ时，即可检出。在伤寒发病早期，当机体抗体水平尚处于低水平时，应用ＰＣＲ斑点杂交检测伤寒沙门氏菌可提高伤寒的诊断率；在伤寒病程后期，应用ＰＣＲ斑点杂交检测治疗后带菌状态具有重要价值。     

巢式聚合酶链反应检测伤寒沙门氏菌

本文采用扩增伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因Ⅵ区一段特异性片段的两对引物，用ＰＣＲ法检测伤寒沙门氏菌与非伤寒沙门氏菌，结果表明阳性符合率达１００％，且反应体系中达１０２ｃｆｕ／ｍｌ浓度时，伤寒沙门氏菌即可检出。检查伤寒确诊患者粪便标本４份，ＰＣＲ扩增均阳性。     

利用PCR技术快速检测引起食物中毒的肠炎沙门氏菌

ＰＣＲ技术近几年来在分子生物学临床医学领域中得到了迅速的发展。目前,这种方法在微生物病原学诊断方面上也得到了广泛应用。为了快速、准确、不漏检引起食物中毒的病原菌（尤其是病情已得到控制的患者的大便已不存在活菌或含菌量很少,以及外环境和食品）,我们作细菌培养的同时,采用ＰＣＲ技术对其进行检测．１９９６年６月６日至８日广州市某聋人学校发生食物中毒,流行病学方面怀疑是由沙门氏菌为病原菌引起的食物中毒,我们采了５４份住院病人的肛拭子,用肉汤增菌６ｈ后,吸０．１ｍｌ制备模板,作ＰＣＲ检测,同时进行细菌学常规…     

鼠疫耶尔森氏菌F1抗原在鼠伤寒沙门氏菌中的表达及其保护力

目的：对鼠疫耶尔森氏菌Ｆ１抗原在鼠伤寒沙门氏菌中的表达及其保护力进行研究。方法：ＰＣＲ、化学转化及电穿孔法。结果：采用ＰＣＲ方法，特异地扩增了鼠疫菌Ｆ１抗原ｃａｆ操纵子的５Ｋｂ基因片段。将ＰＣＲ产物与质粒载体连接后，经化学方法转化大肠杆菌ＬＥ３９２，获得ｃａｆ基因克隆子，所得克隆子能较好地表达Ｆ１抗原基因。应用电穿孔法将克隆子的重组质粒转入发鼠伤寒沙门氏菌Ｇ３０内获得转化子，其Ｆ１抗原表达水平与大     

一步单管反转录PCR检测水中甲型肝炎病毒

以往甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）的检测主要依赖细胞培养法，但此法所需时间长、敏感性低、特异性不强。虽然反转录ＰＣＲ等技术已被用于粪便或食品中ＨＡＶ的检测，但常规反转录ＰＣＲ操作繁琐、污染环节多，极易造成污染，致使实验结果不稳定或出现假阳性结果。为克服ＰＣＲ检测ＨＡＶ的缺点和不足，我们在实验基础上建立了一步单管反转录ＰＣＲ技术检测水中的ＨＡＶ，采用热裂解法提取样品中ＨＡＶ病毒的总ＲＮＡ，反转录与ＰＣＲ反应一步进行，整个反应在一个反应管中进行，操作方法较简单，中间可能污染的环节较少，因此，最大限度的减少了由环境造成的可能污染。我们设计合成的引物（Ｈ１—Ｈ２）在ＨＡＶ病毒核酸的ＶＰ１区，只特异地扩增ＨＡＶ核酸片断，具有较强的特异性。改进后的反转录ＰＣＲ的敏感性与常规反转录ＰＣＲ比有所提高，可检测到细胞培养悬液或水中１０个ＴＣＩＤ＿（５０）的ＨＡＶ。     

巢式聚合酶链反应检测伤寒沙门氏菌H及Vi抗原基因的应用研究

应用巢式聚合酶链反应技术，通过两种引物（共四对）分别对伤寒沙门氏菌鞭毛Ｈ和Ｖｉ抗原基因扩增，并用非伤寒沙门氏菌作对照。实验表明，两种基因的扩增产物均是特异的，Ｈ抗原基因引物仅对伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因扩增，Ｖｉ抗原基因引物对伤寒沙门氏菌和丙型副伤寒沙门氏菌Ｖｉ抗原基因扩增，余均为阴性。扩增Ｖｉ抗原基因比扩增Ｈ抗原基因敏感，当反应体系中达０．５个菌细胞时，Ｖｉ抗原基因就可检出，而鞭毛抗原基因则需５个菌细胞。检测９２例伤寒患者血液标本，血培养阳性２８例（３０．４３％），巢式ＰＣＲ检测Ｖｉ抗原基因阳性３３例（３５．８６％），Ｈ抗原基因阳性３１例（３３．７０％）。伤寒发病早期，当机体伤寒特异性抗体尚处于低水平时，应用巢式ＰＣＲ检测Ｖｉ抗原基因，可提高伤寒的诊断率，使该病得到早期治疗     

应用PCR方法检定单核细胞增多性李斯特菌

目的建立单核细胞增多性李斯特菌（单增李斯特菌）快速、敏感、特异的ＰＣＲ诊断方法。方法选取ｈｌｙＡ基因作为靶序列设计一对引物，用该引物对５４株标准李斯特菌和２１株无关菌进行ＰＣＲ扩增，得到进一步验证。采用ＰＣＲ和常规鉴定方法同时对从国内食品分离的３３株李斯特菌进行鉴定。结果可扩增含有保守ＨｉｎｄⅢ切点的７４３ｂｐ片段。表现出极好的单增李斯特菌种特异性。纯培养的检测极限为５５个菌。发现其中１８株用两种方法都鉴定为单增李斯特菌，两种方法的结果完全符合。当用于食物标本检测时，ＰＣＲ反应遭强烈抑制。经过２５小时的增菌培养，对培养物进行化学抽提、纯化的菌体经加热裂解后直接用作ＰＣＲ反应模板，可使抑制作用大大降低。每毫升牛奶人工接种４个菌可用该法特异检出。结论建立了ＰＣＲ方法，可初步用于单增李斯特菌的快速、特异、敏感诊断。     

应用RCP方法检定单核细胞增多性李斯特菌

目的 建立单核细胞增多性李斯特菌（单增李斯特菌）快速、敏感、特异的ＰＣＲ诊断方法。方法 选取ｈｌｙＡ基因作为靶序列设计一对引物，用该引物对５４株标准李斯特菌和２１株无关菌进行ＰＣＲ扩增，得到进一步验证，采用ＰＣＲ和常鉴定方法同时对从国内食品分离的３３株李斯特菌进行鉴定。结果 可扩增含有保守Ｈｉｎｄ Ⅲ切点的７４３ｂｐ片段。表现出极好的单增李斯特菌种特异性。纯培养的检测极限为５５个菌。发现其中１８株     

肠道病毒感染的快速诊断技术

肠道病毒（ＥＶ）感染的临床表现多样，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＥＶ具有快速、敏感和特异的优点，因此适用于ＥＶ感染的早期诊断。本文介绍的逆转录ＰＣＲ、套式ＰＣＲ、竞争性ＰＣＲ等方法在检测ＥＶ中各有特点，而且ＰＣＲ结合特异性ＥＶ引物、抗原捕获、限制性片断长度多态性分析及基因测序等方法还可进行ＥＶ分型。     

PCR与快速免疫法用于沙眼衣原体检测的比较

目的 探讨多聚酶链式反应（ＰＣＲ）在检测泌尿生殖道沙眼衣原体（ＣＴ）的应用价值。方法 １０３例病人分为症状组（７３例）和无症状组（３０例）应用ＰＣＲ和快速免疫法对其进行ＣＴ检测。结果 症状组２种检测结果差异无显性（Ｐ〉０．０５），而无症状组ＰＣＲ法阳性率显高于快速免疫法（Ｐ〈０．０５）。结论 ＰＣＲ可用于无症状患的沙眼衣原体检测。     

聚合酶链反应诊断小儿支原体肺炎及其意义

笔者用聚合酶链反应技术对７０例小儿支原体肺炎鼻咽分泌物中肺炎支原体ＤＮＡ进行检测，采用快速制备ＤＮＡ模板的方法，简化了ＰＣＲ实验过程，结果５３例阳性，阳性率７５．７％，而用支原体培养方法，阳性率仅５３．８％（Ｐ〈０．０５），差异有显著性，对其中１３例ＰＣＲ阳性患者经红霉素静脉滴注治疗１０～１４天后，复测ＰＣＲ，８例转阴性，５例仍为阳性，该方法既保持了ＰＣＲ的酶感性和特异必，又简化过程，能够检测到相     

改进一步单管RT—PCR检测水中肠道病毒

为克服常规反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）检测肠道病毒的缺点和不足，在实验基础上建立了一步单管ＲＴ－ＰＣＲ检测水中的脊灰病毒，采用热裂解法提取样品中脊灰病毒的总ＲＮＡ，反转录（ｃＤＮＡ）与ＰＣＲ反应在ＰＣＲ仪上一步进行，操作方法简单，中间可能污染的环节少，最大限度地减少了由环境造成的可能污染。设计合成的引物Ｅ１－Ｅ２取自多种肠病毒保守的５′非编码区核酸序列，可用于多种肠道病毒的扩增；Ｐ１－Ｐ２为脊灰病毒３个血清型的共用引物，只扩增脊灰病毒，具有较强的特异性。改进后的ＲＴ－ＰＣＲ的敏感性与常规ＲＴ－ＰＣＲ比有所提高，可检测到细胞培养悬液或水中１０个ＰＦＵ的脊灰病毒。     

PCR技术应用于霍乱监测的效果探讨

为探讨ＰＣＲ 检测技术在霍乱监测中的应用价值，应用ＰＣＲ 技术与培养法平行检测各类标本８６４ 份，结果ＰＣＲ 检出阳性率为７．４１ ％ ，明显高于培养法的４．５１ ％ （χ２ ＝ ５．９５ ，Ｐ＝ ０．０１４７ ＜ ０．０５） 。其中健康接触者ＰＣＲ检出率为１３．７３ ％ ，明显高于培养法的１．９６ ％ （χ２ ＝ ４．８８ ，Ｐ＜ ０．０５） ；水标本ＰＣＲ检出率９．２３ ％ ，也明显高于培养法的４．７６ ％ （χ２ ＝ ４．４８ ，Ｐ＜ ０．０５） 。表明ＰＣＲ 法既特异又敏感、快速，在霍乱监测中有很好的应用前景，可在有条件的地方和单位推广应用     

婴儿沙眼衣原体肺炎的诊断和治疗

近年来应用ＰＣＲ检测手段后，各地对新生儿，婴儿沙眼衣原体肺炎已有报道，本文１９９６年３月～１９９８年３月对住院治疗的感染性肺炎婴儿２２７例，进行咽拭子ＰＣＲ检测ＣＴ－ＤＮＡ，现分析如下。１　对象和方法１．１　对象　凡小于１岁以内的住院患儿经确诊符合感...     

四种方法检测伤寒的实验观察

四种方法检测伤寒的实验观察郴州市第二人民医院（４２３０００）郭燕临床上沿用血培养及肥大反应（ＷＲ）检测伤寒沙门氏菌及其抗体。鉴于伤寒的临床表现渐趋不典型，需提高检测的敏感性和特异性，其中酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）测ＳＴ—Ａｇ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）测ＳＴ...     

聚合酶链反应检测慢性淋球菌感染

６８例拟诊慢性淋病患者的尿道和宫颈分泌物标本作淋球菌ＰＣＲ聚合栈链反应检测与淋球菌培养和直接涂片法比较,结果ＰＣＲ阳性率为７２．１％,培养阳性率３３．８％,标本直接涂片阳性率为２７．９％,而培养阳性者,ＰＣＲ检测全部阳性,但在涂片１９例阳性中,有２例培养和ＰＣＲ检测均阴性。由此可见ＰＣＲ对诊断慢性淋病具有灵敏度高、特异性强、简便、快速的新方法,帮笔者认为ＰＣＲ检测既可作为急慢性感染的诊断依据,又可     

嗜肺军团菌聚合酶链反应检测方法及其应用研究

根据嗜肺军团菌基因组ＤＮＡ的种特异性ＤＮＡ片段序列，合成一对引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）。经琼脂糖凝胶电泳、ＥＢ染色结果表明，一条８７０ｂｐ的核苷酸区带为嗜肺军团菌１～１４血清型菌株所共有。ＰＣＲ检测水中军团菌，其敏感性为３５０ｃｆｕ／ｍｌ，而用同位素标记探针、斑点杂交法检测，其敏感性为４３ｃｆｕ／ｍｌ。ＰＣＲ检测人工感染嗜肺军团菌的豚鼠组织标本，阳性率为８３．３％，而细菌分离培养的阳性率仅为２６．６％。在现场调查中，用ＰＣＲ法初步验证了一起由Ｌｐ１０引起的军团菌病爆发。上述结果表明，ＰＣＲ法能快速、敏感、特异性检测嗜肺军团菌感染。     

复合多聚酶链检测淋病奈瑟菌和溶脲脲原体

目的 评价用ＰＣＲ民时检测标梧的淋球菌和溶脲脲原体。方法 通过筛选不同引物，确定了两引物对的最佳浓度配比。结果 特异性和敏感性评价表明，该复合系统是淋菌和溶脲脲原体特异的，可分别检出２７０ｆｇ、６４ｆｇ的相应ＤＮＡ。结论 临床标本证明，复合ＰＣＲ检测淋球菌与单一ＰＣＲ结果符合率达１００％，检测溶脲脲原体与单一ＰＣＲ结果符合率达９９％。     

聚合酶链反应和平板计数检测土拉弗氏菌气溶胶稳定性的比较

为了提高检测生物气溶胶的特异性和敏感性，分别用平板计数和聚合酶链反应（ＰＣＲ）对土拉弗氏菌气溶胶的稳定性进行了研究。结果表明ＰＣＲ对细菌数目的估计高于平板计数结果，并且ＰＣＲ在采样后的３ｈ就可以得出定性结果，而土拉弗氏菌平板计数则需要３～７天。     

聚合酶链反应鉴定伤寒沙门氏菌

聚合酶链反应鉴定伤寒沙门氏菌北京市卫生防疫站（１０００１３）王劲，张凤琴，任保国我们引入先进的分子生物学技术，以自行设计的寡核苷酸序列作引物，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对伤寒菌进行鉴定，其结果特异、快速、简便。现报告如下。材料和方法：（１）菌株来...