DJ-1降低细胞内ROS并抑制细胞凋亡保护黑素细胞抵抗H202诱导的氧化应激北大核心CSCD

目的探讨DJ-1蛋白在原代培养的人黑素细胞中的表达以及抵抗HO诱导的氧化应激作用。方法免疫荧光方法鉴定DJ-1在原代培养黑素细胞中的表达;使用不同浓度HO处理黑素细胞24 h,改良MTT法选取适宜HO浓度为后续实验条件;Western印迹检测HO处理组细胞内DJ-1表达变化;采用反向转染方法 ,实验分为空白对照组(不含siRNA片段)、阴性对照组(转染非特异性siRNA)和实验组(转染DJ-1特异性siRNA)。光学显微镜观察细胞贴壁后形态学差异;改良MTT法、荧光探针2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinV-FITC/PI)分别检测HO处理后细胞活力变化、细胞内活性氧(ROS)水平及凋亡比例。结果免疫荧光显示DJ-1在黑素细胞细胞核和胞质中均表达,以细胞核表达为主;细胞活力随HO浓度增高呈剂量依赖关系下降,与对照组比较,0.5 mmol/L HO处理24 h后,细胞活力开始下降(P<0.05)。做诱导氧化应激的实验条件;Western印迹结果显示,0.5 mmol/L HO处理细胞24 h后,DJ-1表达增高为HO未处理组的2.23倍(P<0.05)。干涉DJ-1表达后,实验组黑素细胞形态与空白对照组相比,树突减少缩短,胞质空泡化改变。使用0.5 mmol/L HO处理24 h后,siRNA-DJ-1组细胞活力为对照组的35%(P<0.05)。细胞内ROS的荧光密度值(FI)值(902±40)和凋亡比例(58%±6.1%)增高,与空白对照组细胞内ROS的FI值(529±32)和凋亡比例(30%±3.8%)相比,P值均<0.05。结论 DJ-1在黑素细胞中能够通过降低细胞内ROs水平和抑制细胞凋亡,从而抵抗HO所诱导的氧化应激。     

复方中药对黑素细胞迁移和黏附的影响

目的:确定复方中药乙醇提取物对体外培养黑素细胞黏附、迁移的影响.方法:复方中药用70%乙醇提取,正常人黑素细胞来自包皮环切术切取的包皮组织.用包被纤维黏连蛋白的培养板检测黑素细胞黏附,用微孔膜研究黑素细胞迁移.结果:复方中药1号和3号乙醇提取物可促进黑素细胞黏附和迁移(P<0.05),而1、2和3号可以促进黑素细胞迁移(P<0.05).结论:部分复方中药可能通过促进黑素细胞黏附和迁移途径对白癜风起治疗作用.     

自体黑素细胞移植治疗白癜风研究进展

自体黑素细胞移植分为培养的黑素细胞移植和非培养的黑素细胞移植,前者包括纯黑素细胞培养移植和黑素细胞与角质形成细胞共培养移植,后者是指表皮细胞悬液移植。和自体表皮片移植相比,自体黑素细胞移植可以用小面积正常皮肤治疗较大面积的白斑,尤其是培养的黑素细胞移植。近年来广大学者在黑素细胞的培养技术、改进移植方法等方面不断探索,取得了一定的进展。     

皮肤黑素细胞储库等方面的研究进展

黑素细胞产生黑素,形成皮肤的正常颜色。然而白癜风皮损区的黑素细胞明显减少甚至消失。因此,要使白癜风皮损局部恢复色素,黑素细胞从何而来,这是人们关心的热点。近来有人指出,人皮肤中存在黑素细胞储库,对白癜风的治疗起重要作用。现就皮肤中黑索细胞储库及其相关方面的研究,作一简要的介绍。     

影响黑素细胞代谢的相关因素研究进展

黑素细胞损伤在白癜风的发病机制中起重要作用。各种应激因素、遗传因素、免疫因素、内分泌因素以及超微结构和微环境因素等都可能影响黑素细胞代谢,导致黑素生成障碍或破坏黑素细胞,引起色素脱失。本文系统性回顾了影响黑素细胞代谢各类相关因素的研究进展。     

黑素细胞在白癜风中的免疫损伤

有关白癜风病因的各种学说中自身免疫学说得到了越来越多的重视。近期研究发现白癜风皮损中黑素细胞的破坏和消失与患者的体液及细胞免疫作用相关。而黑素细胞在合成黑素的同时具有免疫功能 ,并有可能在自身的免疫破坏过程中起了一定的作用。     

七组中药醇提物通过HaCaT细胞对黑素细胞株BIOBR增殖和黑素合成的影响

目的研究黑胡椒等中药醇提物通过角质形成细胞对黑素细胞增殖及黑素合成的间接作用．探讨其外用治疗白癜风的可能机理。方法选取七组中药的醇提物，其中Ⅰ号：透骨草、浮萍各等份；Ⅱ号：白芷、蛇床子各等份；Ⅲ号：补骨脂；Ⅳ号：黑胡椒；Ⅴ号：黑胡椒、补骨脂各等份；Ⅵ号：女贞子；Ⅶ号：复方卡力孜然酊．加入到HaCaT细胞培养基中，采用ELISA法测定上述中药干预后HaCaT细胞上清液中内皮素-1和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的含量；MTT法测定经中药干预后HaCaT细胞上清液对永生化黑素细胞株B10BR增殖的影响，多巴氧化法检测酪氨酸酶活性，氢氧化钠裂解法测定黑素含量。结果Ⅱ号和Ⅴ号中药能明显刺激HaCaT细胞分泌内皮素-1（P〈0．01及P〈0．05）．Ⅲ号、Ⅳ号和Ⅶ号可促进HaCaT细胞分泌bFGF（P〈0．01，P〈0．05及P〈0．05）。经各组中药处理后的HaCaT细胞培养上清液，Ⅲ号、Ⅵ号能显著促进B10BR的增殖（P〈0．01），Ⅰ号、Ⅱ号和Ⅲ号能明显提高B10BR酪氨酸酶活性（P〈0．01）；Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅵ号、Ⅶ号能明显促进B10BR黑素的合成（P〈0．01或〈0．05）。结论部分中药醇提物治疗白癜风有效可能与中药促进了角质形成细胞分泌细胞因子、改变表皮的微环境有关。     

黑素细胞与白癜风发病机制的研究进展

白癜风是一种常见的色素脱失病,其表现为皮肤暴露及易摩擦部位出现大小不等的乳白色色素脱失斑,白斑部的毛发也可完全变白。人类皮肤的基本颜色是由黑素细胞合成黑素体被运送至表皮角质形成细胞所形成的,皮肤色素沉着的微观过程大体可以分为四个部分：①黑素细胞内黑素小体的装配与黑素合成;     

中药对黑素细胞生物学活性影响的研究进展

黑素细胞的数量及其生物学活性是引起色素性皮肤病的主要原因,传统中医中药治疗白癜风已在临床取得较好疗效,众多学者用不同的细胞株系及不同的研究方法观察了中药(包括单味、复方、单体)对黑素细胞酪氨酸酶活性、黑素细胞增殖和黑素生成的影响。初步阐述了中药治疗白癜风的有效机制。     

人类毛囊黑素细胞的研究现况

毛囊黑素细胞在形态分布、抗原表达及功能作用上与表皮黑素细胞不同;其生物学特性受角朊细胞、激素和紫外线等机体内、外多种因素的调控。白癜风皮损中表皮黑素细胞缺失,而毛囊黑素细胞成为其色素恢复的再生来源;相反,斑秃时毛囊黑素细胞受累,而表皮黑素细胞不受影响。研究影响毛囊黑素细胞生存和病变的因素及其机制将对了解白癜风和斑秃的病因、发病机理和开发新的治疗方法具有重要意义。     

单味中药对黑素细胞黏附和迁移的影响

目的　探讨单味中药乙醇提取物对体外培养黑素细胞黏附、迁移的影响。方法　 14味中药分别用 70 %乙醇提取 ,正常人黑素细胞来自包皮环切术切取的包皮 ,用包被纤维连接蛋白的 48孔培养板检测黑素细胞黏附 ,用微孔膜研究黑素细胞迁移。结果　丹参、菟丝子和红花的乙醇提取物可促进黑素细胞黏附 ,刺蒺藜和黄芪可促进黑素细胞迁移 ,而补骨脂、女贞子和白芷可同时促进黑素细胞黏附和迁移。结论　丹参、菟丝子、红花、刺蒺藜、黄芪、补骨脂、女贞子和白芷可能通过增加黑素细胞黏附和 /或改变迁移途径对白癜风产生治疗作用     

人参皂苷CK对H2O2诱导人黑素细胞凋亡的保护作用

目的探讨人参皂苷化合物K(CK)对H₂O₂诱导来自新生儿中度色素沉着性包皮的正常人表皮黑素细胞(HEMn-MP)细胞凋亡的保护作用及可能机制。方法采用磷酸激酶抗体阵列检测HEMn-MP细胞各阵列蛋白磷酸化水平;比色法测定各组HEMn-MP细胞半胱天冬酶(Caspase-3)活性。结果CK减弱H₂O₂诱导的HEMn-MP细胞P53蛋白磷酸化;CK降低H₂O₂诱导的Caspase-3活化。结论人参皂苷CK可能通过抑制细胞凋亡对H₂O₂诱导的黑素细胞损伤有保护作用,因而可作为治疗白癜风的潜在药物。     

FK506对培养的人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨FK506对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法体外人A375黑素瘤细胞培养,MTT法测定FK506对黑素瘤细胞增殖的影响,NaOH法测定FK506对黑素合成的影响。结果浓度为101~102nmol/L的FK506对黑素瘤细胞增殖无影响,103~104nmol/L的FK506对黑素瘤细胞增殖有抑制作用,但是101~104nmol/L的FK506对黑素瘤细胞的黑素合成均有促进作用,其中以101~103nmol/L的FK506对黑素合成的促进作用最为显著。结论FK506能够直接促进培养的黑素瘤细胞的黑素合成。     

干扰素γ/Fas介导的HaCaT细胞凋亡及8种人参皂甙的作用

目的体外诱导角质形成细胞凋亡并研究人参皂甙对细胞凋亡的影响。方法将IFN-γ,Anti Fas Ab作用于体外培养角质形成细胞HaCaT诱导细胞凋亡,并检测人参皂甙对细胞凋亡的影响。结果50 ng/mL IFN-γ和25 ng/mL Anti Fas Ab共同作用可以诱导21.5%角质形成细胞HaCaT凋亡。8种人参皂甙中,Mx,CK和Re可逆转Anti Fas Ab诱导的HaCaT细胞凋亡,逆转率分别为18.4%,14.5%和9.6%。结论IFN-γ和Anti Fas Ab共同作用可诱导HaCaT细胞凋亡。人参皂甙Mx,CK和Re对Anti Fas Ab诱导的HaCaT细胞凋亡有一定的抑制作用。     

单味中药提取物对体外培养的黑素细胞酪氨酸酶基因和c-kit基因表达的激活作用

目的 研究补骨脂、白芷、夏枯草、川芎和墨旱莲单味中药提取物对黑素细胞的酪氨酸酶基因和原癌基因c-kit蛋白表达的影响，以及对总蛋白合成的影响。方法 采用蛋白印迹法检测了酪氨酸酶蛋白和干细胞因子受体kit蛋白含量的变化；595nm比色标准曲线测定黑素细胞可溶性总蛋白含量。结果 白芷、补骨脂、夏枯草、川芎和墨旱莲对黑素细胞可溶性总蛋白合成和c-kit基因蛋白表达有促进作用，其中白芷和补骨脂对c-kit基因蛋白表达的促进作用为69．44％和58．43％；夏枯草、墨旱莲和川芎对酪氨酸酶基因的蛋白表达有一定的促进作用。结论 在白癜风治疗中传统中药具有较好的疗效．可能与酪氨酸激酶受体蛋白含量的提高相关，即通过SCF／kit蛋白途径起作用，因此可以通过该途径进一步筛选更多治疗白癜风的单味中药。     

鬼臼毒素纳米脂质载体通过线粒体途径诱导人阴道上皮细胞凋亡的机制研究

目的:研究鬼臼毒素纳米脂质载体(POD-NLC)对体外培养的永生化人阴道上皮细胞(VK2/E6E7细胞)线粒体途径相关凋亡基因表达的影响,探索POD-NLC诱导VK2/E6E7细胞凋亡的作用机制。方法:自制0.5%POD-NLC,用不同浓度的POD-NLC(0.25,1μg/mL)和空白NLC作用VK2/E6E7细胞24 h后,采用实时荧光定量核酸扩增法(Real-time Quantitative PCR,qPCR)检测bcl-2、bax、caspace-3、caspase-9等mRNA表达水平,Western Bolt检测bcl-2、bax蛋白的表达水平。结果:POD-NLC呈剂量依赖性的上调bax mRNA的表达水平(P值均<0.01),同时也增加caspase-3、caspase-9 mRNA的表达(P值均<0.05),并降低bcl-2 mRNA表达量(P值均<0.01);空白-NLC组对上述mRNA的影响均无统计学意义(P值均>0.05)。POD-NLC可剂量依赖性地上调bax蛋白表达量(P值均<0.01),同时下调bcl-2蛋白表达量(P值均<0.01),但各药物处理组之间差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论:POD-NLC能通过线粒体途径诱导VK2/E6E7细胞发生凋亡。     

中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡的研究

目的以不同剂量的中波紫外线(UVB)诱导体外培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)凋亡,探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是否参与凋亡过程。方法取对数生长期的HaCaT细胞,分别用10 mJ/cm2,15 J/cm2,20 J/cm2,25 J/cm2,30 J/cm2的UVB照射,并于照射24 h后检测HaCaT细胞的增殖活性,分析HaCaT细胞的凋亡率,测定HaCaT细胞上清液中TNF-α的水平,观察细胞形态及凋亡细胞特征。结果在10~30 mJ/cm2的UVB照射下,随照射剂量的增大,细胞的增殖活性逐渐下降,而细胞的凋亡率逐渐增加,当剂量达30 J/cm2时,细胞凋亡率最大,细胞的增殖活性和凋亡率呈直线负相关;随UVB照射剂量的增大,TNF-α的分泌量增加,细胞上清液中TNF-α的分泌量和凋亡率呈直线正相关;倒置显微镜及透射电镜进一步从形态学上证实了细胞的凋亡改变。结论UVB可诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性;照射产生的TNF-α可能参与了其凋亡过程。     

Caspase-3、Survivin在UVB诱导HaCaT凋亡细胞中的表达

目的探讨Caspase-3、Survivin在UVB诱导HaCaT凋亡细胞中的作用。方法研究对象为人角质形成细胞HaCaT细胞,实验分为正常对照组、10、20、40、80 m J/cm^2中波紫外线组(UVB)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察增殖能力;流式细胞仅(FCM)实验检测细胞凋亡;实时定量PCR、Western-blot检测细胞内的Survivin、Caspase-3表达水平。结果与正常对照组相比,NB-UVB照射组细胞增殖抑制作用及凋亡明显增强(P<0.05),并随着照射剂量的增加,其细胞凋亡作用增加。同时与正常对照组相比,不同UVB照射剂量组Caspase-3表达均增强,其表达增强程度随着照射剂量的增加而增加,与正常对照组相比,10 m J/cm^2照射组,细胞表达Survivin水平最高(P<0.05),20 m J/cm^2组Survivin表达水平下降,稍低于对照组水平,40、80 m J/cm^2组Survivin进一步下降,较对照组下降明显(P<0.05)。结论 Survivin、Caspase-3参与了UVB诱导HaCaT凋亡细胞。Survivin表达水平与UVB辐射剂量有关。     

白癜风患者皮损中CD4~+,CD8~+T淋巴细胞及朗格汉斯细胞的检测

目的探讨白癜风患者皮损中CD4+,CD8+T淋巴细胞、朗格汉斯细胞(LC)及黑素细胞(MC)在白癜风发病中的作用。方法采用Envision免疫组化染色法,对12例白癜风进展期患者和9例稳定期患者皮损处CD4+,CD8+T淋巴细胞、LC及MC进行检测,并与10例正常人皮肤进行对照。结果白癜风患者皮损中CD4+,CD8+T淋巴细胞、LC表达较对照组显著增多(P<0.01),而MC表达较对照组显著减少(P<0.01)。结论白癜风患者皮损中LC,CD4+,CD8+T淋巴细胞异常表达可能参与白癜风的发病,其作用模式可能是LC抗原递呈,CD4+,CD8+T淋巴细胞浸润破坏或攻击MC,从而引起白癜风患者表皮基底层的MC减少或消失,导致白癜风的发生。     

鬼臼毒素纳米脂质载体通过非Caspase依赖途径诱导VK2/E6E7细胞凋亡机制的研究

目的:探讨鬼臼毒素纳米脂质载体(POD-NLC)诱导人永生化阴道上皮细胞(VK2/E6E7)凋亡的作用及机制。方法:取对数期生长VK2/E6E7细胞,分别加入POD-NLC和Caspase抑制剂Z-VAD-FMK共同培养24小时。实验分为4组:A组:空白对照组;B组:0.25μg/mL POD-NLC+Caspase抑制剂组;C组:1μg/mL POD-NLC+Caspase抑制剂组;D组:空白NLC+Caspase抑制剂组。采用流式细胞仪检测ROS水平,qPCR检测AIF mRNA表达,蛋白印迹检测各组细胞AIF、cyt-C蛋白表达。结果:B组、C组均可以上调ROS、AIF、cyt-C水平,与A组及D组相比均有统计学差异(P值均<0.05);B组与C组AIF mRNA及AIF蛋白表达无统计学差异(P值均>0.05);ROS、cyt-C各组间比较均有统计学意义(P值均<0.05)。结论:鬼臼毒素纳米脂质载体可以通过非Caspase依赖途径诱导永生化阴道上皮细胞凋亡。