三种脱钙液对骨组织表面脱钙效果的比较

<正>骨组织是一种致密的结缔组织,细胞基质含有大量钙盐沉积,质地坚硬^[1]。骨组织必须进行脱钙处理才能制片,而脱钙过度会导致骨组织的结构被破坏,相关细胞表面抗原丢失,严重影响HE染色制片和免疫组化制片效果,影响病理诊断^[2]。脱钙液种类繁多,且尚未有相关文献报道各种脱钙液表面脱钙效果的优劣。本实验拟采用临床工作中常用的三种脱钙液对骨组织表面脱钙效果进行比较,为病理医师选用合适的表面脱钙液提供参考。     

免疫组化染色中骨组织脱钙方法

由于骨组织的特殊性,制备好的骨组织标本免疫组化并不是一件容易的事。由于骨组织中60％以上为钙盐组成的羟基磷灰石结晶,因而脱钙是制备标本的重要一环。一些强酸如盐酸,硝酸等虽能快速有效除去骨组织中钙盐,但对其中的抗原蛋白也产生了致命性破坏。本实验仿照目前国外利用EDTA低温脱钙方法,取得了比较满意的结果。     

骨组织脱钙及其脱钙后染色的研究

近年来为配合白血病、淋巴瘤等疾病的诊断而开展了骨髓穿刺活体组织病理检查,特别是2003年以来,为了配合“非典”患者治疗后期相继出现股骨头坏死等病症的科研工作,我科先后为中国医学科学院实验动物研究所及中国人民解放军军事医学科学院等科研单位制作了大量实验动物的骨组织标本的病理学切片。在制作这些骨组织病理切片的“脱钙-染色过程中”遇到了一些问题：骨组织脱钙不足（脱钙液浓度过低、时间过短）造成组织太硬,不易切片且极易脱片;骨组织脱钙过度（脱钙液浓度过高,时间过长）严重影响骨髓组织细胞染色效果,造成细胞核无法正常着色,要么细胞核不着色或着色很浅亦或被伊红染成红色,从而影响对病变组织的病理诊断及实验动物的研究工作。为解决出现的上述问题,我们在工作中认真仔细地分析研究了骨组织的特点,经过反复实验,摸索总结出一套适用于骨穿组织及实验动物骨组织的“脱钙-染色方法”,并获得了满意的结果,现将将此方法作一简单介绍以供读者参考。     

Formical-4脱钙剂在骨组织脱钙中的应用

在骨组织病理制片中，脱钙是至关重要的步骤之一。目前使用的脱钙剂多为无机强酸类制剂，虽脱钙效果较好，但常造成组织形态，特别是细胞结构的破坏，使得病理形态观察受到影响。笔者使用一种快速脱钙剂Formical-4，不仅能够保持组织形态良好，亦能用于特殊染色和免疫组化标记，现介绍如下。     

骨关节炎兔膝关节样品两种脱钙方法的比较

骨关节炎是一种主要侵及关节软骨及其周围结构的退行性疾病.随着老龄化增长,该疾患的发病率日趋增高,危害人类的健康,而引发国内外科研工作者的重视.随着对骨关节炎发病机制的不断深入研究,促使人们不断地发现和探索新的治疗药物.在此过程中,组织学及其相关检测,如免疫组织化学等,可成为判定药物疗效及探索其发病机制的关键环节和重要手段.在这些检测中,研究较多关注的是关节软骨及软骨下骨.     

介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用

骨、含有骨质的肿瘤及钙化组织和骨髓穿刺组织很坚硬,将其制成几微米切片相当困难,常用的方法是先经脱钙处理,使其变软后再切片,所以脱钙是这类组织制作病理切片的关键技术.脱钙液和脱钙方法很多,传统方法脱钙一般用硝酸,其效果不稳定,骨组织脱钙不足,切片破碎甚至切不成片且极易脱片;骨组织脱钙过度,破坏组织的形态结构和细胞成分的性质,造成细胞核不着色或着色很浅,从而影响对病变组织的病理诊断.已有学者对此进行了改进[1~4], 但目前尚无公认的理想方法.为此我们在工作中反复摸索,结合Plank-Rycho脱钙液总结出一套改良的脱钙液并获得了满意效果,现将此方法介绍如下.     

有脱钙骨组织标本超薄切片的制作方法

在骨超微结构研究和临床外检工作中，我们利用Epon812含钙盐的骨组织标本来制备超薄切片。由于不脱钙的超薄切片在电镜下显示了骨组织的真实结构，更利于深入地研究骨组织的形态学。     

骨髓活检标本脱钙方法的比较

在病理外检制片和科研工作中,血液科送检较多的是骨髓活检标本,也是较难制片的组织之一。骨髓石蜡切片需经完全脱钙,才能制成理想的石蜡切片。如何合理有效地选择脱钙液,这对于制片的完整,保存骨髓细胞结构使ＨＥ染色清晰,提高骨髓制片质量是非常重要的。我科从１９９７年初开始采用混合脱钙液代替传统的５％硝酸用于骨髓活检标本脱钙,经实际应用效果良好。１　　材料与方法①　混合脱钙液［１］：甲醛１００　ｍｌ,甲酸８０　ｍｌ,盐酸７０　ｍｌ,三氯化铝６０　ｇ,冰醋酸２５　ｍｌ,生理盐水１００　ｍｌ。②　经１０％甲醛固…     

四种脱钙液对骨组织HE和免疫组化染色的影响

<正>骨是由黏多糖和蛋白纤维构成的有机质及沉积于其中的无机盐组成,无机盐主要是羟基磷灰石结晶,其中大部分为磷酸钙和碳酸钙;由于骨的特殊构成,使骨组织质地较硬,较难制成切片影响诊断工作,因此制片过程中必须对其脱钙。目前临床工作中较常见的脱钙液是复合酸类脱钙液,是将2种或2种以上酸类脱钙液联合使用,或在单纯酸内加入     

加热式磁力搅拌器在骨组织脱钙中应用

骨组织脱钙制片是临床病理诊断中常用的一种手段 ,而选择适当的脱钙液、脱钙方法以及掌握脱钙的时间往往与骨组织的制片质量密切相关。为了了解经脱钙后的骨组织能否应用于免疫组化和特殊染色 ,进行必要的鉴别诊断 ,我们在实践工作中特对需要脱钙的骨组织进行了实验比较 ,现将结果报道如下。1　材料与方法1 1　材料和仪器　收集临床手术切除的骨肿瘤、病变骨以及钙化组织标本共 5 0例 ,不同的标本根据制片要求用骨锯或骨锉处理成薄片备用。用于脱钙的磁力加热搅拌器为江苏省金坛医疗仪器厂生产的金怡牌 78 1型。1 2　方法　将准备脱钙的标本…     

病理骨组织脱钙时间对结核PCR的影响

正结核分枝杆菌可侵入机体的各个器官,骨关节结核是由于结核分枝杆菌侵入骨、关节、滑膜和脊柱引起的,大多发生在脊椎和关节~([1])。本文收集73例经临床诊断为结核的手术或穿刺活检病理骨组织标本(剔除干酪坏死、肉芽组织不需脱钙处理的病灶组织)用不同脱钙时间处理后,采用结核PCR检测,分析阳性率,为寻找合适的病理骨组织脱钙时间提供依据。1材料与方法1.1材料收集贵州省人民医院病理科2016年5月~     

EDTA脱钙在骨组织大切片制片中的应用效果

骨肿瘤病理大切片可以观察组织全貌,准确评估病灶大小、侵袭范围以及手术切缘,对于确定骨肿瘤的边界和临床预后非常重要.但骨组织中丰富的钙盐导致完整制片困难,尤其是大切片的制作.普通酸性脱钙液因破坏细胞及组织结构,影响染色、镜下观察和分子检测,已不适用于日常工作,而EDTA脱钙液性质温和,能有效保护组织内的核酸和组织抗原,日...     

不同脱钙方式对骨组织样本不同病理分析的影响

<正>骨与软组织肿瘤生物学特性复杂,在临床病理工作中有时依据形态学较难做出准确的病理诊断,需行免疫组化、FISH、PCR、Sanger测序及NGS等检测^[1]。骨组织质地坚硬,应使用脱钙液将组织软化后制片。目前,临床使用较多的仍为混合酸性脱钙液,其脱钙速度快,但易对组织抗原及DNA造成不可逆的损伤; EDTA性质温和,对组织抗原及核酸保存较好,但缺点是脱钙时间久且效果差。有研究显示改良EDTA常温处理骨髓样本20～24 h,HE染色佳,免疫组化染色强度适中,定位准确^[2]。     

骨和牙切片的甲酸氯化铝脱钙液及脱钙方法

骨和牙体组织非常坚硬,将其制成几微米薄切片难度较大。常用的方法是先脱钙,使组织变软后再切片,所以脱钙是非常关键的技术。脱钙不好切片破碎甚至切不成片,破坏组织的形态结构和细胞成分的性质,染色不佳甚至染不上色,无法进行观察和研究。脱钙液和脱钙方法虽然很多,但目前尚无公认的理想方法,为此我们在骨和口腔疾病诊断及在大骨节病、氟中毒骨病和很多口腔疾病实验研究中,证明甲酸氯化铝脱钙液及脱钙方法效果优良。     

微波快速脱钙及其脱钙液的选择

微波快速脱钙及其脱钙液的选择杨传红，赖晃文，唐赓云，姜秀英骨组织超薄切片的制备是进行骨组织超微结构研究的先决条件。常规脱钙方法时间太长且超微结构保存不良，不利于临床病理的快速诊断。我们选择不同脱钙液在微波条件下探讨快速脱钙的方法，以达到快速诊断的目的...     

不脱钙骨组织包埋技术的改进

在骨组织切片上同时进行组织形态学计量与免疫组化有较大难度。这是因为常用的包埋介质石蜡只能用于不含钙或含钙很少的组织,而骨组织富含钙盐,所以必须先脱钙。脱钙的骨组织可做免疫组化与原位杂交,但骨小梁的结构遭到了破坏,不能进行组织形态学计量,从而丢失了骨的生长与钙化方面的信息。塑料包埋的不脱钙骨组织虽能行组织形态学计量,却难以兼顾免疫组化与原位杂交。因此,建立一种可靠的、简便的且同时适应于三者的不脱钙骨组织包埋方法是骨病理学研究的关键。     

比较两种脱钙液对Kappa/Lambda原位杂交结果的影响

正Kappa/Lambda原位杂交的检测对浆细胞骨髓瘤的诊断帮助很大,能有效减少Kappa/Lambda在免疫组化染色中导致的背景过重从而影响病理医师诊断的问题。然而在日常工作中,不同脱钙液对Kappa/Lambda原位杂交的影响很大,因此本科室对该类问题进行了相关实验,现就不同脱钙液对Kappa/Lambda原位杂交的影响问题进行讨论。     

两种脱钙液对骨髓穿刺组织DNA质量的影响比较

<正>骨髓穿刺组织是病理科常见的标本,随着精准医学的发展和个体化治疗需求的增加,除了进行常规HE染色和免疫组化检测外,还需辅助分子生物学检测。良好的DNA质量是分子生物学检测的前提,脱钙液的选择对DNA质量有重要影响^[1],因此进行分子生物学检测前需要评估脱钙后骨髓穿刺组织DNA质量。混合酸脱钙液和EDTA脱钙液是本科室两种常用的骨髓穿刺组织脱钙液,在常规组织学染色方面已经取得良好的效果,但其对DNA质量的影响尚不清楚。本实验通过提取两种脱钙液脱钙骨髓穿刺组织的DNA,从浓度、纯度、片段长度及RT-PCR检测Ct值比较两种脱钙液对DNA质量的影响,取得较好效果,现报道如下。     

介绍一种骨髓组织脱钙新方法

骨髓组织活检标本来之不易 ,在制片过程中若处理不当 ,会给诊断造成极大的困难。如何既快又好地制作高质量的骨髓病理组织切片对正确诊断尤为重要。笔者通过 2年的反复实践 ,摸索出一种骨髓组织脱钙后的常规制片方法(简称“新法”) ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　标本　中南大学湘雅医院骨髓穿刺的活检组织 4 0例。1.2　试剂　脱钙液 :2 %硝酸 ,即浓硝酸 2ml加 98ml自来水 ;固定液 :10 %福尔马林液 ;染色液 :Gill苏木精 ,沉淀酸化伊红Y乙醇液。1.3　方法　穿刺活检组织入 10 %福尔马林液中固定 30min ;入 2 %硝酸脱钙液 ,室温下脱钙。在…     

塑料包埋非脱钙骨技术在骨组织学与图像分析中的应用

骨是一种坚硬的结缔组织,细胞间质含大量的矿物质、有机盐和无机盐。为获得高质量的骨组织学图像和准确的骨组织计量学参数。我们对非脱钙切片、染色和图像处理做了一些工作,现总结如下。