五倍子配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立五倍子药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法。方法:根据五倍子细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列设计引物,筛选出五倍子的稳定引物区间,并在区间内筛选获得五倍子的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,根据SNP位点设计五倍子特异性鉴别引物WBZ-F、WBZ-R,分别收集五倍子及其混伪品,建立五倍子配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR体系,对该方法进行耐受性和适用性考察。结果:退火温度为53℃,循环36次,五倍子及其配方颗粒经PCR及凝胶电泳后,可在约138 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,伪品倍蛋蚜虫虫瘿无条带。结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别五倍子药材、标准汤剂冻干粉、配方颗粒中的五倍子蚜虫源性成分,也可为其他中药配方颗粒的质量标准研究提供参考。     

蜈蚣配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的 为进一步保障蜈蚣药材及其制品的质量与临床疗效，建立蜈蚣配方颗粒特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴别方法。方法 根据蜈蚣细胞色素C氧化酶亚基3（COX-3）基因序列筛选适用于蜈蚣配方颗粒的稳定引物区间，并在区间内筛选获得蜈蚣及其混伪品的单核苷酸多态性（SNP）位点，设计特异性鉴别引物。分别收集蜈蚣及其混伪品，考察退火温度、循环次数、不同Taq酶、DNA模板量、不同PCR仪、不同引物量等因素对PCR鉴别方法的影响，建立并优化PCR反应体系，并对此方法的专属性及适用性进行考察验证。结果 PCR鉴别反应体系为2×M5 PCR Mix 12.5 μL，蜈蚣配方颗粒鉴别引物（10 μmol·L^-1）各0.4 μL，DNA模板2.5 μL，无菌双蒸水9.2 μL。PCR反应参数为94 ℃预变性3 min，循环反应30次（94 ℃变性20 s，62 ℃退火20 s，72 ℃延伸45 s），72 ℃延伸5 min。利用上述PCR反应体系和反应参数对蜈蚣药材及其制品进行扩增，电泳检测结果表明所有正品均可在约135 bp处显示出一条明亮条带，而混伪品无条带。结论 建立的特异性PCR鉴别方法可准确对蜈蚣药材、饮片、标准汤剂冻干粉、配方颗粒中间体、配方颗粒成品进行准确鉴别，为进一步保障蜈蚣药材及其制品的质量具有重要意义。     

烫水蛭（蚂蟥）配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的 为保障临床用药的安全性和有效性,建立烫水蛭（蚂蟥）及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴定方法。方法 根据烫水蛭（蚂蟥）细胞色素C氧化酶Ⅰ（COⅠ）基因序列设计引物,筛选出烫水蛭（蚂蟥）的稳定引物区间;在区间内筛选获得烫水蛭（蚂蟥）的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点,并设计烫水蛭（蚂蟥）特异性鉴别引物TSZ-F、TSZ-R;分别收集烫水蛭（蚂蟥）及其阴性样品,建立烫水蛭（蚂蟥）配方颗粒特异性PCR鉴别方法,并对PCR体系进行优化,对该方法的耐受性和适用性进行考察。结果 当退火温度为54 ℃、循环数为34次,烫水蛭（蚂蟥）及其配方颗粒经PCR和凝胶电泳后,可在约133 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,伪品无条带。结论 建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别烫水蛭（蚂蟥）饮片、标准汤剂冻干粉、配方颗粒,也为可其中药配方颗粒的质量标准研究提供参考。     

地龙（参环毛蚓）配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的 为保障临床用药的安全性和有效性,建立地龙（参环毛蚓）药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴定方法。方法 根据地龙氧化酶亚基1（COⅠ）基因序列筛选出地龙配方颗粒的稳定引物区间,并根据区间内筛选获得地龙的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点,根据SNP位点设计地龙特异性鉴别引物dlshmy-F及dlshmy-R,分别采集地龙及其混伪品,建立地龙配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR反应体系,对该方法进行耐受性和适用性考察。结果 退火温度为62 ℃,循环次数为36次,地龙及其配方颗粒经PCR反应及凝胶电泳后,可在约170 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,其他近源伪品如通俗环毛蚓、保宁腔蚓、栉盲环毛蚓等20种伪品及阴性对照均无条带。结论 该研究建立的特异性PCR鉴别方法可快速准确的鉴别出地龙药材、配方颗粒、冻干粉中的参环毛蚓源性成分,准确鉴定出全国广地龙中药材及饮片以及地龙的基原,也可为其他的中药配方颗粒质量标准研究提供了参考。     

金银花配方颗粒的位点特异性PCR鉴别研究

中药配方颗粒已失去所有形态学辨识特征,传统鉴定方法无法有效鉴定其真伪。该文使用位点特异性PCR鉴别技术,根据金银花trnL-trnF的一个SNP位点设计特异性鉴别引物,对金银花基原植物及配方颗粒进行鉴定。经过优化DNA提取方法后,药材与配方颗粒均成功提取到DNA,金银花基原植物及配方颗粒均可扩增获得约110 bp的条带,混伪品无条带。且BLAST结果比对证明PCR产物序列为金银花trnL-trnF序列。该文研究结果表明,DNA分子鉴定方法可弥补性状、显微鉴别局限性,对中药配方颗粒真实性进行快速准确的鉴定,为其生产、流通、用药安全提供科学依据和保障。     

高效液相色谱法测定紫河车配方颗粒中腺苷的含量

目的：建立紫河车配方颗粒中腺苷的含量测定方法。方法：色谱柱为HangBang C18（200＊4．6mm5μm）；流动相为磷酸盐缓冲溶液（pH6．5）[取0．01mol／L磷酸二氢钠68．5ml与0．01mol／L磷酸氢二钠31．5ml，混合（pH6．5）]-甲醇（85：15）；检测波长260nm；流速1．0ml／min；柱温30℃。结果：腺苷的检测测浓度线性范围为0．123～0．612vg（r=0．9997），RSD=2．04％（n=5）；平均加样回收率为98．59％，RSD=1．77％（n=6）。结论：本法简便、快捷、堆确、可用于紫河车配方颗粒的含量测定。     

地骨皮的多重位点特异性PCR鉴别

目的 使用多重位点特异性聚合酶链式反应（PCR）的方法，简单高效地鉴定地骨皮（Lycii Cortex）的2种基原植物枸杞（Lycium chinense）和宁夏枸杞（L. barbarum）。方法 在使用植物叶绿体基因组数据库（CGIR）获取枸杞和宁夏枸杞叶绿体基因组序列的基础上，利用IdenDSS软件筛选出两基原间特定的单核苷酸多态性（SNP）位点，并利用Primer 5.0软件设计获得特异性鉴别引物，包括鉴别枸杞的引物GQ-F/R、鉴别宁夏枸杞的引物NX-F/R。对引物浓度比、退火温度、循环次数、Taq酶进行优化，形成最适的PCR鉴别体系和条件，并对采集自不同地区的地骨皮进行适用性考察。结果 对影响PCR结果的各个条件进行考察优化后，最终确定枸杞和宁夏枸杞的引物浓度比为2∶1、退火温度为59 ℃、循环次数为30次时，来自不同产区地骨皮的2个基原枸杞和宁夏枸杞分别在183、295 bp的位置出现特异性鉴别条带。结论 通过一次PCR即可方便、快捷、高效地鉴定地骨皮的基原，为枸杞和宁夏枸杞的专属性鉴别提供新方法，同时对含有地骨皮成分的经典名方的研发提供一定的技术支撑。     

鹿茸、鹿角的位点特异性PCR鉴别

目的:建立一种快速、高效、简便的鹿茸、鹿角位点特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法。方法:通过比较梅花鹿、马鹿及其混伪品的COI,Cytb基因序列差异,根据Cytb片段上的3个SNP (single nucleotide polymorphism)变异位点设计出一对鹿茸的特异性鉴别引物LR-238上游和LR-238下游,并对影响PCR结果的主要因素退火温度,PCR循环次数,模板DNA浓度,Taq酶用量和及影响重复性的Taq酶种类和PCR仪型号等进行方法学考察和优化。结果:进行方法学考察确定最优鉴别条件的基础上,当PCR退火温度为56℃,循环次数为35次的条件下,鹿茸、鹿角正品均能扩增出约250 bp片段,其他9种混伪品麋鹿、白唇鹿、水鹿、坡鹿、黇鹿、骡鹿、驯鹿、驼鹿、狍及阴性对照无条带。不同来源的药用的马鹿亚种东北马鹿、塔河马鹿、天山马鹿、阿拉善马鹿、阿勒泰马鹿、新西兰马鹿,梅花鹿亚种东北梅花鹿、华南梅花鹿样品使用建立的位点特异性PCR鉴别方法均产生约250 bp特异性鉴别条带。结论:该文设计的鉴别引物具有高度的专属性,所建立的位点特异性PCR鉴别方法可用于鹿茸、鹿角的准确鉴别。     

牛膝及川牛膝配方颗粒位点特异性PCR鉴别研究

为建立一种稳定准确鉴定牛膝和川牛膝配方颗粒的方法。该文使用位点特异性PCR技术,根据牛膝和川牛膝ITS序列的SNP位点设计特异性鉴别引物,经过优化DNA提取方法后,使用牛膝特异性引物进行扩增,牛膝基原植物和牛膝配方颗粒均可扩增出187 bp特异性条带,川牛膝及混伪品无条带;使用川牛膝特异性引物进行扩增,川牛膝基原植物和川牛膝配方颗粒均可扩增出162 bp特异性条带。并利用所建立的方法对不同生产企业的牛膝和川牛膝配方颗粒进行鉴别,可以充分弥补传统鉴别方法的局限性。     

不同赋形剂及配方对中药喷雾干燥浸膏粉制粒的影响

目的：研究不同辅料及配方对中药喷雾干燥浸膏粉制粒的影响，寻求最佳的制粒配方。方法：用制粒难易程度，颗粒得率，溶化性，吸湿性，临界相对湿度等为考察指标，评价不同辅料及配方对颗粒的影响，并筛选合适的配方。结果：辅料种类及配方能明显降低浸膏粉的吸湿性，各组间在制粒难易程度和颗粒得率，溶化性方面有明显差异，但各组间吸湿性差异不明显。结论：临界相对湿度（CRH）在65％以下时，可选择2种配方；（1）浸膏粉－蔗糖－微粉硅胶（500：115：25）或）2）浸膏粉－蔗糖－微晶纤维素－微粉硅胶（50：77．5：25：37．5）。     

紫河车超细粉体的表征技术研究

目的：对紫河车细粉和超微细粉体进行表征研究。方法：先用中草药粉碎机将紫河车粉碎成细粉，然后用倍力微粉机对细粉进行超微粉碎；用扫描电镜和粒径测定仪表征。结果：细粉与超细粉的d10分别为16．05μm、9．37μm，d50分别为96.69μm、50．57μm，d90分别212.8μm、148．21μm，分布宽度分别为2．035、2．745。结论：经过超微粉碎后，粉体外观性状得到改善。     

猪胎盘替代紫河车防治老年性痴呆的实验研究

目的观察猪胎盘替代紫河车用于防治老年性痴呆的效果。方法将70只昆明种小鼠分为空白组、模型组、阳性对照组、紫河车低剂量组、紫河车高剂量组、猪胎盘低剂量组、猪胎盘高剂量组,每组10只。以D-半乳糖皮下注射法制备老年痴呆动物模型,空白组不给任何药物,模型组以生理盐水代替受试药,阳性对照组灌胃给予脑复康,紫河车低剂量组、高剂量组分别灌胃给予紫河车28g/kg、4g/kg,猪胎盘低剂量组、高剂量组分别灌胃给予猪胎盘4g/kg、8g/kg。给药6周后,分别运用行为学实验避暗法、跳台法,测定两药对小鼠造模后学习记忆的影响,并测定脑中乙酰胆碱酯酶和单胺类神经递质的含量。结果猪胎盘和紫河车抗老年痴呆作用无统计学差异(P0.05),在避暗潜伏期试验中,猪胎盘高剂量组的效果明显好于紫河车高剂量组(P0.01)。两者对单胺类神经递质的影响相近。结论猪胎盘有可能替代紫河车用于防治老年痴呆。     

紫河车提取物治疗儿童白癜风的临床对照研究

目的:观察紫河车提取物、人胎盘组织液及人胎盘脂多糖治疗儿童白癜风的临床疗效。方法:采用紫河车提取物、人胎盘组织液以及人胎盘脂多糖外用联合红外线照射治疗儿童白癜风,早晚各1次,每次红外线照射20min,每隔5min搽药水1次进行治疗,观察其疗效。结果:紫河车提取物有效率为78.50%,显效率38.32%;人胎盘组织液有效率47.06%,显效率23.53%;人胎盘脂多糖有效率57.14%,显效率38.10%,3种药物的总有效率之间有统计学差异(P<0.05),紫河车提取物组疗效明显优于其它两种药物。此外,紫河车提取物治疗头皮部白斑的有效率高达89.66%,明显优于其它各部位(P<0.05)。结论:3种药物联合红外线照射对儿童白癜风有较好疗效,且紫河车提取物的临床疗效明显优于人胎盘组织液和人胎盘脂多糖。     

中药配方颗粒的质量控制研究

概述了广东省中医研究所从事中药配方颗粒质量控制研究10余年来的主要成果,包括对中药配方颗粒原料药材、中间品和成品的质量控制研究,以及中药指纹图谱技术在中药配方颗粒质量控制中的应用情况.     

中药配方颗粒国际化有关问题的思考

阐述了中药配方颗粒的国际竞争优势，简要介绍了新工艺、新技术在其生产和质量控制中的应用现状，论述了中药配方颗粒国际化进程中所存在的问题，并对其今后的国际化发展提出了建议。     

中药配方颗粒国际化有关问题的思考

阐述了中药配方颗粒的国际竞争优势,简要介绍了新工艺、新技术在其生产和质量控制中的应用现状,论述了中药配方颗粒国际化进程中所存在的问题,并对其今后的国际化发展提出了建议。     

正交试验优选消食颗粒的成型配方

目的:优选消食颗粒的成型配方。方法:选取药液相对密度、加辅料倍数、混合辅料比为考察因素,以颗粒合格率和溶化性的综合评分为指标,采用L9(34)正交试验优选消食颗粒的成型配方。结果:最佳成型配方为药液相对密度1.30(60℃),加2.5倍量辅料,糊精-淀粉1∶1。结论:该优选工艺合理可行、稳定可靠,可推广于大生产应用。     

黄芪饮片与黄芪配方颗粒有效成分含量比较

目的:比较黄芪饮片及其配方颗粒中2种有效成分的含量。方法:采用HPLC法,迪马C_(18)色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈∶水(32∶68)为流动相;蒸发光检测器检测黄芪甲苷含量,以乙腈为流动相A,以0.2%甲酸溶液为流动相B,进行梯度洗脱紫外检测器检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量,比较黄芪饮片及其配方颗粒中二者含量差异。结果:黄芪饮片中2种有效成分含量均高于《中国药典》标准,黄芪配方颗粒中黄芪甲苷含量接近药典标准、毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量与所标示的浓缩倍数不符,远低于药材含量。结论:配方颗粒生产工艺及质控标准需要改进,需建立统一的配方颗粒工艺标准和质量标准。     

何首乌配方颗粒的UPLC指纹图谱及化学成分归属

目的:建立何首乌配方颗粒的UPLC指纹图谱,并对其主要的共有峰进行成分归属,为配方颗粒的快速质量评价提供方法。方法:采用超高效液相色谱法,以Agilent Eclipse Plus C_(18) RRHD(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱,流动相乙腈-水梯度洗脱,检测波长254 nm,流速0.4 m L·min~(-1),柱温30℃,同时采用飞行时间质谱法对指纹图谱中的主要化学成分进行归属。结果:建立了何首乌配方颗粒的UPLC指纹图谱,确定了12个共有峰,并对其中5个共有峰进行了指认,各何首乌配方颗粒样品指纹图谱与对照指纹图谱相似度均0.9。结论:该方法简单、准确、快速、重复性好,能有效地对何首乌配方颗粒的质量进行快速评价。