共表达p53、p16基因真核表达载体的构建及其在K562细胞中的表达

[目的]构建p53、p16基因真核表达载体,观察其在K562细胞中的表达。[方法]设计并构建包含野生型p53cDNA、p16cDNA的真核双表达载体pBudCE4．1-53—16,脂质体法转染K562白血病细胞,用间接免疫细胞化学法、Western blot等方法鉴定外源性p53及p16的表达情况。[结果]构建成功p53、p16基因双表达真核载体,体外成功转染入K562细胞,检测到K562细胞外源性p53、p16蛋白的表达。[结论]重组质粒pBudCE4．1-53-16体外转染K562细胞后．目的基因能够在细胞中同时表达,为进一步研究两种基因用于肿瘤治疗奠定基础。     

重组腺病毒p53影响口腔黏膜异常增生细胞生长的分子机制

[目的]探讨重组腺病毒p53(rAd-p53)影响口腔黏膜异常增生细胞(POE-9n)生长、诱导凋亡的分子机制。[方法]利用RT-PCR及Westernblot技术检测rAd-p53转染POE-9n细胞后p53、p21CIP/WAF及bcl-2mRNA和蛋白的表达变化。[结果]POE-9n细胞经rAd-p53转染后,p53、p21CIP/WAF和bcl-2mRNA和蛋白水平的表达均出现明显变化。转染24h后,p53、p21CIP/WAFmRNA及蛋白表达显著增高(P<0.01),而bcl-2则在转染72h后表达明显降低(P<0.01)。[结论]rAd-p53转染POE-9n细胞后,外源性p53的导入使p21CIP/WAF激活,并抑制bcl-2的表达,从而诱导细胞凋亡。     

非小细胞肺癌p53基因治疗的循证医学评价

[目的]探讨p53基因治疗非小细胞肺癌的临床研究证据。[方法]依照循证医学的文献检索策略检索MEDLNE,应用系统评价专用软件包进行数据处理。[结果]欧、美两个多中心研究共9篇研究报告均不足以证实p53基因治疗非小细胞肺癌的有效性。[结论]大量的体外、体内实验提示p53基因治疗对于非小细胞肺癌的治疗有效,但是目前尚缺乏临床证据证实其有效性,因此当前不推荐p53基因治疗的临床应用,加强p53基因治疗的基础研究,特别是研究如何提高转基因效率,应该是今后工作的重点,开展p53基因治疗非小细胞肺癌的大规模临床试验目前条件也不成熟。     

非小细胞肺癌组织p53蛋白Ser15磷酸化表达的研究

[目的]探讨人非小细胞肺癌组织中突变型p53蛋白15位丝氨酸位点（p53Ser15）的磷酸化状况,p53Ser15磷酸化、p53蛋白和血清p53抗体水平之间的关联以及与非小细胞肺癌临床病理特征和预后的关系。[方法]应用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测40例非小细胞肺癌组织、相应正常肺组织及10例肺良性疾病组织中p53Ser15磷酸化、p53蛋白以及血清p53抗体水平。随访观察40例非小细胞肺癌组的转移复发情况。[结果]p53Ser15磷酸化、p53蛋白水平在非小细胞肺癌组高于正常肺组织组和肺部良性疾病组,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。非小细胞肺癌组p53Ser15磷酸化、p53蛋白及血清p53抗体水平两两之间均有正相关性（P〈0.05）。非小细胞肺癌组中p53抗体阳性率为42.5%,在鳞癌中的阳性率高于腺癌和腺鳞癌（P〈0.05）。随访期内5例出现复发或远处转移的病例p53Ser15磷酸化、p53蛋白表达水平高于未复发转移病例（P〈0.05）。[结论]突变型p53蛋白在人体内也可如野生型p53一样被磷酸化,而且这种磷酸化有助于突变型p53蛋白的稳定。p53Ser15磷酸化及p53蛋白高水平表达可能会有助于肿瘤进展更快。     

食管癌突变型p53过表达临床研究新进展

p53基因是迄今为止研究最为深入的抑癌基因,定位于人类染色体17p13.1,全长20kb,编码393个氨基酸组成的分子质量为53kD的核内磷酸化蛋白,是体内重要的抑癌基因之一和细胞周期的重要调节基因,具有诱导细胞生长抑制和细胞凋亡的功能[1]。p53突变人类肿瘤发生率约20%～80%,失去野生型抑癌功能,获得类似癌基因的功能,致细     

78例大肠肿瘤中p53、FHIT的表达及临床意义

p53基因及脆性组氨酸三联体蛋白(fragile histidine triad FHIT)基因在大肠肿瘤“腺瘤—癌”的多阶段发生模式中起着重要作用^[1～2]。野生型p53蛋白是细胞增殖、分化及凋亡中的关键调节因子^[3]p53基因错义突变、产生变异蛋白、抑制细胞凋亡^[4]、促进细胞增殖，而发挥促癌作用。FHIT表达于大多数正常组织中。其基因结构及表达异常见于多种类型的肿瘤组织中^[5]。本文应用免疫组化方法，检测p53及FHIT在大肠肿瘤中的表达，以探讨p53及FHIT在大肠肿瘤所起的作用及临床意义。     

GW843682X对鼻咽癌细胞中PLK1和p53表达的影响

[目的]研究Polo样激酶（PLK）抑制剂GW843682X对鼻咽癌5-8F细胞中PLK1和p53表达水平的影响。[方法]用不同浓度的GW843682X处理鼻咽癌5-8F细胞,在不同时间点倒置显微镜下观察细胞形态,RT-PCR及Western blot分别检测PLK1和p53的mRNA和蛋白表达水平的变化。[结果]GW843682X能够显著抑制5-8F细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性。RT-PCR结果表明GW843682X可下调PLK1和p53的mRNA表达水平。Western blot结果显示GW843682X降低PLK1和p53的蛋白表达水平。[结论]GW843682X抑制鼻咽癌5-8F细胞中PLK1和p53的表达。     

p53突变与食管癌发生、预后的研究进展

食管癌是我国最常见的癌症之一,五年生存率低于30％^[1],其发生和发展的确切机制仍未阐明。已有研究探讨了食管癌中癌基因和抑癌基因的改变^[2]。p53基因是最重要的抑癌基因之一,也是各种人类肿瘤包括食管癌中最常见有突变的基因之一。野生型p53具有抗细胞增生的功能,p53基因突变可损害其DNA结合性和转录因子功能,使其控制细胞周期和细胞增殖的正常功能受到抑制。     

一个能够有效介导RNA干扰或外源基因过表达的慢病毒系统

[目的]为研究pRRL为基础的慢病毒系统除了作为RNA干扰工具外是否可用于介导外源基因过表达。[方法]构建能表达NALP2蛋白N末端PYRIN结构域(PYD)或p53的慢病毒;采用RT-PCR、Western印迹法检测慢病毒介导的PYD、p53表达情况;采用NF-κB荧光素酶报告实验和细胞凋亡实验鉴定PYD和p53的生物学功能。[结果]通过对绿色荧光蛋白(EGFP)的观察和对PYD、p53表达水平的检测,表明成功构建了能够表达PYD或p53的慢病毒。NF-κB荧光素酶报告实验和细胞凋亡实验结果表明慢病毒表达的PYD和p53具有生物学功能。[结论]pRRL为基础的慢病毒系统除了能够作为RNA干扰工具外,还可介导外源基因的表达,并在体外高效感染肿瘤细胞。     

MDM2与p53

癌症被认为是基因疾病,控制细胞分化的基因有缺陷就会导致癌症,这些基因可为癌基因也可为抑癌基因 [1]。 p53是研究最多的抑癌基因,它在 DNA转录、细胞生长和增殖以及许多代谢过程中有重要作用,大约 50％以上的肿瘤中都有 p53的突变 [2]。在一些有野生型 p53的肿瘤中,则有其它的因素改变阻断 p53的功能以促进肿瘤的生长,例如 MDM2 基因的扩增或 MDM2蛋白过度表达 [3]。     

慢病毒介导Stathmin-1基因沉默对宫颈Hela细胞p53蛋白的影响

[目的]研究宫颈癌Hela细胞中Stathmin-1表达对p53蛋白的影响及对细胞增殖的作用。[方法]构建Stathmin-1 siRNA慢病毒载体,包装重组慢病毒,感染宫颈癌Hela细胞株,沉默Stathmin-1表达为干扰组,采用导入阴性片段的慢病毒感染Hela细胞作为对照组。MTT法检测细胞增殖,蛋白印迹法(Western-blot)检测细胞p53蛋白的表达。[结果 ]感染重组慢病毒及阴性病毒后,Stathmin-1基因干扰组Hela细胞增殖24h后较对照组抑制明显(P<0.05)。与对照组相比,干扰组中p53蛋白表达明显减少(P<0.05)。[结论]宫颈癌Hela细胞中Stathmin-1影响p53蛋白表达,沉默Stathmin-1可抑制细胞增殖。     

沉默p53的表达对妇科肿瘤细胞系中STAT3的表达影响

[目的]通过siRNA干扰序列沉默p53蛋白的表达,以探讨p53蛋白表达水平的变化对宫颈癌细胞系(HeLa、SiHa、CasKi)、卵巢癌细胞系(HO8910、OVR3)以及子宫内膜癌细胞系HEC-1-A中核转录因子STAT3蛋白的表达影响。[方法]将p53siRNA及阴性对照siRNA通过脂质体分别转染入HeLa、SiHa、CasKi、HO8910、OVR3、HEC-1-A细胞48h后,通过WesternBlot检测STAT3、p-STAT3的表达情况。[结果]通过siRNA沉默上述细胞p53的表达后,发现在HeLa、HO8910以及HEC-1-A中STAT3和p-STAT3的表达明显升高(P<0.05),而在Si-Ha、CasKi以及OVR3细胞中STAT3和p-STAT3的表达无明显变化(P>0.05)。[结论]p53对STAT3的表达调控作用在不同的妇科肿瘤细胞系中作用机制不同。     

MDM2与p53

癌症被认为是基因疾病，控制细胞分化的基因有缺陷就会导致癌症，这些基因可为癌基因也可为抑癌基因 [1]。 p53是研究最多的抑癌基因，它在 DNA转录、细胞生长和增殖以及许多代谢过程中有重要作用，大约 50％以上的肿瘤中都有 p53的突变 [2]。在一些有野生型 p53的肿瘤中，则有其它的因素改变阻断 p53的功能以促进肿瘤的生长，例如 MDM2 基因的扩增或 MDM2蛋白过度表达 [3]。     

p16、p53、C—erbB—2蛋白在胃癌中的表达及其意义

[目的]研究p16、p53、C-erbB-2蛋白的表达与胃癌临床病理学特征的关系。[方法]应用免疫组织化学方法研究100例胃癌组织中,p16、p53、C-erbB-2蛋白的表达,并进行增殖细胞核抗原（PCNA）检测。[结果]100例胃癌中p16、p53、C-erbB-2的阳性率分别为43％、56％和50％。P53、C-rbB-2阳性表达,p16阴性表达的患者预后差（P值分别<0.01和<0.05）,p53表达与细胞增殖、病理分型、分化程度有密切关系,C-erbB-2表达与淋巴结转移、浸润深度相关。[结论]多基因分析比单基因分析更有价值,p16、p53、C-erbB-2蛋白异常表达及其相互作用在胃癌发生、发展中起重要作用,可作为判断胃癌预后的有效指标。     

槐耳清膏体外诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡

[目的]研究槐耳清膏对人肝癌细胞MHCC97H凋亡的作用及其机制。[方法]不同浓度槐耳清膏及5-Fu分别与人肝癌细胞MHCC97H共同培养,采用CCK-8法、FCM及荧光显微镜检测细胞增殖与凋亡变化,细胞免疫组化检测Bax、Bcl-2及p53基因的表达。[结果]槐耳清膏在体外可抑制MHCC97H细胞的增殖,诱导MHCC97H细胞产生早期凋亡,且作用具有剂量和时间依赖性。荧光显微镜下细胞呈典型的早期凋亡形态学改变。细胞免疫组化可见Bax及p53蛋白表达增强,而Bcl-2蛋白表达减少。[结论]槐耳清膏能明显诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡,其机制可能与改变凋亡相关基因Bax、Bcl-2、p53的表达有关。     

南蛇藤提取物诱导宫颈癌Hela细胞凋亡

[目的]观察南蛇藤乙酸乙酯、正丁醇提取物在体外对Hela宫颈癌细胞的凋亡作用。[方法]采用MTT法观察南蛇藤乙酸乙酯、正丁醇提取物对Hela宫颈癌细胞增殖的影响。应用FITC-AnnexinⅤ及碘化丙叮(PI)双重染色法,通过流式细胞仪(FCM)观察Hela细胞的凋亡率及p53基因表达情况。[结果]不同浓度的南蛇藤提取物(15、30、60、120μg/ml)对Hela细胞均有良好的抑制作用,呈剂量依赖性关系,并剂量依赖性地诱导肿瘤细胞凋亡。FCM检测发现随着南蛇藤提取物浓度的逐步上升,胞内p53蛋白表达亦逐渐上升。[结论]南蛇藤具有抑制Hela细胞增殖及诱导其凋亡作用,上调p53表达可能是其抗肿瘤作用的重要机制之一。     

p53Arg72Pro多态性与HPV相关宫颈癌发生机制

[目的]探讨p53Arg72Pro多态性与HPV相关宫颈癌发生机制的关系。[方法]采用PCR技术检测210例宫颈癌和95例正常宫颈组织的HPV16DNA．采用免疫组化方法及TUNEL检测p53Arg72Pro三种基因型中p53、p21、Bax、Ki-67蛋白（P1）表达以及细胞凋亡（AI）。[结果]宫颈癌HPV16阳性率为70．5％,与正常宫颈组织（7．4％）相比差异具有统计学意义（P〈0．05）。HPV16阳性的宫颈癌中：①p53蛋白阴性和弱阳性表达率（73．6％）高于强阳性率（26．4％）,其中p53Arg的阴性表达率（39．2％）高于p53Pro（16．7％）,差异有统计学意义（P〈0．05）;②p21蛋白阴性和弱阳性组中,p53Pro型中PI高于p53Arg型,差异有统计学意义（P〈0．05）;④Bax蛋白阴性和弱阳性组中,p53Pro型中AI低于p53Arg型,差异有统计学意义（P〈0．05）。[结论]p53蛋白可被HPV16E6蛋白降解,其中p53Arg蛋白更易被降解;p53Arg和p53Pro蛋白被降解后,两者抑制细胞增殖能力的降低和诱导细胞凋亡能力的降低程度不同．其中p53Pro蛋白转录激活p21和Bax基因的功能及细胞周期阻滞作用的降低更明显。     

p53、PCNA在胃癌中的表达

[目的]探讨p53、PCNA在胃癌组织中的表达及与胃癌分化程度、淋巴结转移的关系。[方法]采用免疫组化SP法测定胃癌石蜡切片中p53、PCNA的表达。[结果]p53、PCNA在胃癌组织中的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移呈正相关。[结论]p53、PCNA可以作为判断胃癌预后的指标。     

靶向治疗药物的分子靶点蛋白在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义

[目的]检测靶向药物的靶点蛋白在三阴性乳腺癌中的表达。[方法]采用免疫组织化学方法检测VEGF、p53、MMP-9、MMP-2、PKC-α、Bcl-2、CD117、BRCA1、COX-2蛋白在34例三阴性乳腺癌中的表达。[结果]9种蛋白均有不同程度的表达,VEGF、p53和MMP-9阳性表达率97.1%、70.6%和73.5%,且表达量均较高。VEGF蛋白与MMP-9蛋白表达呈正相关（r=0.387,P=0.024）,p53蛋白与MMP-2蛋白表达呈正相关（r=0.536,P=0.001）。基底细胞样乳腺癌Bcl-2蛋白表达量和阳性率均高于非基底细胞样乳腺癌（P〈0.05）。[结论]VEGF、p53和MMP-9蛋白可能是三阴性乳腺癌靶向治疗的潜在靶点,且在三阴性乳腺癌的发生发展过程中具有协同作用。     

透明质酸寡糖逆转MCF-7/ADM耐药及促凋亡作用研究

[目的]研究透明质酸寡糖逆转MCF-7／ADM细胞耐药的作用。[方法]MTT法研究透明质酸寡糖对MCF-7／ADM耐药逆转作用，流式细胞术测定细胞表面耐药相关蛋白P-gp、MRP的表达及凋亡调控蛋白p53、bcl-2的表达。[结果]透明质酸寡糖可提高MCF-7／ADM对化疗药的敏感性，使P—gp、MRP表达下降，p53表达增高，[结论]透明质酸寡糖可部分逆转MCF-7／ADM耐药及促进凋亡的作用．