miR-181家族的表达与人脑胶质瘤恶性程度的关系

目的：探讨miR-181家族，miR-181a、miR-181b和miR-181c，在不同恶性程度的人脑胶质瘤中的表达。方法：收集病理确诊的15例不同恶性程度胶质瘤以及5例正常脑组织手术标本，提取总微小RNA，应用实时荧光定量PCR技术检测miR-181a、miR-181b和miR-181c基因在人脑胶质瘤组织和正常脑组织中的表达，并进一步比较miR-181家族表达情况与不同级别胶质瘤的相关性。结果：miR-181a和miR-181b，在人脑不同级别胶质瘤中表达均明显下降。miR—18Ia表达水平呈随胶质瘤级别增高而下降趋势。miR-181b在胶质瘤级别HI级以上表达水平趋于稳定，Ⅲ级和Ⅳ级组织中的表达无明显差异。miR-181c表达量在正常脑组织与胶质瘤Ⅱ级和Ⅲ级组织间差异不显著．在胶质瘤Ⅳ级组织miR—181c表达水平降低。结论：miR-181a、miR-181b和miR-181c在胶质瘤组织中呈不同程度低表达，miR-181a表达与胶质瘤级别呈负相关，     

脑胶质瘤中miR-181b的表达及临床意义

背景与目的：miR-181b在多种肿瘤中表达异常,并参与调节多种抗肿瘤药物的敏感性。研究发现miR-181b在胶质瘤中具有起类似抑癌基因的作用．可作为胶质瘤的独立预后指标。本研究旨在进一步探讨恶性胶质瘤中miR-181b表达的临床意义及miR-181b对替莫唑胺化疗敏感性的影响。方法：收集不同病理级别胶质瘤标本,以荧光定量PCR法检测其中miR-181b的表达,分析其与胶质瘤病理分级及患者预后的关系：利用CCK-8细胞毒性实验检测患者恶性胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性。并分析其与miR-181b表达的关系。结果：miR-181b在胶质瘤组织中的表达显著低于正常脑组织伊〈0．051．miR-181b的表达水平分别为：正常脑组织3．69±0．477,WH0I级2．56±0．354．WHOⅡ级0．81±0．222．WHOⅢ级0．42±0．130．WH0 Ⅳ级0．21±0．067。miR-181b表达低的患者中位生存期为370±37天．而miR-181b表达高的患者中位生存期为493±60天（P〈0．05）。在高级别胶质瘤中,miR-181b的表达与替莫唑胺的敏感性呈正相关（r=-0．576,P〈0．001）。结论：miR-181b在胶质瘤中的表达与胶质瘤的病理级别呈负相关．而与脑胶质瘤患者预后呈正相关．与高级别胶质瘤对替莫唑胺的敏感性呈正相关．     

分化相关基因MIBP1的表达与人脑胶质瘤恶性程度的关系

目的:应用荧光定量实时PCR技术检测与肿瘤分化相关的基因MIBP1(c-myc内含子结合蛋白1)在不同恶性程度的人脑胶质瘤中的表达。方法:收集病理确诊的30例不同恶性程度胶质瘤以及5例正常脑组织手术标本,抽提RNA,应用荧光定量PCR技术检测MIBP1基因在人脑胶质瘤中的表达,并分析该基因在不同级别胶质瘤中的表达情况。结果:荧光定量PCR系统稳定,WHOⅣ级胶质瘤与正常对照及Ⅱ级胶质瘤比较有显著性差异,多形性胶质母细胞瘤MIBP1基因表达明显降低。2例自身对照标本分析,Ⅳ级肿瘤中表达亦降低。结论:c-myc调控基因MIBP1在高度恶性胶质瘤中表达受抑制,提示该基因的下调可能为癌变的晚期事件。MIBP1基因可能有抑癌作用。     

miR-129-5p在人脑胶质瘤组织中表达下调的表观遗传学机制

目的:检测miR-129成熟体miR-129-5p在人脑胶质瘤组织中的表达特点,探讨人脑胶质瘤组织中miR-129-2表达异常是否与miR-129-2启动子甲基化有关.方法:收集湘雅医院神经外科2013年10-12月收治的胶质瘤患者肿瘤组织21例、脑外伤患者非肿瘤脑组织标本21例.Real-time PCR检测脑胶质瘤组织和非肿瘤脑组织、脑胶质瘤细胞株和正常脑胶质细胞株中miR-129-5p的表达;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测胶质瘤组织中miR-129-2基因启动子甲基化的情况;亚硫酸氢盐硫化测序PCR(bisulfite-sequencing PCR,BSP)分析经甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-dC)处理后的胶质瘤细胞miR-129-2基因启动子甲基化水平的变化,同时Real-time PCR检测miR-129-5p的表达变化.结果:miR-129-5p在人脑胶质瘤组织和细胞中表达显著低于非肿瘤脑组织和正常脑胶质细胞(P＜0.05),胶质瘤组织中miR-129-2基因的启动子甲基化率显著高于正常脑组织(P＜0.05),使用5-Aza-dC去甲基化处理脑胶质瘤细胞后miR-129-2基因的启动子甲基化程度降低、miR-129-5p表达显著升高(P＜0.05).结论:miR-129-5p在脑胶质瘤中显著低表达,miR-129-2启动子甲基化是导致其低表达的机制之一.     

不同级别人胶质瘤组织中miR-10b表达变化的研究

背景与目的:人miR-10b编码基因位于染色体2q31HOXD8基因之间,有研究显示其特异性地高表达于多种肿瘤中,并与肿瘤的侵袭、迁移和远距离转移有关。本研究对不同级别胶质瘤组织及非肿瘤对照脑组织中miR-10b的表达水平进行检测和比较。方法:采用组织微阵列及锁定寡核苷酸原位杂交技术检测56例不同级别胶质瘤及10例非肿瘤对照脑组织中miR-10b的表达水平。结果:对照脑组织及WHOⅠ~Ⅱ级、Ⅲ级及Ⅳ级胶质瘤组织中miR-10b阳性标记指数(LI%)分别为36.87±20.63、18.86±14.04、12.13±11.56及4.93±6.45,4组间差异均有显著性(P<0.05~0.001),miR-10b LI%与肿瘤的良恶性分级呈显著负相关(rs=-0.61,P<0.001)。结论:miR-10b的表达水平与胶质瘤病理分级呈负相关。     

miR-125b抑制胶质瘤细胞增殖作用机制研究

目的 探讨 miR-125b抑制胶质瘤细胞增殖的分子作用机制。方法 选取2016年12月至2017年12月宁夏医科大学总医院收治的胶质瘤患者32例（男18例、女14例）,选择同期行脑内血肿清除术的脑出血或因颅脑损伤行颅内减压术的但脑组织正常患者31例为对照组（男15 例、女 16 例）。利用qPCR法检测miR-125b在胶质瘤组织和人胶质瘤细胞系 LN229的表达,通过转染miR-125b 模拟物,检测miR-125b对胶质瘤细胞LN229增殖的抑制作用,采用Targetscan、miRanda等预测软件对miR-125b的作用靶点进行预测,以双荧光素酶报告基因系统分析miR-125b与STAT3的相互作用,运用Western blot法检测miR-125b对胶质瘤细胞LN229中STAT3表达的影响。结果 与正常癌旁脑组织相比较,胶质瘤组织中miR-125b的表达水平明显降低,胶质瘤细胞系LN229中miR-125b的表达与正常星形胶质细胞明显降低,相比于NC 模拟物,转染miR-125b 模拟物之后LN229细胞的增殖显著抑制,双荧光素酶报告基因系统检测显示,miR-125b 可直接调控STAT3 转录活性,而且miR-125b显著抑制LN229细胞STAT3表达。结论 miR-125b可靶向STAT3的表达从而调控胶质瘤细胞的增殖。     

Nogo B在人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤病理分级的相关性

目的: 探讨NogoB基因在人脑胶质瘤组织中的表达及其与胶质瘤病理分级的相关性。方法：收集上海长征医院神经外科2005-2008年手术获得的经病理证实的人脑胶质瘤组织标本36份，另取其他手术切除的正常脑组织标本10份。以免疫组化技术、Realtime PCR和Western blotting等方法检测这些标本中NogoB在基因和蛋白质层面的表达水平，结合病理资料分析NogoB的表达和病理分级的相关性。结果：Realtime PCR检测发现，恶性程度高的胶质瘤组织中NogoB基因表达明显下调，Ⅲ级的胶质瘤组织中NogoB基因表达水平与正常脑组织相比下降了90%左右(P<0.01)，NogoB基因表达水平与肿瘤的恶性度成相关。Western blotting检测显示，正常脑组织中NogoB蛋白表达相对恒定；在高恶性级别的胶质瘤中NogoB的蛋白表达显著下调，其下降程度与肿瘤的恶性程度呈负相关。免疫组织化学检测显示，NogoB主要在人正常脑组织中弥漫性阳性表达（100%），在人胶质瘤组织中表达显著降低；36例胶质瘤组织中NogoB染色阳性程度随着肿瘤恶性程度增加而显著降低（在ⅠⅡ、Ⅲ、Ⅳ级中阳性表达分别为88.2%，42.9%，25.0%），各组间比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：在人脑胶质瘤中NogoB在mRNA和蛋白质水平上表达均出现下调，其下调程度与病理分级呈负相关。     

锌指蛋白Zfx在人脑胶质瘤中的表达与意义

背景与目的：X染色体耦联锌指蛋白（Zfx）是锌指蛋白超家族中的一员,是胚胎干细胞和成体干细胞自我更新的共同分子基础。本研究探讨Zfx在人脑胶质瘤中的表达及其与脑胶质瘤的发生和恶性程度的关系有待探讨。方法：收集52例经病理证实的脑胶质瘤肿瘤标本和8例正常脑组织标本,根据病理结果对脑胶质瘤标本进行分组,通过实时定量PCR、免疫组织化学和Westemblot等方法对标本中zfx的mRNA和蛋白表达进行检测,应用统计学方法对正常脑组织和不同恶性程度脑胶质瘤中Zfx的表达进行分析。结果：免疫组化染色结果显示,ZfX主要表达于细胞核。脑胶质瘤中Zfx的mRNA和蛋白表达均高于其在正常脑组织中的表达．在不同病理分级的脑胶质瘤中Zfx的表达水平有差异,Zfx的表达水平随脑胶质瘤的恶性程度增高而增高。结论：Zfx的mRNA和蛋白在脑胶质瘤中高表达,与脑胶质瘤的恶性程度呈正相关．它有可能是脑胶质瘤抗凋亡、恶性增殖的一个关键性的调控因子。     

非同源末端连接修复通路DNA-PKcs基因在胶质瘤中表达及其机制研究

目的:研究DNA双链断裂损伤修复通路主要成员Ku70、Ku80、ERCC4、Lig4 和DNA-PKcs 基因在人脑胶质瘤中的mRNA 表达及其与肿瘤发生的关系。方法:采用SYBR Green实时定量PCR 技术检测36例人原发脑胶质瘤组织和12例正常脑组织中的Ku70、Ku80、ERCC4、Lig4 和DNA-PKcs 的mRNA 水平。用亚硫酸盐处理基因组DNA后,采用甲基化特异的聚合酶链式反应（MSP）检测正常脑组织和胶质瘤组织中DNA-PKcs 基因的甲基化水平变化。结果:与正常脑组织相比,Ku70、Ku80、ERCC4、Lig4 基因表达量在脑胶质瘤和正常脑组织中无显著性变化（P>0.05）,DNA-PKcs 基因在脑胶质瘤中表达显性著上调（P=0.002）。DNA-PKcs 基因在脑胶质瘤组织中表达量随胶质瘤恶性程度升高而增加。DNA-PKcs 基因启动子甲基化程度在正常组织中高于肿瘤组织,表明甲基化程度的减少是引起胶质瘤中DNA-PKcs 基因表达增高的原因。结论:DNA-PKcs 基因在人脑胶质瘤中较正常脑组织表达显著上调,并且表达与脑胶质瘤的恶性程度相关。DNA-PKcs 基因甲基化程度的降低是引起胶质瘤中DNA-PKcs基因表达增高的原因。      

miR-145与SMAD2在胶质瘤中的表达及临床意义

目的 检测微小RNA-145(miR-145)和SMAD2蛋白在胶质瘤中的表达情况及与临床意义.方法 收集80例胶质瘤患者的血清和肿瘤组织样本,另选取20例正常脑组织和血清样本作对照.提取血清外泌体,采用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测血清外泌体和组织中miR-145的相对表达量.采用免疫组化染色法检测组织中SMA...     

Expression level of human miR-34a correlates with glioma grade and prognosis

The aim of this study is to investigate the expression level of microRNA-34a (miR-34a) in glioma patients and its significance for predicting the prognosis of glioma. In this study, we examined the expression of miR-34a in glioma tissues of various World Health Organization (WHO) grades and explored the association between miR-34a expression and clinical and pathological parameters of glioma patients. We found that the tissues from high-grade gliomas (grade III and IV) had much lower miR-34a expression compared to normal brain tissues. The results of a 72-month follow-up in 146 glioma patients further demonstrated that miR-34a expression levels positively correlated with tumor WHO grades. Additionally, in the patients with grade III and IV gliomas, lower miR-34a expression correlated with worse progression-free survival and overall survival. Univariate and multivariate analysis revealed that miR-34a was an independent prognostic indicator for glioma. Additionally, we explored the correlation between miR-34a expression and p53 status and Bcl-2 expression in grade III and IV glioma tissues. Wild-type p53 tumors displayed significantly higher miR-34a expression level than mutant p53 tumors. In addition, glioma tissues with high miR-34a expression had dramatically lower Bcl-2 expression levels than tissues with low miR-34a expression. These findings indicate the role of miR-34a in tumor progression may be closely associated with p53 mutation and inversely correlated to Bcl-2 expression. In conclusion, our work presents comprehensive evidence for miR-34a expression as a novel and potentially useful signature for predicting prognosis of glioma.     

MicroRNA-181b提高U87细胞对VM-26的敏感性研究

背景与目的：MicroRNA（miRNA）参与肿瘤发生发展的诸多过程,并参与调节多种抗肿瘤药物的敏感性。本研究探讨恶性胶质瘤中miR-181b对VM-26（teniposide）化疗敏感性的影响。方法：以荧光定量PCR法检测miR-181b在高级别胶质瘤中的表达．并利用CCK-8细胞毒性实验检测高级别胶质瘤患者细胞对VM-26的化疗敏感性：并通过慢病毒感染构建稳定高表达miR-181b的U87／181b细胞及其对照组U87／nc．在荧光显微镜下观察其转染率及荧光定量PCR法检测其中miR-181b的表达：进而利用CCK-8细胞毒性实验检测U87／181b和U87／nc细胞对VM-26的敏感性．利用流式细胞仪检测VM-26作用72小时后U87／181b和U87／nc的凋亡情况。结果：在高级别胶质瘤中,miR-181b的表达与VM-26的敏感性呈正相关（r=-0．691。P〈0．01）．也就是miR一18lb高表达肿瘤对VM-26的敏感性高。qPCR检测miR-181b在U87／18lb（0．699±0．023）的表达显著高于U87／nc（0．019±0．001）（P〈0．05）。CCK-8检测结果显示U87／181b[IC50：（1．25±0．12）μg／mL]对VM-26的敏感性显著高于U87／nc[IC50：（6．24±0．88）μg／mL]P〈0．05）。经VM-26处理后U87／181b凋亡率（69．41±0．77）明显高于U87／nc（37．93_＋2．90）（P〈0．05）。结论：在高级别胶质瘤高表达miR-18lb的肿瘤对VM-26的敏感性高：在胶质瘤细胞U87中增加miR-18lb表达可以提高对VM-26的敏感性．     

miR-19a and miR-19b Overexpression in Gliomas

Astrocytic gliomas are the most common type of human primary brain tumors with poor prognosis. MicroRNAs(miRs) are frequently deregulated in gliomas and play an oncogenic or tumor suppressor role. In our previous study we found that miR-19a and miR-19b were up-regulated in malignant glioma cell lines by microRNA array. For further validation of this finding, the expression of miR-19a and miR-19b was detected by qRT-PCR and in situ hybridization(ISH) in 8 malignant glioma cell lines, 43 freshly resected glioma samples and 75 archival paraffin embedded glioma specimens with different grades of malignancy in the present study. The results demonstrate that miR-19a and miR-19b are overexpressed in glioma cell lines and astrocytic glioma tissues, and their expression level is positively correlated with tumor grades. Additionally, the tumor suppressor gene PTEN is identified as the target of miR-19a and miR-19b by Luciferase assay. It is speculated that miR-19a and miR-19b may have an oncogenic role in gliomagenesis at least partially via the negative regulation of PTEN and the molecular mechanism of gliomagenesis in which miR 19a and miR-19b involved should be investigated further.     

COX-2、Ki-67与nm23在人脑胶质瘤组织中的表达及临床意义

目的研究COX-2、Ki-67及nm23在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学S-P法检测10例正常脑组织和56例人脑胶质瘤组织巾COX-2、Ki-67及nm23的表达。结果COX-2和Ki-67在正常脑组织中均不表达,而在各病理级别的人脑胶质瘤组织中均有表达,各组间差异有统计学意义（P〈0．05）,COX-2和Ki-67的表达强度随脑胶质瘤病理级别呈递增趋势,且COX-2和Ki-6的表达呈显著正相关（r=0．567,P〈0．05）;nm23在正常脑组织和各病理级别人脑胶质瘤组织中均有表达,各组问差异有统计学意义（P〈0．05）,且Ki-6和nm23的表达呈显著负相关（r=-0．388,P〈0．05）。结论COX-2和Ki-67的表达强度随胶质瘤恶性程度的增加而增加;nm23的表达强度随胶质瘤恶性程度的增加而减少;COX-2、Ki-67及nm23与人脑胶质瘤的发生和发展有关系,三者可作为胶质瘤恶性程度评估的重要生物学参考指标。     

人脑胶质瘤中miR-106b~25基因簇表达的研究

  目的  检测胶质瘤细胞系及组织中miR-106b~25基因簇成员miR-106b、miR-93、miR-25的表达情况。  方法  运用实时定量PCR的方法检测不同人脑胶质母细胞瘤细胞系及不同病理级别胶质瘤标本中miR-106b~25基因簇成员miR-106b、miR-93和miR-25的表达水平。原位杂交技术检测含不同病理级别及瘤旁正常脑组织的胶质瘤组织芯片中miR-106b~25基因簇成员的表达情况,进而分析该簇miRNAs的表达与胶质瘤病理级别的相关性。  结果  以正常脑组织表达量为基准,3种miRNA在所有检测细胞系中均有增高的趋势。收集43例胶质瘤标本中,RT-PCR结果显示,随着肿瘤病理级别的升高,3种miRNA在各组中的平均表达量也逐步升高。其中,miR-106b（F=4.479,P=0.018）和miR-93（F=3.493,P=0.040）各组间的表达差异均有统计学意义。而miR-25表达无明显的统计学差异（F=2.766,P=0.075）。原位杂交结果显示3种miRNA的表达在高级别胶质瘤中的表达量明显高于低级别肿瘤。Spearman等级相关分析表明3种miRNA的表达信号强度分布均与胶质瘤的WHO病理分级呈正相关,在miR-106b、-93、-25中的相关系数分别为r_s=0.617（P＜0.001）、r_s=0.438（P＜0.001）、r_s=0.463（P＜40.001）。  结论  miR-106b~25在胶质瘤中表达呈不同程度增高,并与肿瘤分级呈正相关。      

人脑胶质瘤中CD147的表达及其意义

背景与目的：以往研究发现CD147与某些恶性肿瘤存在相关性。本研究探讨CD147在人脑胶质瘤中的表达及其与病理分级的相关性。方法：收集61例星形细胞肿瘤及18例瘤旁脑组织标本．制作组织芯片。进行免疫组织化学染色,用半定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）进行CD147mRNA检测。结果：（1）胶质瘤组织中CD147蛋白的阳性表达率为74．3％．正常脑组织中仅血管内皮细胞浆有阳性着色。（2）Ⅲ、Ⅳ级星形细胞肿瘤瘤细胞胞浆CD147着色显著强于Ⅰ、Ⅱ级低级别星形细胞肿瘤。（3）CD147mRNA在胶质瘤组织中阳性率为83．3％,明显高于正常脑组织中的阳性率25％（P〈0．05）。CD147mRNA在星形细胞肿瘤组织中的表达量为0．274±0．087,明显高于正常组织0．081±0．043,两者差异具有显著性（P〈0．05）。结论：CD147的表达可能在人脑胶质瘤的发生发展中起重要作用．     

人脑胶质瘤PET成像中11C-蛋氨酸摄取与LATl和4F2hc表达的关系

背景与目的：以“C-蛋氨酸（11C-MET）为示踪剂的正电子发射体层成像（PET）可为脑肿瘤的氨基酸代谢提供重要信息,大型氨基酸转运载体1（LATl）和细胞表面抗原4F2重链（4F2hc）所形成的LATl／4F2hc复合物是包括蛋氨酸在内的大型、中性氨基酸的主要转运载体．本研究旨在探讨人脑胶质瘤中11C-MET摄取量与LATl和4F2hc表达的关系。方法：对30例新诊断的脑胶质瘤患者行11C-METPET检查．计算11C-MET最大标准化摄取值（SUVmax）;采用免疫组化方法检测LATl和4F2hc在相同脑胶质瘤标本中的表达;分析11C-METSUVmax、LATl和4F2hc表达水平与胶质瘤临床病理学特征的关系以及三者之间的关系。结果：HC．METSUVmax、LATl和4F2hc表达均随胶质瘤病理级别的升高而明显增强（P=0．000。P=0．028。P=0．003）,在高恶性度胶质瘤中11C．METSUVmax、LATl和4F2hc表达也均明显强于低恶性度胶质瘤（P=0．000．P=0．032．P=O．004）：LAT1和4F2hc表达之间存在明显正相关（P=0．036）;uC．METSUVmax与IATl表达也存在明显正相关（P=0．003）,但与4F2hc表达无明显相关性（P=0．366）。结论：11C-MET摄取量以及LATl和4F2hc表达与脑胶质瘤的病理学特征关系密切．LATl高表达可能是脑胶质瘤11C-MET摄取量增高的一个重要因素。