造血干/祖细胞体外扩增的最新研究进展

造血干/祖细胞体外扩增方法的快速发展为造血干/祖细胞广泛应用于临床开辟了广阔的前景,就造血干/祖细胞体外扩增的方法和培养系统的最新进展做一综述。     

造血干/祖细胞体外扩增的最新研究进展

造血干/祖细胞体外扩增方法的快速发展为造血于/祖细胞广泛应用于临床开辟了广阔的前景,就造血干/祖细胞体外扩增的方法和培养系统的最新进展做一综述.     

造血祖细胞基因转染在造血细胞体外扩增中的应用

如何有效地扩增早期造血祖细胞而避免其过度分化,是造血细胞体外扩增领域中急待解决的问题之一。应用基因转染技术促进早期造血祖细胞体外扩增是一种新方法,该方面的研究已日益受到重视。     

SCID小鼠在脐血造血干/祖细胞移植研究中的应用

严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠是研究人造血干细胞增殖分化的一个理想的体内试验模型 ,近年来脐血造血干 /祖细胞体外扩增的研究成为干细胞移植领域备受关注的课题 ,通过采用有效的体内试验模型来进一步深入了解扩增后脐血造血细胞的移植潜能和造血活性。本文就SCID小鼠在脐血造血干 /祖细胞体外扩增和移植中应用作一综述     

SCID小鼠在脐血造血干／祖细胞移植研究中的应用

严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠是研究人造血干细胞增殖分化的一个理想的体内试验模型，近年来脐血造血干／祖细胞体外扩增的研究成为干细胞移植领域备受关注的课题，通过采用有效的体内试验模型来进一步深入了解扩增后脐血造血细胞的移植潜能和造血活性。本文就SCID小鼠在脐血造血干／祖细胞体外扩增和移植中应用作一综述。     

014 SCID小鼠在脐血造血干/祖细胞移植研究中的应用

严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠是研究人造血干细胞增殖分化的一个理想的体内试验模型,近年来脐血造血干/祖细胞体外扩增的研究成为干细胞移植领域备受关注的课题,通过采用有效的体内试验模型来进一步深入了解扩增后脐血造血细胞的移植潜能和造血活性.本文就SCID小鼠在脐血造血干/祖细胞体外扩增和移植中应用作一综述.     

造血干祖细胞移植的生物学基础

一、什么是造血干祖细胞最佳的移植物造血干祖细胞移植 (ＨＳＰＣＴ)用于治疗造血干祖细胞缺陷性血液病、先天性免疫缺损、先天性贫血、各类自身免疫病等 ,也用于实体瘤的治疗 ,是一种重要的生物治疗或细胞治疗。实际上 ,不论来自骨髓、脐带血或动员的外周血 ,移植物中含的不仅是造血干细胞 ,还包括更多的早期造血祖细胞 ,所谓“造血干细胞移植 (ＨＳＣＴ)”实际上是造血干祖细胞移植 (ＨＳＰＣＴ)。这是当前对“造血干细胞移植”含义崭新的理解。ＣＤ34 细胞中 90 %以上是早期和晚期祖细胞 ,干细胞只是很小一部分。ＣＤ 34 细胞移植更应该…     

脐带血造血干祖细胞移植的基础

1 什么是造血干祖细胞最佳的移植物造血干祖细胞移植(HSPCT)用于治疗造血干祖细胞缺陷性血液病、先天性免疫缺损、先天性贫血、各类自身免疫病等,也用于实体瘤的治疗,是一种重要的生物治疗或细胞治疗。实际上,不论来自骨髓、脐带血或动员的外周血,移植物中含的不仅是造血干细胞,还包括更多的早期造血祖细胞,所谓“造血干细胞移植(HSCT)”实际上是造血干祖细胞移植(HSPCT)。这是当前对“造血干细胞移植”含义崭新的理解。CD34 细胞中90%以上是早期和晚期祖细胞,干细胞只是很小一部分。永久重建造血所需要的造血干细胞为数很少…     

基质细胞在造血细胞体外扩增中的作用及其分子机制

造血干/祖细胞在细胞因子联合应用条件下,经体外扩增后其功能活性往往受到损伤,而一些研究表明造血基质细胞存在时,可促进或维持体外扩增造血细胞的功能活性,其作用的分子机制目前也已开始研究。基质细胞在造血细胞体外扩增中的作用及其分子机制的阐明,将推动造血细胞体外扩增技术研究及应用的进一步深入。     

SCF、G-CSF的胞内信息传递途径及协同机制

在造血干 /祖细胞体外扩增及体内动员过程中 ,早期造血生长因子 SCF与晚期系谱特异性 G- CSF有明显协同作用。SCF、G- CSF与各自相应受体结合 ,启动 Ras- Raf- MAPK、JAK- STAT等胞内信息途径 ,达到最大转录激活     

Ad-LIF-OSM双基因转染饲养细胞对脐血造血细胞体外增殖和分化的影响

目的 构建表达人白血病抑制因子(LIF)和抑瘤素M(OSM)双基因的WI-38人胚肺成纤维细胞,并以此细胞作为饲养层细胞观察其对CD34+.造血干/祖细胞体外增殖和分化的影响.方法 以双启动子转移载体pAdTrack-CMV-LIF-polyA+promoterΔ为基础,将OSM基因片段酶切后插入,构建出转移质粒pAdTrack-CMV-LIF-polyA+promoterΔ -OSM.将构建正确的转移质粒与腺病毒骨架质粒共转化,获得重组腺病毒载体pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-LIF-polyA+promoter△-OSM,通过包装,收获重组腺病毒(AdLIF-OSM).将重组腺病毒感染饲养层细胞,经RT-PCR、ELISA法检测外源基因在细胞中的表达;体外与CD34+造血干/祖细胞共培养后,通过Transwell法和细胞计数检测,比较各实验组干/祖细胞体外扩增与分化情况.结果 测序结果显示重组载体中的LIF和OSM基因序列正确;转基因饲养层细胞中能检测到外源LIF和OSM基因的转录和表达;外源LIF和OSM基因在造血干/祖细胞体外培养中能够发挥作用.结论 成功构建携带人LIF和OSM的双基因重组腺病毒载体(Ad-LIF-OSM),Ad-LIF-OSM在造血干/祖细胞体外培养的过程中能够有效地扩增CD34+造血干/祖细胞,并延缓其分化.     

CD34抗原在人体组织中的表达及临床意义

198 4年Ｃｉｖｉｎ等首先发现ＣＤ34抗原 ,早期的研究表明 ,该抗原在各系造血干 /祖细胞膜上的表达水平最高 ,随着细胞分化程度增高其表达水平急剧下降 ,最后消失。ＣＤ34可以协助骨髓的ＣＤ34阳性造血干 /祖细胞粘附于骨髓基质 ,还可抑制造血细胞分化 ,促进造血祖细胞形成 ,参与细胞内信号传导等。许多造血系统疾病如急性白血病、骨髓异常增生综合征、再生障碍性贫血等都伴有ＣＤ34的异常表达 ,因此分析这些异常之处可以帮助诊断疾病并估计预后。在临床移植中 ,ＣＤ34可用于分离纯化待移植的骨髓中的ＣＤ34阳性造血干 /祖细胞 ,检测造血干…     

TGF-β1和/或TNF-α反义PS-ODNS对造血干/祖细胞体外扩增的作用

目的研究TGF-β1和/或TNF-α反义硫代寡核苷酸(PS-ODNS)对造血干/祖细胞体外扩增的调节作用.方法采用免疫磁珠分离技术从新鲜脐带血中分离CD34+细胞,用淋巴细胞分离液从骨髓血中分离单个核细胞,应用液体培养及造血祖细胞集落分析检测TGF-β1和/或TNF-α反义PS-ODNS对CD34+细胞数及多向性造血祖细胞(CFU-mix)、粒-单祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(BFU-E和CFU-E)集落数的影响.结果培养体系中加入TGF-β1反义PS-ODNS后CD34+细胞数、CFU-mix、CFU-GM、BFU-E和CFU-E集落数分别是对照组(仅加细胞因子组)的4、2.6、2.7、1.8、2.1倍;加入TNF-α反义PS-ODNS后CD34+细胞数、CFU-mix、CFU-GM、BFU-E和CFU-E集落数分别是对照组的4、2.9、2.6、1.7、1.8倍;同时加入TGF-β1和TNF-α反义PS-ODNS后CD34+细胞数、CFU-mix、CFU-GM、BFU-E和CFU-E集落数分别是对照组的5.3、2.1、2.7、1.9、1.8倍.结论采用反义PS-ODNS阻断内源性TGF-β1和TNF-α是造血干/祖细胞体外扩增的有效措施之一.     

FLT配基与血小板生成素对造血调节作用的研究进展

FLT3配基(FL)主要影响造血干/祖细胞生长,影响淋巴系及髓系细胞的增殖;抑制髓系祖细胞的凋亡;促进树突细胞生长.TPO是血小板生成的主要调节因子,不仅促进巨核系造血,也作用于早期造血干/祖细胞,使早期造血干/祖细胞扩增,维持存活及抑制凋亡.FL与TPO联合,能使脐带血干细胞维持长时期的增殖和自我更新;在具有基质细胞层HESS-5细胞的无血清培养体系中,加入TPO与FL,可使CD34+CD38-细胞增殖.FL与TPO联合,对造血干/祖细胞显著扩增,有助于脐血移植的可行性.     

FLT3配基与血小板生成素对造血调节作用的研究进展

FLT3配基(FL)主要影响造血干/祖细胞生长,影响淋巴系及髓系细胞的增殖;抑制髓系祖细胞的凋亡;促进树突细胞生长.TPO是血小板生成的主要调节因子,不仅促进巨核系造血,也作用于早期造血干/祖细胞,使早期造血干/祖细胞扩增,维持存活及抑制凋亡.FL与TPO联合,能使脐带血干细胞维持长时期的增殖和自我更新;在具有基质细胞层HESS-5细胞的无血清培养体系中,加入TPO与FL,可使CD34+CD38-细胞增殖.FL与TPO联合,对造血干/祖细胞显著扩增,有助于脐血移植的可行性.     

Ad-hOSM转基因饲养层细胞对脐血CD34~+造血干/祖细胞增殖及归巢能力的影响

目的:建立转人抑瘤素M(hOSM)基因腺病毒载体的饲养层细胞,观察转基因细胞对脐血CD34+造血干/祖细胞扩增的影响,比较扩增前、后造血干/祖细胞体外迁移能力的变化。方法:建立转hOSM基因腺病毒载体的饲养层细胞,并用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因;采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+造血干/祖细胞,流式细胞术(FCM)检测纯度;将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养,FCM检测各组增殖效果;扩增后的造血干/祖细胞用跨膜迁移实验(Transwell实验)检测自发迁移率和SDF-1诱导迁移率以鉴定体外扩增的造血干/祖细胞的归巢能力。结果:建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光,RT-PCR法和ELISA法证实有目的基因表达,免疫磁珠法分离的脐血CD34+造血干/祖细胞纯度可达(96.8±2.28)%,与Ad-hOSM转基因饲养层细胞共培养7 d后CD34+造血干/祖细胞可扩增15.73倍,表面黏附分子CXCR4和CD54表达量仍较高,培养后的细胞用Tran-swell板做体外迁移实验,与转基因饲养层细胞共培养的干细胞,其诱导迁移率为(40.68±1.35)%,明显高于对照组,可以较好的保持其归巢能力。结论:转hOSM基因腺病毒载体的饲养层细胞可有效扩增脐血CD34+造血干/祖细胞,延缓其分化,并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力。     

体外培养的人脐血细胞表面标志的动态研究

脐血由于来源广泛、采集方便、造血干／祖细胞丰富、增殖潜能大、抗原性低等优点,已成为极有潜力的新的造血干细胞来源之一。脐血干细胞比骨髓干细胞有更大的增殖潜力,脐血体外扩增后进行干细胞移植是一种新的设想和尝试。本文通过流式细胞仪检测了脐血单个核细胞经细胞生长因子（含ＧＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ３、ＩＬ６、ＳＣＦ、ＥＰＯ）刺激后各淋巴细胞亚群和造血干／祖细胞及其细胞培养期间的变化,同时比较了新鲜未刺激脐血和成人外周血淋巴细胞亚群组分,对脐血造血细胞体外扩增及移植的最佳时机的选择进行探讨。结果显示…     

脐血造血干/祖细胞移植研究进展

人类脐血富含造血干/祖细胞,作为骨髓和外周血以外的一种重要造血干细胞来源日益受到重视.脐血造血干/祖细胞移植用于临床已有十余年历史,本文就脐血在采集、纯化、保存、体外扩增、临床应用的研究现状及进展作一介绍.     

人树突状细胞体外提呈与EB病毒感染相关肿瘤抗原的研究

目的建立从人骨髓造血前体细胞体外培养扩增树突状细胞的方法 ,制备 EBV感染介导的相关肿瘤 (如何杰金氏病、鼻咽癌和 Burkitt's淋巴瘤等 )的疫苗。方法采用 Mini- MACS分离技术从正常人骨髓分离 CD34+ 造血干 /祖细胞 ,体外以重组细胞因子组合诱导培养 2周 ,同种混合淋巴细胞反应检测扩增 DCs的 T淋巴细胞刺激活性。结果从正常人骨髓分离得到高纯度 (>90 % )的 CD34+造血干 /祖细胞 ,经重组 h GM- CSF、h TNF- α、h IL- 3、h IL- 4的共同诱导培养 ,扩增得到大量DCs。扩增的 DCs表面具有不规则突起 ,高表达共刺激分子 CD1α,对同种异体 T淋巴细胞具有很强的刺激活性 ,负载抗原后刺激活性进一步增强。结论人 CD34+ 造血干 /祖细胞体外经 h GM- CSF、h TNF-α、h IL - 4、h IL - 3共同诱导培养 ,可生成大量功能成熟的 DCs,并可有效提呈与 EBV感染相关肿瘤的抗原 ,可望用于 EBV感染介导相关肿瘤的疫苗治疗。     

脐血造血干/祖细胞移植SCID小鼠的实验研究

目的 :检测扩增后脐血造血干 祖细胞的体内移植能力和造血活性 ,建立脐血细胞体外扩增优化方案和体内移植的SCID小鼠模型。方法 :采用无基质接触的液体悬浮培养方法扩增脐血CD34 细胞 ,将扩增前后的细胞移植给预先经过亚致死量辐照的SCID小鼠 ,4w后通过免疫荧光标记、PCR等检测存活小鼠体内的人源细胞。结果 :连续培养一定时间后 ,FL TPO SCF IL 6组脐血细胞得到持续扩增 ,并能维持一定比例的CD34 细胞 ;SCF IL 3 IL 6 GM CSF EPO组在第 2周时集落形成数已降低 ,第 4周时集落形成的细胞、CD34 细胞已基本检测不到。移植至少 4w后 ,在存活小鼠体内检测到人CD4 5 细胞和Alu基因。结论 :因子组合FL TPO CSF IL 6可以有效扩增脐血CD34 细胞 ,而且扩增后的细胞具有较高的移植效率和造血活性