雾化吸入和鼻内滴注嗜热吸水链霉菌诱导豚鼠大棚肺模型的比较

目的探讨雾化吸入嗜热吸水链霉菌抗原制剂能否诱导豚鼠大棚肺模型及比较雾化法和鼻滴法二者的差异。方法成年豚鼠40只,体重300～400g,雌性,随机分为模型组(雾化组A1、鼻滴组B1)和对照组(雾化组A2、鼻滴组B2),每组20只。A1组:嗜热吸水链霉菌抗原制剂5mL日1次雾化吸入,15min/次,连续12周;B1组:0.3mL抗原制剂鼻内滴注,连续3次/周,连续12周;A2组:0.9%无菌生理盐水5mL日1次雾化,15min/次,连续12周;B2组:0.9%无菌生理盐水0.3mL鼻滴,连续3次/周,连续12周。结果①影像学改变:A1组:第1周末未见异常;第2周末,可见双肺弥漫性磨玻璃影;第3周末,可见双肺微小结节影;第12周末,可见明显的纤维条索影。B1组:第1周末,可见双肺磨玻璃样改变;第2周末,可见双肺多发斑片状影;第3周末,可见双肺散在小结节影;第12周末,可见纤维条索影。对照(A2、B2)组无异常。②病理改变:A1组:第1周末未见异常;第2周末,可见肺泡炎改变;第3周末,可见肉芽肿改变;第12周末,可见纤维化改变。B1组:第1周末,可见肺泡炎改变;第2周末,可见渗出性改变;第3周末,可见肉芽肿改变;第12周末,可见纤维化改变。对照(A2、B2)组无异常。③肺组织研磨后培养,A1、B1组均可见嗜热吸水链霉菌生长。结论雾化吸入嗜热吸水链霉菌抗原制剂可诱导豚鼠大棚肺模型;雾化法致豚鼠大棚肺肺泡炎改变迟于鼻滴法1周出现。     

用热吸水链霉菌建立农民肺动物模型

热吸水链霉菌是从农民肺死者家中的稻草中分离出来的,但其是否为农民肺的病因未见报道。本实验用此菌在家兔体内复制成了农民肺模型,观察和初步探讨其血清免疫学和组织免疫学的变化和意义,证实热吸水链霉菌可以引起与人的农民肺相似的外源性过敏性肺泡炎的病变。     

免疫转印试验对热吸水链霉菌抗原组分的研究

免疫转印技术是一种将聚丙烯酰胺凝胶电泳与免疫酶标记技术相结合的新的电泳技术。我们试用此项技术动态观察了实验性农民肺家兔血清与热吸水链霉菌抗原组分的免疫反正。结果表明73Kd多肽是热吸水链霉菌的主要抗原，进一步分离提纯此抗原将有助于农民肺的血清学诊断和发病机制的探讨．     

不吸水链霉菌代谢产物抗真菌作用的研究：（Ⅱ）不吸水链霉…

本实验观察了不吸水链霉菌代谢产物对常见的浅部真菌和白色念珠菌，新型隐球菌在体内，体外的抗菌作用。结果表明，ＳＡＭＰ在体外有明显抗真菌作用，其效果与二性霉素Ｂ相近。ＳＡＭＰ可明显降低白色念珠菌血行感染和新型隐球菌脑内感染小鼠的死亡率。     

不吸水链霉菌代谢产物抗真菌作用的研究（Ⅰ）：高效价不吸水…

不吸水链霉菌是从土壤中筛选出的一株放线菌，其代谢产物具有广谱抗真菌作用。本文重点筛选了该链霉菌菌种培养基和发酵培养基，对培养基的配方、培养条件和培养时间进行了摸索，以期获得高效价的ＳＡＭＰ。     

溴化乙锭对吸水链霉菌产生除莠霉素的影响

从南京土壤中分离到一株吸水链霉菌,命名为NAP-05,该菌株能产生除莠霉素,并且在菌体细胞内存在另一种初步鉴定为聚醚类抗生素的物质。该菌还能分泌淀粉酶。用嵌入染料如溴化乙锭(EB)等处理该菌株,发现EB处理株大部分仍保持产抗能力,而用吖啶橙(AO)处理亲株后,大部分的处理株失去除莠霉素产生能力。用原生质体再生方法处理NAP-05,发现多数再生株的产抗能力下降,提示NAP-05菌株的除莠霉素生物合成调节可能受到染色体外因子的影响。     

不吸水链霉菌代谢产物抗真菌作用的研究（Ⅰ）高效价不吸水链霉菌代谢产物产生条件的筛选

不吸水链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｎｈｙｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）是从土壤中筛选出的一株放线菌（ＳＭ），其代谢产物（ＳＡＭＰ）具有广谱抗真菌作用。本文重点筛选了该链霉菌菌种培养基和发酵培养基，对培养基的配方、培养条件和培养时间进行了摸索，以期获得高效价的ＳＡＭＰ。结果表明，５号培养基最好，可作为菌种培养基，６号培养基产生的ＳＡＭＰ抑制真菌的效价最高。     

吸水链霉菌FC904(Streptomyces hygroscopicus FC904)原生质体形成的影响因素

目的探讨吸水链霉菌FC904(S.hygroscopicus FC904)原生质体形成的影响因素.方法用溶菌酶处理S.hygroscopicus FC904的菌丝体,比较在不同条件下原生质体的形成数.结果 S.hygroscopicus FC904在不同条件下原生质体的形成数不同,其原生质体形成的最适条件为:在菌丝体生长培养基中添加0.7%甘氨酸及10%的蔗糖;采用生长旺盛期的菌丝体制备原生质体;溶菌酶适宜浓度为2mg/ml;溶菌温度范围30～37℃;溶菌前每毫升压积菌丝体宜用P缓冲液5ml悬浮.结论菌丝体生长培养基成分、菌龄、溶菌酶浓度、溶菌温度是影响S.hygroscopicus FC904原生质体形成的主要因素.     

大肠杆菌气管注入致急性肺损伤的实验研究

目的：建立气管注入细菌致兔急性肺损伤（ALI）模型,为研究细菌致ALI的致病机制及其治疗提供理论依据.方法：兔分为：细菌注入组（Ⅰ组）,生理盐水注入组（Ⅱ组）,正常对照组（Ⅲ组）.对比观察3组以下指标：血流动力学、呼吸力学、血气分析、支气管灌洗液中的细胞数、蛋白含量、肺组织湿重/干重比及病理检查.结果：Ⅰ组与Ⅱ组、Ⅲ组比较,上述指标,均有明显差异（P均＜0.05）.结论：通过直接气管注入细菌可建立ALI模型.     

海水吸入致大鼠急性肺损伤模型的建立

目的:建立海水吸入肺损伤动物模型.方法:24只大鼠随机分为对照组9只和模型组15只.模型组大鼠屏气9～10 s后吸入海水,4 ml/kg,分2次进行;对照组大鼠不吸入海水.于海水吸入前、海水吸入后10、30、60、120、240 min观察动脉血气和呼吸频率的变化,并记录动物的生存时间.4 h后处死动物,观察肺系数、支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白(TP)含量和白细胞计数以及肺组织形态学的变化.结果:与对照组相比,模型组大鼠吸入海水后呼吸频率显著增加,动脉血氧分压(PaO2)显著降低(P＜0.05),之后虽逐渐回升,但一直维持在较低的水平;肺系数和TP含量均显著升高(P＜0.05);白细胞计数显著增加(P＜0.05);肺组织形态学显示明显的肺水肿、肺泡萎陷和炎细胞浸润情况.结论:成功建立海水吸入肺损伤的动物模型.     

大鼠胸部撞击致肺损伤模型的建立

目的 建立一种胸部撞击致肺挫伤的大鼠模型.方法 将84只SD大鼠随机分成7组(n=12),采用自制的胸部撞击装置,用不同撞击能量(2.7、2.0、1.8、1.5、1.2、0.9和0 J)对大鼠胸部进行撞击造成双侧肺损伤.监测撞击前后大鼠循环和呼吸功能变化.撞击120 min后处死大鼠,开胸行创伤评分,观察心肺组织形态学变化,并进行病理学评分,计算肺组织湿干比和肺泡灌洗液蛋白含量.结果 用1.2J能量撞击大鼠胸部可致理想的双侧肺损伤而无明显心脏损伤,动物死亡率较低.结论 采用自制胸部撞击装置建立的大鼠双侧肺损伤模型可以较好地模拟胸部撞击后双侧肺挫伤伤情,可用1.2J的撞击能量进行后续实验研究.     

鼻内滴注烟草提取物和脂多糖建立慢性阻塞性肺疾病小鼠模型的评价

目的：建立鼻内滴注烟草提取物（CSE）和脂多糖（LPS）制备慢性阻塞性肺疾病（COPD）小鼠模型,并探讨其可行性。方法：24只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组和模型组,每组12只,鼻内滴注CSE和LPS建立COPD小鼠模型,测定2组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数、中性粒细胞数和巨噬细胞数,观察2组小鼠肺组织病理学表现并测定PAS阳性细胞数、肺泡平均内衬间隔（MLI）和肺泡破坏指数（DI）,Western blotting法检测2组小鼠肺组织中E-cadherin、Vimentin和α-SMA蛋白表达水平。结果：实验4和6周时模型组小鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞数和巨噬细胞数明显高于对照组（P<0.01）,模型组小鼠肺组织出现典型粘液高分泌和肺气肿改变;实验4和6周时模型组小鼠PAS阳性细胞数、肺泡MLI （P<0.01）和DI （P<0.01）明显高于对照组;与对照组比较,实验4和6周时模型组小鼠肺组织中E-cadherin蛋白表达水平降低（P<0.01）,Vimentin和α-SMA蛋白表达水平升高（P<0.01）。结论：采用鼻内滴注CSE和LPS的方法可在较短时间内建立COPD小鼠模型。     

肺癌可溶性抗原致敏的DC诱导CTL特异性杀伤肺癌细胞的实验研究

目的 通过对负载人肺癌GLC-82细胞可溶性抗原的树突状细胞（DC）体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）对肺癌细胞的杀伤研究，为以DC为基础的肺癌免疫瘤苗的临床应用提供一定的实验依据。方法 通过用3MKCl提取法和弱酸洗脱法获得人肺腺癌细胞GLC-82的可溶性抗原多肽，用GLC-82细胞抗原多肽冲击致敏从人外周血单核细胞（PBMC）中用GM-CSF、IL-4和TNF—α体外诱导扩增并经鉴定的DC；利用负载GLC～82细胞抗原多肽的DC，刺激同种异体外周血T淋巴细胞活化增殖，诱导产生具有识别肺癌细胞抗原的特异性CTL；进一步探讨该CTL对GLC-82，肺癌CALU-6和人红白血病K562细胞的体外杀伤效应。结果 人PBMC体外经7d诱导出的DC，经光镜、电镜、免疫组化证实具有典型的树突状细胞特性；经GLC-82抗原致敏的DC诱导同种异体T淋巴细胞活化增殖产生CTL，诱导激活的CTL与靶细胞共育时镜下发现CTL靠近并聚集在肿瘤细胞周围，致使肿瘤细胞发生凋亡和坏死。结论肺癌可溶性蛋白抗原能活化致敏DC，无需明确肿瘤特异抗原，获取方法简便可行；联合应用GM—CSF、IL-4和TNF—α诱导人PBMC中的单核细胞，能诱导出功能较强的DC；致敏DC能强烈刺激初始型同种异体T淋巴细胞增殖产生CD8^＋表达增加的CTL;激活的CTL对肺癌靶细胞发挥高效而特异的细胞毒效应，对非肺组织瘤靶细胞也具有非特异性杀伤效应。     

改良兔体外循环急性肺损伤模型的建立

目的 探讨改良经主动脉、右心房插管,自体血预充的兔体外循环(CPB)急性肺损伤模型,及外周血肿瘤坏死因子α水平变化.方法 随机选择10只健康成年雄性新西兰兔建立体外循环模型.待心脏复跳稳定,终止体外循环后,兔存活4 h即判定为模型制作成功.监测生命体征,分别记录在麻醉后(T1)、在体外循环转流前(T2),阻断主肺动脉后15 min时(T3),主肺动脉的重新开放灌流后(T4),体外循环结束后1 h(T5)、4 h(T6)的生命体征值,与T2、T4、T6时刻采集动脉血进行血气分析,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测T2、T5、T6时刻外周血中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.结果 通过对10只兔的实验,成功改良了兔CPB急性肺损伤模型.术中平均动脉压维持55 mmHg以上,体外转流前后红细胞压积显著下降(T230.18±2.88%,T417.73±1.95%,P<0.05),血浆乳酸Lac浓度逐步升高,开放主肺动脉时明显增加(T23.65±1.13 mmol/L,T49.36±1.28 mmol/L,P<0.05).T6氧合指数(PaO2/FiO2)比T2显著下降(T2468.36±56.28 mmHg,T6281.64±55.76 mmHg,P<0.05),血清中TNF-α水平显著升高(P<0.05),肺间质水肿显著,炎性细胞浸润增加.结论 本实验改良的兔CPB急性肺损伤模型稳定可靠,可为研究体外循环引起的急性肺损伤提供稳定可靠的研究基础.     

线粒体毒素诱导伴有眩晕的突发性耳聋模型的建立

目的建立一个突发性感音神经性耳聋(SSNHL)的动物模型,以研究其发病机制和治疗方法。方法49只雄性豚鼠根据给药浓度和听性脑干反应(ABR)测试时间分为7组,用浸有0.3、0.5 mol/L3-硝基丙酸(3-NP)或磷酸盐缓冲液(PBS)的明胶海绵分别放置于豚鼠左耳圆窗龛,作用30 min后取出。4%多聚甲醛加1%戊二醛行活体心脏灌注固定,耳蜗JB4包埋、切片后做光镜观察。结果所有暴露于3-NP的动物均表现中、重度听力减退至ABR反应消失。高剂量(0.5 mol/L 3-NP)组动物均出现快相指向健侧的自发性眼震和不同程度的姿势失衡等单侧前庭功能损伤的典型症状;低剂量(0.3 mol/L3-NP)组仅1只动物出现自发性眼震,2只动物出现姿势失衡。前庭症状在暴露后2 d内消失。所有实验组动物柯蒂氏器和支持细胞出现一过性水肿。暴露后12 h,螺旋神经节细胞胞浆和胞核内有空泡形成,第7天螺旋神经节细胞变性。结论经圆窗膜投放3-NP至内耳可以复制出SSNHL的临床症状,螺旋神经节细胞损伤是其最明显的病理改变。     

猪自体肺移植模型的建立

目的:建立猪自体肺移植实验动物模型,为临床开展自体肺移植术提供实验基础?方法:健康杂种猪18只,分别行左侧第四肋间开胸,游离肺门后行左全肺切除,予修剪左下肺后,将离体的左下肺重新植入胸腔,即把下肺静脉重植于上肺静脉残端,并依次完成支气管和肺动脉吻合?依据术中左下肺叶是否行灌注和灌注液的不同,分为3组,每组6只,分别为:A组(未灌注组)?B组(常温肝素灌注组)及C组(低温Euro-Collins液灌注组)?分别于移植前?移植后0.5 ?1.0?2.0?4.0 h检测移植肺的肺静脉血氧分压(PaO2)?湿干重比(W/D ratio)?氧自由基髓过氧化物酶(MPO)活性;观察移植肺组织的光镜及电镜结构变化?结果:手术无一例失败,均存活?移植前,移植后0.5?1.0?2.0 h 3组移植肺的肺静脉血PaO2 ?肺组织的MPO和W/D无显著性差异(P > 0.05);与对A组相比,B组和C组移植后4 h的PaO2 ?MPO和W/D均有显著性差异(P < 0.05)?与A组相比,B组及C组病理损伤较轻,且两组损伤程度相似?结论:本模型稳定?可靠?重复性好,是研究自体肺移植较为理想的动物模型;常温肝素灌注后的供肺叶能满足自体肺移植的要求?     

内毒素复合油酸二次打击致大鼠急性肺损伤模型的建立

目的研究腹腔注射内毒素（LPS）和（或）静脉注射油酸（OA）的方法致大鼠急性肺损伤（ALI）模型的不同特点及其可能机制。方法将24只雄性Wistar大鼠随机分为4组,每组6只。对照组（C组）：腹腔注射生理盐水10ml/kg;内毒素组（LPS组）：腹腔注射1%LPS10mg/kg;油酸组（OA组）：静脉注射OA0.15ml/kg;内毒素＋油酸组（LPS＋OA组）：腹腔注射1%LPS10mg/kg,30min后静脉注射OA0.15ml/kg。观察120min内各组大鼠平均动脉压和心率变化率的改变。120min后处死动物采集标本。分别检测肺组织核转录因子κB（NF-κB）P65、血清IL-6、肺组织髓过氧化物酶（MPO）含量、动脉血气指标和肺组织湿-干重比（W/D）,HE染色观察肺组织病理学改变。结果与C组比较,LPS组肺组织NF-κBp65水平、MPO含量及血清IL-6含量显著增加,肺组织W/D比值及血气分析结果无显著性差异,病理组织学改变轻微;OA组肺组织NF-κBp65水平和MPO含量及血清IL-6含量无显著改变,肺组织W/D比值升高,pH值和PaO2降低,PaCO2升高,肺脏出现严重的肺泡上皮细胞损伤和肺泡结构破坏。LPS＋OA组肺组织NF-κBp65水平、MPO含量和W/D比值及血清IL-6含量显著增加,pH值和PaO2降低,PaCO2升高,肺泡破坏严重,大量组织液渗出。结论内毒素复合油酸可以产生协同作用,产生大量致炎细胞因子,并造成大鼠严重的肺脏病理生理改变,临床ALI/ARDS发病过程更为接近,是一种研究ALI发病机制及早期干预的较理想的动物模型。