ephrinB2真核表达载体的构建及其在Hela细胞的表达

目的构建ephrinB2重组真核表达载体,研究该质粒在细胞中的表达,为研究ephrinB2对肿瘤生长及血管生成的影响奠定基础。方法逆转录获得人ephrinB2全长cDNA序列,连接到pEGFPN1上,转化大肠杆菌,脂质体转染Hela细胞。RT-PCR检测转录情况,WB鉴定目的蛋白表达。结果酶切和测序证实正确构建重组质粒,并在Hela细胞中表达。结论成功构建了pEGFPN1-ephrinB2真核表达载体,并在Hela细胞中有效表达,为进一步研究ephrinB2的功能奠定基础。     

EphB4和ephrinB2在肿瘤中的研究进展

在人类基因组中Eph是RTK家族最大的亚族，包括Eph受体及其ephrin配体。EPH是Hirai等在人类eDNA文库筛选病毒致瘤基因vfps同源序列时被首先发现的。他们克隆出该基因全部eDNA序列后，运用Northern blot方法对一些人肿瘤细胞系进行表达分析后发现该基因在一株产生红细胞生成素的人肝癌细胞系ETL-1中呈现高表达，     

血管紧张素Ⅱ2型受体对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨激活血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）2型受体（ AT2 R ）对宫颈癌 Hela 细胞生长的影响。方法体外培养宫颈癌Hela细胞,培养基中加入AngⅡ1型受体阻滞剂氯沙坦及不同浓度的AngⅡ（ A组：1×10-8 mol/L;B组：5×10-8 mol/L;C组：1×10-7 mol/L）激活AT2R,培养12小时、24小时、48小时、72小时;MTS法检测细胞活性,计算不同浓度的AngⅡ的细胞抑制率。实时荧光定量PCR检测B淋巴细胞瘤-2基因（bcl-2）、Bax mRNA水平,Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果激活AT2R后各组细胞活性随着培养时间的延长而降低,高剂量的AngⅡ组细胞活性更低。与对照组相比较,B组、C组Bcl-2 mRNA表达水平均明显下降（P〈0.05,P〈0.01）;C组与A组相比较Bcl-2 mRNA表达水平进一步下降（P〈0.01）。与对照组相比较,A组、B组、C组Bax mRNA表达水平均明显升高（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.01）;C组与A组相比较Bax mRNA表达水平进一步升高（P〈0.01）。 Western blot结果表明激活AT2R后与对照组相比较,A组、B组、C组Bcl-2蛋白表达水平均明显降低（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.01）;与A组相比较B组、C组Bcl-2蛋白表达水平进一步降低（P〈0.05,P〈0.01）。与对照组相比较,A组、B组、C组Bax 蛋白表达水平均明显升高（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.01）;与A组相比较B组、C组Bax蛋白表达水平进一步升高（P〈0.05,P〈0.01）。结论宫颈癌细胞激活AT2 R后,上调Bax基因表达,同时下调抑Bcl-2基因表达,最终抑制宫颈癌细胞的生长和增殖,诱导其发生凋亡。     

选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法不同浓度NS-398处理体外培养的人宫颈癌细胞系Hela细胞后，采用噻唑蓝（MTT）法检测处理48h、72h后hela细胞的增殖活性，流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡。结果50、100、200umol／LNS-398处理hela细胞48h，72h后，细胞增殖明显受到抑制，呈时间和剂量依赖性特点。200umol／LNS-398处理hela细胞48h后，流式细胞仪细胞周期分析表明，NS-398处理组G1期细胞明显增加，S期细胞明显减少。而细胞凋亡指数无明显变化。结论体外实验表明，NS-398能有效抑制宫颈癌细胞生长，其机制可能与其阻滞细胞周期有关。     

反义 Bcl -2寡核苷酸对阿霉素诱导的人宫颈癌SiHa 细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨siRNA抑制线粒体Bcl-2基因联合阿霉素对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及相关作用机制。方法将化学合成的靶向Bcl-2基因siRNA序列转染至SiHa细胞中,Western blot验证转染效率后,将SiHa细胞分为5组：空白对照组（不加任何处理）、阴性对照组（转染阴性siRNA序列）、干扰组（转染Bcl-2 siRNA序列）、阿霉素组（5μg／mL阿霉素处理）、联合组（转染siRNA序列＋5μg／mL阿霉素处理）。通过MTT比色法检测细胞增殖水平、流式细胞术检测细胞凋亡水平、分光光度法分别检测半胱氨酸蛋白酶Caspase-3和Caspase-9的活力变化以及细胞色素c（ Cyt-c）释放水平变化。结果 Bcl-2 siRNA转染后,相对于阿霉素组,联合组细胞增殖率明显降低,凋亡水平则明显上升（P＜0.01）;细胞周期各时相重新分布,G0／G1期细胞明显减少（P＜0.01）,S期和G2／M期细胞则明显增多（P＜0.01）;Caspase-3和Caspase-9活力明显升高,Cyt-c释放水平亦显著增加（P＜0.01）。结论 Bcl-2靶向反义siRNA序列联合阿霉素处理能显著促进线粒体依赖性的细胞凋亡, Bcl-2可作为人宫颈癌基因治疗的候选靶点。     

过表达Hsa-miR-133a-2对宫颈癌细胞增殖与侵袭的影响

目的 探究hsa-mir-133a-2对宫颈癌细胞表型的影响及其在宫颈癌细胞增殖与侵袭中的潜在分子机制。方法 通过癌症基因组图谱-宫颈鳞癌和腺癌(The Cancer Genome Atlas-Cervical squamous cell carcinoma and endocervical adenocarcinoma, TCGA-CESC)验证宫颈癌组织和癌旁组织中hsa-mir-133a-2的表达情况;对TCGA-CESC中提取的307例高表达和低表达hsa-mir-133a-2的宫颈癌患者的临床信息进行K-M生存分析以评估其预后价值;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术对正常宫颈细胞和宫颈癌细胞中hsa-mir-133a-2的表达进一步检测;采用细胞计数试剂盒-8(CKK8)和transwell法检测hsa-mir-133a-2对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。结果 与宫颈癌癌旁组织细胞和正常宫颈细胞相比,hsa-mir-133a-2在宫颈癌细胞中表达水平均显著下调(P<0.05);K-M生存分析结果表明,高表达hsa-mir-133a-2的宫颈癌患者具有相对较...     

中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响

目的:探讨中药清毒栓对宫颈癌Si Ha细胞增殖的影响及其诱导凋亡作用的可能机制。方法:设立空白对照组,清毒栓高、中、低剂量组(0.16、0.04、0.01 g/ml)及保妇康栓组(0.017 5 g/ml),分别以不同药液作用于宫颈癌Si Ha细胞24 h、48 h、72 h,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测细胞增殖情况,采用线粒体膜电位法检测细胞凋亡情况。结果:不同剂量的清毒栓作用24 h、48 h、72 h时对宫颈癌Si Ha细胞的增殖均具有一定的抑制作用,其中以清毒栓高剂量组在48 h时作用最为明显。不同剂量的清毒栓均可引起宫颈癌Si Ha细胞线粒体膜电位的改变,进而引起不同程度的细胞凋亡;经统计学分析显示,清毒栓各剂量组、保妇康栓组的凋亡率与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05),清毒栓低、中剂量组与清毒栓高剂量组比较,差异亦有统计学意义(P0.05)。结论:高剂量的中药清毒栓在48 h时对宫颈癌Si Ha细胞增殖的抑制作用最为明显,其作用机制可能是通过使线粒体膜电位降低来促进肿瘤细胞的凋亡。     

调控SOX2对HPV-16阳性宫颈癌细胞增殖转移的影响

目的 探讨SOX2基因对HPV-16阳性宫颈癌细胞株增殖转移的影响。方法 培养Caski-EGFP细胞后,采用空白腺病毒、SOX2基因沉默的腺病毒载体、SOX2基因过表达的腺病毒载体转染Caski-EGFP细胞并将细胞依次分为C、S、E组。Western blot法及实时荧光定量PCR （RT-PCR）检测SOX2及mRNA水平,检测细胞是否构建成功;CCK-8细胞增殖实验检测各组癌细胞的光密度值,绘制细胞活力曲线,分析SOX2基因对宫颈癌细胞株增殖活力的影响;Transwell侵袭试验分析各组癌细胞侵袭抑制率的改变,探讨SOX2基因对宫颈癌细胞株侵袭转移能力的影响。结果 RT-PCR、Western blot法检测,结果显示mRNA、SOX2蛋白表达量分别为E组 > C组 > S组,差异有统计学意义（P<0.05）,提示构建的细胞构建成功可进行下一步实验。CCK-8细胞增殖实验结果显示,不同时间下,C组、S组、E组吸光度值、细胞活力均呈上升趋势,3组都在72h达到高峰,差异有统计学意义（P<0.01）;比较各时间点下3组癌细胞的吸光度值及细胞活力差异,癌细胞培养后第0、24、48及第72h,E组相较于对照组C组而言,癌细胞的吸光度值及细胞活力均显著升高,差异有统计学意义（P<0.01,F_C-E组间=3.764,P_C-E组间=0.001）,S组相较于对照组C组而言,癌细胞的吸光度值及细胞活力均有所降低,差异有统计学意义（P<0.01）。E组相较于对照组S组而言,癌细胞的吸光度值及细胞活力均显著降低,差异有统计学意义（P<0.01,F_组间=4.286,P_组间=0.000）;不同时间点与分组之间存在交互作用（F_交互=3.784,P_交互=0.001）;Transwell小室实验结果显示,以C组实验对照组的细胞侵袭能力设定为100%,则E组的相对侵袭抑制率为146%;S组细胞的相对侵袭抑制率为75%。对比可知,E组的细胞侵袭能力高于实验对照组C组,差异有统计学意义（P<0.01）;S组低于实验对照组C组,差异有统计学意义（P<0.05）;E组细胞侵袭能力明显高于S组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 本研究进一步探讨了SOX2基因对高危型HPV感染（HPV-16）的宫颈癌细胞株增殖能力及侵袭转移能力方面的促进作用,抑制SOX2的表达有望成为一种早期诊断治疗宫颈癌的新途径。     

卷曲乳酸杆菌对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究卷曲乳酸杆菌对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:用卷曲乳酸杆菌与SiHa细胞共培养6 h、12 h、18 h及24 h,CCK-8法检测卷曲乳酸杆菌对SiHa细胞增殖的影响;流式细胞术检测卷曲乳酸杆菌对SiHa细胞凋亡的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清液中白细胞介素-2(IL-2)的含量;实...     

白细胞介素-2对培养的宫颈癌细胞HeLa增殖的促进作用

目的 研究白细胞介素-2(IL-2)对人宫颈癌HeLa细胞系增殖的影响，并探讨其可能的机制。方法 以培养的HeLa细胞进行以下实验：以MTT比色法，测定IL-2对该细胞增殖的剂量效应；用流式细胞技术，观察IL-2对该细胞周期各阶段DNA含量的影响；用激光共聚焦显微镜技术，检测IL-2对该细胞内Ca^2 水平的影响。结果 IL-2(10-1000U／ml)可显著促进HeLa细胞的增殖。用流式细胞技术检测细胞DNA的含量发现，IL-2(100U／ml)可提高该细胞由G1期进入S期的比例。激光共聚焦法检测到IL-2(100U／ml)可升高细胞内的Ca^2 浓度。结论 IL-2参与了对宫颈癌细胞增殖的调节，其促进增殖作用与该细胞周期DNA含量的变化和Ca^2 浓度的改变有关。     

水通道蛋白3介导过氧化氢转运对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移的作用研究*

目的 探讨水通道蛋白3（AQP3）介导肿瘤微环境中过氧化氢（H2O2）转运对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移的作用。方法 应用宫颈癌HeLa细胞,构建AQP3 shRNA慢病毒稳定转染宫颈癌细胞系,通过克隆形成、CCK-8、细胞平板克隆形成、Western blotting等比较H2O2处理前后细胞表型的差异。结果 成功构建AQP3-464- shRNA慢病毒稳定转染HeLa细胞系,AQP3 shRNA抑制肿瘤微环境中H2O2转运,抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移,AQP3 shRNA抑制肿瘤微环境中H2O2转运调控下游信号蛋白激酶B（PKB）。结论 AQP3介导宫颈癌HeLa细胞中H2O2跨膜转运,激发细胞内依赖第二信使H2O2的下游信号PKB,促进HeLa细胞的增殖、迁移。     

子宫颈癌新辅助化疗的疗效

目的：研究宫颈癌新辅助化疗的疗效及与临床资料之间的关系。方法：选择行新辅助化疗的Ib2~IIIa期宫颈癌患者97例,分析化疗后的近期疗效,影响疗效的有关因素和术后病理结果。结果：新辅助化疗的近期有效率为86.6%;与疗效有关的因素为临床分期和病理类型;新辅助化疗后84例患者可以手术,术后病理降级的有17例,术后淋巴结阳性者19例,宫旁浸润者6例;随访中1例患者术后1年内死亡,5例复发,余患者均健在。结论：局部晚期宫颈癌新辅助化疗效果好,新辅助化疗后手术能改善患者预后,提高术后生存率。     

选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制

目的:研究选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制,探讨NS-398与卡铂在宫颈癌治疗中的协同作用.方法:用NS-398、卡铂及两者联合作用人宫颈癌Hela细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测NS-398、卡铂及两者联合对宫颈癌细胞增殖的影响,流式细胞仪PI染色法分析NS-398、卡铂处理后宫颈癌细胞凋亡率和细胞周期的改变.结果:NS-398、卡铂对人宫颈癌hela细胞的增殖具有抑制作用.卡铂联合NS-398对人宫颈癌hela细胞的增殖抑制作用显著增加,其联合抑制率近似于NS-398和卡铂单药抑制率之和,也近似于2倍卡铂剂量时的增殖抑制率.流式细胞仪检测发现,与对照组比较,NS-398处理组G1期细胞明显增加,而S期细胞明显减少,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而卡铂处理组G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,两组比较有统计学意义(P＜0.05).NS-398(200 μmol/L)作用Hela细胞48 h后,流式细胞仪检测发现,NS-398处理组凋亡率为3.43%±0.02%,对照组凋亡率为1.48%±0.03%,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).而卡铂(80 mg/L)处理组凋亡率为9.32%±0.02%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的增殖具有抑制作用.NS-398对宫颈癌细胞的作用可能与凋亡无关.NS-398与卡铂在宫颈癌化疗中具有叠加作用.     

Smad2蛋白在子宫颈癌中的表达及意义

目的探究Smad2蛋白在正常子宫颈(normal cervical epithelium,NCE)、子宫颈上皮内瘤变(cervi-cal intraepithelial neoplasia,CIN)与子宫颈浸润癌(invasive carcinoma of cervix,ICC)中的表达情况,以及其与各种临床病理指标间的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测15例NCE、62例CIN和41例ICC组织石蜡样本中Smad2蛋白的表达情况,并结合子宫颈癌的临床病理指标进行分析。结果 Smad2蛋白主要定位在细胞胞质中,也有少量位于胞核中。Smad2蛋白在ICC中表达率为36.6%(15/41),与CIN9(42/62,67.7%)和NCE(13/15,86.7%)相比明显偏低(P<0.05)。对41例子宫颈癌样本的分析发现,Smad2蛋白阳性表达与子宫颈癌患者的年龄、组织学类型、临床分期、有无淋巴结转移无关(P>0.05),但与病理分级有关(P<0.05)。结论 Smad2蛋白在子宫颈癌组织中表达较正常组织和良性病变组织低,并与患者病理分级密切相关,Smad2蛋白表达的异常可能在子宫颈癌的发生与恶化中起到重要作用。     

纳米雄黄对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨纳米雄黄对不同宫颈癌细胞株Hela(HPV18阳性,腺癌),Caski(HPV16阳性,鳞癌), C33A(HPV阴性,腺癌)增殖、凋亡的影响。方法：体外培养3种不同宫颈癌细胞,采用不同质量浓度(5,10, 20,40 mg/L)纳米雄黄作用于不同宫颈癌细胞24,48,72,96 h,相差显微镜下观察不同质量浓度组与对照 组细胞形态学变化;MTT法测定药物对细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果： 纳米雄黄混悬液(5,10,20,40 mg/L)作用于Caski,Hela,C33A细胞24,48,72,96 h,均可抑制细胞增殖, 且呈时间剂量依赖性,抑制率波动于9.02%~49.06%,以20 mg/L质量浓度组为例,抑制率Caski(39.15%)>Hela (36.17%)>C33A(30.56%)。随着质量浓度的增加,早期凋亡、中晚期凋亡细胞均增加,凋亡率(早期+中晚期凋亡率)波 动于19.29%~99.54%,以20 mg/L质量浓度组为例,凋亡率Caski(60.43±2.88)%>Hela (41.95±3.01)%>C33A (43.49±2.19)%。 细胞周期结果显示高质量浓度组(20,40 mg/L)对Hela,Caski细胞有G2/M期阻滞。结论：纳米雄黄混悬液可抑制不同 宫颈癌细胞株的增殖,促进细胞凋亡,其对Caski细胞的作用最强,对Hela细胞次之,对C33A细胞相对最弱。对HPV 阳性的细胞可产生G2/M期阻滞。     

微波辐射对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用及其机制

目的 : 探讨不同强度微波辐射对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用及对氧化应激水平的影响,阐明微波辐射对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用机制。方法：分别以强度为2.5、5.0、10.0、15.0和20.0 mW/cm的微波处理HeLa细胞20 min作为不同剂量辐射组,同时设立假辐射组（0 mW/cm）作为对照组,采用倒置显微镜观察细胞形态改变;MTT法检测微波辐射对细胞增殖的抑制情况;试剂盒测定辐射后细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;Western blotting法检测细胞内核转录因子-κB(NF-κB)和热休克蛋白70(HSP 70)表达水平。结果：各剂量微波辐射组HeLa细胞数量明显减少,细胞皱缩变形,体积缩小,随着辐射强度的增加变化愈明显; 2.5、5.0、10.0、15.0和20.0 mW/cm强度的微波作用细胞24 h,HeLa细胞的增殖抑制率均明显高于对照组（P<0.05）; 微波辐射后细胞内MDA含量随着辐射强度的增加,与对照组细胞比较呈上升趋势,各剂量辐射组HeLa细胞SOD活性较对照组显著下降（P<0.05）。Western blotting检测,微波辐射后细胞内HSP 70表达水平呈增加趋势,而NF-κB蛋白的表达水平呈明显的下降趋势。结论: 微波辐射对人宫颈癌HeLa细胞增殖具有抑制作用,其可能机制是改变细胞内氧化及抗氧化平衡。     

COX-2基因在宫颈癌组织中表达的临床研究

目的:探讨环氧化酶-2(cyclooxy-genase-2,COX-2)在宫颈癌组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学技术分别对宫颈癌组织和正常宫颈组织中的COX-2蛋白的表达状况进行检测。结果:COX-2蛋白在20例正常组织中不表达,在55例宫颈癌组织中,COX-2阳性表达28例,阳性率为50.9%。癌组织中COX-2的表达率与正常组织比较有差异(P<0.05)。COX-2蛋白的阳性表达率与临床分期差异有统计学意义(P<0.05)。COX-2蛋白的表达量与宫颈癌的分化程度和局部淋巴结转移差异有统计学意义(P<0.05)。结论:COX-2蛋白的表达与宫颈癌的发生发展有一定关系,可作为预后评估的一项参考指标。     

p63、Bcl-2、ki-67在宫颈上皮内瘤样病变、浸润癌中的表达及意义

目的 研究p63、Bcl-2和ki-67在宫颈上皮内瘤样病变(CIN)、浸润癌中的表达及p63与。Bcl-2、ki-67的不同点,探讨p63对宫颈病变发生的影响。方法 采用免疫组化Power Vision^TM二步法,检测80例宫颈组织(包括正常宫颈、宫颈炎、CIN、鳞癌及腺癌)中p63、Bcl-2和ki-67的表达。结果 p63在正常宫颈上皮及鳞状化生上皮中主要表达在宫颈移行带区具有增生潜能的基底细胞;p63的阳性率与CIN分级呈正比,但CINⅢ与鳞癌阳性率差异无显著性;p63在腺癌中无表达。Bcl-2的表达与CIN分级无明显相关性。ki-67的表达与宫颈癌组织分化程度成正相关。Bcl-2和ki-67在鳞癌、腺癌中阳性表达率均无差异。结论 p63在宫颈癌形成早期可能起促癌作用,且可能是鳞状上皮源性肿瘤的标记物。p63可能与细胞增殖有关。