IL-3、G-CSF和GM-CSF在体外对阿糖胞苷细胞毒性影响

目的证实基因重组造血生长因子（ｒｈＨＧＦ）与化疗药物联合应用于急性髓性白血病（ＡＭＬ）的治疗是一种新的策略,可能有助于提高化疗药物对ＡＭＬ细胞的杀伤。方法采用对磺硝基四唑（ＩＮＴ）比色法,研究了１７例ＡＭＬ病人和８例正常人的骨髓细胞在体外对阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）的敏感性,分别观察了Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３３种细胞因子对其敏感性的影响。结果ＡＭＬ细胞分别对Ａｒａ－Ｃ敏感性存在着较大差异;Ｇ－ＣＳＦ,ＧＭ－ＣＳＦ,ＩＬ－３３种因子均能增加Ａｒａ－Ｃ对ＡＭＬ细胞的杀伤作用。结论３种细胞因子的作用有很大的异质性,３种ｒｈＨＧＦ均不能增加Ａｒａ－Ｃ对正常骨髓细胞的细胞毒性。     

5—氟脲嘧啶对耐顺铂人肺腺癌细胞A549^DDP的程序依赖性逆转作用

用耐顺铂（ＣＤＤＰ）人肺腺癌细胞系Ａ５４９ＤＤＰ作模型，研究了５－ＦＵ对ＣＤＤＰ耐药的程序依赖性逆转作用。５－氟脲嘧啶（５－ＦＵ）预处理Ａ５４９ＤＤＰ２４ｈ后立即给予ＣＤＤＰ，ＣＤＤＰ细胞毒性增加３．９倍；５－ＦＵ预处理Ａ５４９ＤＤＰ后间隔２４或４８ｈ再给予ＣＤＤＰ，其细胞毒性分别增加２０倍和２５０倍，甚至较亲代细胞Ａ５４９更为敏感；如先给ＣＤＤＰ后给５－ＦＵ则细胞毒性仅增加１．８倍。５－ＦＵ对亲代细胞亦有类似效应但细胞毒性增加程度明显低于耐药细胞。５－ＦＵ预处理后间隔２４，４８ｈ，细胞内ＧＳＨ含量逐渐降低，与细胞毒性逐渐增加相一致。如用ＢＳＯ耗竭Ａ５４９ＤＤＰ细胞内ＧＳＨ，ＣＤＤＰ细胞毒性增加６．４倍，仅能部分逆转ＣＤＤＰ耐药。５－ＦＵ明显抑制ＭＲＰ的表达，但对ＧＳＴπ的表达无影响。在５－ＦＵ预处理后的无药间隔时间内，给予无毒浓度的三苯氧胺则有明显的协同效应。结论：程序性给予５－ＦＵ通过降低细胞内ＧＳＨ含量和抑制ＭＲＰ的表达能完全逆转ＣＤＤＰ耐药     

IL—3,G—CSF和GM—CSF在体外对阿糖胞苷细胞毒性影响

目的 证实基因重组造血生长因子（ｒｈＨＧＦ）与化疗药物联合应用于急性髓性白血病（ＡＭＬ）的治疗是一种新的策略，可能有画于提高化疗药物对ＡＭＬ细胞的杀伤。方法 采秀对磺硝基四唑（ＩＮＴ）比色法，研究了１７例ＡＭＬ病人和８例正常人的骨髓细胞在体外对阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）的敏感性，分别观察了Ｇ－ＣＳＦ，ＧＭ－ＣＳＦ，ＩＬ－３３种细胞因子对其敏感性的影响。方法 ＡＭＬ细胞分别对ＡｒａＣ敏感性存在着较大差异     

急性白血病细胞体外自主生长与自分泌GM—CSF水平测定及其临床意义

目的：探讨急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ）细胞体外自发生长的原因及其临床意义。方法：应用甲基纤维素半固体集落培养和＾１２５Ｉ放射免疫测定法对１６例ＡＭＬ细胞进行白血病克隆形成单位计数和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）生成水平测定。结果：１１例（６８．７５％）ＡＭＬ细胞在无外源ＧＭ－ＣＳＦ时自主生长；自主细胞生长民政部与ＧＭ－ＣＳＦ水平呈正相关，细胞生长组与无细胞生长组的ＧＭ－ＣＳＦ水平差异有     

腹腔注射分泌粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子的重组痘苗病毒的抗肿瘤肺转移作用

通过体内途径直接注射各种载体进行细胞因子基因治疗，具有重要的临床意义。作者观察了表达小鼠粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因的重组痘苗病毒（ＶＶＧＭ－ＣＳＦ）对肺转移荷瘤小鼠模型的治疗作用。给Ｃ５７ＢＬ／６小鼠尾静脉注射２×１０５Ｂ１６Ｆ１０细胞３天后开始腹腔内注射ＶＶＧＭ－ＣＳＦ１０６ＰＦＵ／０．１ｍｌ，２次／周，连续治疗２周。结果显示，ＶＶＧＭ－ＣＳＦ能够显著减少荷瘤小鼠肺转移结节的数目，并明显延长荷瘤小鼠的存活期。研究发现，经过ＶＶＧＭ－ＣＳＦ治疗，小鼠腹腔巨噬细胞的杀伤、吞噬及其释放一氧化氮的能力明显提高，结合其它实验结果，荷瘤小鼠持续表达ＧＭ－ＣＳＦ并导致以上巨噬细胞功能改变，可能是ＶＶＧＭ－ＣＳＦ的抗肿瘤转移作用机理之一。     

整合素β３与肺癌Ａ５４９细胞对ＡＤＭ敏感性的关系

目的　探讨整合素β３（Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ３）对人肺腺癌Ａ５４９细胞系的药物敏感性的作用及可能机制。方法　采用三维培养方法获得Ａ５４９细胞团簇（ＭＣＳ）;血球计数器计数法比较阻断Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ３作用前后Ａ５４９ＭＣＳ对阿霉素（ＡＤＭ）的敏感性;流式细胞术检测Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ３表达和Ａ５４９细胞凋亡情况。结果　经过５天细胞培养,成功建立了Ａ５４９ＭＣＳ。在一定浓度范围内（＜０.０２μｇ／ｍｌ）,Ａ５４９ＭＣＳ中Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ３表达量随ＡＤＭ浓度的增加而增加。阻断Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ３的作用后,Ａ５４９ＭＣＳ对ＡＤＭ的敏感性增强,半数抑制浓度ＩＣ５０由０.１９μｇ／ｍｌ下降至０.１１μｇ／ｍｌ,细胞凋亡率从（１５.８１±１.８７）％上调至（３０.１４±２.８９）％。结论　Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ３的表达水平能够影响Ａ５４９ＭＣＳ的药物敏感性,可能与Ｉｎｔｅｇｒｉｎβ３抑制凋亡相关。     

血管生成抑制素Endostatin研究新进展

目的：探讨抗ＰＭＬ－ＲＡＲα反义核酸对早幼粒白血病细胞生长、细胞周期、细胞凋亡的作用。方法：以ＮＢ４细胞株为研究对象;细胞计数采用台盼兰排除、计数板计数法;白血病细胞集落采用甲基纤维素半固体培养;流式细胞仪（ＦＣＭ）用于检测细胞凋亡和细胞周期。结果：以６０μｇ／ｍｌ的终浓度处理细胞,抗 ＰＭＬ－ＲＡＲα融合部位反义核酸（ＦＵＡＳ）能明显抑制ＮＢ４细胞增殖及白血病细胞集落（ＡＭＬ－ＣＦＵ）形成,最大抑制率分别为４６．８％,５１．６％;ＧＭ－ＣＳＦ能减弱ＦＵＡＳ的作用,ＦＵＡＳ作用时间越短,ＧＭ－ＣＳＦ促ＡＭＬ－ＣＦＵ增加越明显;ＦＵＡＳ处理第７,９天,出现明显的凋亡细胞群,凋亡细胞百分比分别为４１．０％,３４．２％;ＦＵＡＳ处理第５天Ｓ期下降,Ｇ２／Ｍ期升高,第７天Ｃ０／Ｇ１期明显升高,Ｓ期回升。结论：抗ＰＭＬ－ＲＡＲα反义核酸具有抑制早幼粒白血病细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用。     

逆转录病毒载体介导人 GM-CSF 基因在 HL-60 白血病细胞的高效转移和表达

目的探讨将外源基因导入白血病细胞的条件及可行性，为造血系统恶性肿瘤的基因治疗奠定基础。方法采用脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）包装技术将Ｎ２Ａ／ＣＭＶ／ｈＧＭ－ＣＳＦ导入包装细胞ＰＡ３１７，获得重组逆转录病毒，将重组病毒悬液感染人髓系白血病ＨＬ－６０细胞，经Ｇ４１８筛选出ＨＬ－６０转基因细胞群，应１用ＭＴＴ法测定ＧＭ－ＣＳＦ活性。结果ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测结果证实，ＧＭ－ＣＳＦ基因成功地转移并整合到ＨＬ－６０细胞基因组中，而未转基因和转空载体Ｎ２Ａ的ＨＬ－６０细胞经ＰＣＲ检测未能扩增出特异性片段。经ＧＭ－ＣＳＦ依赖株ＴＦ－１检测，转基因细胞分泌的ＧＭ－ＣＳＦ生物学活性为６０～２００ｎｇ／ｍｌ（细胞１×１０６，培养２４小时），而未转基因及转空载体Ｎ２Ａ的ＨＬ－６０细胞培养上清无ＧＭ－ＣＳＦ活性。结论逆转录病毒载体介导的ｈＧＭ－ＣＳＦ基因能在体外培养的人ＨＬ－６０白血病细胞中获得高效的转移和表达。     

TNF—α和IFN—γ抑制肺腺癌A549细胞系生长的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）和干扰素（ＩＦＮ－γ）联合应用对人肺腺癌Ａ５４９细胞系的细胞毒性作用。方法 实验分为空白组、对照组、ＴＮＦ组、ＩＦＮ且及ＴＮＦ＋ＩＦＮ组，应用ＭＴＴ经色法检测各组的ＯＤ值，计算其抑制率。结果 ＴＮＦ－α和ＩＦＮ－γ对人肺腺癌Ａ５４９细胞系均有直接抑制作用，联合用药有明显提高ＴＮＦ对Ａ５４９细胞系的抑制效应。结论 ＴＮＦ－α和ＩＮＦ－γ对人肺腺癌Ａ５４９细胞系有明     

腺病毒介导的人GM-CSF基因转染瘤苗增强机体免疫功能的实验研究

目的 研究腺病毒介导的人ＧＭ－ＣＳＦ基因转染瘤苗体内抗肿瘤免疫作用极其机理。方法 应用ＧＭ－ＣＳＦ基因转染、的瘤苗对小鼠肝癌模型进行免疫基因治疗,观察该疗法对荷瘤小鼠脾细胞ＮＫ、ＬＡＫ、ＣＴＬ活性的影响、脾淋巴细胞围化反应的影响以及荷瘤习的生存期。结果 经ＧＭ－ＣＳＦ基因转染瘤苗治疗后,插细胞ＣＴＬ活性显著升高,而ＮＫ、ＬＡＫ细胞活性未见明显增强、脾淋巴细胞转化反应显著增强、生存期显著延长。结论     

左旋肉碱对化疗时肾脏作用的实验研究

目的　探讨左旋肉碱对 5 -Fu致肾脏损伤的保护作用。方法　 2 4只大鼠分为对照组和实验组 ,两组均于实验第 4d以 5 Fu灌注腹腔造成大鼠肾脏损伤的模型 ,实验组每日给予左旋肉碱灌胃 ,第 8d处死后行一氧化氮 (NO)、丙二醛 (MDA)含量测定及谷胱甘肽过氧化氢酶 (GSH Px)、一氧化氮合酶 (NOS)的酶活性检测。结果　肾脏组织中实验组NOS酶活性及MDA、NO含量均较对照组明显降低 (P <0 0 5 ) ;而GSH Px酶活性与对照组相比明显增高 (P <0 0 5 )。结论　左旋肉碱对 5 Fu引起大鼠肾脏损伤的保护作用 ,可能是通过提高组织清除氧自由基的能力 ,减少氧自由基的生成 ,降低脂质过氧化反应引起的肾脏细胞结构和功能异常实现的     

原位杂交技术在淋巴瘤研究中的应用

原位杂交是在组织切片或细胞涂片上检测核酸分子的一种方法，它是病理学研究的重要手段。本文介绍原杂交的特点及其在淋巴瘤研究中的应用，包括病毒感染、染色体异常、淋巴瘤相关基因及转录体的检测。     

PHA对CIK细胞体外扩增影响的研究

目的:观察植物血凝素PHA对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinducedkillercells,CIK)体外扩增的影响。方法:在外周血单个核细胞定向诱导CIK细胞时加或不加PHA,观察细胞增殖的变化,流式细胞仪检测细胞的免疫表型,MTT法测定细胞的杀伤活性。结果:PHA能明显提高CIK细胞的扩增倍数及体外杀伤活性,P=0.041。结论:为CIK细胞的过继性免疫治疗提供一种新方法。     

CPP-Id对小鼠树突细胞表面共刺激分子表达的影响

背景与目的:B细胞淋巴瘤的独特型(idiotype,Id)免疫球蛋白可作为肿瘤特异性抗原诱发免疫反应抑制肿瘤的发展。本实验拟探讨小鼠淋巴瘤细胞株A20中Id-CTL表位的存在,了解细胞穿透肽(cell-penetratingpeptide,CPP)负载的Id(CPP-Id)进入树突细胞(dendriticcell,DC)的量,以及在细胞内的分布和进入细胞的时相,同时检测其对DC表面标志表达的影响。方法:用RT-PCR方法扩增A20细胞株的Id抗原CTL(cytotoxicitylymphocyte)表位的基因片段,并测序确定氨基酸的序列;通过流式细胞仪检测CPP-Id与Id进入小鼠DC的量的差异及抗原负载前后的DC表型的表达;共聚焦显微镜观察CPP-Id进入细胞的过程及时间;荧光显微镜观察CPP-Id在细胞内的分布。结果:RT-PCR扩增产物为660bp的片段,测序结果表明A20细胞株的Id抗原CTL表位的基因存在。共聚焦显微镜检测显示CPP-Id能在最初200s内快速进入DC,单纯Id进入DC的量很少。10μmol/L的CPP-Id负载的DC细胞平均荧光强度(MFI)高于单独使用Id组(4.35±0.48vs.1.14±0.33,P<0.005);两者负载的DC表面标记CD80、CD86、CD54及MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子表达均比未成熟DC明显增加。结论:CPP-Id比Id进入小鼠DC的量明显增加,CPP肽可以提高Id抗原进入细胞的效率;CPP-Id体外冲击DC后,可以使DC表面MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子,协同刺激分子CD80、CD86以及粘附分子CD54表达显著增高,有利于活化CTL。     

Effects of graft-versus-host reaction on inhibition of tumor growth in vivo and on tumor cytotoxicity in vitro.

In DA X Wistar F1 rats, growth of 10(4) Wistar-specific Sp 1 carcinoma cells s.c. was commonly prevented by a mild subclinical graft=versus-host reaction produced by injecting 50 X 10(6) Wistar spleen cells i.p. either concurrently with the tumor or 7 to 14 days previously, Spleen cells alone had no effect on established tumor, but their injection on Day 14 significantly reduced the recurrence rate after excision of tumor on Day 21. In vitro tests in tumor-bearing rats with graft-versus-host reactions showed increased spleen lymphocyte and serum cytotoxicity; these mechanisms may inhibit tumor growth in vivo. Because Wistar lymphocytes and Sp 1 cells are syngeneic, inhibition of tumor cannot be due to allograft rejection but is probably an effect of increased host immunoreactivity during the graft-versus-host reaction.     

siRNA抑制食管癌EC9706细胞VEGF-C体内外表达的定量分析

目的观察小分子干扰RNA(siRNA)对人食管癌EC9706细胞中血管内皮生长因子C(VEGF-C)体内外表达的抑制作用。方法根据VEGF-C cDNA已知序列,设计并体外转录合成3条siRNA,将它们分别导入载体质粒中,用脂质体介导分别转染EC9706细胞,并以无关序列转染和正常EC9706细胞为对照。以免疫组化S-P法和定量分析技术,分别检测上述各组细胞中和荷瘤动物瘤组织中VEGF-C蛋白的表达强度(positive unit,PU)。结果未转染细胞对照组和无关序列转染组,均有大量VEGF-C蛋白阳性颗粒,两者之间PU差异无显著性;siRNA转染的3组中,仅有少量VEGF-C阳性表达颗粒,与未转染细胞对照组和无关序列组相比,PU值差异均有统计学意义(P<0.01)。结论VEGF-C siRNA能有效抑制食管癌EC9706细胞中VEGF-C体内外的表达,可望成为一种抗食管癌淋巴管生成的新方法。     

淫羊藿苷对急性早幼粒白血病细胞体内外效应的研究

目的 :探讨淫羊藿苷 (ICA)对急性早幼粒白血病细胞的诱导分化作用。方法 :采用ICA与全反式维甲酸 (ATRA)对比试验 ,观察ICA在体外及小鼠体内对白血病细胞增殖分化的影响。结果 :ICA在体内外对白血病细胞均有较明显的诱导分化和抑制增殖作用 ,且与ATRA合用可产生明显的协同效应。结论 :ICA具有明显的抗白血病细胞作用