叠氮钠对脱细胞组织工程心脏瓣膜形态学及生物力学的影响

目的 对比加叠氮钠和传统的去氧胆酸钠法去除细胞后心脏瓣膜形态学及生物力学差别,为构建理想的组织工程心脏瓣膜提供实验依据.方法 应用两种方法处理6～7月龄新鲜猪主动脉心脏瓣膜.光学显微镜、透射电镜观察脱细胞基质改变,厚度仪测量组织厚度,行拉力测试观察两种方法处理后力学变化上的差异.结果 两种方法处理后组织厚度差异无统计学意义(P>0.01).显微镜检和透射电镜见叠氮钠-去氧胆酸钠法对基质破坏较少,处理后生物力学优于传统去氧胆酸钠法,差异有统计学意义(P<0.01).结论 叠氮钠-去氧胆酸钠法能更好保护去除瓣叶组织后的细胞外基质.     

脱除猪主动脉瓣细胞的研究

组织工程心脏瓣膜是利用组织工程学技术 ,将受体活性细胞种植在生物可降解材料支架上 ,孵育出活性心脏瓣膜 ,无免疫原性 ,不需抗凝 ,耐久性强 ,有自身修复能力。本研究旨在探讨脱除猪主动脉瓣上细胞成分的方法 ,评价其效果 ,为组织工程心脏瓣膜的构建提供较理想的生物材料。一、材料与方法1.实验材料 :采集热缺血时间小于2h的成年猪心脏 5 0个 ,完整取下主动脉瓣 ,4℃Hanks液漂洗。随机分为两组 :A组 (2 5枚 ) :用去污剂 酶消化法[1] 进行脱细胞处理后分别行热皱缩温度、机械强度测定和组织学观察 ;B组 (2 5枚 )作为对照组。2 .脱细胞处…     

组织工程瓣膜天然支架去细胞方法的比较

组织工程心脏瓣膜(TEHV)是瓣膜外科的发展方向。天然支架因解剖结构接近人体瓣膜，血流动力学良好，被越来越多地用于构建TEHV。低温、胰蛋白酶、去污剂等方法常用于制备天然支架，本实验旨在探讨天然支架较理想的制备方法。     

牛心包组织工程心脏瓣膜支架脱细胞方法的比较

目的对比去污剂-酶消化法、胰蛋白酶消化法和去氧胆酸钠法去除新鲜牛心包组织上细胞的效果和保护基质的能力，为组织工程心脏瓣膜的构建提供较满意的平台。方法应用3种方法处理新鲜牛心包组织，用光学显微镜、扫描电镜观察脱细胞效果和胶原纤维、弹力纤维改变；用热皱缩实验、拉力测试观察基质的物理性能变化；用DNA抽提比较脱细胞前后细胞数量差异。结果3种方法均能完全去除细胞，与去污剂-酶消化法比较，另2种方法对基质破坏明显。结论去污剂-酶消化法脱细胞效果好，且有良好的保护基质的能力。     

衍生肌腱支架材料的细胞相容性研究

目的 探讨衍生肌腱支架材料（tendon derivation biomaterials，TDBM）与肌腱细胞的细胞相容性及肌腱细胞在此三维支架上培养的生物学行为，为肌腱组织工程新型支架材料的应用提供依据。方法将肌腱细胞与TDBM体外复合培养，设置单纯肌腱细胞培养为对照组，进行形态学观察，并检测细胞增殖、细胞周期、细胞DNA倍体水平及肌腱细胞凋亡率。通过^3H-脯氨酸（^3H-Proline）掺入试验了解材料对肌腱细胞胶原合成的影响。结果 肌腱细胞在TDBM上呈梭形生长，TDBM组细胞第2天进入对数增长期，倍增时间为3d，而单纯肌腱细胞培养对照组倍增时间为3．75d。TDBM组与单纯肌腱细胞培养对照组比较，^3H-Proline掺入值差异无统计学意义（P〉0．05），说明细胞功能未受影响。与支架材料复合培养的肌腱细胞DNA指数为0．96，增殖指数较对照组高10．1％，提示肌腱细胞在三维胶原支架上生长速度快，增殖能力强。结论TDBM具有良好的细胞相容性，可作为肌腱细胞的有效载体应用于组织工程化肌腱的构建。     

新型复合组织工程瓣膜的构建和体外生物力学研究

目的 构建复合瓣膜进行体外生物力学和脉动流测试.方法 猪主动脉瓣脱细胞处理作为支架,用3-羟基丁酸与3-羟基己酸共聚酯涂层,构建复合瓣膜,用拉伸机进行体外生物力学研究,以新鲜和脱细胞猪瓣作为对照(每组12枚);用脉动流仪进行流体力学研究,以脱细胞猪瓣作为对照(每组6枚).结果 复合瓣膜抗拉强度(12.08±1.72)MPa,与新鲜猪瓣(8.38±0.52)MPa和脱细胞猪瓣(8.16±0.66)MPa比较,差异有统计学意义(P＜0.05);在心输出量2～7L/min时,复合瓣膜与脱细胞猪瓣血流动力学参数差异无统计学意义(P＞0.1).结论 复合瓣膜具有良好的生物力学、流体力学特性.     

生物衍生骨支架材料的组织相容性研究

目的 了解不同处理方法制得的3种生物衍生骨支架材料的组织相容性。方法 将物理化学方法处理制得的复合型完全脱蛋白骨（composite fully deproteinized bone,CFDB)、部分脱蛋白骨（partially deproteinized bone,PDPB)、部分脱钙骨（partially decalcified bone,PDCB)3种材料各10块分别植入兔肌肉内及骨膜下，进行一般观察、血清抗体检测、局部细胞免疫评估、常规HE染色，观测3种材料对机体的毒性作用、免疫效应及骨膜成骨的影响。结果 3种材料均无毒性作用，且能引导周围组织长入材料内；3种材料对骨膜成骨无不良影响，且能促进骨膜形成的软骨或类骨组织钙化形成新骨，并有一定的骨结合能力；3种材料引起机体免疫反应强弱为：PDCB＞PDPB＞CFDB。结论 CFDB、PDPB、PDCB3种天然生物衍生骨材料皆有良好的生物相容性。     

生物衍生骨支架材料的体外细胞相容性实验研究

目的 评价不同处理方法制备的生物衍生骨支架材料的细胞相容性。方法 将支架材料,即复合型完全脱蛋白骨（CFDB）、部分脱蛋白骨（PDPB）和部分脱钙骨（PDCB）与人胚骨膜来源的成骨细胞体外复合培养,采用倒置相差显微镜、激光共聚焦显微镜、扫描电镜、流式细胞仪及碱性磷酸酶（ALP）活性检测,观察支架材料的细胞相容性。结果 三种材料上皆有细胞附着生长,三种材料对细胞增殖影响大小为PDCB＞PDPB＞CFDB;三种材料对成骨细胞的细胞周期影响较小,未见异倍体细胞;三种材料对成骨细胞ALP活性的影响大小依次为PDCB＞PDPB＞CFDB。结论 CFDB、PDPB及PDCB无细胞毒性、无致瘤性,皆有良好的细胞相容性,以CFDB为最好。三种材料皆可用于骨组织工程的支架材料。     

脱细胞羊膜的制备及其生物相容性研究

目的制备脱细胞人羊膜(HAAM),检测其细胞相容性和组织相容性,探讨其作为组织工程支架材料的可行性. 方法新鲜人羊膜经漂洗后戊二醛交联,0.5%SDS震摇24小时,胰蛋白酶消化4小时,充分漂洗,冷冻干燥,分装,环氧乙烷消毒备用.倒置相差显微镜和扫描电镜观察表面结构,测量孔径,并作HE、Mallory染色.体外培养人成纤维细胞并复合于HAAM,倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附、生长,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定HAAM浸提液对培养的人成纤维细胞的细胞毒性.将HAAM植入SD大鼠背部皮下,观察其组织相容性. 结果 HAAM的一面为网状结构,孔径为10～80 nm,另一面为致密纤维结构.HE、Mallory染色表明材料无细胞残留,均为胶原组成.成纤维细胞能在HAAM上黏附、增殖.MTT示材料细胞毒性为0或1级,动物埋置实验无异常反应. 结论应用去垢剂-酶消化法处理新鲜人羊膜,能有效去除组织中的细胞和可溶性成分,可进一步降低其免疫原性,保留基质及网状结构,有良好的细胞相容性和组织相容性,可作为组织缺损的修复材料及组织工程的膜支架材料.     

多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质支架材料的组织相容性研究

[目的]评价多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质支架材料(PLL-DBM)的组织相容性。[方法]采用标准的毒理学方法进行溶血实验、全身急性毒性实验、致癌实验和皮下植入实验验证多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质支架材料(PLL-DBM)的组织相容性。[结果]溶血实验测得溶血指数为2.617%,符合生物材料的国家标准(<5%);全身急性毒性实验:各组裸鼠活动正常,体重正常增长,未见中毒表现或不良反应,72 h内PLL-DBM材料浸提液组与生理盐水组裸鼠体重增长无明显差异(P>0.05),且4周内裸鼠无死亡;致癌实验显示实验组裸鼠正常存活,8个月内未见肿块形成,心、肝、脑、肺、肾、胰、脾组织学观察未见肿瘤细胞;皮下植入实验显示实验动物伤口未见感染、红肿及裂开等不良反应,置入材料无排异现象,取材时见材料周围肌肉颜色及质地正常。[结论]多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质支架材料(PLL-DBM)具有良好的组织相容性。     

Biomechanical properties of decellularized porcine pulmonary valve conduits

Abstract:  Tissue-engineered heart valves constructed from a xenogeneic or allogeneic decellularized matrix might overcome the disadvantages of current heart valve substitutes. One major necessity besides effective decellularization is to preserve the biomechanical properties of the valve. Native and decellularized porcine pulmonary heart valve conduits (PPVCs) (with [ n  = 10] or without [ n  = 10] cryopreservation) were compared to cryopreserved human pulmonary valve conduits ( n  = 7). Samples of the conduit were measured for wall thickness and underwent tensile tests. Elongation measurement was performed with a video extensometer. Decellularized PPVC showed a higher failure force both in longitudinal (+73%; P  < 0.01) and transverse (+66%; P  < 0.001) direction compared to human homografts. Failure force of the tissue after cryopreservation was still higher in the porcine group (longitudinal: +106%, P  < 0.01; transverse: +58%, P  < 0.001). In comparison to human homografts, both decellularized and decellularized cryopreserved porcine conduits showed a higher extensibility in longitudinal (decellularized: +61%, P  < 0.001; decellularized + cryopreserved: +51%, P  < 0.01) and transverse (decellularized: +126%, P  < 0.001; decellularized + cryopreserved: +118%, P  < 0.001) direction. Again, cryopreservation did not influence the biomechanical properties of the decellularized porcine matrix.     

有支架与无支架生物瓣膜行主动脉瓣置换临床对比研究

目的　探讨无支架Medtronic生物瓣行主动脉瓣置换的临床效果。方法　将 6 8例同期施行主动脉瓣置换术病人分为 2组 ,38例行无支架Medtronic生物瓣置换 ,30例对照组行有支架生物瓣置换。术前及术后 2个月随访行超声心动图检查。结果　无支架组和有支架组病人术后各项检测指标差异有显著性意义。无支架组跨瓣压差 (18 0± 3 7)mmHg(1mmHg =0 133kPa)明显低于有支架组(33 7± 8 3)mmHg;左室射血分数 0 6 5± 0 0 5 ,明显高于有支架组 0 5 6± 0 0 8;左室收缩末内径和左室舒张末内径分别为 (3 8± 0 8)cm和 (4 5± 0 4 )cm ,明显低于有支架组 (4 2± 1 4 )cm和 (5 1± 0 9)cm ;无支架组瓣环内径 (2 2 1± 1 8)mm大于有支架组 (19 5± 1 7)mm。结论　无支架Medtronic生物瓣较有支架生物瓣具有较低的跨瓣压差和良好的血流动力学 ,能促进左室功能的恢复。     

枝化状聚乙二醇交联改善猪去细胞主动脉瓣的力学性能比较

目的 采用不同相对分子质量枝化状聚乙二醇(PEG)交联巯基化的猪去细胞瓣,观察其对去细胞瓣膜力学性能的影响.方法 将25例猪去细胞主动脉瓣随机分为5组:PEG3400组、PEG8000组、PEG12000组、PEG20000组和对照组,常温反应时间4 h.测定残余巯基计算交联效率;静态拉伸实验测定力学性能.结果 4 h交联率依次为92.40%、89.88%、87.87%和87.46%,相对分子质量越小,交联效率越高,PEG3400组与其他各组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);力学测试显示,相对分子质量越大,力学强度越高,呈一定的正相关,PEG12000和PEG20000组抗拉强度分别为(3.22±0.41)MPa和(3.19±0.15)MPa,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 相对分子质量12000 Da和20000 Da枝化状聚乙二醇交联可有效改善猪去细胞瓣的力学性能,有望用于构建新型复合的组织工程瓣膜支架材料的研究应用.

Abstract：

Objective Branched polyethylene glycols (PEG) with different molecular weight were cross-linked to the porcine decellularized aortic valve (DAV) and the effects of PEG cross-linking on the mechanical properties were investigated. Methods A total of 25 porcine DAVs were randomly assigned into 5 groups: PEG3400, PEG8000, PEG12000, PEG20000 and control. The reactive time was 4 h at room temperature. The efficiency of crosslinking was calculated by measuring the residual thiol group. The mechanical properties were obtained by static tensile test. Results The efficiency of crosslinking was 92. 40% , 89. 88% , 87. 87% and 87. 46% in PEG3400, PEG8000, PEG12000, PEG20000 groups, respectively. As compared with other groups, the PEG3400 group had significantly greater increase in the crosslinking degree (P ＜ 0. 05). Tensile test showed the tensile strength of PEG12000 and PEG20000 groups was (3. 22 ±0.41) and (3. 19 ±0. 15) MPa, respectively, and significantly different from that in control group (P ＜ 0. 05). The tensile strength and young' s modulus had a positive correlation with the molecular weight of PEG. Conclusion Branched PEG with the molecular weight of 12 000 Da and 20 000 Dacan effectively crosslink to the porcine decellularized aortic valves and improve their mechanical behaviors, and has the potential to be used as the material of fabricating new hybrid scaffold of tissue engineering heart valves.     

小瓣环主动脉瓣替换手术的策略

目的　探讨小瓣环主动脉瓣病变行主动脉瓣替换加瓣环扩大手术的中、远期疗效。方法　对 45例小瓣环主动脉瓣病变患者在主动脉瓣替换时 ,进行瓣环扩大手术。术中探查主动脉瓣瓣环直径 15～ 2 2mm。瓣环扩大方法为Manouguian法 39例 ,Nicks法 5例 ,Konno法 1例。术后患者随访时间为 ( 6 2± 3 4 )年。　结果　本组患者手术死亡 2例 ,无严重的出血并发症 ;平均输血量为376 5ml,11例术后未输血 ;随访无远期死亡。左心室舒张末径较术前有显著缩小 ,而不同瓣环的血液动力学结果差异无显著性。患者NYHA心功能术后较术前明显改善。　结论　小瓣环主动脉瓣病变患者进行主动脉瓣替换的同时 ,应用Manouguian法扩大瓣环 ,近、远期效果良好 ,无血液动力学意义的跨瓣压差 ,是一种安全、有效的术式。     

双瓣膜置换术中细小主动脉根部的扩大成形(附7例报告)

目的报道一种双瓣膜置换术中扩大细小主动脉根部的手术方法和结果。方法7例双瓣膜置换术中细小主动脉根部（瓣环直径17～20mm）者，将斜行的主动脉切口经左、无冠窦交界呈倒“Y”形向二尖瓣前叶切开，切除二尖瓣叶时保留3～5mm宽的前瓣叶组织，补片扩大主动脉瓣瓣环后植入人工瓣膜。结果7例扩大主动脉瓣环直径4～7mm，主动脉瓣和二尖瓣分别植入21～23mm和25～27mm人工机械瓣。无手术死亡，1例二次开胸止血。随访1～26个月，病人心功能恢复良好。结论对双瓣膜置换术中的细小主动脉根部，Manouguian法不能有效扩大主动脉瓣环时，该术式可作为一种安全有效的替代方法。     

去细胞组织工程同种心脏瓣膜的生物力学研究

目的　观察去细胞组织工程同种心脏瓣膜的生物力学特性。方法　取液氮保存的人同种主动脉带瓣管道 ,采用低渗液 去污剂 (1%去氧胆酸 ) 核酸酶法去除了同种心脏瓣膜组织中所有的细胞成分 ,组织基因组DNA含量下降 91% ,保留了完整的细胞外基质。测定去细胞前后组织厚度、组织含水量、热皱缩温度、应力应变曲线、破坏强度及组织伸长比。结果　与去细胞前相比 ,只有管壁组织的含水量去细胞前与去细胞后比较明显增加 (P <0 .0 1) ,瓣叶组织含水量、组织厚度、热皱缩温度、应力应变曲线、破坏强度及组织伸长比差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　去细胞组织工程同种心脏瓣膜的生物力学特性稳定 ,符合机体的要求 ,且为受体细胞化组织工程心脏瓣膜的研制提供了可靠的天然的纤维支架材料。     

去细胞组织工程同种心脏瓣膜的生物学特征

目的　构建去细胞组织工程同种心脏瓣膜 ,对比研究同种心脏瓣膜去细胞前后的生物学特征。方法　取液氮保存的人同种主动脉带瓣管道 ,采用低渗液 -去污剂 ( 1%DOA) -核酸酶去细胞法 ,测定去细胞前后组织学、组织厚度、组织含水量、热皱缩温度、组织基因组DNA含量、胶原蛋白含量。结果　同种心脏瓣膜、管壁及肌肉组织中去除所有细胞成分 ,保留了完整的细胞外基质。与去细胞前相比 ,管壁组织的含水量 [( 75 4 4± 1 84 ) %对 ( 82 0 5± 0 71) % ,P <0 0 5 ]明显增加 ,组织基因组DNA含量显著下降(瓣叶下降 91 14 %、管壁下降 91 5 3% ) ;瓣叶组织含水量、组织厚度、热皱缩温度及组织胶原蛋白含量差别无显著性。结论　低渗液 -去污剂 ( 1%DOA) -核酸酶去细胞法方便有效 ,去细胞的同种组织工程心脏瓣膜生物学特性稳定 ,符合机体要求 ;且为受体细胞化组织工程心脏瓣膜的研制提供了可靠的天然纤维支架材料     

Comparison of cryopreserved homografts and decellularized porcine heterografts implanted in sheep

This study evaluated cryopreserved homografts (Group 1) and porcine heterografts decellularized with deoxicholic acid (Group 2), implanted in the right ventricular outflow tract of juvenile sheep. Two groups with four animals in each were used and all animals survived with good outcome. Animals were sacrificed 90 or more days after surgery (90-150 days). On the third and fifth postoperative months they were submitted to echocardiographic examination with normal function and appearance observed for both groups. Explants were evaluated through histological analysis, atomic spectrophotometry and radiological examination. Calcium content was higher in the cusps of cryopreserved homografts, despite an otherwise similar macroscopic appearance between grafts of both groups. Decellularized heterografts were progressively repopulated by autologous cells suggesting some regenerative ability and longer durability than conventional homografts.     

老年患者主动脉瓣置换术临床研究

目的探讨老年心脏瓣膜病患者施行主动脉瓣手术的临床效果。方法连续选择81例,年龄>60岁的主动脉瓣手术患者的临床资料进行回顾性分析。建立logistic回归模型,分析围术期各个相关因素对于治疗效果的影响。结果早期死亡8例,病死率为9.88%。再次手术、心功能NYHA分级、体外循环时间长是影响患者术后死亡的危险因素。术后发生并发症31例,主要包括:低心排出量综合征、多脏器功能不全综合征、肺部感染、急性肾衰竭、术后呼吸功能不全。结论对症状严重而并发症少的老年心脏瓣膜病患者进行主动脉瓣手术是安全、有效的。     

主动脉瓣置换术后患者再次主动脉外科干预47例

目的 回顾性分析47例主动脉瓣术后再次主动脉外科治疗病例,提高对主动脉瓣术后主动脉疾病再治疗的认识.方法 2003年1月至2012年6月,47例患者因主动脉瓣术后接受再次主动脉手术治疗.男38例,女9例,再次手术间隔时间(6.0±3.8)年.行主动脉根部替换14例,升主动脉替换10例,主动脉根部/升主动脉+全弓替换+象鼻支架置入术21例,全胸腹主动脉替换2例.所有出院患者均行门诊复查和电话随访.结果 47例患者中主动脉夹层25例(53％),升主动脉瘤12例(26％),主动脉根部瘤10例(21％).风湿性心脏病患者升主动脉直径年增长值高于马方综合征患者(P＜0.05).47例均接受外科手术治疗,术中死亡1例;余患者均出院并随访,随访时间(53.49±33.79)个月,3年生存率83％.结论 对马方综合征、风湿性心脏病等主动脉瓣疾病合并主动脉病变要积极干预、严格随访,减少术后主动脉不良事件.