胰淀素对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的：观察胰淀素对胰岛细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法：应用放免法检测胰淀素培养后大鼠胰岛细胞和胰岛β细胞瘤细胞系(βTc3)高糖刺激后上清液的胰岛素水平；应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术检测胰淀素培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞凋亡百分率；应用定量RT-PCR(QRT-PCR)检测培养后bcl-2、bax mRNA的表达。结果：胰淀素使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc3胰岛素分泌功能明显下降，使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc3的凋亡细胞比例明显增加；胰岛细胞凋亡过程中，诱导凋亡的基因bax mRNA表达水平明显升高，抵抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达水平明显下降。结论：胰淀素可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病，其中bcl-2／bax mRNA表达比率变化可能起重要作用。     

高浓度游离脂肪酸对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的：观察高浓度游离脂肪酸体外对胰岛细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法：应用TUNEL法检测高浓度游离脂肪酸培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞凋亡百分率，应用定量RT～PCR(QRT—PCR)检测培养后bc1-2、bax、c—myc、p53和fas mRNA的表达。结果：高浓度游离脂肪酸使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc3的凋亡细胞比例明显增加。胰岛细胞凋亡过程中，诱导凋亡基因bax、c—myc、fas的tuRNA表达水平明显升高，抵抗凋亡基因bcl-2mRNA表达水平明显下降，p53 mRNA表达水平无明显改变。结论：游离脂肪酸可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病，其中bc1-2／bax mRNA表达比率变化可能起重要作用。     

凋亡基因Bcl-2／Bax与高脂饮食诱导大鼠胰岛细胞凋亡的关系研究

目的 观察凋亡基因Bcl/Bax与高脂饮食诱导大鼠的胰岛细胞凋亡的关系.方法 应用TUNEL法检测高脂饮食诱导的大鼠胰岛细胞凋亡率,应用免疫组化方法检测bcl-2、bax的mRNA的表达.结果 高脂饮食使大鼠胰岛细胞凋亡率明显增加.胰岛细胞凋亡过程中,诱导凋亡基因bax的mRNA表达水平明显升高,抵抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达水平明显下降.结论 高脂饮食可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病,其中bcl-2/bax mRNA表达比率变化可能起重要作用.     

细胞因子对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的:观察肿瘤坏死因子α(TNFα)和干扰素γ(IFNγ)对大鼠胰岛细胞和小鼠βTC-3细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响.方法:应用TUNEL法检测高浓度TNFα和IFNγ培养后大鼠胰岛细胞和小鼠BTC-3细胞凋亡百分率,应用半定量RT-PCR(sQRT-PCR)检测培养后bcl-2、hax、c-myc、p53和fas mRNA的表达.结果:大鼠胰岛细胞经高浓度TNFα和IFNγ处理后,上清液中胰岛素浓度明显下降,由(169.69±1.62)mIU/L降为(136.1±1.44)mIU/L(P<0.01);凋亡细胞比例明显增加,由(10.25±1.71)%升为(17.25±1.71)%(P<0.01).βTC-3细胞经高浓度TNFα和IFNγ处理后,上清液中胰岛素浓度明显下降,由(254.13±4.35)mIU/L降为(221.42±3.98)mIU/L(P<0.01);凋亡细胞比例明显增加,由(20.25±2.22)%升为(38.75±3.4)%(P<0.01).大鼠胰岛细胞和βTC-3细胞经高浓度TNFα和IFNγ处理后,致凋亡基因hax、c-myc、fas mRNA表达明显增an(P<0.05);抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达明显下降(P<0.05);bcl-2/bax mRNA表达比率明显下降(P<0.01);p53mRNA表达无明显改变(P0.05).结论:TNFα和IFNγ可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病,其中bcl-2/bax mRNA表达比率变化可能起重要作用.     

强化胰岛素治疗对糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡蛋白bcl-2和bax的影响

目的观察强化胰岛素治疗对糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡相关蛋白bcl-2和bax的影响。方法将36只Wistar大鼠随机分为对照组和高脂组,对照组给予基础饲料喂养,高脂组给予脂肪乳灌胃＋基础饲料喂养10d,然后给高脂组大鼠腹腔注射链脲佐菌素,3d后再将高脂组大鼠随机分为2个亚组,即糖尿病对照组和糖尿病治疗组,疗程4周。在脂肪乳灌胃第10天、注射STZ第3天和治疗4周末测大鼠各项指标;实验结束时用免疫组化法测大鼠胰岛β细胞凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达。结果大鼠在强化胰岛素治疗4周末,与糖尿病对照组相比,糖尿病治疗组的bcl-2蛋白表达升高,bax蛋白表达降低,两组差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论强化胰岛素治疗可增强2型糖尿病大鼠胰岛β细胞bcl-2蛋白表达,降低bax蛋白表达,减轻2型糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡。     

小檗碱改善高糖高脂诱导的胰岛NIT-1细胞凋亡的分子机制

目的观察小檗碱对高脂高糖诱导后NIT-1胰岛β细胞凋亡的改善情况,探讨小檗碱抗凋亡的分子机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,在培养基中加入高糖高脂及小檗碱共同培养24h后,比较不同浓度的小檗碱对体外培养及高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞活力的影响;AnnexinV/PI双标记法流式细胞术检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3mRNA表达水平;免疫荧光法检测caspase-3表达。结果与正常对照组相比,模型组NIT-1细胞凋亡率明显升高(P<0.01),bcl-2mRNA表达明显降低(P<0.01),而bax和caspase-3mRNA表达明显增高(P<0.01),且胞质caspase-3表达增加;与模型组相比,小檗碱组NIT-1细胞凋亡率明显降低(P<0.01),bcl-2mRNA表达增高(P<0.01),而bax和caspase-3mRNA表达降低(P<0.01),小檗碱组胞质caspase-3表达亦降低。结论小檗碱抑制高糖高脂诱导NIT-1细胞的凋亡可能与其激活bcl-2和抑制bax和caspase-3的表达有关。     

枸杞多糖对外源一氧化氮损伤下小鼠胰岛细胞的保护作用

目的研究枸杞多糖对外源性的一氧化氮损伤下小鼠胰岛的保护作用。方法体外培养小鼠胰岛细胞NIT-1，用硝普钠和不同浓度枸杞多糖对它们的细胞活性、NO浓度、SOD活性、MDA含量、细胞凋亡率变化及凋亡相关基因bcl-2和bax进行检测。结果不同浓度枸杞多糖组可以明显抑制NO引起的胰岛细胞的活性下降、凋亡率增加、SOD浓度下降、NO和MDA含量增加，bcl-2mRNA表达降低，baxmRNA表达显著增加，抑制作用随枸杞多糖浓度的增加而增强。     

紫杉醇对肝癌SMMC7721细胞凋亡的诱导作用及对相关基因表达的影响

目的：探讨紫杉醇对肝癌SMMC7721细胞凋亡的诱导作用及对bcl-2和bax基因的影响。方法：用浓度为5ug·ml-1的紫杉醇处理肝癌SMMC7721细胞后,利用DNA琼脂糖凝胶电泳,TUNEL法检测其细胞凋亡;通过原位杂交法、免疫组化法,测定紫杉醇诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡时,凋亡抑制基因bcl-2和凋亡促进基因bax的mRNA和蛋白表达。结果：紫杉醇作用一定时间后,SMMC7721细胞产生凋亡、bcl-2显著下降、bax表达显著增高。结论：紫杉醇通过调节细胞凋亡抑制基因bcl-2和细胞凋亡促进基因bax的作用,从而诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡。     

阿司匹林对体外培养人宫颈癌细胞凋亡作用的研究

目的 探讨阿司匹林诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和bax的作用.方法 培养人宫颈癌Hela细胞,加入不同浓度阿司匹林(1.0、5.0、10.0 mmol/L)干预培养.应用流式细胞技术检测Hela细胞凋亡和细胞周期的变化;用RT-PCR 检测细胞凋亡相关基因bcl-2及bax转录水平的改变;免疫组化法检测bcl-2及bax蛋白表达的变化.结果 与对照组相比,阿司匹林干预组Hela细胞凋亡率明显增高(P<0.05); 随着阿司匹林浓度增加,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);阿司匹林干预培养后Hela细胞中bcl-2基因mRNA表达明显降低,而bax基因mRNA表达升高明显,较对照组均有统计学意义(P<0.05);阿司匹林作用48 h后,免疫组化法检测bcl-2蛋白表达下调及bax蛋白表达上调(P<0.05).结论 阿司匹林能诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,其机制与抑制bcl-2表达,上调bax表达有关.     

番茄红素对宫颈癌HeLa细胞bax、bcl-2基因表达的影响

目的 研究番茄红素对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响。方法不同浓度番茄红素分别处理HeLa细胞24～72h后，MTT法检测细胞的生长活性，RT-PCR方法检测凋亡相关基因bax，bcl-2的表达。结果实验结果随着番茄红素浓度的增加，bax基因mRNA表达增加而bcl-2的mRNA表达减少。结论番茄红素对HeLa细胞的生长具有抑制作用，可促进宫颈癌HeLa细胞发生凋亡，bcl-2基因的减少与bax基因表达增加可能是HeLa细胞凋亡的机制之一。     

金雀异黄素对胃癌细胞SGC-7901凋亡的诱导及相关基因表达的调控

目的：研究金雀异黄素（Genistein,Gen）对胃癌细胞SGC-790t凋亡的影响及凋亡相关基因表达的调控。方法：应用MTT比色法检测Gen对胃癌细胞SGC-7901生长活力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;RT—PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Fas表达水平的改变。结果：Gen对SGC-7901细胞有生长抑制作用,且呈时间／浓度依赖性;10．0mg·L^-1,20．0mg·L^-1Gen能诱导SGC-7901细胞凋亡,凋亡率与剂量正相关（r=0．9830）;Gen使SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA表达下调,Fas mRNA表达上调。结论：Gen可能通过调控Bcl-2、Fas的基因水平而诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡。     

MicroRNA-1对大鼠心肌细胞凋亡的影响

摘要 目的 探讨microRNA-1(miR-1) 对大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法 应用转染的方法使培养的H9C2大鼠心肌细胞高表达miR-1（miR-1组）,荧光定量PCR的方法确定miR-1上调后,采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞活力和凋亡情况、用荧光定量PCR和Western Blot的方法检测凋亡抑制因子Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况。正常细胞和转染随机合成的miRNA阴性对照片段分别为正常对照组和阴性对照组。结果 与正常对照组相比,阴性对照组各个指标的变化均没有统计学差异。miR-1组的miR-1 mRNA表达水平显著升高,细胞活力下降,凋亡率增加,Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低。 结论 转染的miR-1 mimic能够上调细胞内的miR-1mRNA表达水平,抑制心肌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

内毒素致HepG2细胞凋亡的研究

目的 :探讨内毒素对HepG2 细胞的直接作用 ,为肝细胞损害的防治研究提供新的模型。方法 :利用HepG2 细胞作为体外肝细胞模型,HepG2 细胞经LPS(20μg/ml)作用8、16、24小时后 ,分别测定培养上清中LDH含量及MTT法测定活细胞总数。选择LPS作用16小时的细胞 ,电镜观察细胞形态改变 ,Tunel标记法检测细胞凋亡。结果 :LPS作用16小时后 ,HepG2 细胞增殖受到抑制 ,培养上清中LDH轻度增高。电镜观察发现 :部份细胞出现典型的细胞凋亡形态改变 :核染色质浓聚 ,边缘化、凋亡小体形成,细胞器形态基本正常 ;少数细胞出现胞膜破裂等溶解性坏死改变。结论 :LPS直接引起HepG2 细胞凋亡。     

艾迪注射液抑制肿瘤细胞生长及诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的:对艾迪注射液体外抗癌活性进行研究,探讨其抗肿瘤作用及机制。方法:应用四甲基偶氮盐(MTT)法检测艾迪注射液在体外对小鼠S180,H22及人HepG2细胞的生长抑制作用;流氏细胞仪(FCM)分析其诱导HepG2细胞凋亡和对周期的阻滞作用;用荧光显微镜观察其诱导HepG2细胞凋亡作用。结果:艾迪注射液对小鼠S180、H22及人HepG2细胞的IC50分别为(9．82±0．272),(4．25±0．333),(6．78±0．268)mg·ml-1。4．1 mg·ml-1艾迪注射液作用48 h后的HepG2细胞凋亡率达到12．43％。结论:艾迪注射液对肿瘤细胞具有直接杀伤和促进肿瘤细胞凋亡的作用。     

Apoptosis and microglia

Microglia, macrophage-like cells in the central nervous system (CNS), are multi-functional cells; they play an important role in removal of dead cells or their remnants by phagocytosis in the CNS degeneration and are one of important cells in the CNS cytokine network to produce and respond to a variety of cytokines. Although little is known about microglia in the normal CNS, it is obvious that they are quickly activated in all acute pathological events including apoptosis, neurodegeneration and inflammation. Activation of microglia in apoptosis is a double-edged response; under severe apoptotic conditions microglia act as scavengers removing tissue debris and inducing apoptosis in damaged cells, whereas in more subtle injury they exert a surveillance function and might play a protective role. The transformation of resting microglia into full blown phagocytes is strictly regulated. To understand molecular basis of controlling mechanisms of microglia in apoptosis, the study will need in vivo models. For such purpose, we developed the brain-targeting gene delivery system using immortalized microglia, which can facilitate investigation into the roles of particular microglial genes in apoptosis and gene therapy of several brain disorders.     

Apoptosis inducing flavonoids

Herb medicines contain a number of ingredients and produce a variety of effects on the human body. This Tsumura application discloses baicalin and baicalein as apoptosis inducers. These compounds are known to exert anti-inflammatory, anti-allergic and anti-hypertensive actions. Apoptosis is the process of active programmed cell death and is involved in both development and oncogenesis. While glucocorticoids and some anticancer agents are found to induce apoptosis, these agents have severe adverse effects, which limit their application to human patients. The applicants of the patent under review have demonstrated that baicalin and baicalein are free from these severe side-effects even when these administrated at very high dose and argue that baicalin and baicalein could be used for treatment of cancer and viral infections through the induction of apoptosis in cancer cells and virus-infected cells, respectively.     

汉防己甲素对瘢痕成纤维细胞凋亡率的影响

目的探讨汉防己甲素对成纤维细胞凋亡的调控作用。方法将汉防己甲素按质量浓度梯度（0.5,1.0,2.0mg/L）分组,并设空白对照组、乙醇对照组和阳性对照组（曲安缩松钠80mg/L）,分别作用于原代培养的成纤维细胞,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率;以电泳法分离DNA片段,并以紫外光灯观察是否出现“梯状（ladder）”带。结果空白对照组细胞凋亡率为0;而2.0mg/L的汉防己甲素作用48h即出现典型的细胞凋亡峰,且具有质量浓度和时间依赖性,电泳后可见典型的200bp及其倍体片段。结论汉防己甲素能使成纤维细胞发生凋亡,且呈质量浓度和时间依赖性。