Effect of Serum Containing Tougu Xiaotong Capsule on Activity of Chondrocyte

目的 观察透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞活性的影响. 方法 SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,第3代软骨细胞同步化后进行干预,分别确定含药血清的有效干预时间及干预浓度.各组合药血清在有效浓度作用下干预软骨细胞,在有效干预时间点采用MTT法. 结果 干预后,软骨细胞OD值干预72 h明显高于干预24 h、48 h、96 h(P＜0.05);10％含药血清浓度组明显高于5％、20％含药血清浓度组(P＜0.01).确定72 h为有效作用时间,10％为有效作用浓度.在10％含药血清浓度的作用下干预72 h,第3代软骨细胞OD值,透骨消痛胶囊实验组明显高于空白组(P＜0.01),实验2组增殖效果最明显(P＜0.05). 结论 透骨消痛胶囊含药血清能加速软骨细胞增殖,维持软骨细胞活性,其促进软骨细胞增殖作用与药物浓度有关,以中剂量药物浓度(含透骨消痛胶囊29 mg/d)为最佳.     

透骨消痛胶囊含药血清对退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养大鼠退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng/mL IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24 h、48 h、72 h后用TaqMan real-time PCR和Western Blot法检测各组mRNA和蛋白的表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组caveolin-1和p38MAPK基因、蛋白相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,统计均有显著性差异(P0.05)。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞caveolin-1、p38MAPK的表达。     

透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng.mL-1IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达。     

透骨消痛颗粒对BMSCs向软骨细胞分化的影响

目的 探讨透骨消痛颗粒舍药血清诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的分子生物学机制. 方法 从5只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs,体外传代培养,取第3代BMSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组,进行培养1、2周后,通过透射电镜、RT-PCR等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响. 结果 透射电镜观察可见软骨表型化的BMSCs多数为近椭圆形,表面突起多,细胞核大,粗面内质网丰富,内质网池扩张明显,高尔基体丰富.在TGF-β3等诱导因子作用下,透骨消痛颗粒舍药血清可以促进Sox9 mRNA、Cbfa1mRNA在细胞分化过程中的表达,与软骨诱导剂组相比表达量有显著性差异(P<0.05). 结论 透骨消痛颗粒含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化.     

加味青蒿鳖甲汤含药血清对白血病CEM细胞株增殖及凋亡的研究

目的:观察加味青蒿鳖甲汤含药兔血清对CEM细胞株增殖周期及凋亡的影响。方法:用加味青篙鳖甲汤含药兔血清与CEM细胞共同孵育24 h,用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡。结果:不同剂量复方含药兔血清干预后CEM细胞G0/G1期的比例明显增高,高剂量组与低剂量组比较,有统计学意义(P0.05)。高、中剂量组的S、G2/M期的比例明显下降,与正常兔血清组比较,有统计学意义(P0.05)。低剂量组的S期的比例亦较低,与正常兔血清组比较,无统计学意义(P0.05)。不同剂量复方含药兔血清组PI、SPF与正常兔血清组比较,有统计学意义(P0.05),以高剂量组最优。不同剂量复方含药兔血清组细胞凋亡率与正常兔血清组比较有统计学意义(P0.05),高剂量组与低剂量组比较,有统计学意义(P0.05)。结论:加味青蒿鳖甲汤含药兔血清可抑制CEM细胞的增殖,并提高CEM细胞的凋亡率。     

《痘疹活幼心法》版本初考

目的探讨芪灵扶正清解颗粒含药血清对人Hep G2肝癌细胞增殖及对ras基因和蛋白表达的影响。方法制备含药血清和空白血清,体外干预Hep G2细胞24 h。流式细胞术检测细胞周期,荧光定量PCR检测h-ras、n-ras和k-ras基因表达量,免疫细胞化学染色检测P21ras蛋白表达情况。结果芪灵扶正清解颗粒含药血清干预人Hep G2细胞后,G0/G1期细胞的百分含量明显升高,S期细胞的百分含量和增殖指数明显降低。中剂量组k-ras、h-ras和n-ras m RNA的基因表达量和蛋白表达均明显低于空白血清组。结论芪灵扶正清解颗粒抑制Hep G2细胞ras基因和蛋白的表达,影响G1/S转换的进程,进而抑制Hep G2的增殖。     

健骨颗粒含药血清对成骨样细胞增殖及PCNA、Cyclin D1 mRNA表达的影响

目的:观察健骨颗粒含药血清对成骨样细胞增殖及PCNA、Cyclin D1 mRNA表达的影响。方法:制备健骨颗粒含药血清和生理盐水血清,分别干预体外培养的成骨样细胞ROS17/2.8,MTT法检测细胞增殖,流氏细胞术检测细胞周期,荧光定量PCR检测PCNA、Cyclin D1 mRNA表达。结果:与同浓度生理盐水血清组相比,中药血清组10%-30%浓度促细胞增殖均有显著性差异(P<0.05),其中浓度为20%时,两组间有非常显著性差异(P<0.01);中药血清组G0/G1期细胞比例明显低于同期生理盐水血清组,有非常显著性差异(P<0.01)。G2/M期、S期细胞比例及PI在干预48h时均高于同期生理盐水血清组,具非常显著性差异(P<0.01)。中药血清组较理盐水血清组PCNA、Cyclin D1 mRNA表达升高,组间有显著性差异(P<0.05)。结论:健骨颗粒含药血清能促进成骨样细胞的增殖、提高PCNA、Cyclin D1 mRNA表达。     

牛膝醇提物对人膝骨关节炎软骨细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的研究牛膝醇提物对人膝骨关节炎软骨细胞增殖、周期及凋亡的影响,探讨牛膝醇提物对软骨细胞的保护作用。方法取膝骨关节炎行膝关节置换患者及因严重创伤需截肢患者的膝关节软骨,进行膝关节软骨细胞原代培养,不同剂量的牛膝醇提物含药血清作用于软骨细胞,镜下观察细胞形态,甲苯胺蓝染色鉴定细胞,运用CCK-8试剂盒测软骨细胞增殖活力,流式细胞术测定软骨细胞周期及凋亡率。结果镜下观察模型组细胞较正常组细胞生长缓慢;甲苯胺蓝染色显示,模型组异染颗粒较正常组少;与正常组比较,模型对照组细胞活力减弱、G_0/G_1期比例增加、S期细胞比例下降、G_2/M期比例上升、细胞凋亡率增加(P 0. 01);与模型对照组比较,牛膝醇提物不同剂量组细胞增殖活力增强、G_0/G_1期比例降低、S期细胞比例增加、细胞凋亡率降低(P 0. 05),且高剂量组作用显著(P 0. 01)。结论牛膝醇提物通过增加人膝骨关节炎软骨细胞的增殖活力、降低细胞生长阻滞、增加细胞DNA合成、减少细胞凋亡来促进软骨细胞的生长,对人膝骨关节炎软骨细胞具有保护作用。     

黄斑颗粒含药血清预处理对人RPE细胞缺氧损伤的保护作用

目的:观察中药黄斑颗粒含药血清预处理后对人视网膜色素上皮(hRPE)细胞缺氧损伤的保护作用。方法:制备不同剂量中药黄斑颗粒含药血清,用含药血清预处理hRPE细胞,分不同时间段建立化学缺氧损伤模型,培养24h后,用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果:黄斑颗粒含药血清组细胞活力较空白血清组与模型组细胞活力显著提高,其中高剂量含药血清组细胞活力高于低剂量含药血清组,但仍低于正常对照组,有显著性差异;各含药血清组细胞活力抑制率均明显降低,其中高剂量组低于低剂量组。此外,含药血清能促进缺氧条件下RPE细胞由G0/G1期进入S期,促进RPE细胞的增殖。结论:中药黄斑颗粒含药血清预处理对人视网膜色素上皮细胞缺氧损伤具有一定的保护作用。     

透骨消痛胶囊对兔骨性关节炎软骨细胞MAPK信号通路表达的影响

目的研究透骨消痛胶囊对兔骨性关节炎软骨细胞MAPK信号通路表达的作用机制。方法成年健康6月龄新西兰兔40只,采用抽签法随机分为正常组、造模组,造模组用4%木瓜蛋白酶双膝关节腔注射建立骨性关节炎模型;造模成功后造模组采用抽签法随机分为模型组、对照组、实验组,实验组用透骨消痛胶囊水溶液100 mL/d灌胃,对照组用壮骨关节胶囊水溶液100 mL/d灌胃,Western Rlot检测MAPK信号通路p—ERK1/2、p—JNK的蛋白表达。结果实验组治疗后,关节软骨中p-ERK1/2蛋白表达高于模型组、对照组（P<0.05）,p—JNK蛋白表达低于模型组、对照组（P<0.05）。结论透骨消痛胶囊可通过上调兔骨性关节炎软骨细胞p—ERK1/2蛋白的表达,下调p-JNK蛋白的表达,促进软骨细胞增殖、分化,抑制其凋亡。     

重组人内抑素对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的：观察重组人内抑素( rhEndostatin)对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞( HSFs)增殖的影响,探讨rhEndostatin抑制 HSFs 增殖的相关机制。方法制备兔耳增生性瘢痕( HS)模型,分离、培养并鉴定兔耳HSFs;应用四甲基偶氮唑盐( MTT)法和流式细胞仪分别检测rhEndostatin对HSFs增殖和周期的影响。结果分离培养的兔耳细胞经波形蛋白免疫细胞化学染色检测呈阳性。 rhEndostatin对 HSFs增殖的抑制效应与浓度和作用时间呈依赖关系,测得IC50值为100 mg/L。与正常对照组细胞相比,HSFs G1期细胞比例减少(P<0．01),S期和G2/M期细胞比例增加(P<0．01);与模型组细胞相比, rhEndostatin组细胞G1期比例增加( P<0．01),S期和G2/M期细胞比例减少(P<0．01)。结论rhEndostatin可抑制兔耳 HSFs 增殖,该作用可能与其引起HSFs细胞周期G1期阻滞相关。     

低剂量辐射对HCT-8细胞周期及其相关蛋白表达的影响

目的：研究低剂量照射(LDR)对人结肠癌细胞(HCT-8)增殖、细胞周期及其相关信号蛋白表达的影响,为低剂量辐射临床应用提供理论依据。方法：体外培养人结肠癌细胞HCT-8,分为7个实验组：假照组（0 mGy）,25、50、75、100和200 mGy低剂量X线照射组和1 000 mGy高剂量X线照射组。照射后用细胞计数法及噻唑蓝比色(MTT)检测细胞增殖率,用流式细胞术测定细胞周期中G₀/G₁、S、G₂/M期的比例。应用蛋白法分析检测细胞周期及相关信号蛋白（共9个蛋白）的表达。结果：经细胞计数及MTT实验证实,25、50、75、100和200 mGy低剂量辐射组HCT-8细胞增殖率与假照组比较差异均无显著性（P>0.05）,与高剂量组比较差异均有显著性（P<0.05）。经流式细胞术检测,与假照组比较,75 mGy低剂量辐射12和24 h后,HCT-8细胞 G₀/G₁期比例增高(P>0.05),S期比例显著降低(P<0.05);G₂/M期比例显著升高（P<0.05）;48 h后G₀/G₁、S及G₂/M期HCT-8细胞比例与假照组比较差异均无显著性（P>0.05）。蛋白分析检测,低剂量辐射后HCT-8细胞中Akt、PCNA、P27、CDK2、cyclin E、EGFR、ERK1/2、p-ERK、p-GSK-3α/β等 9种蛋白表达量均较假照组降低。结论：低剂量辐射对HCT-8细胞增殖无促进作用,但在一定程度抑制细胞增殖及细胞周期相关蛋白的表达。     

甲醛对小鼠睾丸细胞凋亡和细胞周期的影响

目的：研究甲醛对小鼠睾丸细胞凋亡和细胞周期的影响,探讨甲醛对雄性小鼠的生殖与遗传毒性及其作用机制。 方法：雄性健康昆明种小鼠随机分为阴性对照组（NC）、甲醛染毒组和阳性对照组（PC）,每组12只。采用静式吸入染毒,各染毒组吸入甲醛浓度分别是21(1/24LC₅₀)、42 (1/12 LC₅₀>)和84 mg·m^-3 (1/6 LC₅₀),阴性对照组吸入正常空气,阳性对照组腹腔注射环磷酰胺（50 mg·kg-1）。染毒结束后处死小鼠,检测各组小鼠睾丸细胞凋亡和细胞周期的变化。结果：1/6LC₅₀染毒组小鼠睾丸细胞凋亡率显著高于阴性对照组(P<0.05);随着甲醛剂量的增加,S期细胞百分数逐渐增加,G0/G1和G2+M期的细胞百分数逐渐减少,各剂量染毒组小鼠睾丸细胞S期细胞百分数显著高于阴性对照组,1/6LC₅₀染毒组G0/G1和G2+M期的细胞百分数显著低于其他剂量组(P<0.05)。 结论：甲醛可以使小鼠睾丸细胞凋亡率增加,并影响其细胞周期,具有一定的生殖遗传毒性。     

电离辐射对Jurkat T细胞周期进程的影响

目的：探讨电离辐射诱导Jurkat T细胞损伤过程中细胞周期进程的变化规律。方法：采用流式细胞术 (FCM) 检测低剂量（0.075 Gy）和较大剂量（0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞周期进程变化的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系研究发现,2.0 Gy X射线照射后Jurkat T细胞相继发生S期延迟和G₂期阻滞,S期细胞百分率于照射后立即增加(P<0.001),而G₂+M期细胞百分率照射后8 h开始显著增加（P<0.001）。剂量-效应关系研究发现,75 mGy低剂量X射线照射即可诱导Jurkat T细胞发生S期延迟（P<0.001）和G₂期阻滞（P<0.05）;0.5~6.0 Gy较大剂量X射线照射后,Jurkat T细胞发生S期延迟和G₂期阻滞。与假照组相比较,G₀/G₁期细胞百分率显著降低（P<0.001）,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性,而S期和G₂+M期细胞百分率显著升高（P<0.05或P<0.001）。结论：X射线照射可以改变Jurkat T细胞周期进程,诱导其相继发生S期延迟和G₂期阻滞,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性。     

白藜芦醇对鼠纤维肉瘤S180细胞周期影响及其机制研究

目的:研究白藜芦醇对鼠纤维肉瘤S180细胞的抗肿瘤作用,并探讨其分子机制.方法:用MTT法检测白藜芦醇对鼠纤维肉瘤细胞系S180增殖的影响;PI单标流式细胞术检测白藜芦醇对S180细胞周期分布的影响;Western blot方法检测白藜芦醇对S180细胞 cyclinD1,P21Cip1蛋白表达的影响.结果:白藜芦醇对S180细胞增殖呈双相作用:低浓度促进细胞增殖;高浓度抑制细胞增殖,其抑制作用呈时效和量效关系.白藜芦醇治疗组S180细胞周期发生变化,细胞周期被阻滞于 G0/G1期.白藜芦醇以时间依赖方式下调周期蛋白 cyclinD1 的表达.上调白藜芦醇P21Cip1蛋白表达.结论:白藜芦醇低浓度促进S180细胞增殖,高浓度抑制细胞增殖.白藜芦醇可通过凋节细胞周期蛋白 cyclinD1,p21Cip1的表达调控细胞周期进程,抑制细胞增殖.     

蜂毒多肽对人膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用

目的探讨蜂毒多肽对人膀胱癌T24细胞的增殖及细胞周期的影响。方法以浓度为0.1、1.0、10.0、100.0μg/ml的蜂毒多肽作用于体外培养的人膀胱癌T24细胞,应用四甲基偶氮唑盐（MTT）的培养增殖抑制作用,用流式细胞仪检测蜂毒多肽对细胞增殖核抗原（PCNA）表达及对该细胞周期的影响。结果蜂毒多肽能够在体外抑制人膀胱癌T24细胞的增殖活性;抑制PCNA的表达,呈剂量依赖性,各浓度组PCNA量均较对照组降低（P〈0.05或P〈0.01）;干扰细胞周期,各浓度组G0/G1期均低于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,S期高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,浓度10.0μg/ml和100.0μg/ml组G2/M期均高于对照组（P〈0.01）。结论蜂毒多肽可抑制膀胱癌T24细胞的增殖,其作用机制可能与PCNA的表达抑制及细胞周期受到干扰有关。     

低剂量电离辐射对松果腺细胞周期的影响

目的 :探讨低剂量 X射线全身照射对小鼠松果腺细胞周期的影响。方法 :采用流式细胞术(FCM)检测小鼠松果腺细胞周期。结果 :低剂量电离辐射全身照射后 ,小鼠松果腺 G0 / G1期细胞百分数降低 (P<0 .0 5 ) ,S期细胞百分数升高 (P<0 .0 1) ,G2 + M期细胞百分数降低 (P<0 .0 5 )。结论 :低剂量电离辐射可促进小鼠松果腺细胞的 DNA合成及增殖。     

对MOLT-4细胞用cyclin E+A/DNA流式细胞术分析 - 细胞周期六分法的建立

目的　越来越多的资料表明肿瘤是一类细胞周期性疾病 ,从而使得细胞周期分析在细胞生物学 ,肿瘤生物学领域显得格外重要。迄今为止 ,有很多方法应用于细胞周期分析中 ,但这些方法因为这样或者那样的缺点已无法适应今天的细胞周期分析。本研究的目的是建立一种新的 ,更为合理的细胞周期分析方法。方法　将cyclinE以及cyclinA的单克隆抗体按一定的比例混合后与固定了的MOLT 4细胞孵育 ,后用流式细胞仪检测。结果　我们发明的CyclinE A/DNA多参数流式细胞术能将细胞分为六个细胞群体 :G0 、早G1、晚G1、S、G2 、M期细胞。而在DNA含量直方图仅能区分三个细胞群体 :G0 /G1、S、G2 /M期细胞。结论　CyclinE A/DNA多参数流式细胞术能同时在同一样本中将细胞分为六个细胞群体 :G0 、早G1、晚G1、S、G2 、M期细胞。其对细胞周期分析明显优于目前采用的细胞周期分析方法 ,并且有明显的生物学基础。     

恒磁场诱导联合平阳霉素化疗对人舌癌细胞的作用

目的：观察恒磁场诱导下，人舌癌细胞增殖周期的变化，与平阳霉素联合，二者具有的协同抗癌作用。方法：利用体外培养的人舌癌Ｔｃａ８１１３系细胞分为四组：对照组、磁场组、平阳霉素组和磁场诱导联合平阳霉素组（简称联合组）。用倒置显微镜定时观察细胞的生长状态并照像。流式细胞仪分析结果。结果：均以对照组为参照，恒磁场诱导可使Ｇ０Ｇ１期的细胞比例上升，而Ｓ、Ｇ２Ｍ期的细胞比例下降。细胞增殖指数下降（Ｐ〈０．０５）