基于高通量测序技术的藏族肝硬化患者肠道菌群多样性研究

背景大量研究已证实肝硬化患者存在肠道菌群失调的现象,这为临床防治肝硬化及并发症提供了新的线索与思路.藏族人群生活环境和饮食习惯有别于汉族人群,因而藏族肝硬化患者肠道菌群结构及多样性亦可能存在差异.目的 探讨藏族肝硬化患者肠道菌群结构、丰度与多样性,并对比汉族肝硬化患者肠道菌群的差异及特点.方法 前瞻性纳入2017-10/2018-10四川大学华西医院成办分院消化内科36例肝硬化患者,其中20例藏族设为实验组, 16例汉族肝硬化患者设为对照组;收集患者基本信息、血常规、生化、凝血功能、影像学等,并采集大便标本,提取基因组DNA并对细菌16S rRNA基因V4区进行PCR扩增,应用Illumina Miseq平台进行高通量测序,测序原始结果进行Reads拼接、操作分类单元(operational taxonomic units, OTUs)聚类、物种注释、Alpha多样性分析等,最终得到样品的生物信息学结果.结果对照组和实验组分别获得15006和36872条有效序列,在实验组中Chao1指数显著降低(P0.01),实验组的物种丰富度较对照组显著降低.基于97%的相似性进行物种注释,对实验组和对照组进行微生物物种丰度比较.结果显示,相较于对照组,在门水平上,实验组中拟杆菌门显著减少(P0.001),厚壁菌门和放线菌门在实验组中增加(P0.01和P0.05);在属水平上,葡萄球菌属、放线菌属在实验组中显著减少(P0.01),乳杆菌属显著增加(P0.01).结论藏族肝硬化患者的肠道微生物丰度明显低于汉族肝硬化患者,肠道微生物组成存在着差异.本研究首次展现了藏族肝硬化患者的肠道微生物组成特点,为肝硬化的个性化治疗奠定了基础.     

中国汉族人群PNPLA3 rs738409(C>G)基因多态性与肝硬化病因学的相关性

目的:探究在中国汉族人群中,含patatin样磷脂酶域3(patain-like phospholipase domaincontaining protein 3,PNPLA3)I148M基因变异与酒精性肝硬化、慢性乙型病毒性肝炎肝硬化及慢性丙型病毒性肝炎肝硬化易感性及肝脏损伤程度、预后是否存在相关性.方法:本研究纳入224例中国汉族酒精性肝硬化、慢性丙型病毒性肝炎肝硬化、慢性乙型病毒性肝炎肝硬化患者,其中,慢性乙型病毒性肝炎肝硬化患者88例,酒精性肝硬化患者83例,慢性丙型病毒性肝炎肝硬化患者53例及200名健康人群作为对照组.采用探针法基因分型检测PNPLA3 rs738409与肝硬化之间的相关性.结果:PNPLA3 I148M rs738409 G等位基因型在酒精性肝硬化(OR=1.902,P0.001)及慢性乙型肝炎肝硬化(OR=1.452,P=0.047)与健康对照组中的频率分布存在显著差异;丙型肝炎肝硬化与健康对照组中的等位基因频率分布差异无统计学意义(P=0.056).并未得出PNPLA3 I148M rs738409 CG与肝硬化原发性肝细胞癌相关(P=0.965).结论:PNPLA3 rs738409 CG在中国汉族人群中与酒精性肝硬化及慢性乙型肝炎肝硬化易感性存在相关性.     

肝硬化与ABO血型的相关性分析

探讨肝硬化与ABO血型的相关性。检测640例肝硬化患者ABO血型，并与对照组进行比较。显示：①朝鲜族肝硬化患者较朝鲜族对照组A型血型显著为多，而汉族肝硬化患者ABO血型分布与汉族对照组比较无显著性差异；②肝硬化合并原发性肝癌(PHC)者较未合并PHC者B血型显著为多，O血型显著为少；③男女肝硬化患者ABO血型分布无显著性差异。提示：肝硬化患者ABO血型分布与民族、是否合并PHC等因素有密切关系，而与性别无明显关系。     

汉族老年慢性乙型肝炎患者HLA-DRB1基因多态性

目的探讨汉族老年慢性乙型肝炎患者HLA-DRB1基因多态性。方法选取汉族老年人群中的53例慢性乙型肝炎患者、100例正常健康老年人以及31例乙型肝炎表面抗原携带者作为研究对象,分别为病例组、抗原携带组和健康对照组,对三组研究对象的HLA-DRB1等位基因分型进行比较,并对HBV不同复制状态者HLA-DRB1等位基因分型进行分析。结果病例组的HLA-DRB1*03等位基因频率明显较健康对照组高,而HLA-DRB1*15等位基因频率明显低于健康对照组(P<0.05),抗原携带者与健康对照组比较,HLA-DRB1各等位基因的频率,无显著性差异(P>0.05)。HBV高复制状态组的DRB1*07基因位点明显较低复制状态组多见(P<0.05)。结论汉族老年慢性乙型肝炎患者与HLA-DRB1基因多态性之间存在比较强的相关性。     

肝硬化失代偿期患者空腹胃十二指肠运动改变

目的研究肝硬化失代偿期患者空腹胃肠动力有无异常。方法采用灌注式测压方法,检测15例健康志愿者和12例肝硬化失代偿期患者空腹胃窦和十二指肠动力。结果肝硬化失代偿期患者MMCⅠ期和Ⅲ期的持续时间与健康对照组比较均无显著差别（P〉0.05）;肝硬化患者MMCⅡ期较健康对照组显著延长（P〈0.01）;肝硬化患者MMC周期较对照组显著延长（P〈0.01）。与对照组比较,MMCⅡ期更常出现移行性簇状收缩（P〈0.05）。结论肝硬化患者MMCⅡ期持续时间延长导致MMC周期延长,导致MMCⅢ期发生频率减少,从而影响消化道清除食物残渣和细菌的能力。MMCⅡ期出现移行性簇状收缩亦可能削弱肝硬化患者消化道的清除能力。     

中国汉族慢性乙型肝炎患者MBP基因多态性特点及意义

目的 比较了汉族人群中慢性乙型肝炎患者与背景对照组、健康对照组之间甘露糖结合蛋白(MBP)基因多态性的差异。方法 应用PCR-RFLP方法对中国汉族的552例样品进行MBP基因多态性进行检测,并将其中的22例样品的PCR产物直接进行DNA序列分析。结果 中国汉族人群中慢性乙型肝炎患者与背景对照组、健康对照组之间MBP基因突变频率分别为0.174、0.182和0.202,未检测到密码子52和57的基因突变。结论 MBP基因密码子54等位基因多态性在中国汉族慢性乙型肝炎患者、背景对照组与健康对照组中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡,而且各组之间MBP基因突变频率没有显著差别。     

临床护理路径在病毒性肝炎肝硬化合并消化道出血患者中的应用效果分析

目的探讨在乙型病毒性肝炎肝硬化合并消化道出血患者中实施临床护理路径的效果。方法选择196例乙型病毒性肝炎肝硬化合并消化道出血患者为研究对象,随机分为对照组和观察组,每组98例。对照组患者给予常规护理及健康指导,观察组患者按照临床护理路径对患者进行护理及健康教育,观察分析两组患者的住院天数、生活质量评分、对护理服务的满意度及健康教育达标情况。结果观察组患者住院天数显著少于对照组,差异有统计学意义(P0.05);观察组患者生活质量评分、对护理服务的满意度及健康教育达标率均优于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论临床护理路径在病毒性肝炎肝硬化合并消化道出血患者中的应用,可缩短患者的住院时间、提高患者生活质量,提高患者对护理服务的满意度及健康教育达标率。     

不同年龄期肝硬化患者血浆LPO和红细胞SOD活性的变化

本文检测了37例健康人和30例肝硬化患者血浆过氧化脂质(LPO)含量和红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,结果发现肝硬化患者血浆LPO高于健康对照组(P<0.01),青壮年期肝硬化患者红细胞SOD低于健康对照组(P<0.05)。同青壮年肝硬化患者相比,老年及老年前期肝硬化患者血浆LPO降低,红细胞SOD活性增高.这表明青壮年期肝硬化患者自由基损伤较老年及老年前期更加明显。     

血清IL-22水平与急性戊型肝炎病毒感染患者肝功能损害、疾病进展及转归的相关性

目的探讨血清白介素-22(IL-22)水平同急性戊型肝炎病毒(HEV)感染患者肝功能损害、病情及转归的相关性。方法研究对象为我院收治的62例急性HEV感染患者,其中32例伴有肝硬化(A组),30例为单纯性HEV感染(B组),另选取同期在我院进行健康体检的30名健康志愿者作为健康对照组及20例单纯性代偿期肝硬化患者作为肝硬化对照组,对所有研究对象进行血清干扰素-γ(IFN-γ)、IL-22、白介素-6(IL-6)检验,对检验结果进行对比分析。结果 A、B两组的IL-22水平均显著高于健康对照组及肝硬化对照组(P0.05);A组的IL-6水平显著高于健康对照组及肝硬化对照组(P0.05);A组患者中,有14例出现慢加急性肝功能衰竭(ACLF),18例未出现ACLF。伴ACLF患者的IL-22、IL-6水平均显著高于不伴ACLF患者(P0.05)。伴ACLF组患者治疗9周后的IL-22水平明显降低(P0.05)。结论急性HEV感染引起的肝脏炎性损伤有IL-22的参与,IL-22水平的高低与患者病情的严重程度、预后情况存在密切联系,临床可将其作为评估HEV患者病情转归的有效指标。     

贵州省少数民族与汉族人群ACE基因rs4343多态性与心房颤动的相关性

目的:研究贵州省少数民族和汉族心房颤动(房颤)患者血管紧张素转化酶(ACE)基因rs4343多态性。方法:选取贵州地区医院房颤患者184例为病例组,其中少数民族51例,汉族133例。以年龄和性别为配对条件,选取同期贵州地区医院健康体检中心健康者226例为对照组,其中少数民族96例、汉族130例。采用聚合酶链式反应(PCR)、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和基因测序方法检测两组人群的ACE基因rs4343基因型及等位基因分布特点。结果:健康对照组ACE基因rs4343多态性在少数民族组和汉族组中基因型分别以AA型和AG型为主,等位基因均以A基因为主;ACE基因rs4343型频率和等位基因频率在房颤组与健康对照组间差异显著(P0.05),且房颤组G等位基因频率显著高于健康对照组,为健康对照组的1.79倍;少数民族房颤患者ACE基因rs4343以AA型为主,汉族房颤患者ACE基因rs4343以AG型为主,等位基因均以A型为主,基因型频率和等位基因频率差异不具统计学意义。ACE基因rs4343型频率和等位基因频率在少数民族组和汉族组间差异无统计学意义。结论:ACE基因rs4343多态性与房颤显著相关,G等位基因是房颤发生的危险因子。     

肝硬化患者血浆胆囊收缩素及胃动素对胃排空的影响

目的本研究旨在探讨肝硬化患者胃排空功能,并探讨其胃排空作用与空腹血浆胆囊收缩素、胃动素的关系,进而为预防和治疗肝硬化提供参考。方法 将30例肝硬化患者作为试验组,30例健康志愿者作为对照组,采用^13C-辛酸呼气试验法测定肝硬化患者以及对照组的胃固体半排空时间（GET1／2）,同时用放射免疫技术测定患者及对照组的空腹血浆胆囊收缩素（CCK）及胃动素（MTL）水平。结果与健康志愿者组相比,肝硬化患者组GET1／2明显延迟（P〈0．05）;空腹血浆CCIK及MTL水平明显升高,组间差异有统计学意义（P〈0．05）;患者GET1／2与空腹血浆CCK及MTL水平各自呈正相关。结论肝硬化患者胃排空延迟可能与血浆CCK及MTL水平的异常增高相关。推测肝硬化时血浆CCK及MTL水平均明显增高,由此引发胃排空延迟,最终导致营养不良,进而加重患者病情。     

肝硬化患者肠道微生态的变化

目的:观察肝硬化(hepatic cirrhosis,HC)患者粪便中类杆菌、双歧杆菌、肠球菌、大肠杆菌、直肠真杆菌-球形梭菌和梭状芽胞杆菌,比较肝硬化患者与健康对照组之间肠道微生态的差异,以了解肝硬化患者肠道菌群的变化.方法:收集2010-03/2010-12遵义市第一人民医院消化科所收治的肝硬化患者29例,并以13例同期健康在校大学生作对照,收集粪便标本.经固定、玻片上涂片,荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH),激光共聚焦扫描显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)对细菌进行计数观察.应用秩相关检测法进行分析.结果:肝硬化患者与健康对照组比较粪便中双歧杆菌、类杆菌、真杆菌-直肠梭菌、肠球菌、大肠杆菌和梭状芽胞杆菌均较健康对照组显著减少(Z=-4.006、-4.34、-4.399、-4.174、-3.558、-3.95,均P<0.01),6种细菌的比例发生改变,表现为双歧杆菌及类杆菌专性厌氧菌的数量减少,大肠杆菌、直肠真杆菌-球形梭菌、肠球菌和芽胞杆菌的数量增多(P<0.05).细菌数量及比例之间的这种改变与肝硬化病因及肝硬化严重程度(Child-Pugh)分级无明显相关性(P>0.05).结论:肝硬化患者肠道中6种细菌数量及构成比发生改变,肠道微生态的这种变化与肝硬化不同病因及疾病严重程度之间无明显相关性.     

中性粒细胞与淋巴细胞比值与乙肝及乙肝肝硬化关系研究

[目的]研究乙型肝炎患者外周血中性粒细胞和淋巴细胞计数随乙型肝炎病情进展变化情况,并探讨中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)与乙型肝炎及乙肝肝硬化间的关系。[方法]将健康对照组20例,乙型肝炎组25例,乙肝肝硬化组90例患者应用血液全自动分析仪进行外周血白细胞计数并计算NLR,对比分析3组间NLR水平差异。采用Child-Pugh评分系统对乙肝肝硬化组90例患者进行分级,且分析NLR水平同Child-Pugh评分相关性。[结果]1与健康对照组比较,乙型肝炎组和乙肝肝硬化组患者具有更低水平的NLR(P0.05);2在乙肝肝硬化患者中,随着肝脏纤维化及损伤程度加重,NLR水平呈显著下降趋势;3线性分析显示,Child-Pugh评分会随NLR的升高而降低,NLR水平同乙肝肝硬化患者Child-Pugh评分呈负相关(P0.05)。[结论]NLR水平同乙型肝炎和乙肝肝硬化病理进程密切相关,伴随乙型肝炎的进展,NLR水平显著降低;NLR是Child-Pugh评分的预测因子,其水平与乙肝肝硬化和肝功能损伤程度负相关,可辅助预测乙型肝炎患者肝功能情况,评估肝脏纤维化程度。     

100例HBV感染肝硬化患者心电图检查QTc间期与其Child-Pugh评分的相关性研究

目的 研究乙型肝炎病毒（HBV）感染肝硬化患者心电图（ECG）检查QTc间期与其肝功能分级（Child-Pugh）评分的相关性,为其在诊断HBV感染肝硬化患者心肌病变中的应用提供参考和依据。方法 以2020年1月至2021年12月贺州市人民医院收治的100例HBV感染肝硬化患者作为肝硬化组,选取同期在贺州市人民医院接受体检的97例健康体检者作为健康对照组,所有人员均进行ECG检查,根据Child-Pugh评分将100例HBV感染肝硬化患者分为A组（28例,Child-Pugh评分5～6分）、B组（40例,Child-Pugh评分7～9分）、C组（32例,Child-Pugh评分10～15分）。统计健康体检者与不同Child-Pugh评分HBV感染肝硬化患者一般资料,比较健康体检者、HBV感染肝硬化患者ECG检查QTc间期指标及不同Child-Pugh评分HBV感染肝硬化患者ECG检查QTc间期指标,采用Spearman检验分析ECG检查QTc间期指标与HBV感染肝硬化患者Child-Pugh评分及实验室指标的相关性。结果 健康对照组、A组、B组、C组血清总胆红素（TBil）、白蛋白（A...     

彩色多普勒超声检测肝硬化患者门静脉血流动力学变化临床意义分析

目的探讨彩色多普勒超声检测门静脉血流动力学变化对肝硬化患者临床诊断的意义。方法将2014年5月至2015年6月我院收治的肝硬化患者70例设为研究组,并根据Child-Pugh肝功能分级将患者分为A级、B级和C级三个亚组,病情由轻到重;选取同期在我院体检中心体检的健康志愿者50名作为对照组,采用彩色多普勒超声检测两组对象门静脉内径(DPv)、血流量(QPv)、血流速度(VPv)并进行比较分析。结果研究组患者DPv大于对照组健康志愿者,QPv水平显著高于对照组,VPv水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);肝硬化C级患者DPv、QPv水平显著高于A级患者、VPv水平显著低于A级患者,差异有统计学意义(P0.05);B级患者VPv水平显著低于A级患者(P0.05)。结论通过彩色多普勒超声检测肝硬化患者门静脉血流动力学指标,可了解肝硬化患者疾病的严重程度,帮助临床医生进行临床诊断和治疗。     

肝硬化患者体表胃电图参数与肝功能损害程度的相关性研究

探讨肝硬化患者体表胃电图参数变化与肝功能及检验指标间的关系。对63例肝硬化患者和20例健康志愿者进行体表胃电图记录和化验检查。将健康对照组、Child-pugh分级A级、B级、C级四级受试者进行两两比较,主频和胃电节律紊乱百分比均有显著差异;胃电节律紊乱百分比与肝功能检验指标进行相关性分析,发现白蛋白和血小板计数与胃电节律紊乱百分比存在直线负相关关系(r分别为-0.723和-0.704)。1.肝硬化患者存在明显胃电节律紊乱,并随肝功能损害程度加重而加重;2.白蛋白和血小板计数与肝硬化患者胃电节律紊乱关系密切,可用于判断肝硬化患者胃动力障碍情况。     

APOBEC3G基因多态性与HBV感染后疾病转归的关系

目的 研究中国汉族人群载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3G(APOBEC3G)基因多态性与慢性乙型肝炎和肝硬化的关系.方法 应用焦磷酸测序,检测202例HBV感染自然痊愈者(对照组)、217例慢性乙型肝炎患者和216例乙型肝炎肝硬化患者APOBEC3G基因rs8177832位点多态性,确定其基因型及等位基因分布.同时通过建立DNA池技术初步对APOBEC3G基因的另外4个标签单核苷酸多态性位点(tagSNP)rs17000736、rs17496046,rs9622924和rs2899313进行疾病相关性的初步筛选;HBV DNA检测采用实时定量PCR.结果 rs8177832在中国汉族人群中以A/A为主要存在形式,其基因型频率和等位基因频率在对照组、慢性乙型肝炎组和乙型肝炎肝硬化组中的分布差异无统计学意义.慢性乙型肝炎组中携带G等位基因的患者HBV DNA水平为6.25 log10拷贝/ml,携带A等位基因的患者为5.54 log10拷贝/ml,t=2.111,P=0.036.rs17000736和rs9622924两位点在中国汉族人群中分别只有G/G和C/C一种单一基因型存在,rs17496046和rs2899313两位点分别以G等位基因和A等位基因为主,这4个tagSNP(rs17000736、rs17496046、rs9622924和rs2899313)在对照组、慢性乙型肝炎组和乙型肝炎肝硬化组中等位基因频率差异均无统计学意义.结论 汉族人群APOBEC3G基因中rs8177832位点的多态性可能与HBV的复制有关,但这5个tagSNP可能与HBV感染后疾病的进展无关.     

肝硬化患者NT-pro-BNP、NO和Hb的变化及相关性

目的 观察肝硬化患者血浆氨基末端B型尿钠肽前体、血清一氧化氮和血红蛋白的变化及相关性.方法 测定58例肝硬化患者和30例健康对照的血浆氨基末端B型尿钠肽前体、一氧化氮和血红蛋白水平;同时按血红蛋白水平将肝硬化患者分为贫血组和非贫血组.结果 肝硬化患者血浆氨基末端B型尿钠肽前体、一氧化氮明显高于健康对照组(P<0.01),血红蛋白水平明显低于健康对照组(P<0.01).肝硬化患者贫血组血浆氨基末端B型尿钠肽前体明显高于非贫血组(P<0.05);肝硬化患者血浆氨基末端B型尿钠肽前体水平与一氧化氮呈正相关(P<0.05),与血红蛋白呈负相关(P<0.05).结论 肝硬化患者血浆氨基末端B型尿钠肽前体升高可能提示心功能不全,一氧化氮水平的升高和血红蛋白水平的降低可能参与了肝硬化患者心功能不全的病理生理过程.     

HLA-DRB1等位基因多态性与慢性乙型肝炎、肝硬化关联性的临床研究

目的 探讨人类白细胞抗原(human lymphocyte antigen,HLA)-DRB1等位基因多态性与吉林省地区乙型肝炎肝硬化及乙型肝炎病毒(HBV)复制状态的相关性.方法 采用PCR-SSP方法以健康人作对照,对吉林地区汉族32例慢性乙型肝炎(CHB)患者、36例乙型肝炎肝硬化患者、34例慢性无症状携带者(ASC)的HLA-DRB1等位基因多态性进行检测.结果 CHB组、肝硬化组HLA- DRB10701等位基因频率明显高于健康对照组,有显著性差异(P＜0.05),其他等位基因频率无显著性差异(P＞0.05),HBV-DNA阳性组与HBV-DNA阴性组等位基因频率无显著差异.结论 HLA-DRB1*0701等位基因的高表达与吉林地区汉族人CHB发生相关.     

老年代偿期肝硬化患者左室功能评价

目的探讨超声诊断在102例老年代偿期肝硬化患者左室功能检测中的临床应用价值。方法 2009年8月至2011年8月对收治的老年代偿期肝硬化患者的左心室收缩及舒张功能采用超声进行检查,并与健康对照组进行对比研究。结果老年代偿期肝硬化患者的LVEF、CO、LVFS及LVSV等反映左室收缩功能的超声多普勒参数与对照组比较无明显差异(P>0.05),VE、VA、DT及E/A等反映左室舒张功能的超声多普勒参数与对照组比较有明显差异(P<0.05)。结论代偿期肝硬化患者的早期左心室功能变化主要表现为左室舒张功能减退,在临床诊断与治疗过程中应注意其潜在的危险。应用无创彩色多普勒超声显像检测快速方便,可为临床治疗及时准确地提供参考信息。