p16基因在喉癌中的表达

目的 探讨p16基因的表达与喉癌的关系。方法 采用RT—PCR方法检测喉癌中p16mRNA表达情况。结果 不同病理级别喉癌组织中p16mRNA表达均有不同程度下降，Ⅱ-Ⅲ级患者下降比较明显。结论 p16基因在喉癌中的表达明显低于正常喉粘膜组织。可能与喉癌的发生发展密切相关。     

P16基因在喉癌中的表达

目的探讨P16基因的表达与喉癌的关系。方法采用RT—PCR方法检测喉癌中P16 mRNA表达情况。结果不同病理级别喉癌组织中P16 mRNA表达均有不同程度下降，Ⅱ～Ⅲ级患者下降比较明显。结论P16基因在喉癌中的表达明显低于正常喉黏膜组织，可能与喉癌的发生发展密切相关。     

多重PCR技术检测宫颈癌组织中HPV16、18和11／6E6基因的研究

目的：研究宫颈癌发病与HPV16、18E6基因的关系。方法：采用多重PCR技术检测83例宫颈癌组织中HPV16、18及11／6E6基因。结果：（1）新疆地区36例宫颈癌中HPVE6基因检出率为86.11％（31／36）,其中HPV16E6占构成比80.56％（25／31）。（2）山西地区宫颈癌中HPV DNA阳性检出率51.06％（24／47）,其中HPV16E6占构成比50.00％（12／24）。（3）两组HPVE6阳性检出率比较P＜0.01,差异有显著性。两组HPV16E6构成比比较,P＞0.05,差异无显著性。结论：宫颈癌发生与HPV感染的关系密切,且新疆地区比山西地区更为密切。两组HPV感染以HPV16为主。     

人乳头状病毒16/18及E6、E7基因在宫颈癌组织中的表达

目的探讨高危型人乳头状病毒(HPV)16／18及其E6、E7基因在宫颈癌诊断中的价值。方法对104例宫颈新鲜组织(正常对照16例，轻度宫颈增生18例，中度宫颈增生20例，重度宫颈增生20例，宫颈癌30例)进行研究，荧光定量PCR用于HPV16／18的检测，PCR用于E6、E7基因的检测。结果正常对照组：HPV16／18阳性1例，E6、E7基因无阳性；轻度宫颈增生：HPV16／18阳性2例，R、E7基因无阳性；中度宫颈增生：HPV16／18阳性2例，E6、E7基因阳性1例；重度宫颈增生：HPV16／18阳性6例，R、E7基因阳性2例；浸润型宫颈癌：HPV16／18阳性16例，E6、E7基因阳性7例。结论宫颈癌组织HPV16／18和E6、E7基因阳性率明显高于其它子宫颈增生者，并随子宫颈增生程度逐渐增加。     

喉癌组织中HPV16及其早期区基因E6、E7蛋白的表达及意义

目的:观察喉癌组织中HPV16及其早期区基因E6、E7蛋白的表达,并初步分析其与喉癌组织临床分期、病理分级的相关性.方法:147例喉组织标本,其中喉鳞状细胞癌组织82例,非癌组织39例(声带息肉27例,距肿瘤＞1.0 cm的癌周正常组织12例),癌前病变(声带白斑)26例.免疫组织化学检测各组标本中HPV16及其早期区基因E6、E7蛋白的表达.分析喉鳞癌组织中3种蛋白表达情况与临床分期、病理分级的相关性.结果:喉鳞癌组织中HPV16蛋白及E6、E7蛋白的阳性率明显高于癌前病变组织(P＜0.05或0.01),后者高于非癌组织 (P＜0.05或0.01).非癌组织中HPV16蛋白阳性率明显高于E6、E7蛋白的表达(P＜0.05或0.01),而喉癌组织及癌前组织中三者间无显著差异.不同临床分期(Ⅰ～Ⅳ期)及不同病理分级(Ⅰ～Ⅲ级)喉癌组织中HPV16的阳性率间有显著差异(P＜0.05);而不同临床分期及病理分级间HPV16 E6、E7蛋白表达率无显著差异.结论:HPV16感染后其早期区基因E6、E7的表达可能是诱发喉癌的因素之一,应用免疫学方法抑制E7蛋白的表达对于喉癌的治疗有积极的意义,但其预防和治疗作用不应过分夸大.     

HPV16/18 E6和TRIM25蛋白在不同宫颈组织中的表达及意义

目的 研究不同宫颈组织中HPV16/18 E6和TRIM25蛋白表达水平及意义。方法 选取宫颈癌患者105例、CINIⅠ~Ⅲ患者62例、CINⅠ患者58例和慢性宫颈炎患者50例,免疫组织化学方法检测在各宫颈组织中HPV16/18 E6和TRIM25的表达情况。用Spearman相关分析法分析HPV16/18 E6和TRIM25表达在宫颈癌组织中的相关性。用Kaplan-Meier法分析HPV16/18 E6和TRIM25表达水平与宫颈癌患者预后的关系;COX回归分析法分析宫颈癌患者预后的危险因素。结果HPV16/18 E6、TRIM25在不同宫颈组织中表达比较,差异有统计学意义。HPV16/18 E6和TRIM25在宫颈癌组织中表达水平呈负相关。HPV16/18 E6表达与组织分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径有关,TRIM25表达与组织分化程度、淋巴结转移有关。HPV16/18 E6阳性表达患者的总生存期短于阴性表达患者。TRIM25阴性表达患者的总生存期短于阳性表达患者。淋巴结转移、HPV16/18 E6可作为宫颈癌患者预后的独立危险因素,TRIM25可作为宫颈癌患者预后的独立保护因素。结论 HPV16/18 E6、TRIM25表达与不同宫颈病变的发生、发展及预后有关,有望成为HPV感染及宫颈癌辅助基因治疗的靶点。     

HLA-DR抗原及HPV16/18E6蛋白在宫颈癌组织的表达及意义

目的:通过检测HLA-DR抗原及HPV16/18E6蛋白在宫颈癌组织中的表达情况,探讨由HLA-DR抗原介导的免疫应答在感染高危型人乳头瘤病毒(HPV)至发展为宫颈癌过程中的作用机制。方法:采用免疫组织化学SP法检测正常宫颈、宫颈上皮内瘤病变(CIN)及宫颈癌组织中HLA-DR抗原及HPV16/18E6的表达情况。结果:HLA-DR抗原的阳性表达率在正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中分别为37.5%、73.3%、81.8%,而HPV16/18E6蛋白的阳性表达率则分别为37.5%、60.0%、75.8%,两者在3组的表达差异显著,P均<0.05。HLA-DR抗原及HPV16/18E6蛋白在宫颈癌组织中的阳性表达率随临床分期、分化程度及淋巴结是否转移而不同,但无显著性差异,P均>0.05。结论:HLA-DR抗原递呈病毒抗原给T细胞引起的免疫应答可能在宫颈癌的发生发展过程中起重要的作用。     

HPV16 E6/E7融合基因真核表达载体的构建

目的构建pEGFP-N1-E6/E7融合基因真核表达载体。方法应用聚合酶链反应技术(polymerasechain reaction,PCR)从SiHa细胞中扩增出人类乳头瘤病毒16型(HPV16)E6/E7基因全长片段,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1上。结果获得了包含全长阅读框架的HPV16E6/E7基因,并成功克隆到真核表达载体中。结论成功构建了pEGFP-N1-E6/E7融合基因真核表达载体。     

HPV18E2基因在宫颈癌及癌前病变组织中的表达及其临床意义

目的 观察HPV18 E2基因在宫颈癌及癌前病变组织中的表达及探讨其临床意义.方法 应用RT-PCR法检测39例患者的宫颈组织HPV18 E2基因的表达,以光镜下病理学诊断作为CIN分级标准.结果 HPV18 E2基因主要在宫颈癌前病变组织表达,其中CIN Ⅰ中E2基因表达率最高占60%,CIN Ⅱ中为33.3%,CINⅢ中为28.6%,而癌组织及慢性炎症中没有表达.结论 提示以HPV18 E2蛋白为靶点来研制多肽疫苗,能在HPV18所致疾病的早期及时阻断病变的进一步发展.     

宫颈癌组织中HPV16 E6基因的检测及其意义

目的：探讨宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6基因的检测及其意义。方法：运用PCR方法扩增HPV16E6／E7基因，分子克隆技术进行基因的克隆后进一步测定基因序列，宫颈炎和宫颈癌的确诊依赖于病理学方法。结果宫颈癌组织中HPV16E6基因的检出率为45％，显著高于宫颈炎组织中5％的检出率，两者有统计学差异。HPV16E7基因的检出率在两者之间没有显著性差异。结论：HPV16E6基因在宫颈癌的发病中起到重要的作用。宫颈组织中HPV16E6基因的检测有望成为宫颈癌筛查的新手段。     

HPV16E6和p53在口腔癌中的表达及相关性研究

目的 探讨HPV16E6和抑癌基因p53在口腔癌中的表达,及其与口腔癌临床分期、病理分级的相关性.方法 用免疫组织化学方法检测149例口腔癌、88例口腔癌癌前病变和49例癌周正常组织标本中HPV16E6和p53的表达,统计口腔癌不同临床分期和病理分级中HPV16E6和p53的阳性表达率.结果 口腔癌组织、口腔癌癌前病变组织和口腔癌癌周正常组织中HPV16E6的阳性表达率分别为79.9％ (119/149)、38.6％ (34/88)和2.0％ (1/49),p53的阳性表达率分别为24.2％(36/149)、55.7％(49/88)和91.8％ (45/49).随着临床分期和病理分级的增加,HPV16E6阳性表达率明显增加,而p53阳性表达率却明显减少(P＜0.05).结论 HPV16E6蛋白的表达升高和p53蛋白的表达降低可能会导致口腔癌的发生和发展.检测患者口腔癌组织中HPV16E6和p53的表达可用于评定口腔癌的恶性程度.     

人乳头状瘤病毒16型E6基因的序列及其在HeLa细胞中的表达

人乳头状瘤病毒 (Ｈｕｍａｎｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ ,ＨＰＶ) 16型Ｅ6原癌蛋白作为抗原 ,能诱发机体产生细胞免疫和体液免疫 ,是宫颈癌治疗性疫苗研究的热点[1] 。我们用ＰＣＲ方法从重庆宫颈癌组织中扩增出ＨＰＶ16Ｅ6基因 ,并在ＨｅＬａ细胞中成功表达Ｅ6原癌蛋白 ,为宫颈癌治疗性核酸疫苗的研究打下了基础。1　资料与方法1.1　资料1.1.1　宫颈癌活检组织　　取自重庆医科大学附属第二医院门诊患者。病理诊断为宫颈鳞状细胞癌。组织离体后迅速投入液氮 ,-70℃冷冻保存。1.1.2　引物　　根据标准株[2 ] 序列设计 ,上下游引物是 5’…     

C—myc蛋白在宫颈鳞癌中的表达及其与HPV16／18E6蛋白表达的关系

目的：C－myc蛋白在宫颈鳞癌中的表达状态,并探讨C－myc蛋白表达与HPV16／18E6蛋白表达之间的关系。方法：采用免疫组化SP法对21例慢性宫颈炎、40例宫颈上皮内瘤变和71例浸润性宫颈鳞癌进行C－myc蛋白和HPV16／18E6蛋白的检测。结果：慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级C－myc蛋白阳性率均很高,而浸润性宫颈鳞癌C－myc蛋白阳性率下降（P＜0．05）;HPV16／18E6阳性组和HPV16／18E6阴性组之间C－myc蛋白阳性率无差异。结论：浸润性宫颈鳞癌C－myc蛋白表达明显下降,并且C－myc蛋白表达与HPV16／18E6蛋白表达之间未见明显相关。     

HPV16、HPV16 E7蛋白与Rb蛋白在喉癌发生中的作用

目的观察HPV16及其早期区基因E7表达蛋白与Rb蛋白在喉癌发生中的相关性,为探索喉癌的病因学提供依据。方法用免疫组织化学方法检测82例喉鳞癌、39例非癌组织标本中HPV16、HPV16 E7以及Rb的蛋白表达。结果HPV16 E7和Rb蛋白表达的阳性率在非癌及癌组织中有非常显著的差异（P〈0.01）,HPV16的阳性率在非癌及癌组织中有显著性差异（P〈0.05）。喉癌组织中,Rb蛋白在HPV16和HPV16 E7阳性及阴性组中的阳性率显著不同（P〈0.01）,而在非癌组织中则无此现象（P〉0.05）。结论喉癌组织中HPV16 E7的高表达导致的pRb功能失活是引起喉癌的主要原因之一。     

HPV（16／18）E6、PKR、p-PKR、p-EIF2α在宫颈病变组织表达的意义

目的：探讨HPv（16／18）E6、蛋白激酶R（PKR）、磷酸化型PKR（p—PKR）、磷酸化型真核细胞翻译起始因子2α（p—EIF2α）在各级别宫颈病变组织的表达差异与宫颈病变级别的相关性及对宫颈癌患者预后的影响。方法：采用免疫组化法检测HPv（16／18）E6、PKR、p-PKR、p-EIF2a在63例宫颈癌、114例宫颈上皮内瘤样病变（CINI、CINⅡ、CINⅢ）、15例正常宫颈组织中的表达。结朵：HPV（16／18）E6在各组的阳性表达率为6．7％、15-4％、22．9％、27．5％、39．7％,宫颈癌组明显高于正常组及CINI组（P〈0.01,P〈0.05）;PKR在各组的阳性表达率为6．7％、17．9％、25．7％、30．0％、46．O％,宫颈癌组明显高于正常及CINI-Ⅱ组（P〈0.01,P〈0.01,P〈0.05）;p-PKR在各组的阳性表达率（6．7％、15．4％、20．0％、15．0％、15。9％）无统计学差异（P〉0．05）;p—EIP2α在各组的阳性表达率为6．7％、23．1％、31．4％、40．O％、30．2％,CINⅢ组高于正常宫颈组（P〈0.05）;HPV（16／18）E6、PKR在各组的阳性表达率与宫颈病变级别成正相关（P〈0．05．P〈0.05）;在宫颈癌组,PKR的阳性表达率明显高于p-PKR（P〈0．01）;宫颈癌患者临床分期晚者病情进展快（P〈0．01）,p-PKR、P—EIF2a阴性表达者病情进展快（P〈0.05,P〈0.05）。结论：HPV（16／18）E6使p-PKR、P—EIF2a失活,促进宫颈病变进展,导致宫颈癌患者预后不良;p-PKR、p-EIF2a能抑制病情进展,改善其预后。     

沉默HPV16 E6基因对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫颈癌细胞株CaSki细胞中,经G418筛选,RT-PCR检测E6基因的表达;将细胞接种到BALB/c裸鼠背部皮下,同时将该质粒注射到人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的裸鼠中,观察肿瘤出现时间及体积变化;观察肿瘤组织的病理改变.结果 成功筛选到持续表达E6 siRNA的CaSki细胞,经RT-PCR检测该细胞中HPV16 E6基因表达降低;裸鼠成瘤实验结果显示,处理后的CaSki细胞成瘤能力明显降低,抑瘤率为71.4%;注射质粒进行基因治疗后,裸鼠肿瘤生长受到抑制,肿瘤的体积与质量明显低于CaSki细胞组,差异具有显著性(P＜0.05).病理检查结果显示,经pGensil-CH2处理的肿瘤生长不佳,细胞分裂像少见,组织内有较多坏死区域.结论 沉默CaSki细胞中HPV16 E6基因的表达能明显降低宫癌细胞的成瘤作用.     

喉癌中HPV 16/18 E6蛋白的表达

目的检测HPV16／18E6蛋白在喉癌中的表达水平,研究其表达与临床、病理参数的关系,探讨HPV在喉癌病因学中的作用。方法选取喉癌30例,另选声带息肉30例及正常喉组织6例作为对照,采用免疫组织化学方法(S-P法)检测其HPV16／18E6蛋白的表达。结果喉癌中HPV16／18E6、凹空细胞的阳性率分别为56.7％(17／30)、46．7％(14／30)。声带息肉中凹空细胞的阳性率为40％(12／30),HPV16／18E6为阴性。正常喉组织均为阴性。喉癌中凹空细胞表达与组织分化正相关,分化越高,阳性率越高。喉癌中HPV16／18E6表达与凹空细胞表达呈正相关,与组织分化负相关,分化越低,阳性率越高。结论HPV16、18型与喉癌的发生密切相关。     

宫颈癌及其癌前病变组织中HPV16 E6蛋白的表达及意义

目的：探讨宫颈癌及其癌前病变组织中16型人乳头瘤病毒（HPV16）E6蛋白的表达及其意义.方法：用免疫组化SP法对15例正常宫颈组织、14例低级别宫颈上皮内瘤变（LCIN）、11例高级别宫颈上皮内瘤变（HCIN）以及61例浸润性宫颈癌标本进行了HPV16 E6蛋白表达的检测.结果：HPV16 E6蛋白在正常宫颈上皮、CINⅠ～Ⅱ、CINⅢ及浸润性宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为0（0/15）、7.14%（1/14）、36.36%（4/11）、59.02%（36/61）.高级别CIN和浸润性宫颈癌中HPV16 E6蛋白阳性率明显高于正常宫颈组织和低级别CIN（P〈0.05）,HPV16 E6蛋白表达与宫颈癌临床分期、组织分化和淋巴结转移无关（P〉0.05）.结论：HPV16 E6蛋白的检测可能可作为宫颈癌前病变转归的指标.     

大肠癌组织中HPV16,18E6,p^53癌基因蛋白表达的研究

目的探讨人乳头瘤病毒１６、１８型感染与Ｐ＾５３癌基因协同在大肠癌发生机制中的作用。方法采用ＳＰ免疫组化技术,检测３０例大肠腺瘤、１０例腺瘤恶变、５３例大肠腺癌和３０例正常大肠粘膜组织中ＨＰＶ１６、１８Ｅ６,Ｐ＾５３蛋白并分析其相互关系。结果腺瘤、腺瘤恶变和腺癌组中Ｅ６,Ｐ＾５３的阳性表达分别为３６．７％（１１３０）、３３．３％、（１０／３０）,６０．０％（６／１０）、６０．０％（６／１０）和５４．