葡萄籽原花青素下调miR-27a 表达抑制胰腺癌细胞生长

目的：探讨葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins extract,GSPE)抑制胰腺癌细胞生长的作用及其可 能机制。方法：体外培养人胰腺癌AsPC-1细胞,分别采用M ,Annexin V-FITC/PI双染,Transwell 迁移实验等方法检 测GSPE对AsPC-1细胞的增殖抑制、诱导凋亡及抑制细胞迁移的作用;miRNA real-time RT-PCR和Western印迹检测GSPE 对AsPC-1细胞miR-27a及其下游基因FOXO1表达的影响。转染miR-27a抑制剂,检测GSPE通过下调miR-27a调控AsPC-1 细胞生长、迁移的作用。结果：不同浓度(25,50,75,100 g/mL)GSPE对AsPC-1细胞的增殖抑制率分别为8.36%, 17.36%,50.42%和60.73%,GSPE≥50 g/mL时,增殖抑制率均显著高于对照组(P<0.05)。对照组及25,50,75 g/mL GSPE组的细胞早期凋亡率依次分别为2.5%,20.0%,42.3%,64.3%。75 g/mL GSPE组的细胞迁移率低于对照组,细胞 内miR-27a的表达亦显著低于对照组(P<0.01)。与对照组相比,miR-27a抑制剂组、GSPE组、miR-27a抑制剂+GSPE组的 细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.01),细胞迁移能力均显著降低(P<0.01),FOXO1蛋白表达增加;且共同处理组上述 作用最明显,高于两者单独处理组。结论：GSPE可能通过下调miR-27a表达来抑制胰腺癌AsPC-1细胞生长和迁移。     

Let-7d表达质粒的构建及其对卵巢癌细胞高迁移率A2蛋白及ras蛋白表达的抑制作用

目的构建let-7d真核表达载体,研究let-7d对卵巢癌细胞生物学行为及蛋白表达的影响。方法根据let-7d序列设计合成
microRNA片段,定向克隆到pcDNATM6.2GW/EmGFPmiR真核表达载体上,运用基因转染技术将其导入卵巢癌IGROV1细胞
中,使let-7d基因过表达,以实时荧光定量PCR验证let-7d及高迁移率A2（HMGA2）基因的表达,并用Western blotting检测相关
蛋白HMGA2的差异表达。以MTT绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡率,分析let-7d对IGROV1细胞增殖生长的影
响。结果成功构建针对靶向let-7d的表达质粒,将表达质粒转染人卵巢癌IGROV1细胞后,明显下调HMGA2的表达水平,而
下调ras蛋白的作用较弱,没有前者明显。细胞表型研究显示,抑制HMGA2表达可能改变该细胞的恶性表型,表现在细胞增殖
能力明显下降,自发凋亡率明显增加等。结论Let-7d通过对HMGA2的调控,在改变卵巢癌IGROV1细胞恶性表型方面可能
起重要作用。
     

小干扰RNA沉默OCT4 基因表达对胰腺癌细胞株PANC1增殖与凋亡的影响

摘要：目的运用RNA干扰(RNA inteference,RNAi)技术阻断胰腺癌细胞株PANC1中OCT4基因表达,并研究该基因沉默
后对细胞增殖与凋亡的影响。方法利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000 将化学合成的人Octamer binding factor 4
（OCT4）的小干扰RNA转染入胰腺癌细胞株PANC1 中。RT-PCR法测定胰腺癌细胞内OCT4 mRNA的表达。Western
Blot测定OCT4、PARP。CCK8法测定细胞生长曲线观察细胞增殖的抑制情况。流式细胞仪测定细胞凋亡率的变化。结
果化学合成的人OCT4siRNA能有效地抑制PANC1细胞中OCT4的表达(P<0.05)。OCT4 siRNA组中细胞增殖减慢,凋
亡率较对照组明显增加(P<0.05)。干扰OCT4能够激活PARP的表达。结论体外实验初步证明OCT4基因在胰腺癌细
胞株增殖分化与凋亡方面扮演重要角色。通过沉默其表达可抑制胰腺癌细胞株PANC1增殖并诱导其凋亡。     

IPI-504通过LINC00312/let-7b-5p/EBF1轴抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移

目的 探讨IPI-504诱导的LINC00312对胰腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的抑制作用,并阐明其作用机制。方法通过生物信息学分析预测let-7b-5p与LINC00312、EBF1 m RNA的潜在结合位点,应用双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系。将PANC-1细胞分为对照组、IPI-504组、IPI-504+敲减对照组、IPI-504+敲减LINC00312组、IPI-504+NC mimics组、IPI-504+let-7b-5p mimics组和IPI-504+敲减EBF1组,实时荧光定量PCR检测细胞LINC00312和let-7b-5p的表达,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell检测细胞迁移能力,Western blotting检测细胞EBF1蛋白表达。结果 let-7b-5p与LINC00312、EBF1 mRNA结合,敲减LINC00312、转染let-7b-5p模拟物和敲减EBF1均降低经IPI-504处理的PANC-1细胞中EBF1蛋白表达,促进细胞增殖和迁移。结论IPI-504上调胰腺癌细胞LINC00312表达,LINC00312通过海绵化l...     

特异siRNA沉默Slug基因抑制体外胰腺癌AsPC-1细胞生长的实验研究

目的：研究Slug基因沉默对胰腺癌AsPC-1细胞增殖、凋亡的影响。方法：构建靶向抑制Slug的siRNA表达载体,瞬时转染AsPC-1细胞。采用RT—PCR和Western blot法检测细胞Slug蛋白,MTT检测细胞增殖,Annexin V-FITC／PI了解细胞凋亡的变化。结果：成功构建了pGenesil-1-Slug-siRNA（pSlug-siRNA）和pCenesil-1-Neg-siRNA（pNeg-siRNA）表达质粒。pSlug-siRNA瞬时转染AsPC-1细胞72h后,细胞S1ug表达及生长受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加。结论：Slug-siRNA抑制Slug表达,促进As-PC-1细胞凋亡并抑制细胞的增殖。     

LINC00665通过let-7i/HMGA1促进肝癌细胞增殖与侵袭的机制研究

目的 探讨LINC00665通过let-7i/HMGA1对肝癌细胞增殖与侵袭能力的影响。方法 通过qRT-PCR分析LINC00665在肝癌组织中的表达情况。选择人肝癌细胞Hep3B和Huh7细胞，分别将其分为siRNA-NC组、siRNA-LINC00665组、let-7i mimics-NC组、let-7i mimics组进行转染；采用qRT-PCR和Western blot检测各组的HMGA1 mRNA和蛋白水平；CCK8法检测各组细胞的增殖活力；划痕实验检测各组细胞的划痕愈合率；Transwell实验检测各组细胞的侵袭数量。结果 LINC00665在肝癌组织中的表达量显著高于正常组织。hep3B和Huh7细胞转染48 h后，与si-NC组相比，si-LINC00665组细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降，HMGA1的mRNA和蛋白水平下降，let-7i的表达水平升高；与let-7i mimics-NC组相比，let-7i mimics组细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降，HMGA1的mRNA和蛋白水平下降。结论 LINC00665通过let-7i/HMGA1途径，在肝癌进展中调控肿瘤增...     

神经生长因子对不同胰腺癌细胞的刺激作用及其与细胞Trk-A表达的关系

摘要：目的研究不同胰腺癌细胞株对神经生长因子（NGF）刺激的反应性,以及各细胞株中Trk-A的表达情况,探讨NGF对胰腺
癌细胞株作用的分子机制。方法选取MIA-PaCa-2、PANC-1、SW-1990、AsPC-1、BxPC-3等5种不同转移性能及分化程度的胰
腺癌细胞株,给予外源性NGF刺激,运用MTT方法观察各种细胞株的增殖情况;通过Matrigel实验观察NGF对细胞侵袭性的影
响。运用PCR及Western blotting检测各种细胞株中Trk-A的表达情况,并观察NGF刺激作用与细胞TrK-A表达之间的关系。
结果用含有不同浓度NGF的培养液（0、4、20、100、500 ng/ml）对5种细胞进行培养及MTT检测,发现NGF浓度为100 ng/ml对
细胞的刺激作用最强。选用含100 ng/ml NGF的培养液对各组胰腺癌细胞进行培养及MTT检测,结果显示NGF对PANC-1细
胞的刺激作用最大,增殖最快,对AsPC-1的刺激作用最小。Matrigel实验显示NGF可明显增加PANC-1及MIA-PaCa-2细胞的
侵袭能力,对AsPC-1细胞影响最小。TrK-A抑制剂CEP701可抑制NGF对细胞侵袭的刺激功能。对细胞中TrK-A基因表达及
蛋白水平检测显示,PANC-1细胞Trk-A水平最高,AsPC-1细胞水平最低。细胞内TrK-A表达水平与NGF对细胞增殖及侵袭的
影响成正相关。结论外源性NGF促胰腺癌细胞增殖与侵袭作用和细胞中Trk-A基因及蛋白表达水平一致,说明NGF对胰腺
癌的作用机制可能是通过与Trk-A蛋白结合而促进胰腺癌细胞的增殖及转移。
     

miR-92b 对人胃癌细胞SGC7901迁移、粘附和侵袭的影响

目的探讨miR-92b对胃癌细胞迁移、粘附和侵袭能力的影响及其相关的分子机制。方法在人胃癌SGC-7901细胞中瞬
时转染miR-92b inhibitor和miR-92b mimics后,经划痕实验、细胞迁移实验、基质胶粘附实验和Transwell侵袭实验观察对细胞
转移的影响;Western blot 检测E-Cadherin、Vimentin、Akt 和p-Akt 蛋白的表达水平。结果SGC-7901 细胞转染miR-92b
inhibitors后,迁移、粘附和侵袭的细胞数量减少（P<0.05）;Western blot结果显示E-Cadherin表达升高,Vimentin表达降低,Akt
和p-Akt的表达升高。转染miR-92b mimics后,迁移、粘附和侵袭的细胞数量增多（P<0.05）;E-Cadherin表达降低,Vimentin表
达升高,Akt和p-Akt表达降低。结论miR-92b介导SGC7901细胞发生上皮-间质转化,促进肿瘤细胞的粘附、迁移和侵袭,可能
通过非PI3K/Akt途径促进肿瘤细胞的转移。
     

Sox2 下游调控蛋白的筛选及其对大肠癌细胞增殖、迁移的影响

目的分析大肠癌细胞转录因子Sox2对大肠癌细胞增殖及迁移的影响。方法应用SDS-PAGE蛋白电泳,结合考马斯亮
蓝及镀胺银染色方法,筛选差异蛋白。质谱分析筛选Sox2下游调控蛋白,应用定量PCR（QPCR）及Western blotting验证和鉴定
下游调控蛋白。Cell Counting Kit-8（CCK8）观察Sox2对大肠癌细胞增殖的影响,Transwell实验观察Sox2对迁移能力的影响。
结果应用蛋白组学技术成功筛选出Sox2下调蛋白S3a、上调蛋白ENO1、Gama-actin。QPCR和Western blotting显示,Sox2过
表达后,大肠癌细胞S3a表达减少（P<0.005）,ENO1表达增加（P<0.05）,Gama-actin表达无明显差异,细胞增殖及迁移能力提高
（P<0.05）;Sox2干扰后,大肠癌细胞S3a表达增加（P<0.05）,ENO1表达减少（P<0.001）,Gama-actin表达无明显差异,细胞增殖
及迁移能力下降（P<0.05）。结论Sox2负向调控S3a的表达,正向调控ENO1的表达,促进大肠癌细胞增殖及迁移。
     

线粒体DNA缺失对人淋巴瘤Namalwa 细胞生长和侵袭能力的影响

目的探讨线粒体DNA（mtDNA）缺失对人淋巴瘤Namalwa 细胞生长和迁移能力的影响。方法采用溴化乙锭处理
Namalwa细胞获得mtDNA缺失的ρ0-Namalwa细胞;营养缺陷法、PCR扩增线粒体DNA片段、Western bloting检测COXII蛋白
表达等方法鉴定ρ0-Namalwa细胞;MTT方法及细胞周期测定细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;流式细胞
术检测活性氧（ROS）及细胞内钙离子水平。结果ρ0-Namalwa细胞在选择性培养基中正常生长,而在非选择性培养基中逐渐
死亡;ρ0-Namalwa细胞未扩增出mtDNA片段以及未表达COXII蛋白;与Namalwa细胞相比,ρ0-Namalwa的细胞增殖率、迁移及
侵袭能力、ROS水平及细胞内Ca2+浓度明显降低,细胞阻滞于G0/G1期。结论ρ0-Namalwa细胞与亲本Namalwa细胞相比,生长
及迁移能力减弱,可能与细胞内ROS产生减少及细胞内Ca2+浓度降低有关。
     

5F对胰腺癌细胞生长的影响及机制

目的:观察研究半边旗中二萜类化合物5F(1la-羟基-15-氧-16-烯-ent贝壳杉烷-19酸)诱导人胰腺癌细胞株AsPC-1凋亡的效果及其机制。方法:用脂质体转染法将PUMA/siRNA导入AsPC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆。将转染载体的AsPC-1阳性克隆细胞和未转染载体的AsPC-1细胞分别暴露于浓度8.875,37.5,142μmol/L浓度的5F中作用72h。RT-PCR检测不同组细胞经5F作用24h后的PUMA表达;MTT检测细胞生长抑制,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,Ho-echst33258和PI双染色染色了解细胞凋亡的变化。结果:5F促进AsPC-1细胞凋亡,抑制细胞生长,并有明显的剂量依赖性,在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上调;当PUMA表达抑制后,受5F作用的细胞出现PUMA表达的降低,同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞的明显增殖。结论:5F促进体外AsPC-1细胞凋亡,并抑制其生长,其诱导凋亡与上调PUMA有关。     

多发性骨髓瘤细胞中SWI/SNF核心亚单位SNF5调控的基因表达谱分析

目的研究染色质重塑复合物SWI/SNF核心亚单位SNF5对骨髓瘤细胞系基因表达谱的调控作用。方法在KM3细胞中
构建四环素诱导的表达SNF5 siRNA的稳定细胞系, 通过四环素诱导敲低SNF5,检测SNF5敲低前后的基因表达谱,对差异表
达基因进行生物信息学分析,并对部分基因进行验证。结果SNF5敲低抑制KM3细胞生长,基因表达谱分析发现545个表达差
异基因,其中214个上调,331个下调。结论SNF5是多发性骨髓瘤细胞生长所需的,它通过影响与细胞生长及凋亡相关基因的
表达来发挥作用。
     

RNA干扰IgG表达对人前列腺癌细胞株PC3放射敏感性的影响

目的探讨RNA干扰沉默IgG 表达对人前列腺癌PC3 细胞株放射敏感性的影响。方法将IgG FC 段受体RNA质粒
（FCGR1AshRNA）和阴性对照质粒（NCshRNA）转染人前列腺癌PC3细胞,Q-PCR和Western-blot检测IgG表达。以60Co γ射线
0、2、4、6、8、10 Gy分别照射空白对照组、NCshRNA组、FCGR1AshRNA组细胞;照射48 h后,MTS法检测细胞增殖状态;照射
12、24、48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率。重点探讨6Gy射线照射后不同时间的敏感性、增值率、抑制率与凋亡率。结果质
粒转染前列腺癌PC3细胞后,FCGR1AshRNA与NCshRNA组和空白对照组相比,IgG表达水平明显下降,细胞增殖受抑制（P<
0.05）。不同放射剂量下48 h后及6Gy射线照射后的不同时间段,FCGR1AshRNA组的增值率减低,凋亡率升高（P<0.05）。结
论RNA干扰抑制IgG表达能提高PC3细胞对放射线的敏感性,IgG基因可能是联合放疗治疗前列腺癌的理想靶点。
     

腺病毒介导靶向NF-κB基因的shRNA对体外食蟹猴子宫内膜细胞增殖活性的影响

目的合成高特异性靶向NF-κB基因的shRNA腺病毒载体,观察其对体外培养的食蟹猴子宫内膜细胞的增殖活动是否具
有直接的抑制效应。方法设计携带有NF-κB-p65基因及空载基因的shRNA腺病毒载体,体外培养食蟹猴子宫内膜细胞,分成
实验组及对照组,实验组转染携带NF-κB-p65 shRNA的腺病毒,对照组转染携带空载基因的腺病毒,共培养后观察有关细胞增
殖活性如凋亡蛋白及细胞周期的改变情况。结果腺病毒载体PCR和测序结果与预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为
1.58×1011 U/ml。NF-κB-p65-shRNA腺病毒感染食蟹猴子宫内膜细胞后,实验组子宫内膜细胞凋亡蛋白的表达水平明显高于阴
性对照组（P<0.05）;实验组凋亡细胞较对照组明显增多,进入细胞分裂期细胞数明显少于对照组（P<0.05）。结论携带NF-κB
基因的腺病毒体外感染食蟹猴子宫内膜细胞后可加速子宫内膜细胞的凋亡,并抑制子宫内膜细胞的增殖,为后期该基因在食蟹
猴子宫内膜异位症模型上的研究提供理论基础。
     

miR-223在肾透明细胞癌中的表达与功能

目的探讨miR-223在肾透明细胞癌中的表达与功能。方法用real-time RT-PCR法检测miR-223在肾透明细胞癌组织和
瘤旁组织中的表达以及细胞系中miR-223的表达量。用transwell迁移实验和划痕实验测转染miR-223模拟物的786-O细胞的
迁徙能力,MTS法测其增殖情况,流失细胞仪分析其细胞周期。并用SPSS统计软件分析其临床数据与miR-223 表达量的关
系。结果miR-223在肾透明细胞癌组织和细胞系中的表达量高于瘤旁组织和正常肾小管上皮细胞（P=0.0003）,其miR-223的
表达量与肿瘤的大小有关,肿瘤直径大于4 cm的肿瘤miR-223 表达量升高（P=0,0028）。转染miR-223 模拟物的786-O 细胞
transwell细胞迁移数比对照组多（P<0.0001）,划痕实验显示实验组愈合能力比对照组快,增殖实验表明实验组增殖速度快于对
照组（P=0.006）,细胞周期显示实验组细胞G1期减少,S期细胞增加,提示处于增殖的细胞数多（P<0.05）。结论miR-223可能
起着促进肾透明细胞癌发生发展的作用,可能是抗肾透明细胞癌治疗的新的抗癌靶标。
     

miR-375逆转MCF-7/Adr耐药性的功能研究

目的 研究乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/Adr高表达miR-375后对阿霉素敏感性的影响.方法 将miR-375模拟物(miR-375 mimics)和mimics negative control(NC)分别转染MCF-7/Adr;阿霉素处理后用WST-1法检测耐阿霉素细胞的增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;细胞划痕实验、transwell迁移、侵袭实验检测MCF-7/Adr细胞的迁移和侵袭能力.结果 在MCF-7/Adr细胞中高表达miR-375可以提高其对阿霉素的敏感性并促进其凋亡;高表达miR-375的MCF-7/Adr细胞周期阻滞在G1期;转染miR-375后对MCF-7/Adr细胞的迁移、侵袭能力有抑制作用.结论 MCF-7/Adr细胞中高表达miR-375可以增加其对阿霉素的敏感性.     

顺铂上调STAT1蛋白抑制宫颈癌细胞增殖

目的研究Stat1蛋白对宫颈癌Hela细胞生长、增殖及顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法采用蛋白印迹法（Western
blot）检测不同浓度DDP处理Hela细胞后Stat1蛋白表达差异;转染Stat1-siRNA后,通过Western blot验证干扰效果;应用四甲
基偶氮唑蓝（MTT）法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）观察转染Stat1-siRNA后Hela细胞对DDP敏感性变化,并检测Stat1相关细
胞因子c-Myc的表达变化。结果随着DDP浓度的增加,Hela细胞中Stat1蛋白的表达量逐渐增加,DDP浓度为5 mg/L时,Stat1
蛋白表达上调1.5倍,DDP浓度为10 mg/L时,Stat1蛋白表达上调近2倍;特异性Stat1-siRNA 使Hela细胞中Stat1的表达下调
70%,促进细胞生长和增殖;Stat1-siRNA可以降低DDP对Hela细胞生长和增殖的抑制效应,削弱DDP对c-Myc的抑制作用。
结论Hela细胞中c-Myc是STAT1发挥抑癌作用的靶点基因之一;STAT1/c-Myc通路介导了DDP抑制Hela细胞生长、增殖的作
用;STAT1可增强Hela细胞对DDP的敏感性。
     

不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨不同浓度腐胺对人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblasts,HSF）增殖、迁移、凋亡的影响。方法将体外HSF
分为腐胺组和对照组,以含腐胺浓度分别为0.5、1、5、10、50、100、500、1000 μg/ml完全培养基培养细胞设为腐胺组,不添加腐胺
设为对照组。经对照组及不同浓度腐胺组处理的HSF培养24 h后,再以四唑化合物电子耦联显色法（MTS法）测定细胞增殖能
力（用吸光度值表示）,Transwell迁移实验测定细胞的迁移能力,流式细胞技术（Flow Cytometry, FCM）Annexin V/PI标记法测
定细胞凋亡率。结果（1）细胞增殖能力（MTS）测定结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml 腐胺组HSF的吸光度值较对照组升高（P<
0.01）,并且1 μg/ml时达峰值（0.754±0.024）;500、1000 μg/ml腐胺组HSF吸光度值较对照组降低（P<0.01）;50、100 μg/ml腐胺
组HSF的吸光度值与对照组无明显差异（P>0.05）;（2）Transwell迁移实验结果显示,1 μg/ml腐胺组穿过微孔膜的细胞数目较对
照组显著增加（P<0.01）,且达到峰值309±21;50 μg/ml及以上浓度腐胺组HSF穿过微孔膜的数目较对照组减少（P<0.05）;0.5、
5、10 μg/ml腐胺组HSF穿过微孔膜的细胞数目与对照组比较无明显差异（P>0.05）;（3）流式细胞凋亡结果显示,0.5、1、5、10 μg/ml
腐胺组HSF凋亡率较对照组显著降低（P<0.05）,而且在1 μg/ml时细胞凋亡率达最低值（11.10±0.79）%;100 μg/ml及以上浓度
腐胺组细胞凋亡率较对照组显著升高（P<0.01）,而且随着浓度增加凋亡率逐渐升高;50 μg/ml腐胺组与对照组比较细胞凋亡率
无明显差异（P>0.05）。结论微量腐胺可维持细胞正常的迁移能力,显著提高HSF的细胞增殖能力,而较高浓度的腐胺能显著
抑制HSF迁移与增殖,并诱导细胞发生凋亡,提示不同浓度的腐胺会对创面愈合起到完全不同的作用。
     

Anti-miR-145促进人气道平滑肌细胞增殖及骨桥蛋白合成

目的观察miR-145抑制剂（Anti-miR-145）对人支气管平滑肌细胞（HASMCs）的影响,探讨其在哮喘气道重塑中的作用。
方法分为对照组和实验组,实验组加入不同浓度的Anti-miR-145（10~100 nmol/L）。CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测
细胞凋亡,Western blotting 检测骨桥蛋白合成。结果与对照组比较,10 nmol/L和50 nmol/L Anti-miR-145显著促进HASMCs
增殖及骨桥蛋白合成（P<0.05或P<0.01）,50 nmol/L Anti-miR-145 显著抑制HASMCs 凋亡（P<0.01）。结论Anti-miR-145通过
刺激HASMCs增殖和骨桥蛋白合成,抑制其凋亡,可能在哮喘气道重塑中发挥重要作用。