抗莱氏支原体单克隆抗体的研制

通过细胞融合技术，筛选出ＭＡＬ－１和ＭＡＬ－２两株抗莱氏支原体单克隆抗体。通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法测得单抗相对应的抗原分子量均为６７．４６ｋｕ。用音接免疫荧光法检测，单抗与细胞培养中另外３种常见污染的支原体和呼吸道肺炎支原体无交叉反应。     

三株抗人B淋巴细胞表面抗原单克隆抗体的研制及初步鉴定

用慢性Ｂ淋巴细胞白血病患者外周血白血病细胞免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术产生了三种单克隆抗体，分别命名为ＳＭＵ＿（１０）、ＳＭＵ＿（１１）ＳＭＵ＿（１２）。初步鉴定的结果表明，（１）ＳＭＵ＿（１０）、ＳＭＵ＿（１１）是抗成熟阶段Ｂ细胞及浆细胞的单抗，二者的特性及反应谱相类似；（２）ＳＭＵ＿（１２）是一非系限性单抗，与成熟Ｔ细胞、分化后期的Ｂ细胞及部分粒单细胞反应；（３）ＳＭＵ＿（１０）、ＳＭＵ＿（１１）、ＳＭＵ＿（１２）可较好地判明白血病细胞的来源及Ｂ细胞的分化阶段，在白血病的免疫学分型中具有实用价值；（４）三株单抗是新的抗Ｂ细胞特异性单抗。     

单克隆抗体对LAK细胞抗胰腺癌作用的影响

本文介绍了淋巴因子活化的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞），在ＹＰＣ３抗人胰腺癌单克隆抗体（ＹＰＣ３ｍＡｂ）的介导下，对体外、体内人胰腺癌细胞生长的影响。体外４ｈ＾５１Ｃｒ释放试验表明，特异性识别Ｃａｐａｎ－２人细胞的杀伤作用，这种作用随ｍＡｂ的浓度增加而加强，５０μｇ／ｍｌ的ＹＰＣ３ｍＡｂ提高ＬＡＫ细胞杀伤率约６０％。对照ｍＡｂ无此作用。裸鼠体内实验发现，ＹＰＣ３ｍＡｂ与ＬＡＫ细胞联合应用能完全阻止Ｃａｐａ     

抗人肝癌细胞单克隆抗体的研制及鉴定

利用杂交瘤技术,以人肝癌细胞株HC_(108)免疫Balb/c小鼠,4周后取其脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经细胞抗原ELISA和间接酶桥法筛选,获得一株能稳定分泌抗人肝癌单克隆抗体的杂交瘤株,其染色体众数为96～110个,DNA指数为3.0。此单抗为IgM型,轻链为k链。免疫组化证实此单抗与2例胚胎肝脏组织、胚胎结肠组织呈现较弱的阳性反应;除与3例宫颈癌细胞有很弱的着色反应外,与5例肝癌组织和肝癌细胞株均呈明确的阳性反应,而与其他肿瘤细胞,胚胎组织,正常成人肝脏、心脏、肾脏、肺脏、结肠、胰腺等均未见反应。琼脂糖免疫双扩散和单抗吸收试验证实此肿瘤抗原与甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、铁蛋白(Ferritin)、癌糖蛋白(CA_(19-9))无免疫相关性。免疫酶电镜染色显示此肝癌相关抗原定位于细胞膜,Western Blot显示其分子量为38kD。是一株特异性良好,阳性反应率较高的抗人肝癌单克隆抗体。     

抗登革病毒Ⅰ～Ⅳ型特异性单克隆抗体的研制

用登革病毒免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞，经ＰＥＧ融合处理，共获得９０株分泌登革病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。按照单抗质量标准，对杂交瘤细胞进行了严格的鉴定，筛选出１９株具有型特异的细胞株，再从中选出４个血清型的型特异的单抗组成诊断盒，可用于登革病毒的准确的鉴定和分型。     

抗胰腺癌单克隆抗体的研究

用人新鲜胰腺癌组织免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Agl4融合,获得了分泌抗人胰腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本文重点报道以ABC免疫组织化学法检查YPC1单克隆抗体与人正常组织和肿瘤组织的反应性。结果表明YPC1单克隆抗体与16例被检测的胰腺癌组织发生反应。其中9例(56.3％)呈强阳性反应,与23种正常组织中的10种(43.5％)以及19种非胰腺肿瘤中的8种(42.1％)有不同程度的交叉反应,但多数反应较弱。本研究提示以新鲜人体肿瘤组织作为免疫原制备单克隆抗体是简便可行的,YPC1单克隆抗体可能有助于胰腺癌的诊断和治疗。     

抗人PDCD10单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备鼠抗人程序性细胞死亡分子10(programmed cell death 10, PDCD10)的单克隆抗体,探讨PDCD10蛋白的结构和功能.方法:利用重组PDCD10蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合, 通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗PDCD10蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Western blot和免疫荧光实验等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了3株稳定分泌抗PDCD10蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为5G1, 4F7和3H5.3株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类分别为IgG1(4F7和5G1)和IgG2b(3H5).ELISA检测的单克隆抗体腹水效价可达1:10⁷.3株单克隆抗体与重组PDCD10蛋白有较强的特异性反应,而与大肠杆菌细胞裂解液以及谷胱苷肽-S转移酶(glutathione S-transferase,GST)没有交叉反应.同时,5G1单克隆抗体也能特异性地结合真核细胞内源性和超表达的PDCD10蛋白,免疫荧光竞争结合实验以及Western blot的结果证明3株PDCD10的单克隆抗体能够识别不同的抗原表位,内源性以及超表达的PDCD10蛋白主要定位在细胞核.结论:获得了效价高、特异性好的PDCD10蛋白的单克隆抗体,为PDCD10的生物学功能研究奠定了基础.     

抗结核杆菌单克隆抗体的研制及初步鉴定

运用单克隆抗体技术 ,以结核杆菌H37Rv的培养滤液免疫Balb/c小鼠 ,以H37Rv及BCG抗原同时筛选杂交瘤细胞 ,得到了 7株稳定分泌的抗结核杆菌的杂交瘤细胞株 ,并对它们的特性作了初步鉴定。在 7株单克隆抗体杂交瘤中 ,5株 (2C5、2C11、2D1、2E11及 3D3)为IgG1亚类 ,另两株 (3C3及 5D8)为IgM。腹水经ELISA检测 ,效价可达 10 -3 ～ 10 -4 ,同时应用ELISA及免疫印迹试验分析了 7株单抗的种间反应性 ,结果 7株单抗与其它结核杆菌有不同程度的交叉反应 ,其中 1株单抗 (5D8)与大肠杆菌超声抗原也有明显交叉反应 ,提示结核抗原组分十分复杂 ,不仅分支杆菌种间有共同抗原决定簇 ,甚至与其它种属也有相同或相似的抗原决定簇。将这 7株单抗用于结核血清学诊断的价值有待进一步评估     

抗人IgM单克隆抗体的制备及其特征研究

以人IgM作为抗原免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤技术获得5株分泌抗人IgM单抗的杂交瘤细胞株.通过酶联免疫吸附试验、免疫双向扩散试验证明:该组单抗仅与人IgM起反应,而不与其他各类免疫球蛋白反应。间接免疫荧光试验证明:该组单抗测得不同人群外周血淋巴细胞阳性数与用抗B细胞单抗和直接免疫荧光法测得的结果接近.免疫转印试验证明抗体作用的分子量为50～70kd(dalten法定单位为u,换算系数0.9921,下同).提示为IgM.本文还对单抗应用价值进行了讨论。     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体的研究

以本研究室建立的恶性胶质瘤细胞系SHG-44为抗原,通过杂交瘤技术建立了两株恒定地分泌抗胶质瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞株SZ-38、SZ-39。以该两株单克隆抗体为生物探针,在分子生物学水平研究了两种新的胶质瘤抗原,它们分别为胶质瘤细胞表面分子量47 000及180 000的糖蛋白。通过SZ-39对脑瘤内的放射免疫定位研究,确认了该单克隆抗体应用于临床肿瘤定位诊断和导向治疗的可能性。     

尿激酶单克隆抗体制备,性质和应用

用高分子量尿激酶(HMW UK)免疫BALB/C小鼠,获得21株UK单抗(MoAb)分泌细胞株,并用部分株的培养上清液、腹水或纯化的抗体研究UK MoAb的性质,包括免疫球蛋白分类和亚类、抗体滴度及抗原表位等。有三株MoAb能抑制UK的纤溶活性。通过研究不同MoAb同时与UK抗原作用时其反应强度变化的特点。并确定MoAb在UK的重链或轻链的表位以后,选用部分MoAb建立UK ELISA和UK蛋白质印迹与酶联免疫染色分析法,用以分析比较两种不同UK注射剂和UK尿抽提物的UK抗原含量、比活性,以及UK分子量分布的状况。     

轮状病毒单克隆抗体的研究和鉴定

运用杂交瘤技术,制备出7株分泌抗人轮状病毒短型S_2株单克隆抗体的杂交瘤,其中6株分泌IgG_(2a),1株分泌IgG_(2b)抗体。7株杂交瘤培养上清的免疫荧光抗体(IFA)滴度为1:32～256,腹水IFA滴度为1:8000～25600。双夹心ELISA腹水抗体滴度达10~(-4)～10~(-6)。7株McAb均与HSV、CMV、RSV、ADV等其它常见病毒无交叉反应。7株McAb均能与HRV长型Wa株反应,滴度为10~(-3)～10~(-6)。将其中二株或数株McAb混合后用ELISA检测其相应的OD值较每一单株为高,但相加指数(AI)值均在10%左右。结果表明,7株McAb均属RV群特异性抗体,但各自作用的抗原决定簇可能稍有差异。     

伏马菌素B1单抗制备及其ELISA方法的研究

目的建立应用单克隆抗体的伏马菌素B(1FB1)的间接竞争酶联免疫吸附检测方法。方法利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗FB1单克隆抗体,建立FB1间接竞争酶联免疫吸附方法。结果制备了稳定分泌抗FB1毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的抗体为IgG1亚类,亲和常数为6.72×109L/mol。该方法最低检出浓度为5μg/L,校正曲线的线性范围50～500μg/L,线性方程Y=-0.582X 1.793(r=0.99,P<0.05)。回收率在71.89%～112.95%之间,平均回收率为100.23%。实验室内的变异系数和实验室间的变异系数均小于20%。结论分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株稳定,检测方法快速、灵敏、特异。     

抗骨肉瘤单克隆抗体在骨肉瘤组织中的免疫组化定位研究

本文报道了用本室建立的2株抗人体骨肉瘤细胞株所分泌的单克隆抗体,采用ABC酶标法,对24种肿瘤组织和正常人体组织进行了免疫组化定位研究,发现OS-McAb_1和OS-McAb_2除对部分骨源性恶性肿瘤有阳性反应外,对其他部位的肿瘤均显示阴性反应;与所标记的正常成人及胎儿相应组织无交叉反应。提示OS-McAb对骨肉瘤有较高的特异性,在骨源性恶性肿瘤的免疫诊断方面有一定应用价值。     

多形性HLAMcAbs与常规同种HLA分型血清的比较研究

本文用HLA单克隆抗体(HLAMcAbs)与常规同种HLA分型血清进行了比较研究。结果表明HLAMcAbs效价高(1∶1000000),特异性强(γ>0.93),在一定稀释度下使用可替代常规同种HLA抗血清,用于HLA分型及组织配型。     

Study and Application of Monoclonal Antibodies against Virus of Haemorrhagic Fever with Renal Syndrome

This paper summarizes the study and application of monoclonal antibodies (McAbs)against haemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) virus in our department over the past sever-al years. The following six points are discussed: (1) establishment and characterization of thehybridoma cell lines secreting McAbs against HFRS virus and hemagglutinin of the virus: (2) theantigenic analysis of HFRS viruses in China by McAbs: (3) purification and application of theMcAbs: (4) purification and characterization of HFRS virus 50K stnactural protein by McAba-affini-ty chromatography and the McAbs possessing different characteristics: (5) detection of HFRS virusantigen in peripheral blood lymphocytes from HFRS patients by the McAb-IFAT; and (6)development of McAb-ELISA indirect sandwich methods, and detection of HFRS virus antigen andIgM, IgG and/or HI antibodies in human and animals. The results of the studies show that theMcAbs can be used for early diagnosis, epidemiological investigation, preparation of vaccine andimmunotherapy of HFRS.