p38丝裂素活化蛋白激酶与细胞外调节蛋白激酶在重症胰腺炎炎症反应和免疫抑制中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶（p38 mitogen—activated protein kinase,p38MAPK）与细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）在重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）炎症反应和免疫抑制中的作用。方法75只Wistar大鼠随机分为对照组、SAP组、ERK抑制组（PD组）、p38MAPK抑制组（SB组）、ERK＋P38MAPK联合抑制组（PD＋SB组）各15只。对照组仅作开腹缝合处理,其余4组大鼠建立大鼠SAP模型,其中PD组大鼠术前30min尾静脉注射PD98059,SB组大鼠尾静脉注射SB203580,PD＋SB组大鼠尾静脉注射PD98059与SB203580。术后6、12h观察5组腹腔积液量变化情况。检测5组血清肿瘤坏死因子-α水平,并计算大鼠肺组织湿／干比值。结果对照组腹腔积液量、肺组织湿／干比值及血清肿瘤坏死因子-α水平明显低于其他4组（P〈i0．05）,PD＋SB组低于SAP组、PD组和SB组（P〈0．05）,PD组和SB组低于SAP组（P〈0．05）。结论ERK、p38MAPK在SAP炎症反应和免疫抑制中发挥重要作用,抑制其活性可抑制SAP过度活化的炎症反应,改善细胞免疫功能低下状态。     

电磁场作用下大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化与增殖

目的研究15Hz 1mT的正弦波电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的细胞外信号调节激酶（ERK）和丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）p38的激活规律及相互作用特点,探讨ERK和p38 MAPK信号通路在电磁场促成骨效应中的作用。 方法选取第3代体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞,分为对照组、曝磁组、曝磁+PD98059组和曝磁+SB202190组四个大组。曝磁组细胞置于带有电磁发生器的培养箱中培养,曝磁+PD98059组和曝磁+SB202190组细胞分别加入ERK信号通路阻断剂PD98059和p38 MAPK信号通路阻断剂SB202190后再置入带有电磁发生器的培养箱中培养,对照组细胞正常培养。用免疫印迹（Western blot）法检测ERK和p38 MAPK的蛋白表达及磷酸化水平变化。按照细胞碱性磷酸酶（ALP）试剂盒说明书操作步骤对各组细胞ALP活性进行检测,其活性变化可间接反映细胞的分化成骨活性;用噻唑蓝比色法检测各组细胞的增殖活性变化。 结果①电磁场作用下,骨髓间充质干细胞内p38 MAPK信号通路可被快速激活,曝磁15min后出现p38磷酸化水平升高（P<0.05）;加用SB202190后,再行电磁场刺激,细胞内p38磷酸化水平仍然维持在较低水平,与曝磁组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。②与对照组比较,曝磁5d后细胞内ALP活性显著升高(P<0.05),SB202190可明显阻断该效应(P<0.05)。③与对照组比较,曝磁3d后骨髓间充质干细胞的增殖活性明显升高(P<0.05),SB202190不能阻断该效应(曝磁+SB202190组与曝磁组比较,P>0.05)。④SB202190阻断p38 MAPK信号通路并曝磁5min后,ERK MAPK磷酸化水平明显强化(P<0.05);PD98059阻断ERK MAPK信号通路并曝磁30min后,p38 MAPK磷酸化水平明显强化(P<0.05)。 结论ERK和p38 MAPK信号通路分别参与了电磁场对骨髓间充质干细胞增殖和分化成骨过程的调节,并在电磁场作用下两通路表现出串扰现象。     

骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化中电磁场激活ERK通路的作用

背景：研究表明电磁场可调节骨髓间充质干细胞的增殖和分化,但其具体机制尚不清楚。目的：从ERK信号途径探讨电磁场诱导大鼠骨髓间充质干细胞增殖与分化成骨的作用。方法：取第3代生长良好的大鼠骨髓间充质干细胞,暴磁组给予15Hz、1mT的正弦波电磁场刺激,PD98059＋暴磁组在电磁场刺激前给予20μmol/L ERK阻断剂PD98059,PD98059组仅给PD98059不进行电磁场刺激,对照组正常培养。电磁场刺激后,收集各组细胞,Western blot法检测ERK通路的活性,MTT法检测细胞增殖活性,碱性磷酸酶试剂盒检测细胞碱性磷酸酶活性。结果与结论：电磁场刺激后,细胞ERK1/2磷酸化水平、细胞的增殖活性、及碱性磷酸酶活性均明显升高（P〈0.01）;PD98059可明显抑制ERK1/2磷酸化水平及细胞增殖活性的升高（P〈0.01）,而在一定程度上提高细胞的碱性磷酸酶活性（P〈0.01）。说明电磁场刺激可通过激活骨髓间充质干细胞ERK信号通路,并且主要通过该途径促进骨髓间充质干细胞的增殖;而在脉冲电磁场促进骨髓间充质干细胞分化成骨的过程中,激活ERK信号通路所起的作用较小。     

小肠缺血-再灌注后磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶的表达特征及与干细胞定位的关系

目的：观察大鼠肠缺血－再灌注（I－R）后磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的表达特征及与干细胞定位的关系。方法：雄性Wistar大鼠48只，随机分为假手术组（C）、肠缺血组（I）和肠缺血-再灌注组（R）。C组仅分离肠系膜上动脉根部而不夹闭；I组用微血管夹夹闭肠系膜上动脉根部45分钟后即刻活杀；R组动物在缺血45分钟之后放松血管夹，分别于再灌注后2、6、12和24小时活杀。取血检测血浆二胺氧化酶（DAO）活性，取小肠组织进行形态学观察，用免疫组织化学方法研究磷酸化p38的表达特征。结果：与C组相比，I组和R组血浆DAO活性升高，R组动物的小肠黏膜表现为充血、水肿、炎细胞浸润及坏死糜烂，以再灌注后12小时最显著。磷酸化p38染色显示，C组和I组大鼠每个小肠隐窝仅有5－6个阳性细胞，主要在隐窝的下1／2，大部分表现为分布在胞浆中的棕色颗粒，与肠道干细胞及其初级子代细胞的位置一致。再灌注后2小时阳性细胞数量下降，在6小时隐窝底部的阳性细胞数量增多，主要分布在隐窝的中下1／3，在12小时达到高峰，为隐窝细胞总数的35．6％，在24小时明显下降接近正常。绒毛基质偶有阳性细胞，绒毛上皮无表达。结论：磷酸化p38在肠道的表达与干细胞及其初级子代细胞的分布非常接近，肠I－R使其表达增加，表明磷酸化p38与肠道干细胞之间存在密切的关系，有可能作为干细胞的标记物。     

促分裂原活化蛋白激酶信号阻断剂在TPO促进UT7细胞增殖和分化中的作用

目的探索促分裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinase,MAPK)信号阻断剂对巨核细胞生长分化因子(TPO)促进UT7细胞增殖和分化作用,阐明TPO对UT7细胞作用的机制。方法将EGFPpMSCV和MEK1pMSCV质粒转染UT7细胞;转染细胞与TPO共培养,Westernblot法检测UT7细胞MEK1(MAPK/Erkkinase1)磷酸化;观察转染突变(Ser222A)的MEK1和MAPK阻断剂PD98059对UT7细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测转染突变(Ser222A)的MEK1和MAPK阻断剂PD98059对UT7细胞表达CD41的影响。结果①重组逆转录病毒载体MEK1pMSCV和EGFPpMSCV转染UT7细胞,EGFP阳性率为60.73%。②TPO不同的作用时间(1h,3h),实验组磷酸化MEK1均低于对照组(P值均<0.05)。③MAPK阻断剂PD98059和外源突变MEK基因阻断了TPO对UT7细胞的增殖作用,DMSO对照组的细胞增殖率为98.58%,PD98059组的细胞增殖率为39.00%(P<0.05);转染EGFPpMSCV组细胞增殖率为102.12%,转染MEK1pMSCV组细胞增殖率为48.93%(P<0.05)。④MAPK阻断剂PD98059组UT7细胞CD41表达(10.27%)明显低于对照组(36.43%),转染MEK1pMSCV组UT7细胞CD41表达(24.03%)明显低于转染EGFPpMSCV组(40.16%)。结论TPO诱导UT7细胞MEK1磷酸化,TPO作用时间与UT7细胞MEK1的磷酸化有明显的关系,MAPK信号转导通路介导TPO促进UT7细胞     

肝脏缺血预处理过程中蛋白激酶C活性的变化

目的:观察在肝脏缺血预处理过程中蛋白激酶C的活性改变及细胞内信号转导机制。方法:实验于2004-03/2005-03在南方医科大学珠江医院中心实验室完成。实验分组:36只大鼠随机分成6组,每组6只。①假手术组。②缺血再灌注组。③缺血预处理组。④缺血再灌注 豆蔻酸佛波酰乙脂组。⑤缺血预处理 白屈菜季铵碱组。⑥缺血预处理 PD98059组。实验干预:①假手术组仅分离肝十二指肠韧带,不阻断肝门,不进行其他干预处理。②缺血再灌注组在第一肝门用小血管夹阻断尾状叶及左肝叶血流40min松开血管夹肝脏再灌注3h,再灌注开始后关腹。③缺血预处理组先行3个循环的缺血预处理,阻断第一肝门10min,开放再灌注10min为1个循环,随后操作同缺血再灌注组。④缺血再灌注 豆蔻酸佛波酰乙脂组:按4μg/kg共0.5mL蛋白激酶C激动剂豆蔻酸佛波酰乙脂溶液,经静脉通道缓慢推注,推注10min,推注后等待10min,余处理同缺血再灌注组。⑤缺血预处理 白屈菜季铵碱组:按5mg/kg共0.5mL蛋白激酶C抑制剂白屈菜季铵碱溶液,同样用10min经静脉通道缓慢推注,推注后等待10min,其余处理同缺血预处理组。⑥缺血预处理 PD98059组:按5mg/kg共0.5mL丝裂原激活的蛋白激酶抑制剂PD98058溶液,同上速度缓慢静脉推注,推注后等待10min,余处理同缺血预处理组。实验评估:①在ECHNICONRA-1000全自动生化分析仪上采用速率法检测血清谷草转氨酶和血清谷丙转氨酶活性。②按蛋白激酶C活性测定试剂盒操作步骤检测肝组织蛋白激酶C活力。③Westernblot免疫印迹法检测肝组织磷酸P44/42MAPKs活性。结果:36只大鼠均进入结果分析,中途无脱落和死亡。①血清谷草转氨酶和血清谷丙转氨酶活性:缺血预处理组低于缺血再灌注组(P<0.01)。缺血预处理 白屈菜季铵碱组、缺血预处理 PD98059组显著高于缺血预处理组(P<0.01)。缺血再灌注 豆蔻酸佛波酰乙脂组显著低于缺血再灌注组(P<0.01)。②蛋白激酶C活力:缺血预处理组高于缺血再灌注组[(1877.2±81.0),(713.1±37.0)pkat/g,P<0.01];缺血再灌注 豆蔻酸佛波酰乙脂组亦显著高于缺血再灌注组[(2758.4±454.3),(713.1±37.0)pkat/g,P<0.01];缺血预处理 白屈菜季铵碱组明显低于缺血预处理组[(567.9±46.2),(1877.2±81.0)pkat/g,P<0.01]。③磷酸P44/42MAPKs活性:与假手术组比较,其在缺血再灌注组的表达量轻度升高;缺血预处理组较缺血再灌注组升高显著;缺血预处理 白屈菜季铵碱组较缺血预处理组明显降低,缺血预处理 PD98059组表达量下降更为显著;缺血再灌注 豆蔻酸佛波酰乙脂组表达量较缺血再灌注组明显升高。结论:缺血预处理保护效应中,蛋白激酶C对P44/42MAPKs信号通路的激活是细胞保护效应的一个重要环节。     

电磁场激活细胞外信号调节激酶通络在骨髓间充质干细胞增殖与分化成骨中的作用

目的探讨电磁场作用于大鼠骨髓间充质干细胞对细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路的影响，并进一步研究电磁场诱导所致ERK信号通路变化在骨髓间充质干细胞增殖与分化成骨中的作用。 方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞，取第3代细胞，分为对照组、暴磁组、PD98059组和PD98059+暴磁组。采用Western blotting法检测ERK通路的活性变化，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组细胞的增殖活性，按照碱性磷酸酶（ALP）试剂盒说明书步骤检测各组细胞ALP活性。 结果①暴磁后5 min，ERK1/2磷酸化水平即明显高于对照组，1 h后仍处于较高水平（P<0.01）；PD98059作用可明显抑制ERK1/2磷酸化水平的升高，提示PD98059可有效阻断ERK通路的激活。②MTT法检测结果提示，暴磁后细胞的增殖活性明显升高，PD98059可明显抑制这种效应。③暴磁组ALP活性明显高于对照组，PD98059+暴磁组ALP活性较暴磁组高（P<0.01），差异有统计学意义。 结论在15 Hz、1 mT的正弦波电磁场作用下，骨髓间充质干细胞ERK信号通路很快被激活，引起细胞增殖活性和ALP活性的改变，这为进一步研究磁场对骨髓间充质干细胞的促增殖和分化成骨机制提供了指导意义。     

丝裂原激活蛋白激酶信号转导系统对维甲酸诱导NB4细胞分化的影响

本研究观察丝裂原活化蛋白激酶对全反式维甲酸（ATRA）诱导NB4细胞分化的影响并探讨其机制。采用MTT法测定细胞增殖活性，用流式细胞术分析细胞周期，NBT还原实验检测粒系分化，底物磷酸化法测定细胞外调节激酶（ERK）活性。结果显示：0．01—0．1μmol／L的ATRA呈时间和剂量依赖方式抑制NB4细胞增殖，并诱导NB4细胞向粒系分化；在这过程中ATRA激活ERK活性，ERK抑制剂PD98059能部分阻断ATRA的作用。p38MAPK的特异抑制剂SB203580与ATRA联合应用部分阻断了ATRA对细胞的生长抑制和诱导分化作用。结论：ATRA在诱导NB4细胞分化过程中激活ERK和P38MAPK途径，并且对该途径有依赖作用。     

缺血预处理对大鼠移植胰细胞凋亡的影响

目的 观察缺血预处理对大鼠移植胰细胞凋亡的影响。方法 6只正常大鼠为对照组，18只糖尿病SD大鼠随机分为缺血再灌注组（I／R组，n=6）、供胰缺血预处理组（DIPC组，n=6）和受体双后肢缺血预处理组（RIPC组，n=6），均行单纯胰腺移植（18只正常SD大鼠为供体）；检测各组大鼠再灌注前、后血糖；再灌注后2h移植胰组织中超氧化物歧化酶（SOD）和髓过氧化物酶（MPO）含量；用TUNEL法观察移植胰组织细胞凋亡情况。结果 与I／R组比较，DIPC组和RIPC组大鼠再灌注后的血糖、MPO活性和移植胰组织细胞调亡指数明显降低，移植胰组织中SOD活性明显增高（均为P〈0．01）。结论 供胰和受体大鼠双后肢缺血预处理能减轻大鼠移植胰细胞的凋亡现象。     

骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化中电磁场激活ERK通路的作用

背景:研究表明电磁场可调节骨髓间充质干细胞的增殖和分化,但其具体机制尚不清楚.目的:从ERK信号途径探讨电磁场诱导大鼠骨髓间充质干细胞增殖与分化成骨的作用.方法:取第3代生长良好的大鼠骨髓间充质干细胞,暴磁组给予15 Hz、1 mT的正弦波电磁场刺激,PD98059+暴磁组在电磁场刺激前给予20 μmol/L ERK阻断剂PD98059,PD98059组仅给PD98059不进行电磁场刺激,对照组正常培养.电磁场刺激后,收集各组细胞,Western blot法检测ERK通路的活性,MTT法检测细胞增殖活性,碱性磷酸酶试剂盒检测细胞碱性磷酸酶活性.结果与结论:电磁场刺激后,细胞ERK1/2磷酸化水平、细胞的增殖活性、及碱性磷酸酶活性均明显升高(P < 0.01);PD98059可明显抑制ERK1/2磷酸化水平及细胞增殖活性的升高(P < 0.01),而在一定程度上提高细胞的碱性磷酸酶活性(P < 0.01).说明电磁场刺激可通过激活骨髓间充质干细胞ERK信号通路,并且主要通过该途径促进骨髓间充质干细胞的增殖;而在脉冲电磁场促进骨髓间充质干细胞分化成骨的过程中,激活ERK信号通路所起的作用较小.     

改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子对肠缺血-再灌注损伤的保护作用及剂量-效应关系研究

目的评价改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对肠缺血-再灌注损伤后肠道保护作用的机制及剂量-效应关系。方法以夹闭大鼠肠系膜上动脉(SMA)制备肠缺血-再灌注损伤模型，并将动物随机分为假手术组、生理盐水对照组、不同剂量(2、4和8μg)改构型aFGF治疗组和4μg野生型aFGF治疗组。除假手术组外，其余各组动物均于缺血45min后再灌注2、6、12和24h活杀，取血及小肠组织标本，检测血浆中D-乳酸含量及组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达特性，并检测肝、肾功能指标，观察不同剂量aFGF对肠缺血-再灌注损伤的影响。结果血浆D-乳酸变化及病理组织学观察显示，再灌注后12h肠屏障功能及肝、肾组织损伤最严重，而改构型aFGF 4μg治疗组在伤后24h损伤较生理盐水对照组和野生型aFGF治疗组有所减轻。PCNA的表达趋势与D-乳酸类似。结论改构型aFGF对肠缺血-再灌注损伤具有一定保护与促修复作用，其抗损伤修复作用呈剂量依赖性。     

酸性成纤维细胞生长因子对大鼠肠缺血再灌注损伤影响的研究

目的　观察外源性酸性成纤维细胞生长因子 ( a FGF)对肠缺血再灌注损伤肠道保护效应及与组织损伤修复的关系。方法　采用肠系膜上动脉 ( SMA)夹闭 4 5 m in后松夹方法制备肠缺血再灌注损伤动物模型。将 Wistar大鼠随机分为假手术组、单纯肠缺血再灌注组及 a FGF治疗组。假手术组分离 SMA但不夹闭 ,4 5 min后取血并活杀动物 ;其余两组分别松夹形成血流再灌注 ,缺血再灌注组从尾静脉注射 0 .15 ml生理盐水 ,a FGF治疗组则从尾静脉给予 0 .15 m l( 4 g) a FGF。于再灌注后 0 .5、1、2、6、12和 2 4 h取血检测血浆D乳酸水平 ;活杀动物后取小肠组织行苏木素伊红 ( HE)染色 ,光镜下观察组织病理形态学改变 ;观察两组大鼠肠缺血再灌注损伤后不同时间点的存活率。结果　与肠缺血再灌注组各时间点比较 ,a FGF治疗组动物存活率均高于对照组 ,以 2 4 h最为显著 ,有统计学意义 ( P<0 .0 5 ) ;血浆 D 乳酸水平于再灌注后 1h则明显低于缺血再灌注组 ,至 2 4 h仍呈降低趋势 ( P均 <0 .0 5 ) ;小肠黏膜病理形态学改变较缺血再灌注组轻。结论　外源性 a FGF对肠缺血再灌注损伤有保护作用 ,其机制可能与体内诱导细胞促分裂效应与非促分裂激素样活性有关     

改构型和野生型aFGF对肠缺血-再灌注损伤后肝肾功能的影响

目的　观察肠缺血再灌注损伤后的肝、肾功能的变化 ,并探讨不同类型酸性成纤维细胞生长因子 (a FGF)对肠缺血再灌注损伤后的肝、肾功能的保护作用。方法　将 78只 Wistar大鼠分成假手术组 (C)、生理盐水治疗组 (R)、改构型 a FGF治疗组 (rh F)和野生型 a FGF治疗组 (wt F) ,后 3组根据再灌注时间又分为 2、6、12和 2 4 h4个时间点。阻断肠系膜上动脉 4 5 m in后松夹制备肠缺血再灌注模型。于不同时间点腹主动脉抽血 5 ml,检测肝、肾功能的变化。结果　与 C组比较 ,R组、rh F组和 wt F组肝、肾功能都有明显下降 ,以 R组下降更明显 ,rh F组次之 ,wt F组肝、肾功能恢复得最好。组织病理学检查发现 ,3组动物均有小肠绒毛脱落、黏膜下层炎细胞浸润等改变 ,其严重程度与肝、肾功能指标水平一致。结论　肠缺血再灌注损伤导致多脏器功能损伤 ,野生型、改构型 a FGF对脏器功能有明显的保护作用。     

Protective effects of modified recombinant human acidic fibroblast growth factor on small intestine after ischemia/reperfusion injury in rats.]

OBJECTIVE: To explore the protective effect of modified recombinant human acidic fibroblast growth factor (rhaFGF) on small intestinal after ischemia/reperfusion (I/R) injury in rats. METHODS: The clamp on the superior mesenteric artery (SMA) was removed after clamping it for 45 minutes to replicate I/R injury of the intestine in the rat. Rats were then divided randomly into sham operation group, normal saline treatment group and rhaFGF treatment group, in which the rats of the normal saline treatment group were injected 0.1 ml of normal saline and that of the rhaFGF group were given 4 microg of rhaFGF immediately after reperfusion. The content of D-lactate in the plasma was determined and the changes in intestinal pathology were observed. At the same time, the rates of apoptosis of intestinal epithelial cells were assessed 2, 6, 12 and 24 hours after I/R, and compared to the sham operation group. RESULTS: The plasma content of D-lactate in the saline treatment group at 6 hours after I/R reached (0.34+/-0.09) mg/L and was significantly higher than that in the rhaFGF treatment group((0.23+/-0.07)mg/L, P<0.05). It was shown histologically that the intestinal structures were damaged more seriously in saline treatment group than in rhaFGF group. The apoptosis rates in the saline treatment group and rhaFGF group were elevated significantly, peaking at 12 hours after I/R injury((62.8+/-1.7)% in saline group and (42.5+/-2.6)% in rhaFGF treatment group), then the rate began to fall. There was statistically significant differone between the two groups at 12 hours after I/R injury. CONCLUSION: rhaFGF can reduce content of D-lactate in the plasma and rate of apoptosis of epithelial cells in the intestine after I/R injury, thus it seems to afford a protective effect on the small intestine after I/R injury in rats.     

鼠肝缺血再灌注后肺组织ERK1/2通路活性变化及褪黑素的影响

目的探讨大鼠全肝缺血再灌注后肺组织损伤、修复过程中ERK1/2信号通路活性的动态变化与意义,以及褪黑素对该信号通路的影响。方法本实验将分成两部分完成。第一部分,36只SD大鼠随机分成6组（n=6）：①缺血前组;②再灌注0.5 h组;③再灌注3 h组;④再灌注6 h组;⑤再灌注12 h组;⑥再灌注24 h组。阻断肝门30 min后开放血流,建立大鼠全肝缺血再灌注模型。分别于缺血前5 min、再灌注0.5 h、3 h、6 h、12 h、24 h处死动物取肺,检测ERK1/2和p-ERK1/2表达、细胞凋亡、PCNA表达及肺组织病理学变化,观察肝缺血再灌注后肺组织ERK1/2信号通路活性的动态变化及其与细胞增殖、凋亡的关系。第二部分,将12只SD大鼠随机分成2组（n=6）：褪黑素组与基质对照组,依上述方法制备全肝缺血再灌注模型,分别于全肝缺血前15 min和再灌注前10 min静脉注射0.5%褪黑素溶液10 mg/kg或相同剂量的溶剂,于再灌注3 h处死动物取肺,检测前述相同参数,观察褪黑素的作用。结果 （1）与缺血前相比,全肝缺血再灌注后肺组织p-ERK/ERK比值与PCNA阳性指数均于再灌注0.5 h显著降低,此后逐渐增高;细胞凋亡指数则于再灌注0.5 h显著增高,后逐渐上升,再灌注6 h达最高,后又逐渐下降;肺组织病理于再灌注0.5 h即出现损伤改变,后逐渐加重,再灌注3 h最重,此后逐渐恢复。（2）双变量相关分析显示：p-ERK/ERK比值与PCNA阳性指数成正相关（r=0.85,P〈0.01）;与凋亡指数呈负相关（r=-0.38,P〈0.05）。（3）褪黑素组与基质对照组比较,p-ERK/ERK比值显著增加,细胞凋亡指数显著降低,病理学改变减轻,但PCNA阳性指数无明显变化。结论全肝缺血再灌注后肺组织损伤、修复过程中,ERK1/2信号通路活性呈先抑制后激活的变化方式,该通路可能通过抑制凋亡、促进增殖在损伤肺组织自身修复过程中发挥积极作用。褪黑素可激活ERK1/2信号通路,并可能由此减轻肝缺血再灌注后肺损伤。     

肠缺血/再灌注时卡巴胆碱对肠上皮细胞凋亡的影响

目的研究肠缺血/再灌注(I/R)时卡巴胆碱对肠上皮细胞凋亡的影响及可能机制。方法雄性Wistar大鼠,戊巴比妥钠腹腔麻醉,结扎肠管造成长约8cm肠袋,采用夹闭肠系膜上动脉(SMA)阻断血流45min后恢复血流的方法,制备肠I/R损伤模型。将动物按随机数字表法分为假手术组(n=40)、I/R模型组(n=40)和卡巴胆碱组(n=40)。卡巴胆碱组在阻断血流的同时向肠袋内注射卡巴胆碱(0.1mg/kg),I/R模型组给予等量生理盐水。分别在再灌注0、30、60、120和240min时,采用病理学方法按Chiu's评分观察肠上皮细胞损伤;原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测肠上皮细胞凋亡指数的变化;免疫组化法检测肠上皮细胞凋亡相关半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase-3)和Bcl-2蛋白表达的变化。结果与I/R模型组比较,卡巴胆碱组肠上皮细胞病理学变化较轻,凋亡指数明显降低,caspase-3阳性肠上皮细胞数明显减少,而Bcl-2阳性肠上皮细胞数明显增加(P均<0.01)。结论卡巴胆碱能抑制I/R时肠上皮细胞caspase-3表达,增加Bcl-2表达,减少肠上皮细胞的凋亡。     

ERK1/2信号传导通路介导碱性成纤维细胞生长因子诱导人晶状体上皮细胞中环氧合酶2的表达

背景:碱性成纤维细胞生长因子在各种白内障形成中都起着重要的作用,可促进晶状体上皮细胞的增殖并化生为纤维细胞,但其信号通路尚不清楚。目的:探讨ERK1/2信号转导通路在碱性成纤维细胞生长因子诱导的人晶状体上皮细胞环氧合酶2表达中的作用。方法:使用10μg/L的碱性成纤维细胞生长因子干预培养的人晶状体上皮细胞0,1,3,6,12,24h,RT-PCR检测刺激不同时间人晶状体上皮细胞环氧合酶2mRNA的表达,Western blot检测细胞中环氧合酶2及磷酸化ERK1/2的表达。在阻断实验中应用特异性ERK1/2的阻断剂PD98059阻断ERK信号转导通路1h,再用10μg/L碱性成纤维细胞生长因子刺激细胞6h,Western blot检测细胞中环氧合酶2的表达。结果与结论:碱性成纤维细胞生长因子刺激后的人晶状体上皮细胞中环氧合酶2mRNA及其蛋白的表达显著增加(P<0.01),同时碱性成纤维细胞生长因子诱导人晶状体上皮细胞磷酸化ERK1/2活性增强,表达水平随作用时间而增加,30min时达到最高峰(P<0.01),6h后恢复至基线水平;PD98059可抑制人晶状体上皮细胞环氧合酶2的表达(P<0.01)。说明ERK1/2信号转导通路参与了碱性成纤维细胞生长因子诱导的人晶状体上皮细胞中环氧合酶2的表达,在后发性白内障的形成过程中起着重要作用。     

ERK1/2信号传导通路介导碱性成纤维细胞生长因子诱导人晶状体上皮细胞中环氧合酶2的表达

背景：碱性成纤维细胞生长因子在各种白内障形成中都起着重要的作用,可促进晶状体上皮细胞的增殖并化生为纤维细胞,但其信号通路尚不清楚。目的：探讨ERK1/2信号转导通路在碱性成纤维细胞生长因子诱导的人晶状体上皮细胞环氧合酶2表达中的作用。方法：使用10μg/L的碱性成纤维细胞生长因子干预培养的人晶状体上皮细胞0,1,3,6,12,24h,RT-PCR检测刺激不同时间人晶状体上皮细胞环氧合酶2mRNA的表达,Western blot检测细胞中环氧合酶2及磷酸化ERK1/2的表达。在阻断实验中应用特异性ERK1/2的阻断剂PD98059阻断ERK信号转导通路1h,再用10μg/L碱性成纤维细胞生长因子刺激细胞6h,Western blot检测细胞中环氧合酶2的表达。结果与结论：碱性成纤维细胞生长因子刺激后的人晶状体上皮细胞中环氧合酶2mRNA及其蛋白的表达显著增加（P〈0.01）,同时碱性成纤维细胞生长因子诱导人晶状体上皮细胞磷酸化ERK1/2活性增强,表达水平随作用时间而增加,30min时达到最高峰（P〈0.01）,6h后恢复至基线水平;PD98059可抑制人晶状体上皮细胞环氧合酶2的表达（P〈0.01）。说明ERK1/2信号转导通路参与了碱性成纤维细胞生长因子诱导的人晶状体上皮细胞中环氧合酶2的表达,在后发性白内障的形成过程中起着重要作用。     

大鼠肝缺血-再灌流损伤脑组织p38MAPK与脑细胞凋亡的关系

目的观察肝缺血-再灌流损伤过程中大脑皮质层p38有丝分裂素激活蛋白激酶(p38MAPK) 的变化和神经元凋亡,以探讨p38 MAPK与脑组织神经元凋亡的关系。方法建立肝缺血-再灌流损伤动物模型,分为对照组、缺血30 min组(I组)、缺血30 min再灌流组(I／R组)、缺血30 min再灌流后1 h组(I/ R 1h)、缺血30 min再灌流后2 h组(I／R 2h)、缺血30 min再灌流后4 h组(I/R 4h)。应用免疫组化法测定各组肝组织中iNOS的变化和脑皮质层p38MAPK的改变,应用原位细胞凋亡法测定神经元凋亡,同时观察肝和脑组织病理学改变。结果肝缺血-再灌流损伤形成过程中,随着再灌流时间延长肝组织出现iNOS的高表达,同时大脑皮层出现p38MAPK改变和神经元凋亡。肝组织iNOS与p38MAKP呈正相关(r=0．91,P <0．05)。p38MAPK的表达与phospho-p38MAPK的表达呈正相关(r=0．89,P<0．05),phospho-p38MAPK的表达与凋亡指数呈正相关(r=0．95,P<0．05)。HE染色见肝细胞水肿,炎性细胞浸润,甚至细胞坏死。脑皮质层见神经元水肿、坏死。结论肝缺血-再灌流损伤可导致大脑结构和功能的改变。损伤过程中产生 iNOS作为炎性细胞因子导致大脑皮层p38MAKP的改变,从而引起神经元凋亡。     

肠缺血-再灌注损伤对Leptin蛋白质及mRNA水平的影响

目的　研究肠缺血再灌注损伤对血清及脂肪组织 L eptin水平的影响 ,探讨 L eptin在急性炎症反应中的作用。方法　建立大鼠肠缺血再灌注损伤模型 ,采用高灵敏鼠 L eptin放射免疫分析方法测定血清以及脂肪组织 L eptin浓度变化 ,并采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测脂肪组织 L eptin m RNA表达水平的变化。结果　与损伤前自身对照组的血清 L eptin水平相比 ,肠缺血 6 0 min再灌注损伤 30 m in(I6 0 R30 )组显著降低 ,I6 0 R15 0组呈现增高的趋势 ,而 I6 0 R36 0组显著增高 ;与损伤后假手术组的血清 L eptin水平相比 ,I6 0 R2 4 0组呈现增高的趋势 ,而 I6 0 R36 0组显著增高 ;与损伤后假手术组的脂肪组织 L eptin水平相比 ,I6 0 R30、I6 0 R90组显著降低 ,而 I6 0 R36 0组显著增高 ;与损伤后假手术组相比 ,I6 0 R30组、I6 0 R2 4 0组、I6 0 R36 0组 L eptin m RNA水平显著增高 ,而 I6 0 R15 0组显著降低。结论　 L eptin对肠缺血再灌注损伤等急性炎症刺激具有时间依赖效应 ,并发挥炎性细胞因子的作用。