柴胡疏肝散对衣霉素诱导内质网应激模型细胞活性的影响

目的:探讨柴胡疏肝散含药血清对衣霉素诱导的内质网应激(ERS)细胞模型NG108-15细胞活性的影响。方法:采用衣霉素(TM)孵育NG108-15细胞,诱导ERS细胞模型,并将诱导后的细胞分成五组,模型组、安理申西药组、柴胡疏肝散高、中、低剂量组,分别采用正常空白血清、安理申含药血清、高、中、低剂量柴胡疏肝散含药血清进行干预,同时设置正常空白血清孵育的未经TM诱导的正常组。观察各组细胞的活性。结果:柴胡疏肝散高、中、低剂量组,细胞的活性明显高于模型组细胞的活性(P0.05);西药安理申组和柴胡疏肝散高剂量组细胞的活性均明显高于其他各组(P0.05),且两者之间无明显差异(P0.05)。结论:柴胡疏肝散含药血清对正常NG108-15神经细胞没有明显毒副作用,但其可明显提高衣霉素诱导的内质网应激NG108-15细胞的生存率,其机制可能与柴胡疏肝散缓解衣霉素诱导的细胞内质网应激有关。     

柴胡疏肝散含药血清对衣霉素诱导NG108-15神经元内质网应激模型泛素基因表达的影响

目的:运用中药血清药理学方法研究柴胡疏肝散含药血清对内质网应激的保护作用并探讨其机制。方法:实验用衣霉素(TM)对NG108-15神经细胞进行诱导,建立内质网应激(ERS)细胞模型,柴胡疏肝散含药血清为干预组,采用逆转录聚合酶链式反应方法观察泛素(Ub)的m RNA表达水平。结果:各浓度柴胡疏肝散含药血清干预组Ub m RNA表达与模型组相比,表达水平明显上调,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:柴胡疏肝散方药对内质网应激引起的神经元损伤有显著的保护作用,其机制可能与泛素-蛋白酶体通路(UPP)相关联。     

柴胡疏肝散含药血清对衣霉素诱导神经元 内质网应激模型细胞凋亡的影响

〔摘 要〕 目的：探讨柴胡疏肝散（CSS）含药血清对衣霉素诱导的内质网应激（ERS）模型神经元凋亡的影响。 方法：采用衣霉素对 NG108–15 神经细胞进行诱导,建立 ERS 细胞模型并分成 5 组,模型组（10 % 空白兔血清 干预）、安理申（盐酸多奈哌齐片）组（10 % 安理申含药血清干预）、2.5 % CSS 含药血清（低剂量）组、5 % CSS 含药血清（中剂量）组、10 % CSS 含药血清（高剂量）组。同时设置正常空白血清孵育且未经衣霉素诱导的正常组, 干预后采用流式细胞仪和荧光染色检测各组细胞凋亡率。 结果：流式细胞仪检测结果显示,各干预组细胞凋亡率均低 于模型组（P ＜ 0.05）;同时高剂量 CSS 含药血清组细胞凋亡率明显低于中低剂量组（P ＜ 0.05）。联合荧光染色 也证明高剂量 CSS 含药血清组细胞凋亡率明显低于中低剂量组。 结论：CSS 能够抑制衣霉素诱导的 ERS 模型神经元 凋亡,且其抑制作用随着药物浓度升高而增强。     

柴胡疏肝散含药血清对NG108-15神经元多靶点干预的药物化学研究

目的:探索中药复方柴胡疏肝散配伍对神经元多靶点作用的物质基础和化学机制.方法:采用高效液相色谱对该复方含药血清、水煎剂和含药血清对NG108-15神经元细胞株干预后细胞内药物成分进行检测.结果:在血清和NG108-15神经元细胞中发现多种柴胡疏肝散水煎剂原型成分和移形成分.结论:实验证明柴胡疏肝散含药血清进入NG108-15细胞内部的药物有效成分有多种,符合霰弹靶点理论.     

楮实子提取物对衣霉素诱导的细胞ERS的改善作用及其分子机制

目的:探讨楮实子提取物对衣霉素诱导的细胞内质网应激(ERS)模型的影响及其分子机制。方法:楮实子含药血清干预衣霉素处理的PC12细胞制备内质网应激模型,造模后分为ERS模型组和楮实子高、中、低剂量组。运用CCK8法检测各组内质网应激模型PC12细胞存活率;流式细胞仪检测细胞的凋亡率及细胞周期;利用免疫印迹法检测GRP78及Caspase-12蛋白表达。结果:楮实子含药血清可提高经衣霉素处理后的PC12细胞存活率(P0.05),楮实子使衣霉素(Tu)诱导的内质网应激细胞的细胞周期中的G2期明显增加(6.9%19%),ERS模型组细胞凋亡率为8.36%,而楮实子高剂量组细胞凋亡率为4.51%,楮实子可下调凋亡相关蛋白GRP78、Caspase-12的表达,降低内质网应激反应。结论:楮实子可有效缓解衣霉素诱导的细胞毒性,增加细胞周期阻滞,其作用机制可能是通过细胞周期阻滞,在G2期对损伤的细胞进行修复,缓解内质网应激的进一步进展,进而抑制细胞凋亡。     

补肾益智方对AD细胞模型钙离子内流、细胞骨架、细胞凋亡的影响

目的：观察补肾益智方含药血清对AD（Alzheimer's Disease)细胞模型钙离子内流、细胞骨架、细胞凋亡的影响。方法：在神经母细胞瘤和神经胶质瘤杂交的NG108－15细胞培养液中加入预先老化4d的Aβ25－35片段共同孵育,建立AD细胞模型。分别加入正常老年大鼠血清、补肾益智方高剂量含药血清和补肾益智方低剂量含药血清培养48h后;应用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度（Ca^2 )的变化情况;荧光显微镜观察细胞骨架的重组情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡细胞。结果：与正常大鼠血清加Aβ25－35组比较,高剂量补肾方含药血清组、低剂量补肾方含药血清细胞内Ca^2 浓度的相对荧光值明显降低（P＜0．01）,而他们间两两比较则差异显著（P＞0．05）。正常大鼠血清加Aβ25－35的NG108－15细胞组可以看到,细胞骨架严重解聚并向边缘扩散,细胞形态变性,还有细胞死亡现象;而高、低剂量补肾方含药血清组细胞骨架呈现微弱解聚现象,细胞形态正常,无变性和死亡现象。与正常大鼠血清加Aβ25－35组比较,高、低剂量补肾方含药血清组NG108－15细胞凋亡率明显减少（P＜0．01）。结论：补肾益智方含药血清可以抑制细胞Ca^2 内流,平衡控制细胞内Ca^2 浓度;对Aβ引起NG108－15细胞骨架解聚、细胞变性等有保护作用,能部分保护Aβ25－35诱导的细胞凋亡。     

柴胡舒肝散含药血清对乳腺癌MCF-7细胞的体外抑制作用及Bcl-2与VEGF的影响

目的 探讨柴胡舒肝散含药血清对人乳腺癌MCF-7细胞株体外抑制作用及Bcl-2与VEGF的影响.方法 选取SD雌性大鼠48只,随机分为空白对照组、他莫昔芬组和柴胡疏肝散高、低剂量组.利用他莫昔芬片和不同浓度的柴胡疏肝散进行干预,留取含药血清检测MCF-7细胞凋亡,Bcl-2的蛋白表达及血清中血管内皮生长因子(VEGF)...     

柴胡疏肝散对卒中后抑郁模型大鼠BDNF/TrkB 信号通路和炎症指标的影响

目的:观察柴胡疏肝散对卒中后抑郁(PSD)模型大鼠的治疗作用和可能机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和柴胡疏肝散高剂量组、低剂量组,每组10只。除假手术组以外,其余各组大鼠采用大脑中动脉线栓阻塞法和慢性不可预见性温和应激法复合制备卒中后抑郁模型。假手术组不插入栓线,不给予应激刺激。造模成功后柴胡疏肝散高剂量和低剂量组分别给予11.8 g/kg和5.9 g/kg剂量中药灌胃,假手术组、模型组灌胃等量生理盐水,共灌胃21 d。分别于造模前、造模后及治疗后评价神经功能缺损程度,观察行为学糖水偏好,记录强迫游泳试验结果;治疗后以酶联免疫法(ELISA)检测血清白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,以Western blot法检测海马脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)和核因子κB(NF-κB)水平。结果:PSD模型大鼠神经功能缺损程度、糖水消耗量、强迫游泳不动时间和血清IL-6、TNF-α水平,以及海马BDNF、TrkB、NF-κB表达,与假手术组比较差异均有统计学意义(P0.05)。经治疗后,与模型组比较,柴胡疏肝散高、低剂量组大鼠神经功能缺损程度减轻(P0.05),糖水消耗量增加(P0.05),强迫游泳不动时间缩短(P0.05),海马BDNF、TrkB表达上升(P0.05),血清TNF-α水平、海马NF-κB表达下降(P0.05)。柴胡疏肝散高剂量组治疗后糖水消耗量明显高于低剂量组(P0.05),血清TNF-α水平、海马NF-κB表达明显低于低剂量组(P0.05),海马BDNF、TrkB表达明显高于低剂量组(P0.05)。结论:柴胡疏肝散对PSD大鼠具有治疗作用,其作用机制可能涉及调节BDNF/TrkB信号通路及抑制神经炎症。     

温胆汤改良方对Alzheimer病细胞模型JNK、c-jun磷酸化水平的影响

目的:探讨温胆汤改良方含药血清对AD细胞模型JNK、c-jun磷酸化水平的影响。方法:经老化处理的Aβ25-35(终浓度为5μmol/L)与NG108-15细胞共同孵育24h建立AD细胞模型,运用中药血清药理学方法,以温胆汤改良方含药血清作用于AD细胞模型,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,SABC免疫组化法检测p-JNK、p-c-jun蛋白的表达。结果:温胆汤改良方能显著性降低NG108-15细胞JNK、c-jun的表达,降低细胞凋亡率。与模型组比较,抑制剂组和含药血清组JNK、c-jun的表达降低有显著性意义(P<0.05)。结论:温胆汤改良方保护由Aβ25-35引起的NG108-15细胞损伤作用,可能与其作用于JNK信号转导通路有着密切的关系。     

四君子颗粒含药血清对棕榈酸诱导的MIN6细胞凋亡的影响

目的探讨四君子颗粒含药血清对棕榈酸诱导的MIN6细胞凋亡的影响。方法 SD大鼠灌胃给予四君子颗粒(10.5、5.25 g/kg)7 d,制备四君子颗粒含药血清。四君子颗粒含药血清预处理MIN6细胞24 h后,加入0.4 mmol/L棕榈酸孵育MIN6细胞24 h。CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测GRP78、ATF4、CHOP、p-PERK蛋白表达。结果四君子颗粒含药血清减轻了棕榈酸诱导的MIN6细胞损伤和凋亡(P0.05,P0.01),下调内质网应激相关蛋白GRP78、ATF4、CHOP蛋白表达,降低PERK蛋白磷酸化(P0.05,P0.01)。结论四君子颗粒含药血清可有效减轻棕榈酸诱导的MIN6细胞损伤和凋亡,其机制可能与抑制内质网应激相关的信号通路有关。     

壮医药线点灸疗法对去卵巢家兔血清白细胞介素-2的影响

目的 观察壮医药线点灸疗法对去卵巢家兔血清白细胞介素-2(IL-2)的影响.方法 将30只健康雌性新西兰家兔随机分为正常组、假手术组、模型组、壮医药线点灸治疗组(以下简称药线组)及空线组,每组各6只.模型组、药线组、空线组行卵巢摘除术去势建立围绝经期综合征模型.假手术组只打开腹腔,不予卵巢摘除术.手术后第15 d,药线...     

宁动颗粒对抽动―秽语综合征患儿IL-12、TNF-α的影响

目的观察宁动颗粒对抽动―秽语综合征（Tourette′s syndrome,TS）患儿血清白细胞介素-12（IL-12）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）水平的影响。方法将90例TS患儿随机分为宁动颗粒组、硫必利组、宁动颗粒联合硫必利治疗组（联合治疗组）,并以同期30名正常健康儿童作为健康对照组。宁动颗粒组予以宁动颗粒（组成：天麻、党参、麦冬、白芍、龙骨、牡蛎、地龙、甘草等）,每日1剂,分早晚2次开水冲服;硫必利组予以硫必利片口服,开始剂量为50~100 mg/d,每天2次,根据个体差异及病情变化调整剂量,最大剂量300 mg/d;联合治疗组予以同等剂量的宁动颗粒与硫必利合用。疗程均为3个月。通过美国耶鲁综合抽动严重程度量表（Yale global tic severity scale,YGTSS）评估其治疗前后的病情变化,采用酶联免疫吸附法（enzyme-labeled immunosorbent assay, ELISA）检测血清细胞因子IL-12和TNF-α水平。结果（1）宁动颗粒组、联合治疗组及硫必利组总有效率分别为79.3%、83.3%、67.9%,宁动颗粒组及联合治疗组明显高于硫必利组（P〈0.05）,且联合治疗组明显高于宁动颗粒组（P〈0.05）。（2）各组治疗后YGTSS评分较治疗前明显降低（P〈0.05）;治疗后宁动颗粒组与联合治疗组YGTSS评分均低于硫必利组（P〈0.05）,但两组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。（3）宁动颗粒组、硫必利组及联合治疗组患儿治疗前血清IL-12、TNF-α分别为（124.95±22.78,209.52±21.69）、（123.00±24.26,205.10±26.16）和（126.14±25.65,208.97±22.46）,与健康对照组（64.56±27.59,78.13±33.42）比较显著升高,差异有统计学意义 （P〈0.05）;治疗后宁动颗粒组与联合治疗组血清IL-12、TNF-α分别为（104.67±16.84,183.01±24.95）、（109.04±16.81,179.87±23.45）,均较治疗前明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;而硫必利组治疗前后血清IL-12、TNF-α水平变化不明显。结论宁动颗粒能够调节TS患儿异常的血清IL-12及TNF-α水平,这可能是其治疗TS的药效学机制之一。     

调衡方对Lewis肺癌细胞凋亡标志物bax及bcl-2表达的影响

目的探讨调衡方含药血清诱导Lewis肺癌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法采用细胞培养技术,用不同浓度的含药血清（无特定病原体雌性SD大鼠32只随机分为4组,每组8只,灌服给药,制备调衡方大、中、小剂量含药血清,正常血清。又将细胞分为5组,调衡方大、中、小剂量含药血清组,中剂量含药血清＋AG490干预组,正常血清组）处理Lewis肺癌细胞,用溴化四唑蓝（MTT）法检测药物对细胞增殖的影响;以流式细胞仪测定碘化丙啶染色细胞周期的变化;采用实时聚合酶链式反应（PCR）法检测bax和bcl-2的mRNA表达。结果调衡方含药血清处理Lewis肺癌细胞后,随着药物浓度增加,作用时间延长,细胞增殖速度减慢。流式细胞仪检测结果显示,调衡方含药血清使Lewis肺癌细胞阻滞于S期,随着药物浓度的增加,细胞凋亡逐渐增加,中、大剂与中剂量＋AG490组尤为明显（P〈0.01）。调衡方含药血清还能够促进细胞中bax mRNA表达,减少bcl-2 mRNA表达（P〈0.05,P〈0.01）,并呈浓度依赖性。结论调衡方含药血清能降低Lewis肺癌细胞内bcl-2含量及提高bax的表达,使bax/bcl-2比值升高,这可能是调衡方抗肿瘤诱导Lewis肺癌细胞凋亡的机制。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质内质网应激的影响

目的观察脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质磷酸化(p)RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、真核起始因子2α-亚单位(eIF2α)、p-eIF2α、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的变化,探讨脾阴虚糖尿病相关认知下降发病机制及滋补脾阴方药的作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、糖尿病组、脾阴虚组、脾阴虚糖尿病组(病证组)、脾阴虚糖尿病+滋补脾阴方药组(治疗组)。采用高脂喂养4周联合小剂量链脲佐菌素注射方法建立2型糖尿病模型。在此基础上采用饮食不节、劳倦过度及灌服伤阴药方法建立脾阴虚糖尿病模型。治疗组给予滋补脾阴方药灌胃,其余各组给予等体积生理盐水灌胃,连续15 d,取大脑皮质。采用Western Blot、RT-PCR方法观察PERK、eIF2α、p-eIF2α、GRP78表达变化。结果糖尿病组、脾阴虚组、病证组PERK、p-eIF2α蛋白表达及GRP78 mRNA表达较对照组增强(P0.05),糖尿病组、病证组GRP78蛋白表达较对照组增强(P0.05),治疗组上述分子表达较糖尿病组、病证组均减弱(P0.05)。结论内质网应激参与脾阴虚糖尿病相关认知下降的发病,滋补脾阴方药通过减轻内质网应激改善学习记忆障碍。     

化浊解毒和胃方对胃癌前病变大鼠血管生成机制的影响

目的探讨化浊解毒和胃方治疗胃癌前病变（precancerouslesionsofgastriccancer,PL—GC）在血管新生方面的可能机制。方法Wistar大鼠66只随机分为6组：即正常对照组（空白组）,模型组,维甲酸治疗组（维甲酸组）,化浊解毒和胃方高、中、低剂量治疗组,每组11只。采用幽门弹簧插入复合法复制慢性萎缩性胃炎PLGC模型,各组给予相应的药物每天灌胃1次,每次2mL,连续12周。采用免疫组织化学和Westernblot方法,观察化浊解毒和胃方对慢性萎缩性胃炎PLGC大鼠胃黏膜组织缺氧诱导因子-1α（hypoxiainducedfactor,HIF-1α）、血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）的影响。结果与空白组比较,模型组VEGF、HIF-1α的表达增高,差异有统计学意义（P〈0．05）;各治疗组与模型组比较,VEGF、HIF-1α表达降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;且化浊解毒和胃方高剂量组与中剂量组降低VEGF、HIF-1α的表达优于维甲酸组及化浊解毒和胃方低剂量组（P〈0．05）,低剂量组与维甲酸组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论化浊解毒和胃方可能是通过降低PLGC大鼠胃黏膜HIF-1α、VEGF的表达,从而抗血管生成达到防治慢性萎缩性胃炎PLGC的治疗效果,并且存在-定的量效关系。     

黄芪甲苷对急性肺损伤大鼠内质网应激介导影响

目的:探讨黄芪甲苷(ASIV)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的保护作用,并初步探讨其抑制内质网应激介导的细胞凋亡的作用。方法:随机将50只SD大鼠分成5组,每组10只。对照组(静注生理盐水1mg/kg),ALI组(静注LPS,5mg/kg),ASIV组(注射LPS前,给药3、6、12mg/kg ASIV连续灌胃7天)。观察注射12h后肺组织湿干重(W/D)、western blotting检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)的蛋白表达。结果:ALI组W/D值较对照组上升(P0.01),GRP78、ChOP蛋白表达较对照组升高(P0.01);ASIV组W/D值较ALI组下降(P0.01),GRP78、ChOP蛋白表达较ALI组降低(P0.01),并呈一定的剂量依赖性。结论:黄芪甲苷对急性肺损伤大鼠有保护作用,其作用机制可能与内质网应激有关。     

高原环境下REM睡眠剥夺大鼠皮质GRP78的表达及药物干预

目的探讨高原环境下大鼠不同时间快速动眼睡眠（REM）期睡眠剥夺（SD）后皮层内质网应激（ERS）标志性分子葡萄糖调控蛋白78（GRP78）的动态变化、神经元凋亡影响及人参皂甙Rd（GS Rd）可能的神经保护作用。方法采用小平台水环境法制作大鼠SD模型,应用免疫组织化学染色检测相关时间点GRP78的动态变化;TUNEL试剂盒检测凋亡细胞。结果在平原（兰州）组,SD后1 d皮层区GRP78蛋白表达开始增高,3 d时达高峰,5 d时与正常睡眠组相比无明显差别。GS Rd,组SD后1 d、3 d、5 dGRP78的表达较生理盐水对照组增高。在对应时间点高原（可可西里）组GRP78的表达均高于平原组。结论高原SD组大鼠GRP78的表达较平原组增高;GS Rd能够提高SD组大鼠GRP78表达;GS Rd可能会通过升高GRP78的表达保护内质网功能,以减轻脑损伤。     

解酒护肝方对不同体质大鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的：观察解酒护肝方对不同体质大鼠酒精性肝损伤的保护作用。方法：将大鼠随机分为正常组、阳虚模型组、阳虚预防给药组（温低组、温高组、寒低组、寒高组）、阴虚模型组、阴虚预防给药组（寒低组、寒高组、温低组、温高组）等11组,除正常组外,阳虚组采用30 mg/kg肌注氢化可的松,阴虚组采用甲状腺素水溶液25 mg/kg分别建立阳虚模型、阴虚模型,造模完成后针对体质预防给药,分高、低剂量组（按生药量计为4.15,0.83 g/kg）,1小时后灌胃0.009 mL/g 56度红星二锅头,持续灌注5周后测定大鼠血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）水平。结果：与正常组比较,模型组与预防给药组的AST、ALT及AST/ALT比值均增高,提示有不同程度的肝损伤（P＜0.05）;违背体质用药的高剂量组血清AST、ALT增高明显（P＜0.05）;符合体质用药的高剂量组血清AST、ALT明显降低（P＜0.05）。结论：针对体质的解酒护肝方能有效预防大鼠酒精性肝损伤。     

何首乌含药血清对体外培养的人肝细胞活性的影响

目的：观察何首乌含药血清对体外培养的人肝细胞活性的影响,考察何首乌入血成分是否具有肝细胞毒作用。方法：采用血清药理学方法制备何首乌含药血清及空白对照组血清,作用于体外培养的人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞,MTT法检测不同浓度血清对两种细胞活力的影响;倒置相差显微镜观察各浓度血清作用后两种细胞的形态变化;测定含药血清作用于两种细48 h后,细胞培养液转氨酶活性变化。结果：何首乌含药血清对人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞的活力没有明显影响。两种细胞含药血清组与空白血清组相比,细胞形态都没有发生明显改变,细胞培养液转氨酶活性（ALT、AST）也没有显著差异（P〉0.05）。结论：何首乌含药血清对体外培养的两种人源肝细胞活性均没有明显影响。