痛泻要方中配伍“风药”对PI-IBS模型大鼠 PAR2 mRNA表达及炎症介质的影响

目的探讨痛泻要方中配伍风药(防风)对感染后肠易激综合征(PI-IBS)大鼠模型PAR2mRNA表达和炎症介质的影响。方法采用福氏痢疾杆菌灌胃法复制PI-IBS大鼠模型,评价痛泻要方原方、痛泻要方无防风方、防风的疗效及对结肠黏膜PAR2mRNA基因表达和炎症介质SP、TNF-α、IL-6的影响。结果痛泻要方原方、痛泻要方无防风方、防风可升高感染后IBS大鼠的内脏痛觉敏感压力阈值,减少大鼠排稀便次数(P<0.05或P<0.01);痛泻要方原方及防风组显著降低结肠黏膜SP、IL-6、TNF-α含量并抑制结肠黏膜PAR2mRNA基因表达,而痛泻要方无防风方可降低结肠黏膜SP的含量(P<0.05),但对结肠黏膜IL-6、TNF-α和PAR2mRNA基因表达无显著影响(P>0.05)。结论痛泻要方中配伍风药(防风)可增强方中其他药物的止痛止泻效应,增强对PAR2基因表达和炎症介质的抑制作用,防风在方中发挥了不可替代的佐助作用。     

隔药灸对肿瘤坏死因子-α介导克罗恩病肠上皮细胞凋亡途径的影响

目的:观察隔药灸对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)-肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域(TRADD)-Fas相关的死亡结构域(FADD)途径介导克罗恩病(Crohn's disease,CD)肠上皮细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:将48只SD雄性大鼠随机分成正常组、模型组、隔药灸组和西药组,每组12只。采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)制备CD模型,造模成功后隔药灸组采用隔药饼灸"天枢""气海"穴,每日1次,每次每穴隔药灸2壮,共灸10d。西药组采用美沙拉嗪灌胃,每日2次,每次2mL,共灌胃10d。治疗结束后取各组大鼠结肠上皮组织,分离、纯化和培养结肠上皮细胞建立体外肠上皮细胞屏障模型,将100ng/mL TNF-α分别与各组肠上皮细胞孵育培养24h,应用荧光黄透过率检测各组肠上皮细胞屏障通透性,Western blot法检测各组肠上皮细胞凋亡途径相关蛋白肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、TRADD、受体作用蛋白1(RIP1)、FADD、锌指蛋白A20(A20)表达以及流式细胞术观察各组肠上皮细胞凋亡情况。结果:与正常组比较,模型组的荧光黄透过率显著升高(P0.001),结肠上皮细胞TNFR1、TRADD、RIP1表达量明显升高(P0.01),A20表达量明显降低(P0.01),细胞凋亡率显著增高(P0.001)。与模型组比较,隔药灸组和西药组的荧光黄透过率显著降低(P0.001),结肠上皮细胞TRADD、RIP1、FADD表达量明显降低(P0.01),A20表达量明显升高(P0.01),结肠上皮细胞凋亡率显著降低(P0.001)。结论:隔药灸可能是通过调控TNF-α介导CD肠上皮细胞凋亡途径的异常,达到保护或修复CD肠上皮屏障损伤之效应。     

基于对通透性及紧密连接的影响探讨益艾康对HIV/AIDS肠黏膜屏障损伤的保护作用

目的通过观察益艾康对IFN-γ损伤肠黏膜屏障通透性及紧密连接的影响,探讨益艾康对HIV/AIDS肠黏膜屏障损伤的保护作用。方法利用IFN-γ刺激Caco-2单层细胞屏障模拟体内HIV损伤肠黏膜的病理过程,实验分为空白对照组、IFN-γ组、益艾康组、IFN-γ+益艾康组,观察不同时间点下列指标变化:跨细胞膜电阻抗值变化;荧光素钠透过率改变;紧密连接蛋白ZO-1蛋白及mRNA变化。结果与空白对照组相比,IFN-γ干预不同时间点TEER值均有所降低,48h降低最为明显(P0.05),与IFN-γ组相比,益艾康在不同时间点均能提高Caco-2细胞单层TEER值;IFN-γ干预不同时间后,荧光素钠的渗漏量均由不同程度的增加,48h后降低已非常明显,与空白对照相比差异显著(P0.05),与IFN-γ组相比,益艾康能明显降低荧光素钠的渗漏量(P0.05);与空白对照组相比,IFN-γ能引起Caco-2细胞单层ZO-1蛋白及mRNA表达下降(P0.05),而益艾康含药血清能提高肠黏膜屏障损伤模型ZO-1蛋白及mRNA的表达(P0.05)。结论益艾康能降低IFN-γ引起的肠黏膜屏障的通透性增加,维持肠黏膜屏障的完整性,其机制与抑制紧密连接蛋白ZO-1的表达下降从而维持正常的紧密连接相关。     

基于“痛泻要方”探讨防风对TNBS诱导大鼠UC结肠TLR-4及外周血中TNF-α、IL-1β的影响

目的:观察痛泻要方及配伍防风对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜TOLL样受体4(TLR-4),血清白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠法复制UC大鼠。Wistar大鼠72只分为6组,分别给予防风、痛泻要方祛防风、痛泻要方、SASP灌胃治疗,模型对照组和正常对照组给予生理盐水,4周后,对各组大鼠结肠黏膜TLR-4,血清TNF-α、IL-1β水平进行检测,并进行统计学分析。结果:与空白组比较,模型组大鼠结肠黏膜TLR-4,血清TNF-α、IL-1β水平显著升高(P0.01);经药物治疗后与模型组比较,防风、痛泻要方祛防风、痛泻要方、SASP组结肠黏膜TLR-4,血清TNF-α、IL-1β水平下降,其中痛泻要方和SASP组有显著差异(P0.01,P0.05)。结论:痛泻要方全方对UC大鼠的治疗作用明显优于缺防风方,其机制之一可能是抑制NF-κB信号通路上游TLR4及下游炎症因子TNF-α、IL-1β的表达有关,防风在痛泻要方中发挥着重要的佐助作用。     

肠上皮细胞模型不同培养条件的优化及适应性研究

目的:建立肠上皮(Caco-2)细胞单层模型,探讨不同培养条件对细胞单层模型的影响,优化适宜的条件,提供稳定、重复性好的Caco-2细胞模型。方法:将细胞接种Transwell培养板上进行体外培养,并比较3种Transwell培养板及包被鼠尾胶原蛋白对细胞单层的影响,通过透射电镜和倒置显微镜观察细胞单层的形态学特征,通过测定细胞单层的电阻值、细胞两侧碱性磷酸酶含量、荧光素钠的透过量验证细胞单层的完整性、极性、通透性。结果:经过21 d培养,24孔Transwell培养的细胞单层的完整性、极性高于12孔Transwell培养的细胞单层,而透过性低于12孔Transwell培养的细胞单层;包被鼠尾胶原蛋白的Transwell于细胞单层生长前期跨上皮细胞电阻值(transepithelium electrical resistance,TEER)迅速升高,对细胞单层生长的中后期无显著性影响。结论:3种Transwell均可成功培养Caco-2细胞单层,24孔站立式Transwell适用于样品需求量少、检测灵敏度高的物质,可应用于大量样品的高通量筛选;12孔悬挂式Transwell提供检测的样品量和透过率较大,适于实验室的常规操作和常用仪器的样品需求。     

痛泻要方加减引经药防风对肠易激综合征大鼠内脏敏感性及脑肠轴不同靶点脑肠肽的影响

目的:研究痛泻要方加减防风对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)大鼠内脏敏感性及脑肠轴不同靶点脑肠肽的影响。方法:将新生SD大鼠随机分为正常组、模型组、痛泻要方缺防风组、痛泻要方全方组,和痛泻要方倍用防风组,每组10只,除正常组外,其余各组采用母子分离结合乙酸灌肠法,复制腹泻型肠易激综合征大鼠模型,造模后各组灌胃给予相应药物,连续2周,检测粪便含水量和腹壁撤退反射(AWR),采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测5-羟色胺(5-HT)和P物质(SP)的含量,通过免疫组化法检测促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)的表达。结果:与模型组比较,各实验组均能显著降低粪便含水量、最小容量阈值和血浆、下丘脑、结肠中的5-HT,SP含量,减少CRH的表达(P0.05,P0.01)。痛泻要方全方组和痛泻要方倍用防风组大鼠粪便含水量,5-HT和SP含量及CRH的表达量较痛泻要方缺防风组明显减低,AWR评分明显升高,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:防风具有增强痛泻要方抑制腹泻型肠易激综合征的内脏高敏感性和调节脑肠轴不同靶点中的脑肠肽的效应。     

痛泻要方及防风对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜COX-2及外周血中IL-6的影响

目的:观察痛泻要方及防风对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜COX-2,血清白细胞介素-6(IL-6)的影响。方法:将72只Wistar大鼠分为6组,应用病证结合复合法复制肝郁脾虚型溃疡性结肠炎大鼠后,分别给予防风、痛泻要方去防风、痛泻要方、柳氮磺胺吡啶灌胃治疗,正常对照组和模型对照组给予生理盐水。4周后处死大鼠,分离血清和结肠组织,评价结肠组织损伤,采用免疫组化法检测结肠组织COX-2水平,放射免疫法检测血清IL-6的水平。结果:痛泻要方组结肠黏膜的损伤、COX-2蛋白表达,血清IL-6水平较防风组、痛泻要方去防风组有明显下降,痛泻要方组与模型对照组对比,差别有统计学意义(P0.01)。结论:痛泻要方可下调溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜COX-2蛋白的表达,降低血清IL-6炎性因子的水平来促进溃疡的愈合,而防风在全方中发挥了不可替代的佐助作用。     

Caco-2细胞模型验证指标的选择与评判

 目的建立Caco-2细胞模型并探讨验证该模型指标的选择与评判。方法在所建立的Caco-2单层细胞模型上,通过测定跨上皮细胞膜电阻(TEER),比较膜两侧碱性磷酸酶(ALP)活性,计算几种公认的标记物在单层模型转运参数等对Caco-2细胞单层可靠性进行评价。结果TEER在细胞单层形成过程中稳定增长,膜两侧培养液中ALP活性差异逐步加大,细胞旁及跨细胞转运标记物均呈现可预见的低或高表观渗透系数(P_app)值,P-gp标准底物非索非那定双侧转运流出率(ER)大于2。结论建立的Caco-2细胞模型在完整性、细胞极性、通透性以及P-gp表达等方面均符合胃肠吸收化合物机制研究的要求。     

白芷中呋喃香豆素类成分对葛根素、芍药苷、长春新碱肠道转运的影响

目的考察白芷中呋喃香豆素类成分对难吸收药物葛根素、芍药苷、长春新碱吸收的影响,探讨白芷中呋喃香豆素类成分对不同结构药物吸收的影响规律。方法采用Caco-2细胞模型,以各药物透过Caco-2细胞单层的表观渗透系数(Papp)为指标,分别考察白芷中呋喃香豆素类成分(欧前胡素、异欧前胡素、佛手柑内酯、氧化前胡素)对葛根素、芍药苷、长春新碱透过Caco-2细胞单层的影响。结果 4个呋喃香豆素类成分对3种单体成分转运的影响不同,欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素能显著促进葛根素透过Caco-2细胞单层转运(P0.05、0.01),佛手柑内酯对葛根素透过Caco-2细胞单层转运无明显影响;欧前胡素、佛手柑内酯对芍药苷透过Caco-2细胞单层转运无明显影响,但异欧前胡素、氧化前胡素显著抑制芍药苷透过Caco-2细胞单层转运(P0.05、0.01);欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素能显著促进长春新碱透过Caco-2细胞单层转运(P0.05、0.01),佛手柑内酯能显著抑制长春新碱透过Caco-2细胞单层转运(P0.05)。结论不同呋喃香豆素对同一药物的肠道转运的影响不同,虽然同为呋喃香豆素,对药物的转运可表现为完全相反的作用。同一呋喃香豆素与不同药物联合使用,其对联合用药物肠道转运的影响也不相同。     

痛泻要方对兔离体小肠蠕动影响的研究

<正> 痛泻要方(又名白术芍药散)由白术、白芍、防风、陈皮四味中药组成。该方具有疏肝补脾缓急止痛、调气和中的作用,主治肝旺脾虚。主证是:肤胀腹痛,腹痛即泻,泻物不多,泻后舒畅而痛减,脉弦而缓,疗效尚称满意。近年来有些单位利用痛泻要方治疗肠炎取得较好的临床效果。痛泻要方,目前国内尚未见有动物实验研究的报道。本文仅就痛泻要方及其中各药对兔离体小肠蠕动的影响做初步报告,以供同道们参考。     

痛泻要方加减引经药防风对肠易激综合征大鼠水液代谢和5-HT系统的调控作用

目的:探讨引经药防风对痛泻要方调控腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠水液代谢和5-羟色胺(5-HT)信号系统的影响。方法:将40只IBS-D SD大鼠随机分为模型组,痛泻要方缺防风组(26 g·kg^-1),痛泻要方全方组(30 g·kg^-1)和痛泻要方倍用防风组(34 g·kg^-1),另取10只正常SD大鼠作为正常组,除正常组外,其余各组采用母子分离联合乙酸灌肠法,建立腹泻型肠易激综合征大鼠模型,造模后各组灌胃给予相应药物,连续14 d,观察并计算腹泻指数和粪便含水量,微量法检测肠黏膜Na^+-K^+-ATP酶活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测5-HT的含量,化学发光法检测单胺氧化酶-A(MAO-A)活性,通过免疫组化法检测结肠中水通道蛋白4(AQP4)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测下丘脑和结肠中5-HT受体3(5-HT3R),5-HT受体4(5-HT4R)和5-HT转运体(SERT)的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠的粪便含水量,5-HT含量,MAO-A酶活性,5-HT3R表达均显著升高(P<0.01),肠黏膜Na^+-K^+-ATP酶活性,AQP4,5-HT4R和SERT表达均显著降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠的腹泻指数和粪便含水量、下丘脑与结肠中的5-HT含量,MAO-A酶活性,5-HT3R蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),但痛泻要方缺防风组5-HT3R蛋白表达未见明显差异,各给药组肠黏膜Na^+-K^+-ATP酶活性,AQP4,5-HT4R和SERT表达均明显增加(P<0.05,P<0.01);与痛泻要方缺防风组比较,痛泻要方全方组和痛泻要方倍用防风组大鼠腹泻指数和粪便含水量,5-HT含量及MAO-A酶活性,5-HT3R的蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),Na^+-K^+-ATP酶活性和SERT的蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论:防风可增强痛泻要方改善IBS-D水液代谢、调控5-HT信号系统多靶点的效应,进一步证实了防风的引经增效作用。     

四逆散合痛泻要方加味治疗腹泻型肠易激综合征60例临床观察

目的观察四逆散合痛泻要方加味治疗腹泻型肠易激综合征（IBS）的临床疗效。方法将100例腹泻型IBS患者随机分为2组。对照组40例子盐酸洛哌丁胺胶囊治疗,治疗组60例予四逆散合痛泻要方治疗,2组疗程均为4周。疗程结束后观察疗效,并记录患者中医症状评分。结果2组治疗后主要症状评分均较本组治疗前减少（P〈0．05）,且治疗组减少明显（P〈0．05）。治疗组总有效率91．7％,对照组总有效率75．0％,2组总有效率比较差异有统计学意义（P〈0．05）,治疗组疗效优于对照组。结论四逆散合痛泻要方加味治疗腹泻型IBS临床疗效确切。     

痛泻要方合桃红四物汤治疗溃疡性结肠炎疗效观察

目的:观察痛泻要方合桃红四物汤治疗慢性溃疡性结肠炎的临床疗效。方法:将80例慢性溃疡性结肠炎患者随机分为两组。治疗组40例以痛泻要方合桃红四物汤口服治疗;对照组40例口服柳氮磺胺吡啶片。两组均10 d为1个疗程,治疗3个疗程,随访1年后判定疗效。结果:治疗组总有效率为100%,复发率7.5%;对照组总有效率为77.8%,复发率40%,两组比较有显著性差异(P<0.05)。电子肠镜检查比较,治疗组总有效率为97.5%,对照组为72.5%,两组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:痛泻要方合桃红四物汤治疗慢性溃疡性结肠炎具有提高疗效,减少复发等优点。     

痛泻要方加味治疗肠易激综合征（腹泻型）肝郁脾虚证临床研究

目的 观察痛泻要方加味治疗肠易激综合征（腹泻型）肝郁脾虚证的临床疗效和安全性.方法 将80例患者随机分为治疗组与对照组各40例,对照组采用马来酸曲美布汀胶囊治疗,治疗组采用痛泻要方加味,疗程2周,观察两组临床疗效及安全性指标.结果 治疗组总有效率92.05％,高于对照组的75.00％（P＜0.05）：治疗组症状积分改善优于对照组（P＜0.05）;两组患者均未见血尿便常规及肝肾功能异常.结论 痛泻要方治疗肠易激综合征（腹泻型）肝郁脾虚证临床疗效确切,安全可靠.     

痛泻要方配伍疏肝药治疗休息痢80例

目的 观察痛泻要方配伍疏肝药治疗休息痢肝郁脾虚证的疗效.方法 将本院门诊160例休息痢患者随机分为治疗组和对照组,对照组服用水杨酸柳氮磺胺吡啶加蒙脱石散冲剂,而治疗组服用痛泻要方配伍疏肝药,治疗两疗程后,比较两组患者的临床有效率及临床症状缓解情况.结果 治疗后两组比较,治疗组完全缓解70例,有效6例,总有效率95.00%;对照组完全缓解40例,有效15例,总有效率68.75%.两组止泻、止痛、治疗纳差等积分,治疗组明显低于对照组,且差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论 痛泻要方配伍疏肝药具有疏肝解郁、健脾祛湿的作用,对于治疗肝郁脾虚型休息痢具有良好效果,值得深入研究.     

痛泻要方对内脏高敏性大鼠结肠MC形态学影响的研究

目的:通过痛泻要方对内脏高敏性大鼠结肠形态学、结肠MC形态学、结肠MC密度的影响,研讨其对内脏高敏性大鼠结肠MC干预作用。方法:采用乳鼠结肠刺激方法复制内脏高敏性大鼠IBS模型,以HE染色法观察痛泻要方对各组结肠组织形态学的影响,以甲苯胺蓝改良法对MC进行染色,观察痛泻要方对各组结肠MC形态学、密度的影响。结果:经乳鼠结肠刺激方法复制内脏高敏性模型后,结肠形态学变化不明显,MC边界不清,呈不规则形状,且MC颗粒增多,经痛泻要方干预后,MC形态改善、数量降低。结论:痛泻要方降低内脏高敏性大鼠肠道敏感性与改善MC形态、降低MC数量有关。     

中药复方通腑颗粒对失代偿期肝硬化患者肠黏膜屏障的保护作用

目的 探讨中药复方通腑颗粒对失代偿期肝硬化患者肠黏膜屏障的保护作用。 方法 选取失代偿期肝硬化患者50例,随机分为标准治疗组（26例）和通腑颗粒组（24例）,疗程2周,并以30名健康成年人作为正常对照。观察治疗前后两组患者的肠黏膜通透性（尿中乳果糖/甘露醇排出率）、血浆内毒素水平及肠道菌群变化,并与正常对照组进行比较。结果 肝硬化患者治疗前与正常对照组比较,肠黏膜通透性、血浆内毒素水平显著升高,肠道双歧杆菌数量减少,肠杆菌数量增多（P＜0.05,P＜0.01）。治疗2周后,通腑颗粒组血浆内毒素水平、尿中乳果糖排出率较治疗前显著降低,与标准治疗组比较差异有统计学意义（P<0.05）,同时通腑颗粒组肠道双歧杆菌较治疗前数量增多,肠杆菌数量减少（P<0.05,P<0.01）,达到正常对照组水平。结论 通腑颗粒可以改善肠黏膜屏障功能,纠正肠道菌群紊乱,减轻失代偿期肝硬化患者的肠源性内毒素血症。     

痛泻要方合参苓白术散治疗肝郁脾虚腹泻型肠易激综合征随机平行对照研究

[目的]观察痛泻要方合参苓白术散治疗肝郁脾虚腹泻型肠易激综合征疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将60例住院患者按就诊顺序随机分为两组,对照组30例,马来酸曲美布汀片100mg/次,3次/d,口服。治疗组30例,痛泻要方合参苓白术散(炒白芍20g,炒白术15g,陈皮9g,防风6g,茯苓30g,薏苡仁20g,扁豆、山药各30g,砂仁6g,炒莱菔子10g,合欢皮30g,佛手12g)1剂/d,水煎服,分早晚两次。观察症状体征与症候积分、不良反应、一般指标。4周为1疗程,连续治疗1疗程,随访180d,判定疗效。[结果]治疗组痊愈6例,显效15例,有效6例,无效3例,总有效率90.00%。对照组痊愈3例,显效12例,有效6例,无效9例,总有效率70.00%。治疗组疗效优于对照组(P0.05)。中医证候积分减少治疗组优于对照组(P0.01)。两组均无明显不良反应。[结论]痛泻要方合参苓白术散治疗肝郁脾虚腹泻型肠易激综合征疗效满意。     

辨证治疗腹泻型肠易激综合征60例临床观察

目的 观察中医辨证分型治疗腹泻型肠易激综合征的临床疗效。方法将60例符合罗马Ⅲ诊断标准的腹泻型肠易激综合征患者辨证分为3型,肝郁脾虚型（24例）予痛泻要方协定方治疗,脾气虚弱型（20例）予参苓白术散协定方治疗,脾。肾阳虚型（16例）予四神丸合理中汤协定方治疗。3组疗程均为8周。采用目前国际公认的肠道症状尺度表和生活质量量表,观察治疗前后各组患者肠道症状及生活质量的变化情况。结果肝郁脾虚组有效率为83．3％,脾气虚弱组为85．0％,脾肾阳虚组为75．0％,组间疗效差异无统计学意义（P〉0．05）。3组肠道症状、生活质量和排便情况在治疗后均显著改善（P〈0．05）。结论中医辨证分型治疗腹泻型肠易激综合征疗效确切。