恶性疟原虫体外培养的同步化方法

本文就恶性疟原虫体外培养的同步化方法加以综述,主要对恶性疟原虫的同步化方法,如传统的浓度分离法、渗透压分离法、Percoll梯度法、温度周期法、阿非迪霉素法,及近几年发展起来的磁性分离法及流式细胞分析仪法进行了介绍.     

恶性疟原虫4个分离株的体外培养

为了筛选在体外培养中能形成成熟配子体的虫株,以建立恶性疟原虫蚊期和红外期实验模型,我们于1990年在云南南部疟疾流行区从4个病人分离出4个恶性疟原虫分离株,暂定名为B-1(Burma-1),FCC-901/YN,FCC-902/YN,FCC-903/YN,并进行了体外培养观察。     

海南省东方市恶性疟原虫对氯喹敏感性的体外检测

目的：检测海南省东方市东方地区恶性疟原虫对氯喹的敏感性。方法：采用WHO标准的体外微量法。结果：1986--1987年和1999--2001年，分别检测恶性疟患102例和101例，抗性率为63．73％和71．29％。IC50分别为1．08和1．10pmol/μl血，平均完全抑制裂殖体形成的药物浓度为6．19和5．57pmol/μl血。结论：当地恶性疟原虫对氯喹抗性仍然比较严重。     

恶性疟原虫红内期在体外存活时间的实验观察

目的 观察恶性疟原虫红内期在体外存活时间，分析其培养虫血的感染活力。方法 采用Tragers等常规体外培养方法，待恶性疟原虫体外连续培养的原虫率达到15％～20％时，吸取含虫血于保存液置4℃贮存，以后每天吸取少量虫血培养，24h观察原虫生长情况。结果 恶性疟原虫血4℃贮存2d疟原虫减虫率80．6％，10d几乎为100％；11d已未发现疟原虫。结论 估算体外培养的恶性疟原虫红内期在体外4℃贮存，存活时间不超过11d。     

两种恶性疟原虫复合抗原免疫血清对疟原虫体外抑制作用的比较

为了比较恶性疟原虫复合抗原HBsAg/45肽和β-半乳糖苷酶/45肽的免疫效果,我们将这两种含45肽抗原的融合蛋白免疫家兔后进行体外抑制试验。结果表明颗粒状的HBsAg/45肽免疫血清对原虫的抑制作用明显大于线状的β-半乳糖苷酶/45肽免疫血清。提示:恶性疟原虫杂合45肽连于HBsAg颗粒上有助于提高其免疫保护作用。     

4℃保存的红细胞在恶性疟原虫体外培养中的寿命观察

本文报道4C保存的红细胞,在恶心疟原虫体外培养中,通过红细胞感染率、疟原虫生长发育及血液质量的观察,结果表明红细胞寿命可长达75d。提示红细胞可以延长使用至50d。     

体外培养恶性疟原虫的实验报告

<正>疟原虫属真球虫目(Eucoccidiida)、疟原虫科(Plasmodidae)、疟原虫属(Plasmodium),是疟疾(malaria)的病原体疟原虫通过被感染的蚊虫叮咬传播疟疾。这种传染病每年夺去大约100万人的性命,导致4亿人感染。     

恶性疟原虫地理株体外培养及vat基因转录方法的建立

目的建立恶挫疟原虫地理株连续体外培养方法,并采用荧光定量PCR技术分析培养虫株var基因转录类型。方法采用常规RPM11640培养基和添加AlbumaxIl等成分,建立2株恶性疟原虫地理株的体外培养,并采用荧光定量PCR技术检测中晚期虫体var基因转录变化。结果成功体外连续培养2株恶性疟原虫野生株,并建立了荧光定量PCR检测var基因转录的方法,用该方法检测出该虫株var基因优势转录类别。结论建立的疟原虫体外培养方法和var基因转录检测技术可用于我国恶性疟原虫var基因致病作用的分析。     

用乳酸脱氢酶为靶分子的免疫层析技术检测恶性疟原虫

目的 建立一种免疫胶体金层析(GICA)法用于恶性疟原虫的检测。方法 采用杂交瘤技术制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDHpf)单抗,利用筛选出来的单抗制成诊断恶性疟原虫的免疫层析条,以镜检和PCR法为对照,用GICA条检测门诊"四热"病人血样,评价其敏感性和特异性,并对其稳定性进行了初步研究。结果 筛选出4株抗LDHpf单抗,间接ELISA表明4株单抗仅与恶性疟原虫发生反应,而与间日疟原虫、红细胞蛋白、刚地弓形虫和日本血吸虫不发生交叉反应。Western-blot结果显示4株单抗能识别恶性疟原虫相对分子质量约为33000处的虫源蛋白。以镜检法和PCR法为标准,GICA条检测恶性疟原虫的敏感性分别为88.37%和86.67%,GICA与镜检法的符合率均为91.55%。结论 GICA检测恶性疟原虫简易快速、灵敏度高,无需特殊仪器设备,有望成为一种恶性疟原虫快速免疫诊断试剂盒。     

The development of a recombinant hybrid protein of Plasmodium falciparum and analysis of its antigenicity and protectivity

ＴｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｙｂｒｉｄｐｒｏｔｅｉｎｏｆＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｉｔｓａｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙａｎｄｐｒｏｔｅｃｔｉｖｉｔｙ￥ＬｉＱｕａｎｚｈｅｎ（李全贞）；Ｌｉ...     

抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的研制与胶体金免疫层析方法的建立

目的 制备抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断恶性疟的胶体金免疫层析方法。方法 用基因重组的GDH蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定其免疫球蛋白亚类及其亲和力。用protein-G亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法,选择最佳反应模式对疟疾血样进行检测。结果 筛选出6株能稳定分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类均为IgG₁,亲和常数(κ)介于1×10^-8~2.82×10^-10。以镜检法为参照,建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟的敏感性为86.66%,特异性为96.43%。结论 建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟快速、简便、可靠,有望开发成为恶性疟快速诊断试剂盒。     

抗恶性疟McAb的筛选与恶性疟免疫诊断研究

用单克隆抗体(McAb)夹心斑点免疫金银染色法(Dot-IGSSA)对11株抗恶性疟McAbs和4株抗食蟹猴疟原虫McAbs进行了筛选,其中McAbs11G5、13A2、13A1可包被到硝酸纤维素膜(NcF)上作为捕获抗体,McAb14D9可用于胶体金探针的标记。此外,为增加胶体金的标记效果和胶体金标记McAb14D9探针的敏感性,还对McAb14D9的等电点(pI)进行了测定,其pI为6.35。同时用筛选出的最佳McAbs对10份恶性疟病人感染血和10份健康人血样品进行了检测,并对这几株McAbs的交叉反应性进行了测定,结果表明McAbs11G5、13A1与14D9夹心时,对云南株和安微株恶性疟原虫红内期抗原呈现交叉反应,而且McAb13A1与14D9夹心时还可以用于检测间日疟抗原。     

恶性疟原虫红内期两个重要候选抗原的相互影响

目的:分析恶性疟原虫红内期2个疫苗候选抗原PfAMA-1(Ⅲ)和PfMSP1-19的相互关系.方法:用ELISA和竞争ELISA检测蛋白和抗体的反应,一些抗体用特定的蛋白进行预吸附.结果:PfMSP1-19蛋白能去除恶性疟疾患者血浆对PfAMA-1(Ⅲ)的反应,这种能力是剂量依赖的,完全去除需要高的蛋白浓度;PfMSP1-19蛋白也能去除兔抗PfCP-2.9血清、兔抗PfAMA-1(Ⅲ)血清、亲和纯化的兔抗PfAMA-1(Ⅲ) IgG对PfAMA-1(Ⅲ)的反应.结论:酵母表达的PfMSP1-19重组蛋白能吸附PfAMA-1(Ⅲ)特异抗体.     

海南省乐东县恶性疟原虫对抗疟药的敏感性测定

目的了解乐东县恶性疟原虫对抗疟药的敏感情况,以指导用药. 方法采用Rieckmann体外微量法,于1999年测定氯喹、哌喹、咯萘啶、青蒿琥酯、双氢青蒿素及其加用氯喹的敏感性. 结果测定上述药物的ID50依次为244nmol/L、464nmol/L、7lnmol/L、3nmol/L、4nmol/L与11/1.32nmol/L.完全抑制裂殖体形成的平均浓度（CIMC）依次为353nmol/L、672nmol/L、102nmol/L、10nmol/L、13nmol/L与19/1.86nmol/L.前3种药的抗性率依次为85.71%、42.86%与14.29%.结论恶性疟原虫对氯喹、哌喹、咯萘啶产生抗性,对青蒿琥酯与双氢青蒿素均敏感,氯喹与双氢青蒿素联用体外测定有增效作用.     

HRPII双抗夹心ELISA检测恶性疟原虫体外敏感性研究

目的验证富组蛋白2双抗夹心酶联免疫吸附法（Histidine—Rich Protein 2 Double—Site Sandwich Enzyme—Linked Immunosorbent Assay,HRPII—ELISA）在恶性疟原虫体外敏感性检测中的适用性。方法运用HRPII-ELISA测定氯喹、咯萘啶、青蒿琥酯、蒿甲醚及双氢青蒿素等五种抗疟药物对体外培养的恶性疟原虫氯喹敏感株与氯喹抗性株的体外敏感性,并对所测得的量效曲线（dose-response curves）及50％有效抑制浓度（IC50）与WHO推荐的Rieklnann体外微量法比较。结果HRPH—ELISA法测定的五种药物对恶性疟原虫氯喹敏感株的IC50值依次为4．7nmol/L、2．90nmol／L、3．38nmol／L、4．64nmol／L、2．72nmol／L,对恶性疟原虫氯喹抗性株的IC50值依次为110．4nmol／L、3．85nmol／L、4．39nmol／L、3．90nmol／L、3．27nmol／L;同时,将上述结果与体外微量法所得的结果进行相关性分析,R2=0．96,P〈0．001,两种方法结果基本一致。结论HRPII—ELISA法可用于恶性疟原虫对抗疟药物的体外敏感性检测。