lncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌T24细胞生物学特性的影响

目的 探究lncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌组织中的表达和对膀胱癌T24细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响.方法 QPCR检测膀胱癌组织和细胞系中lncRNA ZFPM2-AS1的表达;将阴性对照siRNA和lncRNA ZFPM2-AS1 siRNA转染至膀胱癌T24细胞中,qPCR检测转染后细胞中lncRN...     

半乳糖凝集素3 在膀胱癌组织中表达和临床意义及其对T24 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨半乳糖凝集素3（galectin-3）在膀胱癌组织中的表达与患者临床病理特征的关系及其对膀胱癌T24 细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法：收集2014 年5 月至2016 年6 月在川北医学院附属医院收治的、经病理切片确诊的104 例膀胱癌患者的癌和癌旁组织标本,用免疫组织化学法检测膀胱癌和癌旁组织中半乳糖凝集素3 蛋白的表达,分析其表达与患者临床病理特征的相关性。将siRNA-Gal3、siRNA-Control 分别转染至T24 细胞,用Weatern blotting 检测细胞的半乳糖凝集素3 蛋白表达水平,MTT法检测细胞的增殖,Transwell 实验检测细胞的侵袭,流式细胞术检测细胞的凋亡。结果：膀胱癌组织中半乳糖凝集素3 阳性表达率显著高于癌旁组织（73.1% vs 9.6%,P<0.05）,膀胱癌组织中半乳糖凝集素3 的表达与组织学分级、肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和TNM分期均有关（均P<0.05）,与性别和年龄无关（P>0.05）。siRNA-Gal3 显著下调半乳糖凝集素3 蛋白的表达水平（P<0.05）,干扰半乳糖凝集素3 表达后：T24 细胞的增殖能力和侵袭能力均明显降低（均P<0.05）;细胞的凋亡率明显增加（P<0.05）。结论：半乳糖凝集素3 在膀胱癌组织中呈高表达,并与膀胱癌患者临床病理特征存在密切关系。干扰半乳糖凝集素3 蛋白的表达可抑制膀胱癌T24 细胞的增殖与侵袭,促进细胞的凋亡。     

慢病毒介导NDRG2基因过表达抑制人膀胱癌T24细胞的侵袭和迁移

目的： 观察N-Myc下游调节基因-2（N-Myc downstream-regulated gene 2, NDRG2）过表达对人膀胱癌T24细胞体外侵袭和迁移的影响。 方法： 采用携带NDRG2基因的慢病毒Lenti-NDRG2感染T24细胞,构建稳定过表达NDRG2的细胞株。Western blotting检测T24细胞中NDRG2、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2和MMP-9的表达,Transwell体外迁移和侵袭实验观察过表达NDRG2对T24细胞体外迁移和侵袭的影响。 结果： 建立了稳定过表达NDRG2的T24细胞株。与Lenti-Lacz组和空白对照组相比,Lenti-NDRG2组NDRG2蛋白的表达\[(30.1±1.27) vs (9.9±1.24)、(8.2±1.28), P<001\]明显提高;Lenti-NDRG2组MMP-2 \[(13.5±1.32) vs (30.7±1.29)、(28.8±1.30), 均P<0.01\]和MMP-9 \[(11.7±127) vs (25.2±1.28)、(26.4±1.31), 均P<0.01\]的表达明显降低;Lenti-NDRG2组T24细胞的侵袭细胞数\[(18.1±3.4) vs (88.5±4.2)、(90.2±4.1)个,均P<0.01\]和迁移细胞数\[(20.1±3.5) vs (109.4±5.6)、(113.0±4.9)个,均P<0.01\]明显减少。 结论： 慢病毒介导的NDRG2基因过表达可能通过降低MMP-2和MMP-9的表达而抑制人膀胱癌T24细胞的转移与侵袭。     

微小RNA-106a在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌T24细胞增殖、侵袭作用的影响

目的:观察微小RNA-106a（miR-106a）在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌T24细胞增殖、侵袭作用的影响。方法:提取35例膀胱癌组织及正常膀胱组织中的总RNA，实时定量RT-PCR法检测miR-106a在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达量；培养膀胱癌T24细胞，分成实验组及对照组，实验组转染miR-106a mimics，对照组转染空白脂质体，噻唑蓝(MTT)法检测转染miR-106a mimics后对T24细胞增殖的影响，流式细胞仪检测T24细胞周期变化，Transwell侵袭小室检测T24细胞侵袭能力。结果:膀胱癌组织中miR-106a的表达量显著低于正常膀胱组织。膀胱癌T24细胞转染miR-106a mimics后，T24细胞增殖能力降低，细胞周期停滞于G1期，Transwell侵袭小室检测提示T24细胞侵袭能力降低。结论:miR-106a的表达量在膀胱癌组织中减少，miR-106a过表达抑制膀胱癌T24细胞的增殖及侵袭能力。     

circFBXL5通过靶向miR-515-5p影响膀胱癌T24细胞的恶性生物学行为及其分子机制

目的：探讨circFBXL5通过靶向miR-515-5p影响膀胱癌T24细胞的增殖、迁移、侵袭及其分子机制。方法：收集2020年4月至2020年6月间在苏州市中西医结合医院手术切除的41例膀胱癌组织及其癌旁组织,采用qPCR法检测circFBXL5、miR-515-5p的表达;双荧光素酶报告实验验证circFBXL5与miR-515-5p之间的靶向关系,体外培养人膀胱癌T24细胞,实验分为si-NC组、si-circFBXL5组、anti-miR-NC⁺si-circFBXL5组和si-circFBXL5⁺anti-miR-515-5p组;MTT法、细胞克隆形成实验、FCM、Transwell实验和WB法分别检测转染后T24细胞的增殖、细胞克隆形成、迁移、侵袭和凋亡及BAX、Bcl-2蛋白水平。结果：膀胱癌组织中circFBXL5呈高表达,miR-515-5p呈低表达(均P<0.05);circFBXL5靶向且负向调控miR-515-5p的表达;敲减circFBXL5后T24细胞的增殖抑制率、凋亡率和BAX蛋白水平均显著增高(均P<...     

膀胱癌组织GPR48表达及其临床意义

目的 G蛋白偶联受体48(G protein coupled receptor 48,GPR48)在人类细胞信号传导过程中起重要作用,并且与人类肿瘤的发生相关.本研究旨在探讨膀胱癌组织GPR48的表达水平,分析其与膀胱癌恶性程度的相关性.方法 选取2014 01-01 2016 05 20郑州大学附属郑州中心医院泌尿外科住院行手术切除治疗的膀胱癌组织标本60例和癌旁组织(距肿瘤组织＞2 cm)标本8例,BIU-87、5637和T24 3种膀胱癌细胞系作为研究对象,通过RT-PCR和蛋白质印迹法检测GPR48的表达量,收集60例患者性别、年龄、病理分级等临床病理资料,并检测其与GPR48表达的相关性.结果 GPR48在膀胱癌旁组织及癌旁组织中均有表达,膀胱癌组织和癌旁组织GPR48 mRNA表达量分别为0.080±0.048和0.041±0.032,差异有统计学意义,t=-3.047,P=0.005.膀胱癌组织和癌旁组织GPR48蛋白表达量分别为0.533±0.307和0.144±0.086,差异有统计学意义,t=-3.541,P=0.001.分析患者临床病理资料发现,GPR48的表达与患者性别无关,P＞0.05;而与患者年龄、病理分级和临床分期呈正相关,均P＜0.01.BIU-87、5637和T24细胞系中GPR48 mRNA的表达量分别为0.021±0.002、0.054±0.006和0.145±0.003,GPR48蛋白的表达量分别为0.718±0.076、0.905±0.121和1.205±0.08.T24细胞系GPR48 mRNA及蛋白表达量显著高于5637细胞系,均P＜0.05;5637细胞系GPR48 mRNA及蛋白表达量显著高于BIU-87细胞系,均P＜0.05.结论 GPR48表达与膀胱癌的恶性程度密切相关,有望成为一种潜在的生物标志物来预测膀胱癌的预后.     

选择性环氧合酶2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的作用

背景与目的:环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)与膀胱癌的发生发展密切相关,因此COX-2抑制剂对于膀胱癌可能具有潜在的抗肿瘤效应.本实验旨在探讨选择性COX-2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的抑制作用.方法:用四甲基偶氮唑蓝还原法(MTT)研究选择性COX-2抑制剂SC-58125、塞来昔布(celecoxib)和非选择性COX抑制剂吲哚美辛(indomethacin)对T24细胞增殖的影响;用流式细胞术、DNA电泳和Hoechst33258荧光染色3种方法检测SC-58125作用下T24细胞的凋亡,同时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax基因的变化.结果:在12.5 μmol/L至200 μmol/L的剂量范围内,SC-58125、塞来昔布及吲哚美辛均能不同程度地抑制T24细胞的增殖,以SC-58125的抑制作用最强,IC50在25 μmol/L～50 μmol/L之间;3种凋亡检测方法均观察到SC-58125作用后凋亡细胞的比例增加,其中100 μmol/L的SC-58125作用于T24细胞6 h和12 h后,流式细胞仪测得凋亡细胞的比例分别为(7.95±1.88)%和(12.5±2.42)%,较对照组增加(P＜0.05),但细胞内与凋亡相关的Bcl-2和Bax基因表达没有变化.结论:选择性COX-2抑制剂体外可抑制T24细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.     

MTA1和nm23-H1蛋白表达与乳腺癌生物学行为之间的关系

目的探讨肿瘤转移相关基因（NTA1）和nm23-H1蛋白表达与乳腺癌生物学行为之间的关系。方法运用免疫组化S-P法检测56例乳腺癌组织中NTAl、nm23-H1蛋白的表达。结果56例乳腺癌组织中39例NTA1蛋白阳性表达,阳性率为69．6％,NTA1高表达与乳腺癌组织学分级、临床分期和淋巴结转移关系密切（P〈0．05）;3l例nm23-H1蛋白阳性表达,阳性率为55．4％,nm23-H1低表达与乳腺癌组织学分级、临床分期和淋巴结转移关系密切（P〈0．05）;乳腺癌组织中NTA1、nm23-H1蛋白表达呈负相关（P〈0．05）。结论NTA1和nm23-H1蛋白表达与乳腺癌分化程度、淋巴结转移和预后关系密切,可作为诊断乳腺癌患者转移复发的参考指标,并有望成为乳腺癌基因治疗的新靶点。     

环氧化酶-2 抑制剂Nimesulide对膀胱癌T24细胞体外生长的抑制作用

 目的 观察环氧化酶-2（COX-2）抑制剂Nimesulide（NIM）对人膀胱癌T24细胞株体外生长的影响，并探讨其作用机制。方法 采用细胞形态学、MTT法、流式细胞术、吖啶橙-溴化乙啶双染法（AO-EB）等技术检测NIM对体外培养的人膀胱癌细胞株T24生长的抑制效应。结果 细胞形态学观察可见NIM对T24细胞生长具有明显的细胞毒作用；MTT法、流式细胞术分析显示NIM能明显抑制T24细胞的增殖，且呈剂量、时间依赖关系；细胞周期分析表明，NIM能使T24细胞G0／G1期细胞比例升高，S期和G2／M期细胞比例下降；流式细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”，细胞凋亡率与NIM作用时间和剂量相关；荧光显微镜检查显示NIM处理的T24细胞AO-EB双染色后，细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光，典型细胞可见新月形改变，固缩或片段化的核。结论 COX-2抑制剂NIM对T24细胞生长具有明显的抑制作用，其作用机制可能与阻断细胞周期、诱导细胞凋亡等有关。     

miR-144-3p靶向调控E2F3抑制膀胱癌T24细胞的增殖与侵袭

目的:探讨miR144-3p在膀胱癌组织及细胞中的表达及其对T24细胞增殖与侵袭的影响.方法:选用2018年2月至2018年12月空军军医大学唐都医院手术切除的36例膀胱癌组织及10例正常膀胱上皮组织标本,以及人膀胱癌细胞株T24和正常尿路上皮细胞株SV-HUC-1,用qPCR法检测膀胱癌组织和细胞中miR144-3p...     

lncRNA HULC在膀胱癌组织中的表达及其对5637细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HULC在膀胱癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系,以及沉默HULC对膀胱癌5637细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响.方法:选取2014年6月至2017年12月郑州人民医院手术切除的102例膀胱癌患者的癌及癌旁组织标本,以及人膀胱癌细胞株5637和人正常膀胱上皮细胞株SV...     

siRNA干扰HMGB1表达对膀胱癌T24株细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制

目的:探讨高迁移率族蛋白1(high-mobility group box 1,HMGB1)对膀胱癌T24株细胞的增殖、凋亡及恶性生物学行为的影响及其潜在作用机制.方法:收集2014年12月至2016年1月期间重庆医科大学附属第一医院泌尿外科病区手术切除的20例膀胱癌以及相应癌旁组织,免疫组化方法检测膀胱癌和癌旁组织HMGB1表达差异;应用RNAi处理T24细胞并分为空白对照组(Blank)、阴性对照组(NC)和干扰组(siHMGB1);CCK-8、流式细胞术、划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测HMGB1敲低后对T24细胞增殖、凋亡、周期、迁移以及侵袭能力的影响;Western blotting检测不同膀胱癌细胞株BIU-87和T24细胞的HMGB1表达水平以及敲低HMGB1对T24细胞恶性生物学行为相关蛋白的影响.结果:与癌旁组织相比,HMGB1在膀胱癌组织处于高表达状态[(67.33±4.91)vs (12.00±3.79),P＜0.05].与NC组和Blank组相比,siHMGB1组细胞增殖受抑制(P＜0.05);流式细胞术提示敲低HMGB1后细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G0/G1期;划痕实验及Tran-swell侵袭实验显示,敲低HMGB1后细胞迁移(P＜0.05)以及侵袭[穿膜细胞数:(16.33±1.45)vs(35.00±1.53)、(34.00±2.08)个,均P＜0.05]能力减弱;Western blotting结果显示敲低后E-钙黏着蛋白表达上调(P＜0.05),N-钙黏着蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶(metrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、细胞周期蛋白D1、c-Myc、β-联蛋白表达下调(均P＜0.05).结论:HMGB1可通过促进膀胱癌细胞EMT进而增强其恶性生物学行为,其机制可能是通过β-联蛋白信号通路介导.     

富脯氨酸蛋白11 在食管癌组织中的表达及其对TE-2 细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨富脯氨酸蛋白11（PRR11）在食管癌组织中的表达及其在体外对人食管癌TE-2 细胞侵袭和迁移能力的影响。方法：选取2016 年10 月至2018 年10 月郑州大学第二附属医院胸外科经病理确诊为食管癌患者80 例,收集其手术切除的食管癌组织及相应的癌旁组织标本。用qPCR检测食管癌组织或细胞系中PRR11 mRNA的表达水平,Log-rank Test 法分析食管癌组织中PRR11 mRNA的表达与患者一般资料、组织学分级、淋巴结转移、浸润深度及TNM分期的关系,Kaplan-Meier 曲线分析法分析PRR11 mRNA与食管癌患者预后的关系。以慢病毒shRNA表达载体感染食管癌TE-2 细胞,构建敲低PRR11 的细胞系及相应的对照细胞系作为本研究的shPRR11#1、shPRR11#2 及对照组,qPCR及WB实验分别验证细胞株中PRR11 mRNA及蛋白的表达水平,MTT实验检测感染后细胞的增殖能力,Transwell 实验检测其侵袭和迁移能力。结果：PRR11 mRNA在食管癌组织中的表达高于癌旁组织（P<0.05）,PRR11 mRNA的过表达与食管癌的组织学分级、淋巴结转移、浸润深度及TNM分期均显著相关（均P<0.05）,PRR11 高表达与食管癌患者预后不良显著相关（P<0.05）;shPRR11#1、shPRR11#2 组细胞中PRR11 mRNA及蛋白表达显著低于对照组细胞（P<0.05 或P<0.01）。shPRR11#1、shPRR11#2 组细胞的增殖能力低于对照组（P<0.05 或P<0.01）,Transwell侵袭及迁移实验结果显示,shPRR11#1、shPRR11#2 组平均每个视野内细胞数均显著低于对照组（P<0.01）。结论：PRR11 高表达于食管癌组织中,与食管癌的发生、进展及患者预后密切相关;体外实验也证明了敲低PRR11 表达可以抑制食管癌的增殖、侵袭和迁移能力,是潜在的食管癌靶标。     

染料木黄酮抑制多柔比星诱导的多药耐药膀胱肿瘤T24细胞增殖的实验研究

 【摘要】　目的　建立膀胱肿瘤T24细胞多药耐药（MDR）模型并鉴定其耐药特性,观察染料木黄酮对多柔比星（ADM）诱导的多药耐药T24（T24／ADM）细胞增殖的影响。方法　体外培养膀胱肿瘤T24细胞,采用ADM浓度梯度诱导,培养出具有稳定MDR表型的T24／ADM耐药细胞株,光镜观察新建细胞株的形态学特点,MTT法检测多种药物对耐药细胞株的增殖活性以及染料木黄酮对T24／ADM细胞增殖的有效作用浓度。结果　用ADM诱导6个月后的T24／ADM细胞形态无明显改变;T24／ADM细胞对多种化疗药物的耐受能力均明显提高,与亲本细胞株T24相比,耐药细胞株T24／ADM对ADM的耐药指数达15.79,对5-氟尿嘧啶、顺铂、环磷酰胺的耐药指数依次为4.68、3.81、5.53。用染料木黄酮作用于T24／ADM细胞后,对T24／ADM细胞的半数抑制浓度为40 μg／ml,质量浓度为20～100 μg／ml的染料木黄酮具有抑制T24／ADM细胞增殖的作用。结论　建立的T24／ADM细胞具有多药耐药性,达到实验要求。质量浓度为20～100 μg／ml的染料木黄酮可部分抑制人类膀胱肿瘤T24／ADM细胞的增殖。     

结肠癌组织中MTA1的表达水平及定位与患者预后的相关性研究

目的研究结肠癌组织中MTA1的表达水平及在细胞核、细胞质内的定位情况,分析其与结肠癌预后的相关性,并探讨其可能的机制。方法采用免疫组织化学染色方法在结肠癌组织芯片(30例肠癌组织、10例转移组织、8例正常组织)中检测MTA1与Sox2蛋白的表达水平及定位情况,统计分析二者与临床病理资料及预后的相关性;并初步探讨Sox2与MTA1表达的相关性。结果①肠癌组织及转移组织中MTA1细胞质染色强度均显著高于正常组织(P<0.05),而肠癌组织与转移组织间MTA1表达差异不显著(P>0.05);②MTA1在细胞质的表达强度与临床分期呈正相关(P=0.03),生存时间<5年的肠癌患者的肿瘤组织细胞质内MTA1的表达强度显著高于生存时间≥5年的患者组织(P=0.007);③Sox2在肠癌组织细胞核及细胞质内的表达均与MTA1细胞质表达具有显著的相关性(P<0.01)。结论 MTA1细胞质过表达提示结肠癌预后不良,这可能与Sox2的过表达相关。