姜黄素通过抑制NF-κB信号通路减轻高糖致H9C2心肌细胞损伤的实验研究

[目的] 观察姜黄素对炎症反应、氧化应激相关指标及细胞核转录因子κB（NFκB）信号通路的影响,探讨其减轻高糖致H9C2细胞损伤的作用机制。[方法] 高糖孵育建立H9C2心肌细胞损伤模型。实验分为正常对照组、高糖对照组和姜黄素各剂量组（2.5、5、10、20 μmol/L）。酶联免疫吸附（ELISA）法测定细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、乳酸脱氢酶（LDH）的含量以及细胞内丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量。蛋白质印迹（Western Blot）法检测细胞内IκB激酶β（IKKβ）、NF-κB p65、p-NF-κB p65的蛋白表达水平。[结果] 与正常对照组比较,高糖对照组H9C2心肌细胞活性降低,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6、LDH含量明显增加（P<0.05）,心肌细胞内MAD含量增加（P<0.05）、SOD含量降低（P<0.05）,心肌细胞内IKKβ蛋白表达增加（P<0.05）,NFκB p65蛋白表达变化不明显,但p-NF-κB p65的蛋白表达水平增加（P<0.05）;与高糖对照组比较,姜黄素各剂量组预处理6 h可呈剂量依赖性增强H9C2细胞活性（P<0.05）,降低细胞培养液上清中TNF-α、IL-6、LDH含量（P<0.05）,降低细胞内MDA含量、增加SOD含量（P<0.05）,降低IKKβ蛋白表达（P<0.05）,降低p-NF-κBp65蛋白表达（P<0.05）。[结论] 姜黄素可通过抑制NF-κB信号通路过度激活,降低炎症反应及氧化应激状态,减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞损伤。     

HO-1介导黄芪甲苷抗原代心肌细胞缺氧/复氧损伤作用研究

[目的]研究黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的保护作用及机制。[方法]培养乳鼠原代心肌细胞,以缺氧4 h,复氧4 h建立心肌H/R损伤模型。四甲基噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力。检测细胞培养液中心肌肌钙蛋白（cTnT）、乳酸脱氢酶（LDH）含量,炎症细胞因子超敏C反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）浓度。分别以聚合酶链式反应逆转录（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）法检测心肌细胞血红素氧化酶1（HO-1）mRNA及蛋白表达水平。[结果]与H/R组比较,AS-Ⅳ、HO-1激动剂原卟啉氯化钴（CoPP）均可显著降低细胞上清中cTnT、LDH含量（P<0.01）,降低炎症因子hs-CRP、TNF-α水平（P<0.01）,而HO-1拮抗剂原卟啉Ⅸ锌（Ⅱ）络合物（ZnPP）作用趋势则相反。与H/R组比较,CoPP组及AS-Ⅳ组HO-1 mRNA、蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,ZnPP组则显著下降（P<0.01）。[结论]AS-Ⅳ对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有显著的保护作用,其机制与诱导具有保护作用的HO-1表达有关。     

Z-藁本内酯对人脐静脉内皮细胞保护作用及其机制研究

目的 通过观察Z-藁本内酯对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）及核因子-κB（NF-κB）表达的影响,探讨其对炎性因子损伤内皮细胞的保护作用及其机制。方法 向体外培养的HUVEC中加入TNF-α 10 ng/mL造成细胞损伤,同时加入不同浓度（5、10、20 μmol/L）的Z-藁本内酯,共同孵育24 h,MTT法检测各组细胞活力,ELISA法测定细胞培养液中ICAM-1和VCAM-1的量,Western blotting法检测各组细胞NF-κB蛋白表达。结果 与对照组比较,TNF-α可造成HUVEC明显损伤（P＜0.05、0.01）,显著增加HUVEC中ICAM-1和VCAM-1的表达（P＜0.01）。与模型组比较,Z-藁本内酯可以剂量相关地降低ICAM-1（P＜0.01）和VCAM-1（P＜0.05）的表达,显著减少细胞NF-κB蛋白的表达（P＜0.05）。结论 Z-藁本内酯可减轻TNF-α对HUVEC的损伤,其作用机制可能与通过抑制NF-κB的激活,进而减少ICAM-1和VCAM-1的表达有关。     

芪茵荷叶饮对糖耐量异常大鼠糖代谢及骨骼肌NF-κB信号通路的影响

[目的]探讨补气益脾组方芪茵荷叶饮对糖耐量异常大鼠糖代谢及骨骼肌NF-κB信号通路的影响。[方法]采用高脂高糖饲料建立糖耐量受损（IGT）大鼠模型,将成模大鼠按体质量随机分为模型组（M）和9组不同剂量配伍组（A、B、C、D、E、F、G、H和I）。采用正交实验设计,选取黄芪、茵陈蒿和荷叶进行三因素三水平实验L₉（3⁴）。于干预前及干预6周、12周检测大鼠空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,观察骨骼肌组织病理变化,实时荧光定量PCR方法检测各组大鼠肌肉组织IκB-α和NF-κBp65基因转录水平。[结果]D组FBG在干预12周时低于给药前水平;与M组比较,各实验组FINS在干预6周、12周（除A和B组）下降明显（P<0.05）,HOMA-IR在干预6周时A、D、E、F、G、H组和干预12周时D、F、G、H、I组较M组下降显著（P<0.05）。仅不同剂量的茵陈蒿对FBG影响存在统计学差异,仅不同剂量黄芪对FINS和HOMA-IR调节具有统计学差异,主次顺序为黄芪>茵陈蒿>荷叶。M组大鼠骨骼肌水肿、有炎性细胞浸润,G组NF-κBp65mRNA表达水平较M组明显下降（P<0.05）。[结论]芪茵荷叶饮中黄芪为君、茵陈蒿为臣,辅以荷叶,最佳配伍方案为半量黄芪、2倍量茵陈蒿、半量荷叶。IGT大鼠骨骼肌组织存在炎性反应,G组配伍的芪茵荷叶饮可通过抑制NF-κB信号通路,改善IGT大鼠胰岛素抵抗,预防IGT向2型糖尿病（T2DM）演变。     

基于NF-κB通路探讨温经汤合琥珀散对寒凝血瘀型子宫内膜异位症大鼠的影响

[目的] 基于核转录因子-κB（NF-κB）通路及相关蛋白探讨温经汤合琥珀散对子宫内膜异位症（EMs）大鼠的影响。[方法] 将60只SPF级雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、孕三烯酮组与温经汤合琥珀散低、中、高剂量组,每组10只。除假手术组外,其余各组大鼠均采用冰水浴联合盐酸肾上腺素和自体内膜移植法建立寒凝血瘀证EMs大鼠模型,假手术组只开腹但不进行内膜移植。假手术组和模型组给予纯水;孕三烯酮组给予孕三烯酮（0.25mg/kg）每周灌胃2次（周一、周四）,灌胃4周;温经汤合琥珀散组分别给予低（9.69 g/kg）、中（19.38 g/kg）、高（38.75 g/kg）剂量的温经汤合琥珀散,连续灌胃4周。酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平,检测各组大鼠的血液流变学、凝血功能。蛋白免疫印迹法检测各组大鼠子宫内膜组织中核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、核转录因子-κB抑制蛋白α（IkBα）、核转录因子-κB激酶亚基β抑制因子（IKKβ）蛋白表达。[结果] 与假手术组比较,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量升高（P＜0.05或P＜0.01）,血液流变学各项指标升高（P＜0.05或P＜0.01）;凝血功能方面,模型组大鼠部分凝血活酶时间（TT）降低（P＜0.05）,纤维蛋白原（FIB）含量升高（P＜0.01）;蛋白免疫印迹法检测结果显示,NF-κB p65、IKKβ升高（P＜0.01）,IkBα表达降低（P＜0.05）。与模型组比较,温经汤合琥珀散部分剂量组大鼠血清TNF-α、IL-1β表达降低（P＜0.05或P＜0.01）,温经汤合琥珀散部分剂量组及孕三烯酮组大鼠血液流变学各项指标降低（P＜0.05或P＜0.01）;凝血功能方面,温经汤合琥珀散部分剂量组及孕三烯酮组大鼠TT升高（P＜0.05或P＜0.01）,FIB降低（P＜0.05或P＜0.01）;蛋白免疫印迹法检测结果显示,温经汤合琥珀散部分剂量组大鼠NF-κB p65表达降低（P＜0.05或P＜0.01）,温经汤合琥珀散部分剂量组及孕三烯酮组大鼠IKKβ表达降低（P＜0.05或P＜0.01）,温经汤合琥珀散部分剂量组及孕三烯酮组大鼠IkBα表达升高（P＜0.05或P＜0.01）。[结论] 温经汤合琥珀散可能通过阻断或抑制NF-κB信号通路活化及阻断异位组织增殖,从而缩小异位灶,调控EMs的发展,且可改善寒凝血瘀大鼠相关症状,疗效优于孕三烯酮。     

扶正固表方对免疫低下小鼠免疫功能的实验研究

[目的] 研究扶正固表方对环磷酰胺诱导免疫低下小鼠的免疫调节作用。[方法] 48 只 Balb/c 小鼠随机分为对照组、模型组、扶正固表方组（7.15 g/kg）和西药组（盐酸左旋咪唑,30 mg/kg）,除对照组外,其他各组小鼠腹腔注射环磷酰胺制备免疫低下小鼠模型。造模成功后,扶正固表方组和西药组分别给予灌胃干预 7 d。观察各组小鼠的一般状态和体质量变化,检测免疫器官指数;酶联免疫吸附法测定血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-4（IL-4）和干扰素-γ（IFN-γ）的水平;苏木素-伊红染色法观察脾脏病理变化;流式细胞术检测脾淋巴细胞亚群 CD4⁺ T 淋巴细胞、CD8⁺ T 淋巴细胞及 CD4⁺/CD8⁺的分布与比例;实时荧光定量聚合酶链反应法与蛋白免疫印迹法检测脾脏组织中 NF-κB p65 和 IκBα mRNA 与蛋白的表达水平。[结果] 与对照组相比,模型组小鼠出现精神萎靡,毛发黯淡等体征,伴随体质量、脾脏指数和胸腺指数降低（P<0.01）;血清 TNF-α 水平升高（P<0.01）,而 IL-4 和 IFN-γ 水平降低（P<0.01）;脾组织红、白髓界限不清,伴有红细胞和炎性细胞浸润;脾 CD4⁺淋巴细胞数下降（P<0.01）,CD8⁺淋巴细胞数升高（P<0.01）,CD4⁺/CD8⁺比例降低（P<0.01）;脾组织中 NF-κB p65 mRNA 与蛋白表达降低（P<0.01）,IκBα mRNA和蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组相比,扶正固表方组一般状态有所改善,体质量升高,脾脏指数和胸腺指数提升（P<0.01）,血清 TNF-α 水平降低（P<0.01）,IL-4 和 IFN-γ 水平升高（P<0.01）,脾组织红、白髓界线逐渐清晰,脾CD4⁺淋巴细胞数增多,CD8⁺淋巴细胞数降低,CD4⁺/CD8⁺比例上升; 脾组织中 NF-κB p65 mRNA 与蛋白的表达水平上升（P<0.05）,IκBα mRNA 和蛋白表达降低（P<0.05）。[结论] 扶正固表方可以调节免疫低下小鼠的免疫状态,增强机体的免疫功能。     

活血温通方对缺氧心肌细胞氧化应激和凋亡的影响

[目的] 观察活血温通方对缺氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用。[方法] 采用H9c2心肌细胞进行缺氧无血清刺激,同时加入活血温通方含药血清和空白血清处理4 h后,检测细胞活力、Caspase 3和Caspase 8活性、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶 （CAT）、丙二醛（MDA）含量,并进行二氢乙啶（DHE）染色观察活性氧（ROS）变化,以及Hoechst染色观察细胞凋亡情况,对比分析各组之间差异。[结果] 与对照组比较,缺氧组H9c2心肌细胞活力、SOD和CAT活性显著下降（P<0.01）,Caspase 3和Caspase 8活性、MDA含量明显升高（P<0.01）,同时累积的ROS含量和细胞凋亡数量增多（P<0.01）。活血温通方含药血清能提升细胞活力、增加SOD、CAT活性（P<0.01）,明显降低MDA水平、Caspase 3和Caspase 8活性（P<0.01）,同时减少ROS累积,抑制心肌细胞凋亡（P<0.01）。[结论] 通过抑制细胞凋亡、减轻氧化应激,活血温通方一定程度上可以保护心肌细胞免受缺氧损伤。     

槲皮黄酮改善心肌细胞肥大过程中对线粒体功能及动力学的影响

[目的]探讨槲皮黄酮对原代心肌细胞肥大、线粒体功能及动力学的影响。[方法]原代培养大鼠心肌细胞,采用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及槲皮黄酮共同干预细胞48、72 h后,BCA试剂盒检测细胞中蛋白浓度,倒置显微镜分析心肌细胞直径;酶标仪检测心肌细胞内三磷酸腺苷（ATP）及活性氧（ROS）含量,JC-1方法分析心肌细胞线粒体膜电位（MMP）;蛋白免疫印迹（Western Blot）方法测定线粒体动力学相关蛋白视神经萎缩蛋白（OPA1）、动力相关蛋白（Drp1）及磷酸化动力相关蛋白1（p-Drp1）表达量。[结果]与空白组比较,模型组心肌细胞中总蛋白浓度、细胞直径大小及ROS水平显著升高（P<0.05）,ATP和MMP值则显著降低（P<0.05）,Western Blot结果发现OPA1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,p-Drp1蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;与模型组比较,槲皮黄酮处理72 h后心肌细胞中总蛋白浓度、细胞直径大小及ROS水平显著降低（P<0.05）,ATP和MMP值则显著升高（P<0.05）,Western Blot结果发现OPA1蛋白表达水平显著增高（P<0.05）,p-Drp1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。[结论]槲皮黄酮对AngⅡ引起的心肌细胞肥大具有保护作用,其作用机制可能与降低心肌细胞线粒体功能障碍、稳定线粒体动力学平衡相关。     

黄芪甲苷对苯并芘诱导RAW264.7细胞MMPs表达的保护作用

目的 观察黄芪甲苷（astragaloside IV,ASIV）对苯并芘（benzopyrene,Bap）诱导RAW264.7巨噬细胞MMPs表达的保护作用,探讨腹主动脉瘤防治的可能新策略。方法 应用Western blot法观察Bap对RAW264.7巨噬细胞基质金属蛋白酶-9/12（MMP-9、MMP-12）、NF-κB、TNF-α等表达的变化及黄芪甲苷的作用,利用流式细胞仪观察黄芪甲苷对巨噬细胞ROS表达的影响。结果 Bap能够诱导RAW264.7巨噬细胞MMP-9、MMP-12等金属蛋白酶的表达升高和NF-κB、TNF-α等炎性指标的活化。黄芪甲苷具有降低RAW264.7巨噬细胞因Bap诱导而表达升高的MMP-9、MMP-12、NF-κB、TNF-α,同时具有清除ROS的作用。结论 黄芪甲苷能够降低Bap刺激RAW264.7巨噬细胞引起的MMP-9、MMP-12、NF-κB、TNF-α的表达升高,并具有清除ROS的作用。     

氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肌组织细胞因子的影响

目的 探讨氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肌组织核因子-κB（NF-κB）等细胞因子的影响。方法 采用大鼠盲肠结扎穿孔法制备大鼠感染性休克模型。造模后56只SD大鼠随机分为假手术组,氧化苦参碱对照组,模型组,氧化苦参碱高、中、低剂量（52、26、13 mg/kg）组、地塞米松阳性对照（10 mg/kg）组,各组给药1次。采用RT-PCR法测定心肌组织NF-κB（p65）mRNA的表达;Western blotting法测定心肌组织NF-κB（p65）及IκB-α的表达;放射免疫分析法测定心肌组织匀浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-1β（IL-1β）量的改变。结果 氧化苦参碱能显著抑制大鼠心肌组织NF-κB（p65）mRNA的表达及NF-κB（p65）和IkB-α的活性（P＜0.05）,降低心肌组织匀浆中TNF-α及IL-1β的量（P＜0.05）。结论 氧化苦参碱能通过抑制NF-κB（p65）mRNA的表达及诱导NF-κB激酶（NF-κB-inducing kinase,NIK）的活化,抑制细菌、病毒等对NF-κB的激活作用,减少TNF-α、IL-1β等促炎因子的表达,进而对感染性休克大鼠心肌损伤性病变发挥治疗作用。     

自拟补肾祛瘀方对多囊卵巢综合征模型大鼠的作用及机制研究

目的 探究自拟补肾祛瘀方治疗多囊卵巢综合征（PCOS）的疗效及机制。方法 选取SD雌性大鼠,复制PCOS模型后随机分为对照组、模型组、西药组及联合组。对照组和模型组根据大鼠体重给予1 mL/（kg·d）氯化钠溶液灌胃,联合组每天根据体重给予补肾祛瘀汤剂11 g/kg和4.5 mg/kg二甲双胍灌胃,西药组仅给予4.5 mg/kg二甲双胍灌胃。药物干预后分别采用Western blotting、qRT-PCR、免疫组织化学法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核因子κB（NF-κB）、核因子IκB（IκBα）的蛋白、mRNA及阳性表达。比较各组大鼠的体重及血清睾酮（T）、促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）水平。结果 各组大鼠药物干预前的体重比较,差异无统计学意义（P >0.05）;各组大鼠药物干预28 d后的体重比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组的体重高于另外3组（P <0.05）,西药组高于联合组和对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）。各组大鼠血清T、FSH、LH水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组血清T、FSH、LH水平高于另外3组（P <0.05）,西药组高于联合组与对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）。各组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB、IκBα蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB蛋白相对表达量高于另外3组,IκBα蛋白相对表达量低于另外3组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB蛋白相对表达量高于联合组与对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织IκBα蛋白相对表达量低于联合组与对照组（P <0.05）,联合组低于对照组（P <0.05）。各组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB、IκBα mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB mRNA相对表达量高于另外3组,IκBα mRNA相对表达量低于另外3组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB mRNA相对表达量高于联合组与对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织IκBα mRNA相对表达量低于联合组与对照组（P <0.05）,联合组低于对照组（P <0.05）。各组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB、IκBα的OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB的OD值高于另外3组,IκBα的OD值低于另外3组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB的OD值高于联合组与对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织IκBα的OD值低于联合组与对照组（P <0.05）,联合组低于对照组（P <0.05）。结论 自拟补肾化瘀方治疗PCOS可通过影响TNF-α调控的NF-κB/IκBα信号通路促进LH、FSH、T的恢复。     

苓桂术甘汤对慢性心衰模型大鼠心肌组织TNF-α及血清NF-κB和IL-1β的影响

目的 观察苓桂术甘汤对慢性心力衰竭模型大鼠心肌组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白及mRNA表达、血清核因子-κB（NF-κB）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平的影响,探讨苓桂术甘汤防治慢性心衰的作用机制。方法 采用冠状动脉结扎法制备慢性心衰大鼠模型,造模4周后将模型大鼠随机分为模型组,卡托普利（4.375 mg/kg）阳性对照组,苓桂术甘汤低、中、高剂量（生药2.1、4.2、8.4 g/kg）组,另设假手术组,每天给药1次,连续给药4周。Western blotting、RT-PCR法分别检测各组大鼠心肌组织TNF-α蛋白及mRNA的表达,ELISA法检测血清中NF-κB、IL-1β水平。结果 与假手术组相比,模型组大鼠心肌组织TNF-α蛋白及mRNA表达增强,血清NF-κB、IL-1β水平显著升高（P＜0.01）;与模型组相比,苓桂术甘汤及卡托普利均能显著抑制模型大鼠心肌组织TNF-α蛋白及mRNA表达、降低模型大鼠血清NF-κB、IL-1β水平（P＜0.05、0.01）。结论 苓桂术甘汤干预慢性心衰的机制与其调节细胞因子网络有关。     

一贯煎对子痫前期大鼠胎盘NF-κB mRNA与MMP-9 mRNA表达影响

[目的] 探讨中药一贯煎对子痫前期大鼠胎盘核转录因子-κB mRNA（NF-κB mRNA）和基质金属蛋白酶-9 mRNA（MMP-9 mRNA）表达的影响。[方法] 建立子痫前期Wistar大鼠模型,并灌胃给予中药一贯煎,监测给药前后大鼠血压及24 h尿蛋白变化。PCR法检测孕鼠胎盘NF-κB mRNA及MMP-9 mRNA的表达。[结果] 1）NF-κB mRNA：与正常妊娠组相比,模型对照组及一贯煎治疗组均升高,与模型对照组相比,一贯煎治疗组降低,且差异均有显著性（P<0.05）。2）MMP-9 mRNA：与正常妊娠组相比,模型对照组与一贯煎治疗组均降低,与模型对照组相比,一贯煎治疗组有所升高,且差异均有显著性（P<0．05）。[结论] 一贯煎通过降低子痫前期大鼠胎盘NF-κB mRNA的表达,升高MMP-9 mRNA的表达治疗子痫前期大鼠。     

苦参素对慢性脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡保护作用的研究

[目的]研究苦参素对大鼠慢性脑缺血后大脑海马CA1区神经元凋亡的保护作用并探讨其机制。[方法]将100只SD大鼠采用结扎双侧颈总动脉的方法复制慢性脑缺血大鼠模型,设假手术组、模型组和苦参素低[25 mg/（kg·d）]、中[50 mg/（kg·d）]、高[100 mg/（kg·d）]剂量组,各20只,术后第2天开始腹腔注射给药,疗程7 d。通过苏木精-伊红（HE）染色、末端标记（TUNEL）法分别观察海马CA1区神经元形态及凋亡状况;免疫组织化学（IHC）法检测海马B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达;蛋白免疫印迹（Western blot）法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、核因子-κB（NF-κB）蛋白表达;生化分析海马区氧化酶活性和丙二醛（MDA）含量;测定海马组织炎症细胞因子含量。[结果]与模型组比较,苦参素中、高剂量组慢性脑缺血大鼠海马CA1区神经元形态结构变化和凋亡状况均明显改善,凋亡指数（AI）显著降低（P<0.01）,海马区Bcl-2表达上调、Bax表达下调且Bcl-2/Bax比值显著提高（P<0.05或P<0.01）,Caspase-3、NF-κB蛋白表达均显著下调（P<0.05或P<0.01）,抗氧化酶[超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）]活性显著升高且MDA含量显著降低（P<0.05或P<0.01）;炎症细胞因子[白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）]含量均显著降低（P<0.05或P<0.01）。[结论]苦参素具有抑制慢性脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡的药理学作用,其机制可能与苦参素调节凋亡相关蛋白表达以及提高氧自由基清除能力、抑制炎症反应有关。     

糖肾1号方含药血清对高糖环境下培养的HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白水平的影响

[目的]观察糖肾1号方含药血清干预高糖环境下培养的人肾小管上皮细胞（HK-2）中转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）mRNA和蛋白水平,初步探索糖肾1号方治疗糖尿病肾病可能的作用机制。[方法]选用HK-2细胞,分为空白组、高糖组、空白血清组、糖肾1号方含药血清低剂量组、糖肾1号方含药血清高剂量组。高糖环境下培养24 h后,进行血清干预24 h,培养48 h后收集细胞,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平。[结果]1）与空白组相比,高糖组的TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平明显增多,差异具有统计学意义（P<0.05）。2）与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组、糖肾1号方高剂量组TGF-β1、α-SMA、FN mRNA表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。3）与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）,糖肾1号方高剂量组α-SMA、FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。4）与糖肾1号方低剂量组相比,糖肾1号方高剂量组TGF-β1、FN mRNA降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。[结论]糖肾1号方含药血清可抑制TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和α-SMA、FN蛋白表达水平,糖肾1号方高剂量组效果优于糖肾1号方低剂量组。     

间歇性低氧诱导人脐静脉内皮细胞损伤机制研究

目的 建立人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的间歇性低氧（IH）模型,探讨IH损伤血管内皮细胞的机制。方法 通过低氧气体循环灌注低氧舱,建立HUVECs的IH模型。实验分为正常对照组（CON）,间歇性低氧（IH）2、4、6、8、10、12、14、16次循环组,IH+P38 MAPK阻断剂组（INH）以及持续性缺氧组（SH）。采用定量PCR技术（QPCR）检测细胞间黏附因子（intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1）、E选择素（E-selectin）、白介素1（interleukin -1, IL-1）、白介素6（interleukin -6,IL-6）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）基因表达量;Western blot法检测P38 MAPK /NF-κB通路关键靶标蛋白表达量;细胞免疫荧光技术观察NF-κB P65核移位变化,同时检测细胞黏附功能。结果 （1） 与CON组比较,IH刺激下炎性反应相关因子IL-1、IL-6、TNF-α基因表达量升高（P<0.05）。（2） 与CON组比较,IH组HUVECs的p-P38 MAPK蛋白表达水平升高,NF-κB通路靶标蛋白p-IκB、NF-κB P65核蛋白表达水平均升高,而INH组变化不明显。IH组的NF-κB P65出现核移位变化。（3） 细胞黏附实验结果显示IH组人单核细胞系（human acute monocytic leukemia cell line,THP-1）与HUVECs的黏附能力较CON组增强（P<0.05）。结论 IH能够体外诱发HUVECs炎性反应,其机制与激活P38 MAPK/NF-κB信号通路相关。     

姜黄素对肺炎链球菌感染的抗炎和抑菌作用

目的 研究姜黄素（Cur）及其衍生物6B、Y20对肺炎链球菌（streptococcus pneumonia,SP）最小抑菌浓度及对其致病因子NanA、NF-κB表达调节,探讨Cur、6B、Y20对SP抑菌作用及减少SP感染炎性反应的作用机制。方法 利用微量浓度稀释法联合血琼脂平板涂布法检测Cur、6B、Y20对SP的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）值;培养人支气管上皮（BEAS-2B）,建立体外SP感染模型,分为空白对照组、SP感染组、Cur+SP组、6B+SP组、Y20+SP组。CCK8法测试细胞存活率,ELISA法检测NanA、TNF-α等的蛋白含量,用Western blot法检测NF-κB的表达。结果 Cur、6B、Y20在高浓度有抑菌作用;随SP感染时间的延长,药物处理组细胞存活率较SP感染组相比增高（P<0.01）;与空白对照组比较,SP感染组中NanA、NF-κB、TNF-α表达增加;与SP感染组比较,Cur、6B、Y20药物预处理组NF-κB、NanA表达降低（P<0.05）,TNF-α等表达水平较模型降低（P<0.01）。结论 Cur、6B、Y20高浓度有抑菌作用,并可通过下调SP表面毒力因子NanA的表达,减轻SP的毒力作用,并通过抑制NF-κB转录激活,减少下游炎性因子表达,减轻SP引起炎症损伤。     

灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症介质分泌的影响

[目的] 研究灯盏乙素对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞炎症的影响,初步探讨其抗炎作用机制。[方法] 用噻唑蓝（MTT）法检测灯盏乙素对RAW264.7细胞活力的影响;用Griess法检测灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞中一氧化氮（NO）生成的影响;用荧光素酶报告质粒法检测灯盏乙素对LPS诱导的核转录因子（NF-κB）转录活性的影响;用实时定量聚合酶链反应（PCR）法检测灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞中NF-κB靶基因肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）mRNA表达的影响。[结果] 0.01～10 μmol/L的灯盏乙素处理24 h后对RAW264.7活力无显著影响;1、10 μmol/L的灯盏乙素可以显著抑制LPS诱导的NO的生成及NF-κB转录活性;灯盏乙素可以不同程度的抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB靶基因TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA的上调作用。[结论] 灯盏乙素可能通过抑制NF-κB的活化及炎症因子的表达发挥一定的抗炎作用。     

异槲皮苷对db/db小鼠肝脏脂肪酸代谢及相关基因表达的影响

[目的] 研究异槲皮苷对自发性糖尿病小鼠肝脏脂肪酸代谢相关基因表达的调控作用。[方法] 8周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组、异槲皮苷组，雄性C57BL/6J小鼠为正常对照组，药物干预4周后，检测小鼠体质量、空腹血糖（FBG）、总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA），肝质量和肝质量/体质量；肝组织苏木精-伊红（HE）染色观察肝细胞脂质蓄积；逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）基因表达。[结果] 与模型组比较，异槲皮苷组小鼠体质量、FBG、CHO、TG、FFA、肝质量、肝质量/体质量显著降低（P<0.05或P<0.01）；苏木精-伊红（HE）染色肝细胞脂肪变性减轻，肝脏SREBP1c、FAS mRNA表达降低（P<0.05；P<0.01），PGC1α、PPARαmRNA表达显著升高（P<0.05）。[结论] 异槲皮苷可以改善db/db小鼠肝脏脂肪酸代谢紊乱，可能是通过下调肝脏SREBP1c、FASmRNA表达，上调肝脏PGC1α、PPARα表达实现的。     

黄芪注射液对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

[目的] 研究黄芪注射液对高糖环境下肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响。[方法] 传代培养人近曲肾小管上皮细胞,细胞用无血清培养基同步化24 h后,将细胞分为5组:低糖对照组、高糖组、高糖+不同浓度黄芪注射液组(2、20、200 μg/mL),每组设3个复孔。将细胞置于37 ℃恒温培养箱中培养至24、48、72 h,收集细胞及细胞上清液。用流式细胞仪测定细胞凋亡率。[结果] 24、48、72 h,低糖对照组细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.05)。细胞培养24 h,黄芪干预组200和20 μg/mL细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.05)。细胞培养48和72 h,黄芪注射液干预组细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.05)。黄芪注射液干预组各组之间凋亡率比较差异也都有显著性(P<0.05),其干预作用呈剂量依赖性。[结论] 黄芪注射液能抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞的凋亡,有助于糖尿病肾病的治疗。