基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的甘草大鼠体内入血成分分析

目的:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS/MS)法分析灌胃给药后甘草提取液在大鼠体内的入血成分。方法:大鼠灌胃给予甘草提取液后,腹主动脉取血,分离血清。采用UPLC BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)分析,0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源,正、负离子模式下对甘草提取液、给药血清和空白血清进行数据采集。结果:根据色谱峰保留时间及质谱碎片裂解规律,结合文献相关信息,共鉴定出13个入血原型成分,依次为Tachiogroside B、夏佛托苷、7,4'-二羟基黄酮、6″-O-乙酰甘草苷、芒柄花苷、甘草查尔酮B、金圣草(黄)素、异甘草素、芒柄花黄素、皂皮酸、黄宝石羽扇豆素、甘草酸、半甘草异黄酮B,主要为黄酮类、有机酸类、苷类和香豆素类。结论:该研究通过UPLC-Q-TOF-MS/MS分析技术,明确了甘草提取物中含有的13种入血原型成分,为其药效物质基础的研究提供了科学依据。     

泻白散大鼠体内入血成分研究

目的研究泻白散的体内入血成分。方法采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱技术进行分析。将SD大鼠随机分为空白组和给药组,每组10只。空白组大鼠灌胃水,给药组大鼠灌胃2 g/mL(以生药量计)泻白散溶液,给药体积均为11.3 mL/kg,每日2次,连续3 d。末次给药1.5 h后,各组大鼠腹主动脉取血,将血清处理后取上清液进样分析;采集正、负离子模式下的相关数据,利用自建二级质谱数据库并查阅相关文献对泻白散入血成分进行分析鉴定。结果共鉴定出17种泻白散入血成分,其中6种来源于君药桑白皮,7种来源于臣药地骨皮,12种来源于佐使药甘草,分别为地骨皮甲素、绿原酸、tachiogroside B、astringin、新甘草苷、甘草素、壬二酸、异甘草苷、glycyroside、芒柄花苷、癸二酸、parthenolide、刺芒柄花素、18β-甘草次酸、6-姜酚、棕榈酰胺、芥酸酰胺,这些化合物主要是黄酮类、生物碱类和有机酸类成分。结论本研究初步确定了泻白散的17种入血成分,这些成分与泻白散的作用相一致,可能是泻白散的药效物质。     

基于UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术探究和表征杜仲提取物在腺嘌呤致肾纤维化大鼠中的入血成分及其代谢产物

探究和表征杜仲提取物在腺嘌呤致肾纤维化大鼠中的入血成分,为其药效物质基础研究提供参考。以腺嘌呤致肾纤维化SD大鼠为实验对象,灌胃给予杜仲提取物并收集血浆样品,利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)技术分析鉴定吸收入血的原形成分及其代谢产物。本实验获得南京中医药大学实验动物伦理委员会批准(批准号:202103A008)。结果共鉴定出入血原形成分24种,其中木脂素类9种、环烯醚萜类4种、苯丙素类8种、有机酸类3种;进一步分析得到代谢产物30种,其中木脂素类9种、环烯醚萜类19种、有机酸类2种。研究结果可为进一步阐明杜仲治疗肾纤维化的药效物质基础及其作用机制提供有价值的依据。     

五味子酯甲在大鼠体内代谢产物的鉴定

目的 考察五味子酯甲在大鼠体内的代谢转化。方法 采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-TOF-MS/MS)分析鉴定大鼠灌胃五味子酯甲后,其在尿样中的代谢产物。Phenomenex UPLC C₁₈色谱柱,流动相为乙腈-1‰甲酸水,梯度洗脱,质谱仪离子源为电喷雾离子源(ESI),正离子方式检测。结果 经代谢物软件处理后,根据MS/MS给出质谱碎片信息对五味子酯甲代谢产物进行结构推测,共检测到5种代谢产物。结论 五味子酯甲在大鼠体内的代谢途径主要为氧化反应和还原反应。     

基于UPLC-Q-TOF-MS的西洋参提取物及入血成分分析

目的采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)对西洋参的主要化学成分及入血成分进行分析鉴定。方法采用超高效液相色谱梯度洗脱分离各主要成分;电喷雾电离源负离子模式检测,四级杆飞行时间串联质谱法对各主要色谱峰进行归属。灌胃给予大鼠3 g·kg~(-1)西洋参粉,收集血清样品。采用UPLC-Q-TOF-MS分析并鉴定西洋参粉提取物及入血成分。结果通过质谱信息并结合对照品数据及相关文献,提取物中共鉴定了22个化合物,大鼠含药血清中共鉴定了8个入血成分。结论 UPLC-Q-TOF-MS可较全面地对西洋参成分进行定性分析,为进一步阐明药效物质基础和建立全面的质量控制提供参考依据。     

基于UPLC-Q-TOF-MS技术的五酯胶囊及其入血原型木脂素类成分快速鉴定分析

目的:利用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)技术通过特征碎片和中性丢失快速鉴别五酯胶囊及其入血的原型木脂素类成分.方法:ACQUITY UPLCBEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),以0.1％甲酸水-甲醇梯度洗脱,流速0.2 ml·min-1;进样量2 μL.电喷...     

广金钱草黄酮成分在肾结石大鼠中的代谢研究

目的 利用超高效液相色谱串联电喷雾飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）分析广金钱草黄酮成分在肾结石大鼠中的代谢途径和代谢产物。方法 建立SD大鼠肾结石造模,灌胃给予肾结石大鼠广金钱草总黄酮,采用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析黄酮成分在肾结石大鼠模型的血浆、尿液和粪便中的代谢变化,通过TOF/MS得到的准确相对分子质量,多级质谱裂解信息,结合对照品及相关文献报道对黄酮成分的裂解规律总结结果对比鉴定,对血浆、尿液和粪便中总黄酮成分和代谢产物进行鉴定。结果 广金钱草总黄酮给药后,在大鼠血浆中鉴定出5种原型成分和3种夏佛塔苷的同分异构体,16种以血浆中原型成分代谢得到的产物;从尿液中鉴定出12种原型成分和21种以尿液中原型成分代谢得到的产物;从粪便中鉴定10种原型成分和43种以粪便中原型成分代谢得到的产物。结论 阐述了广金钱草总黄酮在大鼠体内的代谢变化情况,为该药材今后的药效物质基础研究提供了理论参考。     

UPLC-Q/TOF-MS/MS法分析鉴定夏佛塔苷在小鼠体内的代谢产物

采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography coupled with quadrupole/time-of-flight tandem mass spectrometry, UPLC-Q/TOF-MS/MS)技术,对夏佛塔苷口服给药后在小鼠体内的原形成分及其代谢产物进行定性分析。动物福利和实验过程获得徐州医科大学伦理委员会的批准(批准号:XZMULL201612024)。通过分析各成分的精确分子质量、一级、二级质谱信息,并与相应的对照品及文献比对,从小鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中共鉴定出1个原形成分和29个代谢产物。这些成分在小鼠体内代谢的主要途径有去羟基化、羟基化、脱糖化、糖化、氢化、甲基化、乙酰化、硫酸化、葡糖醛酸化等。研究结果可为进一步阐明夏佛塔苷的药效物质基础提供有价值的依据。     

基于UPLC-Orbitrap-HRMS技术鉴定当归-川芎药对化学成分及大鼠体内入血成分

目的 鉴定当归-川芎药对化学成分及大鼠ig后的入血原型成分和代谢产物。方法 基于超高效液相色谱-静电场轨道阱-高分辨率质谱技术（UPLC-Orbitrap-HRMS）,结合对照品图谱、自建数据库、相关文献信息及Compound Discoverer3.3、Xcalibur qual browser 4.3等软件对当归-川芎药对的化学成分进行分析鉴定;大鼠经ig给药后制得含药血清,通过比对含药血清与对照组血清,鉴定入血原型成分和代谢产物。结果 共在当归-川芎药对中鉴定出69个化学成分,主要包括苯酞类24个、有机酸类24个、氨基酸类8个、含氮类7个、香豆素类4个、木脂素类1个、黄酮类1个;在含药血清中共鉴定出30个入血原型成分,包括苯酞类15个、有机酚酸类13个、香豆素类2个;鉴定出45个代谢产物,包括32个苯酞类代谢产物,13个有机酚酸类代谢产物。结论 明确了当归-川芎药对的化学成分及入血原型成分和代谢产物。     

生川乌配伍白蔹、白及反药组合在大鼠血中移行成分的研究

目的鉴定生川乌配伍白蔹、白及的入血成分,比较配伍前后血中移行成分的变化特征。方法大鼠ig给予生川乌配伍白蔹、白及提取物,收集血浆样品并采用UPLC-QTOF/MS法鉴定入血成分,由半定量分析比较配伍前后血中移行成分的变化。结果检测配伍组20个成分,均为来自于生川乌的原形成分,配伍组中双酯型生物碱的相对质量分数均显著降低,单酯型生物碱中苯甲酰乌头原碱的相对质量分数显著降低,醇胺型生物碱中宋果灵的相对质量分数显著降低,其他没有显著性变化。结论生川乌配伍白蔹、白及能够改变其血中移行成分的体内过程。     

基于大鼠体内多成分代谢的黄芪质控成分遴选

目的 基于中药多成分作用特点,探讨黄芪多成分在体内的代谢情况,遴选黄芪质控成分。方法 制备黄芪水提物,ig给予大鼠（生药20 g/kg）,每天3次,连续给药3 d,腹主动脉采血、代谢笼收集尿液,结合超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）技术对黄芪水提物主要成分、入血成分和尿液排泄成分进行鉴别,并分析主要的代谢途径,遴选黄芪质控成分。结果 黄芪水提物主成分共鉴别出包括毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、calycosin-7-O-glc-6"-O-malonate、毛蕊异黄酮、芒柄花素等在内的15个化合物;血浆样品中指认出11个成分,包括7个代谢成分和4个原型成分;尿液样品中指认出14个成分,9个代谢成分及5个原型成分。结论 根据质谱数据分析结果,遴选出黄芪中以原型入血的成分和参与体内代谢的成分,包括毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、大豆苷元、3-hydro-9,10-diMP、isomer of 3-hydro-9,10-diMP、calycosin-7-O-glc-6"-O-acetate和formononetin-7-O-glc-6"-O-acetate,作为黄芪的质控成分。     

HPLC-MS鉴定黄芪水煎液中黄酮类成分

目的 建立黄芪水煎液中黄酮类成分HPLC-MS鉴定方法.方法 黄芪水煎液采用C18固相萃取小柱获得黄酮类化学成分.采用HPLC-DAD-MS的方法对黄芪水煎液中黄酮类成分进行了定性研究,对比所建立化合物库的化学成分与实测的化学成分质荷比信息以及化合物的裂解规律确定各化学成分.结果 液相色谱质谱联用技术可对黄芪水煎液所含...     

基于1H-NMR代谢组学技术评价何首乌炮制品中差异代谢物的研究

目的采用1H-NMR代谢组学技术评价何首乌炮制品中的差异代谢物。方法建立何首乌的1H-NMR指纹图谱,对黑豆汁制、黄酒制、清水制、黑豆汁加黄酒制何首乌以及生首乌进行分析,同时考察6、12、18、24、32、36 h炮制时间,采用主成分分析、偏最小二乘法判别分析等多元统计方法对不同炮制品与生品差异进行比较分析。结果在何首乌生品、炮制品中找到15种差异化学成分,其中苏氨酸、脯氨酸、没食子酸、β-葡萄糖、琥珀酸、乳酸、胆碱、甘氨酸含量具有随着炮制而升高趋势;而γ-氨基丁酸、蔗糖具有降低的趋势;二苯乙烯苷的含量是先升高后降低。结论基于NMR技术的代谢指纹图谱可以较好的评价何首乌的不同炮制工艺。     

甘草配伍大戟的体外肝毒性研究

目的 研究甘草和大戟配伍的体外肝毒性。方法 采用显微观察法和MTT法检测不同浓度的甘草单煎液、大戟单煎液、甘草-大戟合煎液和甘草-大戟单煎混合液对人肝癌细胞HepG2增殖的影响,并比较大戟单煎液、甘草-大戟合煎液和甘草-大戟单煎混合液相当浓度下细胞毒性的大小。结果 大戟单用及大戟与甘草配伍均有细胞毒性,且呈剂量相关性;与大戟单煎液相比,甘草-大戟单煎混合液细胞毒性无明显差异,甘草-大戟合煎液细胞毒性减小。结论 甘草和大戟配伍导致大戟的体外肝毒性减小。     

桂枝、炙甘草剂量变化对桂枝甘草汤药效组分的影响

目的研究桂枝或炙甘草剂量变化对桂枝甘草汤药效组分的影响。方法采用HPLC-DAD多波长切换法同时测定10种成分的变化。Hypersil Gold-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈–0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长230 nm(苯甲酸钠、甘草苷、甘草素)、254 nm(桂皮醇、甘草酸)、276 nm(香豆素、桂皮酸、桂皮醛)、370 nm(异甘草苷、异甘草素);体积流量0.8 mL/min;柱温20℃;进样量20μL。考察桂枝或炙甘草剂量变化对各药材、桂枝甘草汤药效组分的影响。结果适当增加桂枝(炙甘草)剂量可促进炙甘草(桂枝)药效组分的溶出,当桂枝(炙甘草)超过一定剂量,炙甘草(桂枝)药效组分的含量反而降低。桂枝、炙甘草剂量变化时其自身的药效组分含量变化明显。随着桂枝或炙甘草剂量的增加,桂枝(炙甘草)5种药效组分总量均呈先增后减的趋势,当配伍剂量与经方相一致时有最大值。结论桂枝(炙甘草)剂量变化对炙甘草(桂枝)药效组分、自身药效组分及药效组分总量均有影响,提示桂枝甘草汤用药剂量科学合理。     

QuEChERS-反相高效液相色谱-串联质谱法测定麦冬中多效唑、烯效唑

目的建立QuChERS-反相高效液相色谱-串联质谱法测定麦冬药材中多效唑、烯效唑的农药残留的方法。方法采用Thermo BDS Hypersil C_(18)色谱柱(100 mm×4.6 mm,2.4 mm);流动相:0.1%甲酸的0.005 mol/L醋酸铵溶液–乙腈(25∶75);柱温:25℃;体积流量:0.3 mL/min;进样量:10μL;检测波长:223 nm。采用电喷雾正离子模式进行多反应监测,喷雾电压:5 000 V,毛细管温度:450℃,鞘气:206 kPa,辅助气:15 mL/min。结果多效唑、烯效唑浓度在1.0～100 ng/mL线性关系良好。多效唑、烯效唑的检出限分别为0.05、0.01 ng/mL,定量限分别为0.22、0.03 ng/mL。多效唑、烯效唑的平均回收率分别为94.7%、85.5%,RSD值分别为5.3%、4.1%。在33个实际样品中有31个样品检出多效唑残留,检出率为94%,残留量为0.02～2.08 mg/kg;有9个样品检出烯效唑残留,检出率为27%,残留量为0.02～0.13 mg/kg。结论本方法可快速、简便、准确地测定麦冬药材中的多效唑、烯效唑残留量。     

大黄、枳实、厚朴不同炮制品对小承气汤中药效组分的影响

目的研究大黄、枳实、厚朴饮片变化对小承气汤药效组分的影响,以期为临床的合理应用和饮片的质量标准提供参考。方法采用HPLC法分别测定各类成分。大黄游离蒽醌类(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚):Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇–0.1%磷酸;梯度洗脱;体积流量0.8 m L/min;柱温30℃;进样量10μL;检测波长254 nm。大黄结合蒽醌类(番泻苷B、番泻苷A):Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–0.05%磷酸;梯度洗脱;柱温30℃;进样量10μL;检测波长340 nm。枳实黄酮苷类(芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷):Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–水;梯度洗脱;体积流量0.7 m L/min;柱温40℃;进样量10μL;检测波长283 nm。厚朴木脂素类成分(和厚朴酚、厚朴酚):Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈–0.05%磷酸;梯度洗脱;体积流量0.7 m L/min;柱温30℃;进样量10μL;检测波长294 nm。结果小承气汤配伍剂量(大黄12 g–炒枳实9 g–姜厚朴6 g)不变,大黄、枳实、厚朴饮片改变时,小承气汤药效组分总量变化规律为:大黄–枳实–姜厚朴酒大黄–炒枳实–姜厚朴熟大黄–炒枳实–姜厚朴大黄炭–炒枳实–姜厚朴≈小承气汤大黄–炒枳实–厚朴,变化率分别为酒大黄组(6.561%)、熟大黄组(4.222%)、大黄炭组(0.118%)、枳实组(30.186%)、厚朴组(-11.218%)。除大黄炭组外,其余组的药效组分总量皆明显变化,其中枳实组变化最明显。结论同一味药材的不同炮制品在小承气汤处方中药效组分不同,对其他药味的影响亦不同,在小承气汤处方配伍中不可随意替代。     

民族药材青阳参对照品的制备及质量标准提高研究

目的：建立青阳参苷甲对照品的制备方法和含量测定,为质量标准的提高提供参考。方法：采用植物化学方法制备青阳参苷甲作为对照品,采用质谱、核磁共振等光谱法鉴定对照品的结构,采用面积归一化法测定了对照品含量,并建立高效液相色谱法测定青阳参及同属药材白前、白薇和徐长卿中青阳参苷甲的含量。采用Waters X Select C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为乙腈-水溶液（43：57）,流速1.0 mL·min^-1;检测波长223 nm;柱温30℃;进样量10 μL。结果：经过鉴定分离的青阳参苷甲纯度大于98%,可作为质量研究用对照品。青阳参苷甲质量浓度在5.62~224.8 μg·mL^-1（r=0.9998,n=6）范围内线性关系良好,方法的平均回收率（n=6）为97.7%（RSD=1.4%）。白前、白薇和徐长卿中未检出青阳参苷甲,青阳参中青阳参苷甲含量在0.015%~0.070%。结论：青阳参苷甲是青阳参的特征成分,可作为该药材的定量指标。本文所建立的高效液相色谱法可作为青阳参药材质量标准中的含量测定方法。     

党参生品及不同米炒党参UPLC指纹图谱比较研究

目的 比较小米和大米炒制党参Codonopsis Radix前后的指纹图谱差异。方法 采用超高效液相色谱（UPLC）法,色谱柱为Agilent Poroshell SB-C₁₈,流动相为乙腈-0.15%冰醋酸水（梯度洗脱）,体积流量为0.3 mL/min,检测波长为267 nm,柱温为30℃,进样量为1 μL。以党参炔苷为参照,建立生党参、小米炒党参、大米炒党参（各9批）的UPLC指纹图谱;运用《中药指纹图谱相似度评价系统（2012版）》进行相似度评价及共有峰指认;运用SPSS 20.0软件进行聚类分析;使用数据统计软件SSPS 20.0与SIMCA 14.1进行主成分分析。UPLC法检测大米炒党参、小米炒党参、生党参各9批饮片中5-羟甲基糠醛（5-HMF）和党参炔苷含量。结果 9批党参生品的UPLC指纹图谱有6个共有峰,小米炒党参和大米炒党参分别均有10个共有峰,相似度均大于0.90;指认了5-HMF、党参炔苷2个共有峰,党参“米”炒后UPLC指纹图谱共有峰特征明显,小米炒党参和大米炒党参的UPLC指纹图谱未见明显差异。聚类分析和主成分分析结果一致,9批党参生品聚为一类,而小米炒党参和大米炒党参聚为另一类。与生党参比较,大米炒党参和小米炒党参中5-HMF含量均显著升高（P<0.01）,3种饮片党参炔苷含量无明显差异。结论 成功建立了党参生品及小米炒党参、大米炒党参的UPLC指纹图谱,不同炮制辅料对米炒党参中化学成分的影响趋势相同,但程度不同。