苗药验方四大血可减少关节炎大鼠滑膜组织的坏死性凋亡和血管新生：基于抑制RIPK1/RIPK3/MLKL通路

目的 探究贵州苗医验方“四大血”（SX）对胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠滑膜组织坏死性凋亡和滑膜血管新生的作用机制。方法 将42只SD大鼠均分为空白组（Nor）、模型组（Mod）、雷公藤多苷片阳性对照组（GTW,40 g/kg）和SX高、中、低剂量组（SX 40 g/kg、SX 20 g/kg、SX 10 g/kg）,7只/组。构建CIA大鼠模型。建模后测量大鼠双后肢足跖肿胀程度并进行关节炎指数评分。ELISA法检测血清中TNF-α、IL-1β和IL-17变化,HE染色法观察大鼠关节滑膜病理变化,Real-time PCR检测滑膜组织中VEGF、MMP-9、Ang-1、RIPK1、RIPK3、Caspase-8 mRNA表达水平,Western blot检测滑膜组织中VEGF、MMP9、Ang-1、STAT-3、RIPK1、RIPK3、MLKL、p-MLKL、Caspase-8蛋白表达水平。结果 GTW组和SX高、中、低剂量组足跖肿胀度及关节炎指数评分均小于Mod组（P<0.05）。在光镜下观察大鼠关节滑膜病理组织切片,Mod组可见大量炎性细胞浸润,各层组织结构混乱;而药物治疗组中,炎性细胞浸润、滑膜血管新生和滑膜增生程度均降低。且随SX剂量增高,治疗效果呈逐渐增强的趋势。与Mod组相比,GTW组和SX 40 g/kg组大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-17含量,滑膜组织中RIPK1、RIPK3、VEGF、Ang-1、MMP9 mRNA和蛋白表达均降低（P<0.05）,Caspase-8 mRNA和蛋白表达水平增高（P<0.05）并下调Stat-3蛋白表达和MLKL的磷酸化水平（P<0.05）。结论 SX可以改善CIA大鼠滑膜血管新生,其机制可能与抑制RIP1/RIP3/MLKL信号通路激活,并下调促血管生长因子VEGF、Ang-1、MMP9、STAT-3表达有关。     

对INT-FAK信号通路调控脑缺血后神经细胞凋亡的思考

脑缺血性疾病是人类健康的主要杀手之一,相关研究表明,神经细胞的凋亡是造成脑缺血疾病中神经系统损害的主要机制之一,而以整合素-黏着斑激酶（INT-FAK）控制调节的PI3K/PDK/Akt以及Raf/MEK/ERK两条主要信号途径引起的细胞凋亡是其主要作用机制。凋亡过程出现的诸多能加以调控的信号分子,都可以作为治疗脑缺血性损伤的潜在靶点。随着对脑缺血损伤与神经细胞凋亡关联的深入研究,抗凋亡治疗已经成为治疗脑缺血性疾病的重要途径。     

木犀草素抑制HIF-1α/NLRP3信号通路对脑卒中大鼠认知障碍和神经细胞凋亡的影响

目的 探究木犀草素（Lut）对脑卒中大鼠认知障碍和神经细胞凋亡的影响及其机制。方法 将健康雄性SD大鼠随机分为Sham组、中动脉闭塞（MCAO）组、Lut组、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)拮抗剂（YC-1）组、Lut+HIF-1α激动剂（AG1）组,每组20只。除Sham组外,其余各组大鼠均建立MCAO模型。Sham组大鼠正常喂养,给予等量生理盐水;MCAO组大鼠灌胃给予等量体积含5%二甲基亚砜（DMSO）的生理盐水;Lut组大鼠灌胃给予Lut(40 mg/kg);YC-1组大鼠腹膜内给予YC-1(5 mg/kg);Lut+AG1组大鼠灌胃给予Lut(40 mg/kg),腹膜内给予AG1(10 mg/kg)。再灌注24 h后记录上述各组大鼠神经功能缺损评分;核磁共振成像测试用于确定脑梗死体积;苏木精-伊红（HE）和原位缺口末端标记法（TUNEL）染色用于观察脑组织病理变化和神经细胞凋亡;莫里斯水迷宫测试用于评估大鼠的空间学习和记忆能力;相应的试剂盒测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达水平;Western bl...     

新加肾元方调控RIPK1/RIPK3/MLKL通路对高糖诱导的糖尿病肾病肾小球足细胞损伤的影响

目的:探讨新加肾元方对高糖诱导的糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)大鼠肾小球足细胞损伤及RIPK1/RIPK3/MLKL通路的影响,并分析其可能的作用机制。方法:选取70只SD大鼠,随机取12只为正常对照组,另58只采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射STZ法建立糖尿病肾病大鼠模型成功48只,随机分为模型组,阳性对照组,新加肾元方低、高剂量组,各12只。阳性对照组厄贝沙坦水溶液0.017g/kg灌胃,新加肾元方低、高剂量组0.72g/kg、1.44g/kg灌胃,正常对照组、模型组等体积生理盐水灌胃。检测肾功能：尿素氮、血清肌酐、蛋白尿;HE染色观察肾组织病理形态;透射电镜观察肾小球足细胞超微结构变化;TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡情况;ELISA检测肾组织TNF-α、IL-6水平;WB检测肾组织RIPK1/RIPK3/MLKL通路相关蛋白表达;对新加肾元方中所含活性成分进行收集与筛选,并对“有效成分-靶点”拓扑分析所得度值较高的有效成分进行分子对接。结果:模型组大鼠蛋白尿、血清肌酐、尿素氮水平、凋亡指数、TNF-α、IL-6水平、RIPK1、RIPK3、MLK...     

RIPK1抑制糖皮质激素体外诱导的间充质干细胞凋亡

 目的  研究受体相互作用蛋白激酶1(receptor-interacting protein kinase 1,RIPK1)抑制糖皮质激素(glucocorticoid,GC)体外诱导的间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)的凋亡效果及其调控机制。方法    将SD大鼠来源的MSC,分为3组:GC+MSC组,GC+RIPK1-MSC组和生理盐水+MSC组(对照组)。通过形态学观察、MTT分析、AO/EB 染色、Hoechest 333342 染色、Live/Dead 染色、TUNEL凋亡检测及Western blot分析等方法确定抑制效果,并分析其中涉及的关键蛋白和信号通路。结果   GC诱导24 h后,MSC发生凋亡,并证实RIPK1可对抗这种凋亡。RIPK1上调伴随TRAF2/cIAP1/cFLIPL水平升高,其为对抗凋亡的关键蛋白通路。结论     RIPK1可抑制GC诱导的MSC凋亡,为早期阻遏股骨头坏死(osteonecrosis of femoral head,ONFH)提供了新思路。     

利拉鲁肽激活Wnt/β-catenin信号通路保护大鼠急性脊髓损伤后神经功能的分子机制研究

目的 探讨利拉鲁肽通过调控Wnt/β-catenin信号通路对急性脊髓损伤大鼠神经保护作用的机制。方法 60只SD大鼠随机选取15只作为假手术组(仅接受T9～T10椎板切除术),其余45只大鼠采用改进Allens技术建立急性脊髓损伤模型。脊髓损伤模型建立成功后,随机分为模型组、利拉鲁肽组和利拉鲁肽+XAV939组,各15只。在脊髓损伤后的14 d内,假手术组和模型组大鼠每天皮下注射50 mg/kg生理盐水,利拉鲁肽组大鼠每天皮下注射50μg/kg利拉鲁肽,利拉鲁肽+XAV939组大鼠每天皮下注射50μg/kg利拉鲁肽和0.4 mg/kg XAV939(一种Wnt/β-catenin信号通路的小分子抑制剂)。于术前、干预第7天、第14天时,采用BBB评分法对大鼠下肢运动功能进行评估。第14天采用蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫组化分析β-连环蛋白(β-catenin)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)蛋白表达水平。第14天采用HE和尼氏染色观察大鼠脊髓组织神经细胞变化。结果 术前各组间BBB评分无差异。干预第7天、第1...     

人参皂苷Rg1对脊髓压迫损伤模型大鼠病灶中促凋亡/抗凋亡平衡的影响

目的:研究人参皂苷Rg1对脊髓压迫损伤型大鼠病灶中促凋亡/抗凋亡平衡的影响。方法:选择Wistar大鼠作为实验动物,随机分为假手术组、压迫损伤组、人参皂苷组,建立脊髓压迫损伤模型后给予10mg/kg的人参皂苷Rg1腹腔注射干预。干预后14d,收集伤部位的脊髓组织并检测促凋亡基因、抗凋亡基因、凋亡相关信号通路基因的mRNA表达量。结果:压迫损伤组大鼠脊髓组织中Bcl-2、Bclxl、NAIP、Survivin、ERK1/2、p38MAPK、JNK、STAT3、STAT5的mRNA表达量均显著低于假手术组,Bax、caspase-3、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量均显著高于假手术组(P<0.05);人参皂苷组大鼠脊髓组织中Bcl-2、Bcl-xl、NAIP、Survivin、ERK1/2、p38MAPK、JNK、STAT3、STAT5的mRNA表达量均显著高于压迫损伤组,Bax、caspase-3、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量均显著低于压迫损伤组(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1对脊髓压迫损伤模型大鼠病灶中促凋亡/抗凋亡的平衡具有调节作用。     

ERK信号通路在神经细胞凋亡中的双重作用

细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路参与细胞的多种生物学过程,包括细胞增殖、迁移、分化和死亡。尽管大多数研究证实,神经细胞中的ERK信号通路具有抗凋亡的作用,但是其促进凋亡的作用也已被发现。在本文中,我们将综述ERK信号通路在神经细胞凋亡中的双重作用。     

基于p38 MAPK/Drosha信号通路探讨脑出血患者继发性脑损伤及神经细胞凋亡的机制

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/Drosha信号通路对脑出血(intracerebral hemorage,ICH)继发性脑损伤(secondary brain injury,SBI)及神经细胞凋亡的影响.方法 通过胶原酶注射建立的ICH...     

野黄芩素经Akt/FoxO1信号通路抑制视网膜神经节细胞凋亡

目的探讨野黄芩素经Akt/叉头状转录因子O1(FoxO1)信号通路抑制视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的机制。方法构建视网膜神经RGC-5细胞氧化应激损伤模型,野黄芩素组分别给与25和100 μmol/L野黄芩素,阳性对照组给予25 μmol/L拉坦前列素,设模型组和阴性对照组。检测各组细胞增殖和凋亡情况,以及RGC-5细胞活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)及凋亡相关蛋白的水平。结果与阴性对照组比较,其他组细胞增殖率、SOD、p-Akt/Akt、p-FoxO1/FoxO1和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)水平降低,细胞凋亡率、ROS、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和Caspase-3水平增加(P＜0.05)。与模型组比较,野黄芩素组和阳性对照组细胞增殖率、SOD、p-Akt/Akt、p-FoxO1/FoxO1和Bcl-2水平增加,细胞凋亡率、ROS、Bax和Caspase-3水平降低;且随野黄芩素剂量增加差异更为显著,但阳性对照组作用最明显(P＜0.05)。结论野黄芩素可以抑制RGC-5细胞凋亡,其机制可能与激活Akt/FoxO1信号通路有关。     

NIPA2通过JAK/STAT信号通路对高糖诱导的成骨细胞凋亡的调控作用及其机制

目的：探讨普瑞德-威利/安格曼综合征区域蛋白2（NIPA2）对高糖诱导的成骨细胞凋亡的影响,阐明其作用机制。方法：将成骨细胞MC3T3-E1采用26 nmol·L^-1高糖处理24 h,将细胞分为HG+si-con组（转染si-con）、HG+si-NIPA2组（转染si-NIPA2）、HG+si-NIPA2+DMSO组（转染si-NIPA2后再用DMSO处理）和HG+si-NIPA2+AG490组（转染si-NIPA2后再用AG490处理）,另设对照组。采用脂质体法转染MC3T3-E1细胞,再用26 nmol·L^-1高糖处理;采用qRT-PCR法检测MC3T3-E1细胞中NIPA2 mRNA表达水平,Western blotting法检测细胞中NIPA2、P21、Cleavedcaspase-3、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：与对照组比较,HG组MC3T3-E1细胞中NIPA2 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）。敲减NIPA2后,与HG+si-con组比较,HG+si-NIPA2组MC3T3-E1细胞中NIPA2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,P21和Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,MC3T3-E1细胞在48和72 h时细胞增殖活性明显降低（P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,JAK/STAT信号通路相关蛋白p-JAK2和p-STAT3的表达水平明显升高（P<0.01）。与HG+si-NIPA2+DMSO组比较,HG+si-NIPA2+AG490组MC3T3-E1细胞中NIPA2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,P21和Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,在48和72 h时细胞增殖活性明显升高（P<0.01）,细胞凋亡率明显降低（P<0.01）。结论：NIPA2对高糖诱导的成骨细胞增殖和凋亡具有调控作用,其调控机制与JAK/STAT信号通路有关。     

hFIST/HIPK2在Fas/FasL和TNF/TNFR1介导的凋亡信号转导途径中的作用

目的 探讨hFIST／HIPK2在Fas／FasL介导的凋亡信号转导途经中的作用。方法 应用瞬时转染技术，将全长序列hFIST／HIPK2、Fas(CD95／Apo-1)、TNFR1、FADD、TRADD、easpase-8 cDNAs转染入293T细胞中，应用免疫沉淀技术、Western Blotting技术检测hFIST／HIPK2与以上凋亡相关蛋白的相互作用。结果 hFIST／HIPK2与Fas、TNFR1、FADD、caspase-8无相互作用，与TRADD有相互作用，且Fas、TNFR1竞争性抑制这种相互作用。在有FasL存在及无FasL存在时，Fas均可与FADD相互作用；Fas与TRADD有相互作用。结论 hFIST／HIPK2与TRADD有相互作用，Fas与TRADD有相互作用，hFIST／HIPK2可能间接参与了Fas／FasL、TNF／TNFR1信号转导途径。     

来氟米特通过 PI3K／Akt／mTOR信号通路诱导大鼠系膜细胞凋亡的作用

目的：探讨来氟米特（A771726）对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响及可能机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组（加入含5％胎牛血清的DM EM 培养液）、A771726组（在对照组基础上加入 A771726,使其终浓度为50μg／mL）、LY294002组（在正常对照组基础上加入LY294002,使其终浓度为2μg／mL）,LY294002＋A771726组（先加2μg／mL的LY294002干预系膜细胞4 h后,加入50μg／mL的A771726）,采用流式细胞术检测各组干预48 h后对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响,采用免疫荧光法检测各组干预48 h对大鼠系膜细胞中mTOR蛋白表达的影响,采用免疫印迹法检测各组干预48 h后对大鼠系膜细胞中Caspase‐3表达的影响。结果与正常对照组比较,A771726、LY294002、LY294002＋ A771726组大鼠肾小球系膜细胞的凋亡率均明显升高,mTOR蛋白表达均明显降低,Caspase‐3蛋白表达均明显增加;与 A771726组比较,LY294002、LY294002＋ A771726组大鼠肾小球系膜细胞的凋亡率均明显升高,mTOR蛋白表达均明显降低,Caspase‐3蛋白表达均明显增加;与LY294002组比较,LY294002＋A771726组大鼠肾小球系膜细胞的凋亡率明显升高,mTOR蛋白表达明显降低,Caspase‐3蛋白表达明显增加。结论来氟米特可能通过下调PI3K／Akt／mTOR信号通路而诱导大鼠肾小球系膜细胞的凋亡,且来氟米特可协同LY294002共同诱导大鼠系膜细胞的凋亡。     

SHH信号通路对子痫前期患者滋养细胞凋亡和侵袭的影响及其机制

目的：探讨激活SHH信号通路对子痫前期（PE）患者滋养细胞凋亡和侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法：将HTR8/SVneo细胞分为正常对照组、缺氧/复氧（H/R）处理组和purmorphamine+H/R处理组。Western blotting法检测PE胎盘组织和正常妊娠晚期胎盘组织及各组HTR8/SVneo细胞中SHH信号通路相关蛋白SHH、Ptch1、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达水平,流式细胞术（FCM）检测各组HTR8/SVneo细胞的凋亡率,Transwell小室法检测各组HTR8/SVneo细胞的穿膜细胞数,Western blotting法检测各组HTR8/SVneo细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达水平。结果：PE胎盘组织HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达水平均明显低于正常妊娠晚期胎盘组织（P<0.05）;H/R处理组HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1、Gli3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及穿膜细胞数均明显低于正常对照组,细胞凋亡率明显高于正常对照组（P<0.05）;purmorphamine+H/R处理组HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1、Gli3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及穿膜细胞数均明显高于H/R处理组（P<0.05）,细胞凋亡率明显低于H/R处理组（P<0.05）。结论：激活SHH信号通路可减少PE患者胎盘组织中HTR8/SVneo细胞凋亡,并通过上调MMP-2和MMP-9表达提高细胞的侵袭能力。     

芸香苷通过 PI3K/AKT 信号通路抑制 H2 O2诱导人晶状体上皮细胞凋亡

目的：探讨 PI3K/ AKT 信号通路是否参与芸香苷对过氧化氢(H2 O2)诱导人晶状体上皮细胞(HLEC)凋亡的抑制作用。方法将培养的 HLEC 分为4组：空白对照组、H2 O2组、芸香苷组、LY294002组;采用 MTT 法测细胞存活率,Western blot 法检测 p-AKT 及 AKT 的表达,Annexin V-FITC/ PI 双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果H2 O2可诱导 HLEC 发生凋亡,与 H2 O2组相比,芸香苷组不仅使 AKT 的磷酸化水平显著升高,还降低了细胞凋亡率(P<0．01);在 LY294002干预组, PI3K/ AKT 信号通路的特异性阻断剂 LY294002明显抑制了芸香苷组中各项指标的变化,差异有统计学意义(P <0．01),但与 H2 O2组比较,差异无统计学意义。结论芸香苷抑制 H2 O2诱导的 HLEC 凋亡可能与 PI3K/ AKT 信号通路有关。     

三叶青黄酮调控STAT3信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制研究

目的 分析三叶青黄酮调控STAT3信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制.方法 将膀胱癌T24细胞分为对照组、低剂量组和高剂量组,分别使用空白培养基、50μg/mL三叶青黄酮、100μg/mL三叶青黄酮干预;使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,使用MTT法检测T24细胞的凋亡抑制率;使用Western blot法检...     

补阳还五汤通过NLRP3/caspase-1调控大鼠髓核细胞退变的机制研究

目的探讨隐丹参酮对脑卒中大鼠的保护作用及对PI3K/AKT-eNOS信号通路的影响。方法将40只SD大鼠随机分为对照组、脑卒中模型组、低剂量隐丹参酮组(5mg/kg)、中剂量隐丹参酮组(15mg/kg)与高剂量隐丹参酮组(45mg/kg),每组均8只,采用线栓法建立大鼠脑卒中模型。采用酶联免疫吸附法测定大鼠大脑皮质和外周血中SOD、MDA及NO水平,Westernblol法检测大鼠脑组织PI3K及AKT的表达,qRT-_PCR分析评估Bcl-2,Bax和VECF的表达水平。结果与对照组相比,脑卒中模型组PI3K 磷酸化、VECF、eNOS、MDA水平增加(P<0.05);隐丹参酮组PI3K膜易位AKT磷酸化、VEGF 、eNOS MDA水平减弱(P<0.05);且与剂量呈负相关(P<0.05)。与对照组相比,脑卒中组NO、SO[J]. Bel- 2 Bax水平显著下降(P<0.05),隐丹参酮组NO、S0D Bcl-2. Bax 水平升高(P<0.05),且与剂量呈正相关(P<0.05)。结论隐丹参酮对脑卒中大鼠脑组织具有保护作用,其作用机制可能与其抑制PI3KAKT-eNOS信号通路有关。     

水仙环素通过调控PLK1/AKT信号通路诱导三阴性乳腺癌细胞细胞周期阻滞和凋亡

摘 要：目的 研究水仙环素（Narciclasine，Nas）对人三阴性乳腺癌（Triple negative breast cancer，TNBC）细胞周期和凋亡的抑制作用及分子机制。方法 采用细胞增殖-毒性检测试剂盒（Cell Counting Kit-8，CCK-8）、克隆形成、Transwell、流式细胞术等实验分析Nas对TNBC细胞株MDA-MB-231细胞增殖和侵袭能力的抑制作用，及对细胞周期和凋亡的诱导作用；利用免疫印迹（Western blot，WB）实验分析Nas对MDA-MB-231细胞株cle-Caspase-3、PARP、cle-PARP、PLK1、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、CDK1、Cyclin B、Cyclin A、p-21、p-27、p-62、LC3、γ-H2AX等蛋白质的影响。结果 不同浓度的Nas（浓度分别为0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、2.0 μmol/L）能抑制MDA-MB-231细胞株的克隆形成（48 h抑制率分别为15.99%、24.76%和54.17%）、侵袭能力（48h抑制率分别为0.68%、23.20%和45.27%），可将细胞周期阻滞于G2期（48 h阻滞率分别为75.50%、140.56%和316.06%），可对细胞凋亡起到诱导作用（48 h凋亡诱导率分别为105.39%、199.73%和375.74%；72 h凋亡诱导率分别为104.45%、244.96%和709.60%）。分子机制实验显示Nas可以显著促进cle-Caspase-3、cle-PARP、γ-H2AX、p-21及p-27等蛋白质的表达，显著抑制PLK1、p-PI3K、p-AKT、CDK1、Cyclin B等蛋白质的表达水平，而对PARP、p-62、LC3-II/I、PI3K、Cyclin A等蛋白质的表达水平影响不明显。结 论 Nas能抑制MDA-MB-231细胞株的克隆形成、侵袭能力，对凋亡起到诱导作用，并将细胞周期阻滞于G2期，该机制可能通过调节PLK1/AKT信号通路来实现。