康莱特注射液调控胆固醇代谢以抑制肺腺癌A549细胞的恶性生物学行为

目的：明确康莱特注射液（KLTi）通过调控胆固醇代谢对肺腺癌A549 细胞恶性生物学行为的抑制作用。方法：构建A549 细胞体外培养模型,设置空白对照组（CON组）、KLTi组、顺铂（DDP）组及KLTi+DDP 组,分别给予对应药物干预,采用CCK-8法检测不同分组的药物干预对A549 细胞增殖的影响,并确定IC50 值用于后续实验;使用细胞划痕实验、平板克隆形成实验、 Transwell 侵袭实验观察不同分组药物对A549 细胞恶性生物学行为的影响;流式细胞术检测不同分组药物对A549 细胞晚期凋亡水平的影响;WB法检测各组细胞上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达,ELISA 法检测促炎因子释放水平。采用比色法检测细胞胆固醇含量水平的组间差异,借助WB法检测胆固醇代谢相关膜通道蛋白ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）及功能蛋白ATP柠檬酸裂解酶（ACLY）、肽基脯氨酰异构酶B（PPIB）表达水平差异。结果：KLTi 及DDP对A549 细胞抑制作用具有时间及剂量依赖性（均P<0.05）,最终选择2 mg/mL KLTi、3 μg/mL DDP作为干预剂量,按分组加药干预48 h后显示,KLTi 单用或联合DDP均可抑制A549 细胞克隆形成、迁移、侵袭能力且促进其晚期凋亡,KLTi+DDP 组的效果更加明显（P<0.05 或P<0.01）; KLTi 单用或联合DDP 可通过调控E-cadherin、vimentin、snail 蛋白表达从而影响A549 细胞EMT 进程（P<0.05 或P<0.01）,同时下调IL-6 及IL-8的释放水平（P<0.05 或P<0.01）。KLTi 单用及联合DDP 均可以明显降低A549 细胞胆固醇含量（P<0.05 或P<0.01）,并且对ABCA1、ACLY、PPIB 表达具有调控作用,联合组的效果更加明显（P<0.05 或P<0.01）。结论：KLTi 可能通过调控胆固醇代谢水平及相关通道蛋白抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为及EMT进程。     

低氧环境下甲酰肽受体1 拮抗剂Boc2 对人肺腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨低氧环境下甲酰肽受体1（formyl peptide receptor 1,FPR1）的拮抗剂Boc2 对人肺腺癌细胞迁移、侵袭、增殖及成瘤能力的影响。方法：采用Western blotting 检测低氧诱导下人肺腺癌细胞A549 中低氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α）和FPR1 蛋白的表达情况。以FPR1 拮抗剂Boc2 体外处理低氧诱导的A549 细胞,按照随机数字表法分为3 组：对照组（常氧条件下培养）、低氧组和低氧+Boc2 处理组。细胞划痕实验、Transwell 细胞侵袭实验及MTT法分别用于检测各组细胞的迁移、侵袭和增殖能力。接种A549 细胞制备裸鼠移植瘤模型,同上分3 组,4 周后处死裸鼠,分析各组间裸鼠移植瘤体积、质量、成瘤率以及迁移相关蛋白E-钙黏素（E-cadherin,E-cad）和侵袭相关蛋白MMP-9 表达量的差异性。结果：低氧诱导能促进A549 细胞FPR1 蛋白的表达,且呈时间依赖性（P<0.05）。与对照组相比,低氧组细胞的迁移、侵袭及增殖能力均显著增强（P<0.01）,而相对低氧组,Boc2 处理能显著抑制A549 细胞的迁移、侵袭和增殖能力（P<0.05）。低氧组裸鼠成瘤率为100.0%（15/15）,对照组为60.0%（9/15）,低氧+Boc2 处理组裸鼠成瘤率为73.3%（11/15）;低氧组裸鼠移植瘤体积、质量均显著高于对照组（均P<0.01）;而相对低氧组,低氧+Boc2 处理组裸鼠肿瘤体积、质量均有显著降低（均P<0.01）。低氧组E-cad 及MMP-9 蛋白表达量显著高于对照组（P<0.01）,而与低氧组相比Boc2 处理能显著降低E-cad 及MMP-9 蛋白表达量（P<0.05）。结论：FPR1 拮抗剂Boc2 能显著抑制低氧诱导的人肺腺癌细胞A549 的迁移、侵袭、增殖及成瘤能力,表明FPR1 在人肺腺癌的发生发展过程中扮演着重要角色,并有可能成为人肺腺癌治疗的潜在靶点。     

光甘草定对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制

目的：探讨光甘草定对肺腺癌细胞A549 恶性生物学行的影响及其分子机制。方法：常规方法培养A549 细胞和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,用不同浓度的光甘草定和或顺铂对其进行处理,通过结晶紫染色、CCK-8 法检测光甘草定、顺铂对A549、BEAS-2B细胞增殖活力的影响,Transwell 小室实验、细胞划痕实验检测光甘草定对A549 细胞侵袭、迁移能力的影响,流式细胞术检测光甘草定对A549 细胞凋亡的影响,3D超低黏附板培养法培养A549 细胞后采用CCK-8法检测光甘草定对A549 细胞增殖的影响,WB法检测光甘草定对A549 细胞中上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达的影响;构建A549 细胞移植瘤模型后检测光甘草定、顺铂对移植瘤的生长以及移植瘤组织中EMT相关蛋白表达的影响。结果：光甘草定、顺铂呈剂量依赖性地显著抑制A549 细胞的增殖（P<0.05 或P<0.01）、细胞迁移（P<0.05 或P<0.01）和侵袭能力（P<0.05 或P<0.01）,光甘草定能诱导A549 细胞凋亡（P<0.01）,抑制A549 细胞中N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达,促进E-cadherin 蛋白表达;光甘草定、顺铂均能抑制A549移植瘤的生长,抑制移植瘤组织中Ki67、N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达、促进E-cadherin 蛋白的表达。结论：光甘草定可通过抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其抑制细胞的EMT进程而产生抑癌作用有关。     

IL-17RA基因过表达对人肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨白介素-17受体A（interleukin-17 receptor A,IL-17RA）对人肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:构建IL-17RA基因过表达慢病毒载体并感染A549细胞,采用RT-qPCR法和Western blot方法检测IL-17RA、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白的表达。MTT实验、划痕实验及Transwell侵袭实验检测IL-17RA过表达对A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:IL-17RA过表达A549细胞中IL-17RA mRNA和蛋白表达显著上调。IL-17RA过表达细胞的增殖活性同对照组无明显变化,但过表达组细胞的迁移距离较空载病毒组及空白对照组明显增多（P<0.05）,过表达组穿膜细胞数较空载病毒组及空白对照组明显增多（P<0.05）。IL-17RA高表达可明显上调MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结论:成功构建IL-17RA过表达A549细胞,IL-17RA具有增强A549细胞迁移及侵袭的作用,其机制可能与上调MMP-2和MMP-9表达有关。     

HuR siRNA对肺腺癌A549 细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的：探讨HuR siRNA 对人肺腺癌A549 株细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能机制。方法：HuR siRNA 瞬时转染肺腺癌A549 细胞24 h 后,CCK-8 实验、集落形成实验检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,qPCR和Western blotting 检测HuR及基质金属蛋白酶（MMP）-9 基因mRNA和蛋白质表达。结果：HuR siRNA能够抑制人肺腺癌A549 细胞的增殖、迁移及侵袭;HuR siRNA 显著降低A549 细胞HuR、MMP-9 mRNA和蛋白表达（P＜0.01）。结论：下调HuR能抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭,其机制与下调MMP-9 有关。     

苯丁酸钠对体外人肺腺癌细胞A549的影响

目的观察苯丁酸钠（PB）对体外人肺腺癌细胞A549的影响。方法采用MTT法观察不同浓度PB对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用,流式细胞术分析不同浓度PB对生长期人肺腺癌细胞A549的细胞周期及凋亡情况的影响。结果 PB作用后人肺腺癌细胞A549的生长缓慢,细胞阻滞于G0/G1期（P〈0.05）,凋亡增加（P〈0.05）,其抑制作用呈时间和浓度依赖性。结论 PB能抑制人肺腺癌细胞A549的生长,促进其凋亡。     

黏蛋白13在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞恶性生物学行为的影响与可能的机制

目的：探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法：通过癌症基因组图谱（TCGA）和高通量基因表达（GEO）数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达。qPCR法和WB法检测人肺腺癌细胞NCI-H1395、NCI-H1975、H1299、A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中MUC13 mRNA和蛋白的表达水平。利用si RNA技术敲低A549细胞中MUC13表达,实验分为si-MUC13组、NC组和si-MUC13+IGF-1组。通过克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测敲低MUC13对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,WB法检测敲低MUC13对A549细胞上皮钙黏素（E-cadherin）、神经钙黏素（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT等蛋白表达的影响。结果：MUC13 mRNA和蛋白在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达（均P<0.01）,选取表达水平较高的A...     

α1AT基因对人肺腺癌细胞株A549裸鼠皮下移植瘤的作用

目的探讨α1AT基因对人肺腺癌细胞株A549裸鼠皮下移植瘤的作用。方法离体途径将α1AT基因转染人肺腺癌细胞株A549，然后接种于裸鼠皮下，观察肿瘤体积的变化，并计算抑瘤率。结果经α1AT基因转染后的人肺腺癌细胞株在裸鼠皮下成瘤能力降低，裸鼠成瘤潜伏期延迟，最大抑瘤率可达55．5％。结论高表达α1AT基因能降低A549的成瘤能力，抑制肿瘤生长。     

地塞米松预处理人肺腺癌 A549 细胞对顺铂抗肿瘤活性的影响

目的：探讨地塞米松（dexamethasone,DEX）预处理人肺腺癌A549细胞后,对化疗药物顺铂（cispla—tin,DDP）抗肿瘤活性的影响。方法：以不同浓度（500、1000nmol／L）DEX预先作用于人肺腺癌A549细胞12h后,再用不同浓度（1．25、2．5、5u/ml）DDP处理。流式细胞术测定细胞凋亡,细胞计数观察细胞生长密度、形态。结果：DEX对A549细胞增殖有抑制作用。DDP能够明显抑制A549细胞增殖,促进其凋亡。DEX预处理后DDP干预A549细胞的增殖抑制作用较单一用DDP增强,且随着DEX浓度的增加,其对化疗药物DDP凋亡抑制作用的影响增强。结论：DEX预处理对顺铂诱导的人肺腺癌A549细胞的凋亡具有明显的促进作用,能增强DDP的抗肿瘤活性。     

rNDV IL-29对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨表达IL-29的重组新城疫病毒(recombinant Newcastle disease virus IL-29,rNDV IL-29)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和细胞凋亡的影响.方法:实验分为rNDV IL-29组(rNDV IL-29感染A549细胞)、NDV组(NDV感染A549细胞)和对照组(PBS).用Western blotting、RT-PCR、免疫荧光法检测IL-29蛋白及其mRNA的表达;MTT、克隆形成实验及划痕实验检测rNDV IL-29对A549细胞增殖、迁移能力的影响;流式细胞术及Western blotting检测rNDV IL-29对A549细胞凋亡的影响.结果:与NDV组和对照组相比,rNDV IL-29组细胞:(1) IL-29蛋白及其mRNA表达水平显著升高;(2)细胞增殖抑制率明显升高[(56.48±11.89)％ vs (42.18±6.18)％,P＜0.05],细胞迁移率明显下降[(5.00±4.00)％ vs (32.43 ±3.71)％、(84.57±3.96)％,均P＜0.05];(3)Caspase3表达水平明显上调[(29.67±1.53)％ vs (18.33±3.06)％、(7.00±6.08)％,均P＜0.05],Bcl-2/bax表达水平明显下调[(12.00±2.65)％ vs (42.33±5.86)％、(67.00±6.25)％,均P＜0.05],细胞凋亡增多.结论:rNDV IL-29抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移,并且促进其凋亡,提示rNDV IL-29可能成为一种很有潜力的抗癌药物.     

S100A6基因干扰对A549肺腺癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨S100A6基因干扰对A549肺腺癌细胞生物学行为的影响.方法 构建S100A6基因RNAi载体,慢病毒转染A549肺腺癌细胞,共分为3组,①空载体对照组:转染不携带S100A6基因RNAi的空载质粒;②阴性对照组:未转染任何质粒;③S100A6 RNA干扰组:携带S100A6基因RNAi的质粒.应用实时聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting鉴定S100A6基因和蛋白表达;采用四甲基偶氮唑蓝、迁移试验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、浸润、细胞周期及细胞凋亡等生物学特性.结果 S100A6基因干扰后A549肺腺癌细胞S100A6 mRNA的表达(0.009±0.001)较阴性对照组(0.049 ±0.005)和空载体对照组(0.030 ±0.006)均有明显下降,差异均有统计学意义(=57.56,P=0.000;t=48.21,P=0.000).S100A6基因干扰后A549肺腺癌细胞S100A6蛋白的表达(0.107±0.002)较阴性对照组(0.341 ±0.005)和空载体对照组(0.311 ±0.006)均有明显下降,差异均有统计学意义(t=37.34,P=0.000;=27.51,P=0.001).48 h细胞增殖能力:RNA干扰组(0.230 ±0.008)较阴性对照组(0.292 ±0.038)和空载体对照组(0.307 ±0.013)降低,差异均有统计学意义(t=25.31,P=0.003;t=29.42,P=0.001).细胞浸润能力:RNA干扰组细胞的穿膜细胞数(11.40个±1.36个)较阴性对照组(26.80个±1.83个)和空载体对照组(25.80个±1.93个)降低,差异有统计学意义(t=29.44,P=0.001;t=23.17,P=0.005).细胞周期:RNA干扰组的S期细胞比例(28.26％±0.38％)显著低于空载体对照组(44.73％±0.66％)和阴性对照组(45.15％±1.69％),差异有统计学意义(t=63.69,P=0.000;t =71.55,P=0.000),RNA干扰组的G2-M期细胞比例(26.99％±0.29％)显著高于阴性对照组(13.26％ ±0.49％)和空载体对照组(12.41％±0.46％),差异有统计学意义(t=56.31,P=0.000;t =51.39,P=0.000).RNA干扰组细胞凋亡率(8.90％±0.48％)与阴性对照组(5.84％±0.21％)和空载体对照组(5.99％±0.37％)比较,差异均有统计学意义(t=51.34,P=0.000;t=47.27,P=0.000).结论 S100A6基因参与肺腺癌细胞的增殖、浸润、细胞周期、细胞凋亡等生物学过程,与肿瘤发生、发展、转移等密切相关,有望作为肺腺癌诊断和治疗新的分子靶标.     

KIF14对肺腺癌A549细胞生物学功能的影响

目的:探讨驱动蛋白超家族蛋白14(KIF14)在肺腺癌(LUAD)中的表达情况及对LUAD细胞生物学功能的影响。方法:通过TCGA、GEO数据库分析KIF14 mRNA在LUAD中表达情况,采用Kaplan-Meier法分析KIF14表达与患者预后的关系。利用单样本基因集富集分析(ssGSEA)和TIMER数据库探索KIF14表达水平与肿瘤免疫浸润的关系。通过功能富集分析注释KIF14在肺腺癌中的生物学功能。进一步进行体外实验和免疫组织化学验证。通过实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot检测KIF14在LUAD细胞系中表达情况;构建KIF14干扰序列并将其转染入A549细胞中,将其分为NC组(转染KIF14阴性对照序列)、siKIF14组(转染靶向KIF14的siRNA序列)。Western blot检测细胞中KIF14沉默效果;CCK-8、平板克隆形成实验检测siKIF14对LUAD细胞增殖能力的影响;TUNEL凋亡实验检测siKIF14对LUAD细胞凋亡能力的影响;Transwell和划痕实验检测siKIF14对LUAD细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:生物信息数据...     

慢病毒介导shRNA沉默QKI-6基因对人肺腺癌A549细胞生物学行为的影响

目的:探讨慢病毒介导shRNA沉默QKI-6基因对人肺腺癌A549细胞QKI-6基因表达、细胞周期、克隆形成和细胞迁移的影响。方法:构建QKI-6-shRNA慢病毒表达载体,并用其转染A549细胞,阴性对照组转染无意义序列,空白对照组为A549细胞。运用RT-PCR及Western blot检测各组细胞QKI-6 mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期,琼脂成瘤实验检测细胞克隆形成能力,Transwell实验检测细胞迁移能力。结果:实验组QKI-6 mRNA及蛋白表达均较阴性对照组及空白对照组降低。实验组较阴性对照组及空白对照组,G0/G1期细胞比例降低（P<0.05）,S期细胞比例增高（P<0.05）。琼脂成瘤实验显示,实验组与空白对照组及阴性对照组比较,克隆形成率明显提高（P<0.05）。细胞迁移实验结果显示,实验组与空白对照组及阴性对照组比较,细胞迁移数量明显增多（P<0.05）。结论:QKI-6能够抑制肺腺癌细胞生长、克隆形成及迁移,QKI-6有望成为肺癌治疗的新靶点。     

吗啡对人肺腺癌A549细胞增殖的作用研究

目的 观察不同浓度吗啡对A549细胞增殖及凋亡的影响。方法 采用不同浓度的吗啡（0.3、3、30 μg/ml）处理A549细胞48 h后采用CCK-8法检测其增殖情况,Annexin-V FITC/PI双染法检测30 μg/ml吗啡作用48 h后的细胞凋亡率,Western blotting检测30 μg/ml吗啡作用48 h后的X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、Survivin、Bcl-2、caspase-3和Bax蛋白表达水平。 结果 吗啡可以剂量依赖性促进A549细胞增殖,各浓度间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。与对照组相比,30 μg/ml吗啡降低了A549细胞的凋亡率（P＜0.05）,且Survivin和XIAP蛋白水平升高,而caspase-3蛋白水平降低（P＜0.05）。 结论 吗啡可促进人肺腺癌A549细胞增殖并抑制其凋亡,可能与吗啡上调XIAP、Survivin蛋白的表达和抑制caspase-3蛋白活化有关。     

敲降HE4 和PAX8 基因对TC方案治疗上皮性卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨敲降人附睾蛋白4（HE4）和配对盒基因8 抗原（PAX8）基因后对紫杉醇药+铂类药（TC方案）治疗的上皮性卵巢癌OVCAR3 细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法：分别设计和合成敲降HE4 和PAX8 的单靶siRNA（HE4-siRNA 或PAX8-siRNA）及双靶siRNA（HE4+PAX8-siRNA）和阴性siRNA 序列,并与质粒载体pGCsi-H1 相连形成重组质粒,分别转染人上皮性卵巢癌OVCAR3 细胞形成HE4-siRNA 组、PAX8-siRNA 组、HE4+PAX8-siRNA 组和siRNA-NC组,同时设立空白对照组（无任何处理）。用TC方案（紫杉醇3.13 μg/ml +卡铂2.82 μg/ml,）分别处理上述5 组细胞后,用MTT法、划痕愈合实验、Transwell 侵袭实验、流式细胞术检测各组细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡能力的变化。结果：敲降HE4 和PAX8 基因后,与siRNA-NC组和空白对照组比较,HE4-siRNA组、PAX8-siRNA 组、HE4+PAX8-siRNA 组卵巢癌OVCAR3 细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低（均P<0.01）,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,尤以同时敲降HE4 和PAX8 基因的效果更佳。结论: 敲降HE4 和PAX8 基因均可增强TC方案抑制上皮性卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭能力并促进其凋亡,尤以HE4 和PAX8 基因同时敲除的效果更好。     

lncRNAPCGEM1对肺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其作用机制

目的：探讨长链非编码RNA（long-chain noncoding，lncRNA）PCGEM1 对肺癌A549 细胞恶性生物学行为的影响及其作用机制。方法：收集2016 年3 月至2018 年5 月湖北医药学院附属太和医院胸外科接受手术治疗的62 例肺癌（lung cancer，LC）患者癌组织及相应的癌旁组织标本，并用以上组织构建LC组织芯片。用qPCR检测lncRNA PCGEM1 及miR-148a 在LC组织相应的癌旁组织及LC细胞株中的表达。构建lncRNA PCGEM1 沉默细胞系A549-siPCGEM1 和阴性对照A549-NC，并以A549 细胞作为空白对照（Control 组），用MTT和平板克隆实验检测敲减PCGEM1 对A549 细胞增殖能力的影响，Transwell 和划痕实验检测敲减PCGEM1 对A549 细胞侵袭和迁移能力的影响。使用生物信息学网站StarBase 预测可互补结合PCGEM1的miRNA，再根据Targetscan 网站预测相应可靶向结合miRNA的基因；Western blotting 实验检测TGF-β2/Smad2 信号通路蛋白表达情况。结果：在LC组织中PCGEM1 的表达水平高于癌旁组织而miR-148a 的表达量明显低于癌旁组织（均P<0.05），PCGEM1 在5 种LC细胞株中的表达明显高于人肺成纤维细胞HLF-02（均P<0.05），且以A549 细胞中表达最高。敲减PCGEM1 后，与Control 组和A549-NC 组比较，A549-siPCGEM1 组A549 细胞增殖、侵袭和迁移能力显著降低（均P<0.05）。StarBase 和Targetscan 网站预测结果显示，PCGEM1 可与miR-148a 互补结合，miR-148a 与TGF-β2 存在靶向结合位点。与Control 组和A549-NC组比较，A549-siPCGEM1 组中miR-148a 表达明显升高，TGF-β2 及p-Smad2 蛋白的表达明显降低（均P<0.05）。结论：lncRNA PCGEM1在LC组织和细胞株中高表达，高表达的PCGEM1 可通过下调miR-148a 水平强化TGF β2/Smad2 信号通路，从而促进A549 细胞恶性生物学行为的进展。