基于militarine含量结合UPLC指纹图谱的不同产地白及饮片质量分析

[目的] 采用超高效液相色谱法（UPLC）测定militarine（1,4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯）的含量,并建立不同产地白及饮片的UPLC指纹图谱,为白及饮片的质量控制提供参考依据。[方法] 采用ACQUITY UPLC^® BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×150 mm,1.7 μm）,以乙腈-纯水为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL/min,检测波长270 nm,柱温46℃,建立白及饮片的指纹图谱,进行相似度评价,在含量测定和指纹图谱基础上,采用聚类分析和主成分分析对不同产地白及饮片质量进行分析。[结果] 24批次的白及饮片militarine含量在18.98～44.87 mg/g之间,指纹图谱分析共标定12个共有峰,相似度在0.812～0.976之间,其中22批白及饮片的相似度均大于0.9,表明市售白及饮片整体质量基本一致;聚类分析和主成分分析将militarine含量和指纹图谱中4个关键成分的总相对含量均较低的样品聚为一类,聚类结果与相似度高低关系不大。[结论] 测定militarine含量结合UPLC指纹图谱评价白及饮片的质量,具有一定的科学性和可行性。     

白芍药材的质量属性研究及产地评价

[目的]通过药材含量、药材水煎液特征图谱及出膏率表征不同产地白芍药材的质量属性,为其在经典名方中的应用提供质量评价方法。[方法]以2015版药典方法测定各批次白芍药材中芍药苷的含量;参考古法制备药材水煎液,摸索并建立其特征图谱,测定6个产地共21批白芍药材的水煎液特征图谱和出膏率,并进行相似度评价、聚类分析和主成分分析。[结果]建立的白芍药材水煎液特征图谱,共标定6个共有峰,21批药材相似度介于0.829~0.999,可分为2类,聚类分析和主成分分析结果与相似度评价结果一致。[结论]以药材芍药苷含量、药材水煎液特征图谱及出膏率作为考察指标,通过化学计量学和成分分析可有效评价不同产地白芍药材的质量属性,具有一定的应用价值。     

香加皮有效部位滴丸的质量标准研究

[目的]建立香加皮有效部位滴丸的质量标准。[方法]建立了高效液相色谱(HPLC)法进行杠柳毒苷含量测定和杠柳毒苷的均匀度检查;对滴丸剂进行了常温下的初步稳定性考察。[结果]香加皮有效部位滴丸含量测定方法学考察的指标均符合有关规定;滴丸均匀度符合要求。[结论]建立了有效部位及滴丸的质量标准,方法简便、可靠。滴丸剂质量基本稳定。     

血栓通及单体成分人参皂苷Rd对内毒素激活小胶质细胞的影响

[目的] 研究血栓通及其单体成分对小胶质细胞(BV-2)的影响及其作用机制。[方法] 实验分为对照组、脂多糖刺激组、加药组和阳性药米诺环素组,CCK-8检测血栓通(不同稀释倍数的血栓通及其单体成分)对小胶质细胞活力的影响;Greiss法检测脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞一氧化氮(NO)产生的影响,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测炎性基因的表达。[结果] 血栓通在0.5~50 mg/L范围内对LPS诱导的小胶质细胞NO的产生没有抑制作用;在血栓通5种单体成分中,人参皂苷Rg1、Rb1、Re、三七皂苷对小胶质细胞NO的产生没有抑制作用;人参皂苷Rd在不影响细胞活力的情况下能明显抑制NO产生,并且能抑制炎症基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6) mRNA 的表达。[结论] 血栓通单体成分人参皂苷Rd抑制激活的小胶质细胞产生NO和iNOS 、IL-1β、IL-6 mRNA的表达可能是血栓通发挥神经保护作用的物质基础。     

酸枣仁总皂苷的含量测定

[目的] 测定经大孔树脂纯化后酸枣仁总皂苷的含量。[方法] 酸枣仁药材经乙醇提取,正丁醇萃取,大孔树脂纯化得酸枣仁总皂苷。以人参皂苷Rb1为标准品,香草醛-硫酸液显色,采用紫外分光光度法,543 nm为检测波长,以相应的吸收度A为横坐标（X）,浓度（g/L）为纵坐标（Y）绘制标准曲线。[结果] 回归方程为：Ŷ= 32.526X - 1.675 9,r=0.999 7.皂苷测定在取量1.818~ 29.09 mg/L时,吸光度与皂苷含量呈良好线性关系。精密度实验相对标准偏差（RSD）为0.09%,重现性实验RSD为0.28%,样品和标准品稳定性实验RSD分别为0.42%和1.13%,加样回收率实验结果平均回收率为99.88%,RSD为1.13%,样品中总皂苷的平均含量为54.59%,RSD为0.38.[结论] 建立的含量测定方法可行,稳定,可以用于浸膏的质量控制。     

高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1与黄芩苷在细胞培养基中的含量变化

[目的]研究细胞培养基中人参皂苷Rg1和黄芩苷稳定性问题。[方法]采用高效液相色谱法测定细胞培养基中人参皂苷Rg1和黄芩苷的含量。[结果]人参皂苷Rg1和黄芩苷的线性范围均为20～400ng,方法回收率分别为96.8%和97.7%。[结论]该法简便、灵敏、特异,适用于细胞培养基中人参皂苷Rg1和黄芩苷的测定。     

桑叶7种黄酮类成分同时测定及其抑制α-糖苷酶活性的研究

[目的] 测定桑叶7种黄酮类成分含量与其α-糖苷酶抑制活性,考察黄酮类成分与降糖活性关系,阐明桑叶"经霜为上"的科学内涵。[方法] 基于正交实验对桑叶提取方法进行优化,采用高效液相色谱（HPLC）法对不同采收期及不同产地桑叶7种黄酮类成分进行含量测定;采用酶标法对桑叶样品α-糖苷酶抑制活性进行测定。[结果] 桑叶最佳的提取条件为80%甲醇、超声30 min、料液比1：20;建立了桑皮苷A、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、紫云英苷、槲皮素和山奈酚7种黄酮类成分同时测定HPLC方法。[结论] 建立了同时测定桑叶中7种黄酮类成分的HPLC方法,且本方法精密度、重复性、稳定性、加样回收率良好;发现不同产地桑叶7种黄酮类成分总含量与其α-糖苷酶抑制活性呈正相关关系,本研究为桑叶"经霜为上"的科学内涵阐明,桑叶的临床应用、质量控制及桑叶资源的二次开发提供参考。     

天津市区零售药店五加皮用药情况调查

[目的]调查天津市区零售药店中五加皮的用药情况。[方法]以香加皮中的杠柳毒苷为指标成分,采用高效液相色谱(HPLC)以及薄层层析色谱(TLC)法进行含量测定和定性鉴别。[结果]在32个样品中,31个样品为香加皮,1个为五加皮。[结论]天津市区零售药店中存在以香加皮代五加皮的现象。     

RP-HPLC测定活血止痛片中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1含量

[目的]建立活血止痛片中三七皂苷R₁和人参皂苷Rg₁的含量测定方法。[方法]采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。[结果]三七皂苷R₁的线性范围为0.207~1.036μg,人参皂苷Rg₁的线性范围为0.829~4.148μg,样品平均回收率分别为96.1%,97.3%,RSD分别为2.02%,2.34%。[结论]本方法可准确测定活血止痛片中三七皂苷R₁和人参皂苷Rg₁的含量。     

药用菊花HPLC图谱分析及其模式识别研究

目的 研究药用菊花的质量控制方法。方法 采用高效液相色谱法建立了药用菊花HPLC图谱,对29种药用菊花栽培类型进行测定,并使用聚类分析和主成分分析对图谱进行模式识别研究。结果 聚类分析和主成分分析结果相一致,29份药用菊花种质资源分为两类。结论 该方法可用于药用菊花质量控制及其综合评价。     

《太平圣惠方》“三消”解析

《太平圣惠方》中明确提出"三消"一词,并对"三消"的病因、病机有独特的论述,通过对《太平圣惠方》中"三消"的病因病机及其中方药的分析,总结出《太平圣惠方》中"三消"的含义及辨证论治特点。     

不同种植区九寨刀党综合质量比较研究

目的 综合比较不同种植区九寨刀党质量,为九寨刀党种植区域规划提供依据。方法 采用SPSS17.0分析软件对来源于九寨沟县不同种植区的38份九寨刀党样品的主要性状及化学成分进行主成分分析及聚类分析。结果 筛选出特征根累计贡献率达到85.604%的5个主成分;以主成分分析确定的主成分值为指标,采用组内连接聚类法对不同种植区九寨刀党质量指标进行聚类分析,将38份样品划分为4类。结论 通过主成分聚类分析对不同种植区九寨刀党质量进行综合评价,此方法具有较强的可行性。九寨沟县不同种植区九寨刀党质量差异较大,需要加快规范化栽培技术的研究与应用。     

广西不同产区两面针HPLC指纹图谱研究

目的 采用高效液相色谱法建立两面针的HPLC色谱指纹图谱分析方法,为其品质控制提供可靠依据。方法 采用HPLC-UV分析两面针的指纹图谱。色谱柱：Ultimate^TMXB C₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为水（0.2%磷酸＋0.2%三乙胺）（A）-乙腈（B）,梯度洗脱：0～5 min,8%～12% B;5～7 min,12%～15% B;7～14 min,15%～21% B;14～35 min,21%～25% B;35～40 min,25%～36% B;40～60 min,36%～52% B;60～80 min,52%～100% B;80～95 min,100% B;体积流量1.0 mL/min;柱温 35 ℃;检测波长 250 nm,测定24批两面针指纹图谱,应用相似度分析、系统聚类分析,对两面针进行分类研究。结果 在色谱指纹图谱中,确定了22个共有峰,根据相似度分析、系统聚类分析的结果,将24批药材分为2类。结论 该指纹图谱检测方法方便,重现性好,可用于两面针质量控制。     

成都市售辣椒中产黄曲霉毒素菌株的分离及其基因分析

目的 从成都市售辣椒粉中,分离产黄曲霉毒素的菌株,探究产毒基因AflR、Omt-1和Ver-1与产黄曲霉毒素B1（AFB1）能力的关系。方法 采用传统培养法分离菌株,多重PCR方法筛查潜在产黄曲霉毒素菌株,对潜在产黄曲霉毒素菌株进行产毒培养,以ELISA方法检测潜在产毒株7 d产毒培养液中AFB1含量;同时基于潜在产毒株的产毒关键基因AflR、Omt-1和Ver-1构建系统进化树,分析其同源性。结果 64份辣椒样品中,分离到17株潜在产AFB1的黄曲霉菌株,有11株分离株产毒,产毒黄曲霉分离率为64.71%;且基于AflR、Omt-1和Ver-1基因与产毒标准菌株有较高同源性;有6株分离株不产毒,与米曲霉序列有较高同源性。结论 控制黄曲霉污染是黄曲霉控制中重要的环节之一。并非含有产毒基因的黄曲霉都会产AFB1毒素,产AFB1能力与产毒基因AflR的序列有着直接联系,而AFB1合成量的高低与Omt-1和Ver-1基因有关。     

云贵高原滇龙胆不同居群形态特征变异研究

目的 对云贵高原滇龙胆不同居群进行形态特征变异研究,为滇龙胆遗传多样性保护和良种选育提供依据。方法 采用野外调查取样,对27个滇龙胆居群根、茎、叶的15个形态性状指标进行测量和统计分析。结果 滇龙胆不同居群、不同产地和同一居群内不同个体间,在不同植物学性状上均有一定变异,其中,叶片数、植株生物量、株高、分枝数等形态指标变异较大。相关分析表明,滇龙胆植株根条数、根粗和根干质量同植株地上分枝数、叶片数及茎叶干质量呈显著或极显著正相关关系。聚类分析表明,27个滇龙胆居群可分为4组,其中第III组主要分布在黔西和川中南,比较适合作为高产优良品种选育的材料。主成分分析显示,茎叶干质量、根干质量、根条数、分枝数、株高、叶长这6个形态指标是造成表型差异的主要因素。结论 滇龙胆具有丰富的表型遗传多样性,并以根部表型性状变异幅度最大。在筛选高产滇龙胆种质资源时可考虑分枝数、叶片数和茎叶干质量这几个外观形态指标。     

制川乌与川贝母、浙贝母配伍前后化学成分的变化研究

目的 研究制川乌与川贝母、浙贝母配伍前后其化学成分的整体变化情况,从而分析乌头反贝母的相反机制。方法 使用UPLC-ESI-LTQ-MS对配伍前后的煎煮液进行分析,采用主成分分析（PCA）对数据进行分析并采用多级串联质谱技术对化学标志物进行鉴定。结果 制川乌与川贝母、浙贝母配伍前后成分均有明显差异,其中与川贝母配伍产生5个化学标志物,与浙贝母配伍产生6个化学标志物,重复出现的标志物为次乌头碱和苯甲酰基次乌头原碱。结论 制川乌与两种贝母配伍后的化学标志物差异较大,仅有2个相同,结合前期的急性毒性试验结果,推测制川乌与不同贝母配伍后LD₅₀的变化与其配伍后化学成分的变化相关;从而说明相反不完全是通过其化学成分变化引起的,其相反机制可能还通过其他因素共同引起。     

黄花蒿HDS基因的克隆与功能分析

目的 克隆获得黄花蒿MEP途径中必需关键酶——羟甲基丁烯基-4-磷酸合成酶基因（HDS）,并进行生物信息学分析和功能互补分析研究。方法 对已知的其他种子植物HDS基因的核苷酸序列进行多重序列比对,选取保守区域设计简并引物,利用同源扩增和cDNA末端快速扩增技术从黄花蒿中获得目的基因;利用BLAST进行序列比对,ORF Finder寻找开放阅读框,并用MEGA3.0中的临位相联法构建进化树。结果 得到1条长2 324 bp的HDS cDNA序列,其ORF框长1 854 bp,编码617个氨基酸残基的蛋白;生物信息学分析显示,黄花蒿HDS基因AaHDS与其他种子植物来源的HDS高度同源;功能互补分析表明,AaHDS能互补突变菌株Escherichia coli MG1655 ara＜＞HDS中缺失的HDS功能,使突变菌株恢复生长,证明AaHDS具有典型的HDS基因功能。结论 首次克隆获得黄花蒿HDS基因,为青蒿素的代谢工程研究提供相应的基础。     

基于关联分析的吴茱萸与8味甘味药配伍作用规律研究

[目的] 以关联分析和高效液相色谱法（HPLC）探讨甘味中药在配伍过程中对吴茱萸的作用规律，以期为吴茱萸配伍机制研究提供参考。[方法] 通过收集整理含有吴茱萸的处方，利用Apriori算法挖掘其潜在配伍规律并获取常与吴茱萸配伍的甘味中药；采用HPLC分析法，检测配伍前后吴茱萸中3种主要成分柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱在提取物中的含量变化。[结果] 8种甘味中药均可不同程度的降低吴茱萸中3种主要成分的含量；黄芪使3种有效成分的含量明显下降，甘草可明显地降低吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量但对柠檬苦素的作用较小。[结论] 甘味中药能够降低吴茱萸中主要毒性成分兼活性成分的含量进而降低其毒性；黄芪对3种成分的降低作用最显著，甘草有良好的"减毒存效"作用。本研究应用数据挖掘技术结合HPLC发掘吴茱萸配伍规律并进行分析，为探索药物配伍的合理性和规律性提供参考。     

桑黄肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析

目的 对桑黄肌动蛋白（Actin）基因进行克隆及序列分析。方法 搜索网上已知数据库中Actin基因,与本实验室测得的桑黄转录组数据进行生物信息学比对,找到转录组数据中与Actin相似性最高的片段,并根据其设计引物,提取桑黄菌丝体总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增Actin基因片段并对PCR产物进行测序。结果 得到一段839 bp的序列,序列分析表明,该片段编码279个氨基酸,与其他物种Actin基因核苷酸序列同源性在87%以上。结论 首次从桑黄中克隆出了Actin基因,为有效利用该基因奠定了基础。     

维药小新塔花和芳香新塔花的HPLC指纹图谱研究

目的 建立小新塔花和芳香新塔花的HPLC指纹图谱分析方法,并同时测定8批小新塔花和22批芳香新塔花中金丝桃苷、槲皮素、胡薄荷酮的量。方法 采用Kromasil C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以甲醇-0.08%甲酸水溶液进行梯度洗脱,同时测定了小新塔花和芳香新塔花中金丝桃苷、槲皮素、胡薄荷酮的量,建立了不同产地8批小新塔花和22批芳香新塔花的指纹图谱。结果 根据主成分分析、聚类分析,将30批药材分为2类,建立了2种新塔花的HPLC指纹图谱。不同产地的2种新塔花中金丝桃苷、槲皮素和胡薄荷酮等成分的量存在较大差异;芳香新塔花不含槲皮素,而小新塔花中含有;芳香新塔花中的金丝桃苷和胡薄荷酮量高于小新塔花;小新塔花中金丝桃苷量为49.72～204.33 μg/g,槲皮素量为161.06～213.22 μg/g,胡薄荷酮量为36.19～93.29 μg/g;芳香新塔花中金丝桃苷量为174.15～802.24 μg/g,胡薄荷酮量为77.43～353.45 μg/g。结论 不同品种的新塔花指纹图谱存在一定的差异,可为新塔花药材的质量控制、品种鉴定及划分提供一定的参考依据。