大麻素对星形胶质细胞谷氨酸释放的影响及机制研究

目的:观察人工合成大麻素HU210对体外培养中脑腹侧被盖(VTA)区星形胶质细胞谷氨酸释放的影响,并探讨抑制星形胶质细胞谷氨酸释放的药物治疗途径。方法:体外培养大鼠VTA脑区星形胶质细胞,RT-PCR及免疫荧光染色检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及大麻素受体1(CB1R)的表达。将培养的星形胶质细胞分为4组:对照组(培养基中只加入0.2%DMSO),HU210组(培养基中加入3μM HU210),HU210+AM281组(培养基同时加入3μM HU210及3μM AM281)和HU210+Riluzole组(培养基同时加入3μM HU210及3μM Riluzole),各组4孔。干预30 min后,采用谷氨酸检测试剂盒观察各组星形胶质细胞培养基中谷氨酸浓度。再培养VTA脑区星形胶质细胞,分为对照组(培养基中只加入0.2%DMSO)和Riluzole组(培养基中加入3μM Riluzole),干预30 min后,利用Western Blot印迹分析Riluzole干预后谷氨酸转运体-1(GLT-1)表达水平的变化。结果:RT-PCR及免疫荧光染色显示,星形胶质细胞内有广泛CB1R的表达。与对照组比较,HU210组星形胶质细胞谷氨酸的释放显著增加(P<0.01),HU210+AM281组及HU210+Riluzol组星形胶质细胞谷氨酸的释放较HU210组均显著降低(P<0.01);且HU210+Riluzol组星形胶质细胞的GLT-1表达较对照组升高(P<0.05)。结论:HU210可能通过激活星形胶质细胞的CB1R促进星形胶质细胞释放谷氨酸。Riluzole可能通过升高星形胶质细胞的GLT-1的表达,逆转HU210所致的谷氨酸释放。     

何首乌苷对奥沙利铂诱导大鼠星形胶质细胞凋亡的影响

目的探讨何首乌苷保护大鼠星形胶质细胞免于奥沙利铂诱导凋亡的作用及可能机制。方法原代培养大鼠星形胶质细胞,并利用流式检测所培养细胞胶质纤维酸性蛋白的表达情况。利用10μmol/L奥沙利铂处理胶质细胞24 h建立凋亡模型,加入浓度梯度的何首乌苷预处理胶质细胞24 h后与奥沙利铂共同作用24 h,台盼蓝染色法观察细胞存活。随后通过Annexin V-FITC/PI双染法流式检测各组凋亡率和检测Caspase-3的活性水平。进而利用JC-1染色法流式检测细胞线粒体膜电位,并利用实时定量RT-PCR与免疫印迹检测BAX与BCL2的m RNA水平和蛋白表达量。结果培养的大鼠星形胶质细胞表达胶质纤维酸性蛋白率达95%以上。奥沙利铂处理诱导凋亡24 h后,对照组胶质细胞凋亡率及Caspase-3活性上升并降低线粒体膜电位,加何首乌苷处理后凋亡率及Caspase-3活性下降而线粒体膜电位上升。相对于对照组,加入何首乌苷处理后BAX基因的m RNA及蛋白表达水平降低,BCL2基因的m RNA及蛋白表达水平上升。结论何首乌苷能恢复凋亡相关基因BAX与BCL2的平衡,保护大鼠皮质星形胶质细胞的线粒体膜电位,并使胶质细胞免于奥沙利铂诱导的凋亡作用。     

氯化铜过度负荷对星形胶质细胞的氧化损伤机制

目的观察过量浓度Cu2+对原代培养的新生大鼠星形胶质细胞存活影响及探讨引起星形细胞抗氧化功能损伤的可能机制。方法原代培养的大鼠星形胶质细胞,分为低浓度(30μmol/L)、高浓度(100μmol/L)氯化铜(CuCl2)组和对照组,分别作用12、24、48、96、120h后,用CCK-8法检测星形细胞的存活率,比色法测定星形细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量及谷胱甘肽还原酶(GR)的活性,Griess反应法测定NO分泌量。结果低浓度CuCl2可引起星形细胞的增殖,而高浓度组的存活率显著降低。高浓度CuCl2(100μmol/L)作用24h后细胞内GSH含量及GR活性显著低于对照组。作用星形细胞120h,NO分泌量较对照组显著增加。结论在病理情况下过度负荷的Cu2+显著损害星形胶质细胞的生长和增殖能力,通过降低GR活性及GSH的含量降低星形细胞的抗氧化功能。可能通过增加NO分泌加剧氧化应激并激活炎症途径。从而为临床治疗提供新的治疗分子靶点。     

氯胺酮对N-甲基-D-天冬氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞损伤的作用

背景氯胺酮是临床常用的静脉全麻药,静脉或硬脊膜外腔用药都有镇痛作用,它是N-甲基-D-天冬氨酸受体非竞争性拮抗剂,可拮抗兴奋性氨基酸的毒性作用.目的观察氯胺酮对N-甲基-D-天冬氨酸受体过度激活诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.设计随机对照观察.单位郧阳医学院附属太和医院麻醉科.材料实验于2003-09/2005-01在郧阳医学院基础医学研究所细胞生物学实验室完成.由武汉大学动物实验中心提供新生两三天Wistar大鼠.方法取Wistar大鼠T11～L6脊髓背角星形胶质细胞原代纯化培养.胶质纤维酸性蛋白鉴定星形胶质细胞纯度达98%后用于实验.将培养细胞24孔板随机分为6组(每组9份)①对照组加Hanks液50μL.②N-甲基-D-天冬氨酸组加药浓度为100μmol/L.③氯胺酮组加药浓度为1 mmol/L.④100μmol/L N-甲基-D-天冬氨酸+0.1 mmol/L氯胺酮组.⑤100μmol/L N-甲基-D-天冬氨酸+0.5 mmol/L氯胺酮组.⑥100 μmol/L N-甲基-D-天冬氨酸+1mmol/L氯胺酮组.1 mmol/L氯胺酮为临床镇痛剂量.培养24 h后检测超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量,免疫细胞化学观察Bcl-2蛋白和形态学变化,流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率.主要观察指标①Bcl-2蛋白免疫组织化学苏木精-伊红复染细胞着色及形态学变化.②流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率.③丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性变化.结果①Bcl-2平均吸光度值(A)作为半定量测量Bcl-2蛋白表达水平100 μmol/L N-甲基-D-天冬氨酸组低于对照组,差异显著[分别为0.054±0.021,0.108±0.039,P＜0.01],100 μmol/L N-甲基-D-天冬氨酸+1 mmol/L氯胺酮组高于100 μmol/L N-甲基-D-天冬氨酸组,差异显著[分别为0.148±0.045,0.054±0.021,P＜0.01].②流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率100 μmol/L N-甲基-D-天冬氨酸组高于对照组,差异显著[分别为(25.26±6.13)%,(5.66±2.24)%,P＜0.01],100μmol/LN-甲基-D-天冬氨酸+1 mmol/L氯胺酮组低于100 μmol/L N-甲基-D-天冬氨酸组,差异显著[分别为(24.41±4.82)%,(25.26±6.13)%,P＜0.01].③丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性变化100 μmol/L N-甲基-D-天冬氨酸使星形胶质细胞内丙二醛含量显著升高,而超氧化物歧化酶活性明显降低;1 mmol/L氯胺酮明显降低丙二醛含量,显著增强超氧化物歧化酶活性,该效应在临床镇痛剂量以内有明显量效关系,与N-甲基-D-天冬氨酸组相比差异显著(P＜0.01).1 mmol/L氯胺酮组与对照组相比、100μmol/L N-甲基-D-天冬氨酸+0.1 mmol/L氯胺酮组与N-甲基-D-天冬氨酸组相比差异均无显著性.结论N-甲基-D-天冬氨酸受体过度激活可诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞大量凋亡,适量氯胺酮显著抑制细胞凋亡,其机制可能增强星形胶质细胞Bcl-2蛋白表达,同时抑制自由基的产生和增强超氧化物歧化酶活性.     

大鼠缝隙连接蛋白Connexin 43的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定

目的:构建缝隙连接蛋白connexin 43(CX43)特异性shRNA重组腺病毒载体,为应用基因沉默技术从转录后水平进行基因治疗研究奠定基础。方法:合成CX43发夹样shRNA的DNA单链一对和对照单链scramble一对,退火后将其克隆至带有增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因的穿梭质粒pAd shRNA/H1,得到pAd shRNA/H1-CX43和pAd shRNA/H1-scramble。分别酶切及DNA测序鉴定后,经Pme I线性化后转化入BJ5187-AD-1感受态细菌,在细菌内进行同源重组构建含目的基因的重组腺病毒质粒载体。用Pac I酶切鉴定重组菌。将Pac I酶切重组的两种腺病毒质粒载体后,经脂质体转化293细胞进行包装得到重组的腺病毒颗粒,并通过293细胞绿色荧光表达反应重组腺病毒表达情况。将重组的腺病毒Ad-Cx43 shRNA和对照病毒Ad-scramble shRNA分别感染大鼠原代培养的星形胶质细胞,并检测星形胶质细胞CX43的表达。结果:证实穿梭质粒的以及重组腺病毒质粒均构建正确,腺病毒质粒转染293细胞后48 h即可见绿色荧光蛋白表达,10 d后全部细胞表达绿色荧光,并有半数细胞飘起,收获病毒感染培养星形胶质细胞后48 h,均有绿色荧光表达,经感染Ad-Cx43 shRNA的星形胶质细胞CX43的表达明显低于感染对照病毒Ad-scramble shRNA的星形胶质细胞。结论:成功构建表达大鼠CX43特异性发夹状shRNA的重组腺病毒载体,将为应用基因沉默技术研究CX43在神经系统疾病尤其是缺血性脑损伤中的作用提供依据。     

富血小板血浆对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性反应的作用

目的了解富血小板血浆(PRP)对脂多糖诱导(LPS)的星形胶质细胞活化、增殖及炎症相关因子释放的影响。方法无菌条件下取10只出生1—3 d SD大鼠乳鼠,处死并取大脑皮质,使用胰酶消化大脑皮质组织,清洗、离心并过滤后得到原代大鼠星形胶质细胞。使用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色鉴定所得细胞是否为大鼠星形胶质细胞。建立LPS诱导的星形胶质细胞炎症体外模型,分为5组:空白对照(BC)及LPS、LPS+2.5%PRP、LPS+5%PRP以及LPS+10%PRP组,各LPS组均以终浓度为1μg/mL LPS预处理24 h后,加不同浓度PRP处理24 h。提取各组大鼠星形胶质细胞细胞蛋白,以WB法检测大鼠星形胶质细胞GFAP蛋白含量、CCK-8法检测细胞存活率,Griess法检测细胞NO释放量,ELISA法检测细胞炎症因子TNF-α和IL-6表达量。结果 1)GFAP(抗体)标记的阳性细胞数95%,说明所培养的细胞为SD大鼠星形胶质细胞。2)5组GFAP表达水平(灰度值):LPS组(3.49±0.15)较BC组(1.23±0.18)明显增加(P0.05),而3个LPS+(2.5%、5%、10%)PRP组(2.77±0.32、1.83±0.14、1.78±0.24)较LPS组明显降低(P0.05)。3)细胞增殖率(%):LPS(组)诱导12、24、48 h(125.47±5.4、144.72±6.5、151.49±7.1)后较BC组(100±6.2、100±5.2、100±8.0)明显上升(P0.05);而加入2.5%、5%、10%PRP处理12 h(113.04±7.4、94.41±4.2、90.06±2.1)、24 h(108.21±7.9、93.44±7.4、83.59±4.1)和48 h(98.02±9.3、78.22±9.4、70.1±8.4)后较LPS组明显下降(P0.05)。4)5组细胞上清液中的NO含量(μmol/L):LPS组(13.28±0.58)较BC组(3.01±0.15)明显上升(P0.05);而加入2.5%、5%、10%PRP(组)处理(9.98±0.72、7.19±0.91、6.82±0.46)后较LPS组明显降低(P0.05)。5) TNF-α和IL-6表达(ng/L):LPS(组)处理后(TNF-α为4.204±0.04、 IL-6为0.483±0.02)较BC组(TNF-α为1.763±0.05、 IL-6为0.296±0.02)均明显上升(P0.05);而加入2.5%、5%、10%PRP(组)处理后(TNF-α为3.234±0.09、3.496±0.05、3.260±0.17,IL-6为0.403±0.01、0.381±0.01、0.386±0.02)较LPS组均明显下降(P0.05)。结论 PRP能够抑制大鼠模型LPS诱导的星形胶质细胞活化和增殖,有效改善大鼠星形胶质细胞炎症损伤。     

连接蛋白43和胶质纤维酸性蛋白在甘珀酸预处理的戊四氮致痫大鼠前脑中的表达变化

目的:研究大鼠在脑室埋管注射甘珀酸预处理后戊四氮导致癫痫发作时前脑内星形胶质细胞和连接蛋白43的形态学反应及其相互关系。方法:实验于2003-10/2004-06在解放军第四军医大学神经科学研究所进行。取24只大鼠分为生理盐水组、甘珀酸组、戊四氮组、甘珀酸+戊四氮组,应用免疫荧光组织化学双重标记显示胶质纤维酸性蛋白和连接蛋白43蛋白在前脑的表达及其相互关系。结果:甘珀酸+戊四氮组的大鼠癫痫发作的行为表现比戊四氮组显著加重,星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白的表达也比戊四氮组明显升高,值得注意的是甘珀酸组的星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白的表达比生理盐水组明显升高。连接蛋白43在戊四氮引起的癫痫大鼠的大脑皮质、海马和杏仁核内增加,而甘珀酸预处理后的癫痫模型中连接蛋白43进一步增强。在连接蛋白43与胶质纤维酸性蛋白双标的切片上发现,阳性的星形胶质细胞双标,在甘珀酸预处理后的癫痫模型中胶质纤维酸性蛋白阳性的星形胶质细胞显著增加的同时连接蛋白43也明显增加。结论:在整体动物甘珀酸预处理可以导致癫痫发作增强,这可能与星形胶质细胞增生及其连接蛋白43表达升高有关。     

细胞松弛素D对大鼠脊髓星形胶质细胞水通道蛋白和内向整流性钾通道4.1 基因表达的影响

目的探讨不同浓度细胞松弛素D(CytD)对大鼠脊髓星形胶质细胞骨架重构,水通道蛋白(AQP)1、AQP4 及内向整流性钾通道4.1(Kir4.1)基因表达的影响。方法原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞,加CytD 0.05 μg/ml、0.10 μg/ml、0.20 μg/ml、0.40μg/ml、0.80 μg/ml 和1.00 μg/ml 共培养2 h、12 h 和24 h。MTT法检测细胞增殖情况;鬼笔环肽联合Hoechst 33342 套染后激光共聚焦显微镜下观察共培养2 h 后细胞骨架重构情况;RT-PCR法检测共培养2 h 时AQP1、AQP4 和Kir4.1 mRNA表达水平。结果细胞生存率随CytD 浓度升高和作用时间延长而减少。CytD 使大鼠脊髓星形胶质细胞微丝发生解聚、弯曲,但极性未失。CytD 0.05μg/ml、0.10 μg/ml、0.20 μg/ml 和0.40 μg/ml 上调AQP1、AQP4 和Kir4.1 mRNA表达。结论适当浓度CytD可以重建星形胶质细胞骨架,上调大鼠脊髓星形胶质细胞AQP1、AQP4和Kir4.1基因表达。     

电碳酸氢钠协同转运蛋白1(NBCe1)在小鼠皮质星形胶质细胞中的功能性表达依赖于S255-257并受mTOR调节

电碳酸氢钠协同转运蛋白1,NBCe1(SLC4A4)是星形胶质细胞中表达的主要碳酸氢根转运蛋白。它对碳酸氢根高度敏感,并且是细胞内、细胞外和突触p H值的主要调节剂,从而调节神经元兴奋性。尽管已知NBCe1的这些基本功能,然而NBCe1介导的星形胶质细胞对细胞外pH值变化反应的分子机制尚不明确。使用原代小鼠皮质星形胶质细胞培养,本研究探索长期细胞外代谢碱中毒对NBCe1调节的影响;并通过免疫印迹,表面蛋白的生物素化,使用H+敏感染料2, 7-双(羧乙基)-5(-6)-羧基荧光素记录细胞内H+,和磷酸化蛋白质组学分析阐明该调节作用潜在的分子机制。结果显示代谢性碱中毒后NBCe1活性显著下调,而NBCe1的蛋白质丰度或表面表达并不受影响。在碱中毒期间,NBCe1活性下调时细胞内H+变化的速率在野生型星形胶质细胞中降低,但在NBCe1缺陷小鼠的皮质星形胶质细胞中不变。激活mTOR信号传导能够拯救碱中毒诱导的NBCe1活性降低。此外,质谱分析揭示S255-257的组成型磷酸化,而突变分析揭示这些残基对NBCe1转运活性至关重要。本研究证明了一种通过调节NBCe1的功能表达而实现的新的mTOR调节机制。该种机制不仅适用于星形胶质细胞,也适用于上皮细胞中的NBCe1。     

小分子量透明质酸促进星形胶质细胞中脑源性神经营养因子和血管内皮生长因子的表达

背景:国外研究表明透明质酸可以促进脊髓损伤后大鼠运动功能的改善,但其机制尚不清楚。目的:观察透明质酸对星形胶质细胞营养因子表达的影响。方法:无菌条件下分离SD大鼠脑组织星形胶质细胞进行原代培养,对培养第3代细胞采用免疫化学方法对其鉴定。对第4代细胞给予透明质酸(相对分子质量125000～175000)作用星形胶质细胞24h,并设置对照组。结果与结论:免疫化学方法鉴定原代培养星形胶质细胞阳性率近100%。Westernblot和RT-PCR分析结果显示,胶质细胞在质量浓度100,1000mg/L透明质酸作用下同10,1mg/L透明质酸组和对照组比较,脑源性神经营养因子和血管内皮生长因子表达明显升高(P<0.05);免疫荧光双标显示在质量浓度1000mg/L透明质酸作用下,同对照组相比,胶质细胞脑源性神经营养因子和血管内皮生长因子表达明显增加。证实小分子量透明质酸可上调星形胶质细胞中脑源性神经营养因子和血管内皮生长因子的表达。     

梅毒患者免疫功能的检测及临床意义

目的 检测未经治疗的梅毒患者外周血中淋巴细胞亚群及CD4+CD25+调节性T细胞的比例,并探讨其临床意义.方法 利用流式细胞分析仪检测56例未经治疗的梅毒患者外周血中淋巴细胞亚群、CD4+CD25+调节性T细胞的比例,并与40例健康人群的检测结果相比较.结果 未经治疗的梅毒患者外周血中CD3+,CD4+,CD19+,NK细胞比例与正常人对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);而CD4+CD25+调节性T细胞比例(8.01±7.45)%较正常人对照组(4.79±4.37)%显著增高(P＜0.01).结论 未经治疗的梅毒患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例较高,它们对梅毒患者具有免疫抑制功能.     

支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞CD19~+CD23~+和CD4~+CD25~+的表达及意义

目的探讨支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞CD19＋CD23＋和CD4＋CD25＋的表达及意义。方法采用流式细胞分析技术及免疫化学发光法分别检测34例哮喘发作期（哮喘发作组）和32例哮喘缓解期（哮喘缓解组）外周血CD19＋CD23＋表达率、CD4＋CD25＋表达率和血清总IgE水平,并与25例体检儿童（对照组）进行比较。结果哮喘发作组外周血CD19＋CD23＋表达率为（19.31&#177;9．08）％分别高于哮喘缓解组（8．63&#177;3．54）％和对照组;哮喘发作组CD4＋CD25＋表达率为（2．79&#177;1．69）％和哮喘缓解组为（3.36&#177;1．17）％均低于对照组;哮喘发作组IgE水平为（177．01&#177;90．38）IU/ml和哮喘缓解组为（160．76&#177;77．54）IU／ml均高于对照组．三组的差异均有统计学意义（F分别=36．62、24．67、24．35,P均〈0．05）。CD19＋CD23＋表达率与IgE呈正相关,CD4＋CD25＋表达率和IgE呈明显负相关,CD19＋CD23＋表达率和CD4＋CD25＋表达率亦呈明显负相关,差异均有统计学意义（r分别：0．22、-0．41、-0．34,P均〈0．05）。结论哮喘急性发作时外周血CD19＋CD23＋和CD4＋CD25＋改变明显。     

帕金森大鼠黑质外液和红细胞内Mg2+含量的变化

目的:观察帕金森病(PD)大鼠中脑黑质外液及红细胞内Mg~(2+)浓度的改变。方法:采用6-羟基多巴(6-OHDA)损毁制备偏侧PD大鼠模型24只,分4组各6只,分别于造模后第7、14、21、28天采集大鼠动脉血中的红细胞,采用微透析技术收集中脑黑质细胞外液,火焰原子吸收光谱法测定红细胞内和黑质细胞外液Mg~(2+)含量。选5只健康大鼠作为对照组,进行相同测定。结果:各时点PD组红细胞内Mg~(2+)含量均显著低于对照组(P<0.05),且随病程延长而逐渐下降(P<0.05);但PD组中脑黑质细胞外液Mg~(2+)含量仅在第21、28天明显低于对照组(P<0.05)。结论:Mg~(2+)缺乏与PD的发生及病程进展有一定关联。     

CD4~＋ CD25~＋细胞和CD8~＋ CD28~-调节性T细胞在原发性肝癌患者外周血中的水平变化

目的研究原发性肝癌（HCC）患者外周血中CD4＋ CD25＋细胞和CD8＋ CD28-调节性T细胞的表达及意义。方法采用流式细胞仪测定93例HCC患者和24名健康人外周血中的CD4＋ CD25＋细胞和CD8＋ CD28-调节性T细胞水平。结果 HCC患者外周血中的CD4＋ CD25＋细胞[（14.39±4.58）%]和CD8＋ CD28-调节性T细胞[（24.05±5.64）%]表达均显著高于对照组[（8.37±1.73）%、（15.93±4.84）%,P〈0.05];CD8＋CD28-调节性T细胞与HCC的分期呈正相关（r=0.463,P〈0.001）。结论 CD4＋ CD25＋细胞和CD8＋ CD28-调节性T细胞在HCC患者外周血中呈高表达,且CD8＋ CD28-调节性T细胞与HCC的病情及预后相关。     

老年社区获得性肺炎患者细胞免疫功能的变化

目的了解老年社区获得性肺炎(CAP)患者细胞免疫功能状态,初步探讨T细胞亚群在老年CAP急性期发病机制中的作用,从而为老年CAP的防治工作提供理论依据。方法采用流式细胞仪测定35例老年CAP患者和35名老年健康对照组、25例非老年CAP患者和25名非老年健康对照组,观察外周血中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+水平。结果1.老年CAP组CD3+T细胞比老年健康对照组增高,差异有统计学意义(P<0.05);CD4+T细胞水平比老年健康对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2.老年CAP组和非老年CAP组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的比较结果显示:老年CAP组的CD3+T细胞低于非老年CAP组,差异有统计学意义(P<0.05)。3.老年健康对照组的CD3+T细胞、CD8+T细胞水平低于非老年健康对照组,其中,这两组的CD3+T细胞水平差异有明显统计学意义(P<0.01),CD8+T细胞水平差异有统计学意义(P<0.05);老年健康对照组的CD4+/CD8+水平高于非老年健康对照组,差异有明显统计学意义(P<0.01)。结论老年CAP患者急性期既存在免疫功...     

Effects of catecholamines on plasma potassium: the role of alpha- and beta-adrenoceptors

Summary— The sympathetic nervous system plays an important role in the control of plasma potassium levels. Administration of adrenaline or noradrenaline evokes, in the majority of mammal species a dual response: first a short transient hyperkalaemia, followed by a maintained hypokalaemia. Alpha₁- and alpha₂-adrenoceptors mediate the initial hyperkalaemia through the activation of hepatic Ca²⁺-dependent-K+- channels. Stimulation of beta₁- and beta₂-adrenoceptors induces the late hypokalaemia by stimulation of skeletal muscle Na+-K+-ATPase. Beta₃-adrenoceptor stimulation may also have an effect on plasma potassium control since administration of selective beta₃-adrenoceptor agonists induces a decrease in plasma potassium. The simultaneous infusion of phenyleprine (alpha-adrenoceptor agonist) and isoprenaline (beta-adrenoceptor agonist) increases plasma potassium levels: this effect is several times larger than the algebric summation of the changes in plasma potassium when each agent is infused separately, thus suggesting potentiation. The physiological (changes in cell volume and function secondary to changes in ion fluxes) and clinical implications (pathophysiological conditions with hypo or hyperkalaemia, hyperkalaemic periodic paralysis, ventricular arrythmias) of these findings are discussed.     

粒细胞集落刺激因子对脑缺血大鼠骨髓干细胞分布及脑保护作用的影响

目的 研究人重组粒细胞集落刺激因子(rG-CSF)对骨髓干细胞(BMSCs)在脑缺血大鼠血液和脑组织中的分布变化及抗脑缺血损伤的影响.方法 将106只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(10只)、模型组(48只)、rG-CSF组(48只),后两组再分为术后2、3、7、14 d亚组,每个亚组12只.用改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型.rG-CSF组于术前3 d和术后2 d皮下注射rG-CSF 10μg/kg,假手术组和模型组给予等量生理盐水,均每日1次.术后各时间点进行神经功能评分;取腹主动脉血,测定外周血白细胞计数(WBC)及CD34+细胞计数;观察脑组织病理改变;并用免疫组化法测定脑组织CD34+细胞表达.结果 ①制模后2 d大鼠神经功能评分即显著降低,随后逐渐升高;rG-CSF组术后7 d和14 d神经功能评分(分)较模型组显著增高(7 d:11.86±0.69比10.53±0.76,14 d:13.38±0.52比12.38±0.52,均P<0.01).②制模后2 dSb周血WBC和CD34+细胞计数即显著增加,3 d达峰值,7 d和14 d降低;除14 d CD34+细胞计数外,rG-CSF组其余时间点WBC和CD34+细胞计数均较模型组明显增加[WBC(×109/L)2 d:11.75±1.76比8.07±1.27,3 d:13.07±1.70比10.88±1.78,7 d:8.63±1.36比5.58±1.57,14 d:6.98±0.98比4.87±0.92;CD34+细胞计数(个/μl)2 d:8.83±2.14比3.17±0.75,3 d:13.50±1.87比5.00±1.55,7 d:5.33±1.21比2.33±1.21,P<0.05或P<0.013.③制模后2 d大鼠脑组织CD34+细胞表达即明显增强,7 d达峰值,14 d降低;rG-CSF组各时间点CD34+表达[吸光度(A)值]均较模型组显著增加(2 d:43.21±4.41比22.04±2.95,3 d:45.79±1.76比25.69±2.44,7 d:52.09±2.86比33.04±2.62,14 d:29.73±1.99比16.91±2.95,均P<0.01).④rG-CSF组脑组织病理损伤较模型组减轻,以14 d改善明显.结论 脑缺血可引起BMSCs进入外周血及向脑组织归巢,其在外周血和脑组织的变化呈先增多再减少的特点,分别于缺血后3 d和7 d达峰值;rG-CSF可使进入外周血和脑组织的BMSCs明显增加.BMSCs动员对脑缺血损伤的保护作用明显,且随动员后时间的延长呈增强趋势.

Abstract：

Objective To explore the influence of recombination granulocyte colony stimulating factor (rG-CSF)on mobilization and distribution of bone marrow stem cells (BMSCs) in blood and brain tissue,and its role in protecting brain in rats with cerebral ischemia.Methods One hundred and six SpragueDawley(SD)rats were divided into sham-operated group (n=10),model group(n=48),rG-CSF group (n=48) according to the method of random digital table,and rats in model and rG-CSF groups were divided into four subgroups:i.e.2,3,7 and 14 days subgroups,with 12 rats in each subgroup.Middle cerebral artery occlusion(MCAO)model was reproduced with nylon thread.In rats of rG-CSF group rG-CSF (10 btg/kg)was administered by subcutaneous injection 3 days before and 2 days after operation respectively,once a day.Rats in sham-operated and model groups were administered with normal saline in the same volume,once a day.At the corresponding time after operation,general neural function score(GNFS)of rats was measured.Blood was collected through abdominal aorta,then white blood cell (WBC) and CD34+ cells in peripheral blood were counted.Brain pathologic changes were observed,and expression of CD34+ cells in rats brain tissue was determined by using immunohistochemical method.Results ①GNFS was lower obviously in 2-day model group compared with that in sham-operated group,and then increased gradually.At 7 days and 14 days after operation,GNFS in rG-CSF group was higher significantly than that in model group (7 days:11.86±0.69 vs.10.53±0.76,14 days:13.38±0.52 vs.12.38±0.52,both P<0.01).②WBC and CD34+ cells in peripheral blood in model group increased obviously,with the highest level appeared at 3 days and lowered at 7 days and 14 days.Increase of WBC and CD34+ cells in rats of rG-CSF group was more obvious than that of model group at each time point except CD34+ in 14 days group [WBC (×109/L)2 days:11.75±1.76 vs.8.07±1.27,3 days:13.07±1.70 vs.10.88±1.78,7 days:8.63±1.36 vs.5.58士1.57,14 days:6.98士0.98 vs.4.87士0.92;CD34'(cells/t~1)2 days:8.83±2.14 vs.3.17±0.75,3 days:13.50±1.87 vs.5.00±1.55,7 days:5.33±1.21 vs.2.33±1.21,P<0.05 or P<0.01].③Expression of CD34+ cells in the brain of rats in 2-day model group increased significantly,and the highest level appeared at 7 days and decreased at 14 days.Absorbance (A) value of CD34+ cells expression in rat brains of each rG-CSF group was more significant than that in model group(2 days:43.21±4.41 vs.22.04±2.95,3 days:45.79±1.76 vs.25.69±2.44,7 days:52.09±2.86 vs.33.04±2.62,14 days:29.73±1.99 vs.16.91±2.95,all P<0.01).④ The signs of injury to brain in pathological examination were less obvious in 14 days rG-CSF group.Conclusion BMSCs could be induced to enter peripheral blood and "home" to brain tissue after cerebral ischemia.It was showed that BMSCs increased in number at first and then decreased in peripheral blood and brain,the peak number was found on 3rd day in peripheral blood and 7th day in brain.Mobilization with rG-CSF could increase the number of BMSCs in peripheral blood and brain tissue.The effect of mobilization of BMSCs on protecting brain was significant after cerebral ischemia,and effect appeared to be more pronounced with prolongation of mobilization.     

钙离子在精子获能和顶体反应中的作用

精子获能和顶体反应是精子最终完成受精过程中两个主要的生理活动,钙离子(Ca2+)作为细胞信号第二信使在其中起着重要的调节作用。现着重从Ca2+的正负调节、内流和清除等方面,综述其在精子获能和顶体反应中的作用机制。     

不同浓度钙离子对蟾蜍实验性心肌损伤心电图的影响

目的探讨不同浓度钙离子（Ca2＋）对蟾蜍实验性心肌损伤心电图的效应。方法采用蟾蜍实验性心肌损伤法并注入不同浓度Ca2＋,观察心肌损伤后Ca2＋对心电图的影响。结果注入1%CaCl2后,QT间期延长（P〈0.01）、心率减慢（P〈0.01）;注入2%CaCl2后心率减慢（P〈0.01）、QT间期与1%CaCl2组比较缩短（P〈0.01）、PR间期缩短（P〈0.05）;注入3%CaCl2后,QT间期明显缩短（P〈0.05）、心率减慢（P〈0.05）、PR间期分别与1%CaCl2和2%CaCl2相比均延长（P〈0.05）。其余波段变化不大。结论心肌损伤后不同浓度Ca2＋分别对心电图有一定的影响。     

NHE-1的表达、调控与白血病细胞多药耐药

多药耐药(MDR)机制多种多样且往往复合存在。目前发现MDR细胞pHi均高于敏感细胞,而Na~+-H~+交换蛋白-1(NHE-1)是调节pHi的主要离子通道蛋白,故通过抑制NHE-1降低MDR细胞pHi可能成为化疗增敏、逆转MDR的新手段。