温肾固疏方调控去卵巢大鼠氧化应激及骨代谢指标的机制研究

目的观察温肾固疏方对去卵巢骨质疏松模型大鼠氧化应激及骨代谢指标的影响。方法通过切除大鼠双侧卵巢建立绝经后骨质疏松症模型。造模后,将40只模型大鼠随机分为温肾固疏方高、中、低剂量组、雌二醇组、模型组;假手术组仅切除卵巢旁脂肪组织。干预2月后,检测骨组织形态学改变,测定骨密度,采用ELISA法测定血清PINP、BGP、TRACP5b、RANKL、OPG的含量。比色法检测血清中MDA、CAT、SOD水平。结果与假手术组比较,模型组股骨近端和股骨总BMD均明显降低,模型组血清MDA活力明显升高(P0.05),而CAT活力下降明显(P0.01),血清TRACP5b、BGP、PINP含量明显升高(P0.01),而OPG、OPG/sRANKL比值下降(P0.05),骨形态改变与骨质疏松症一致;与模型组相比:各治疗组骨组织形态改善。雌激素组、温肾固疏方高、中剂量组BMD均明显增高(P0.05)。雌激素组、温肾固疏高、中剂量组血清PINP、BGP含量下降(P0.05)。雌激素组、温肾固疏中剂量组TRACP5b含量下降(P0.05)。温肾固疏中、低剂量组血清OPG含量升高(P0.05)。温肾固疏高、中剂量组OPG/sRANKL比值升高(P0.05),低剂量组比值明显升高(P0.01);雌激素组、温肾固疏中剂量组血清MDA活力降低(P0.05),温肾固疏中、高剂量组血清CAT活力升高(P0.05)。结论温肾固疏方可降低骨代谢高转换水平,增加骨形成,减少骨吸收而发挥抗骨质疏松作用,抗氧化应激机制可能在其中发挥了作用。     

温肾固疏方对绝经后骨质疏松大鼠骨代谢以及脂代谢的影响

目的探讨温肾固疏方改善骨质疏松和脂代谢异常的的作用机制。方法将60只大鼠的卵巢全部切除以建立绝经后骨质疏松模型,随机分为对照组(n=20)、雌激素组(n=20)和实验组(n=20)。假去势组(n=20)大鼠仅从卵巢周围切除少量脂肪。干预治疗8周后,采用酶联免疫法测定各组大鼠血清PING、TRACP5b、OPG、BGP的水平;并检测各组大鼠血脂指标。结果与假去势组大鼠比较,对照组大鼠的股骨和股骨近端的BMD明显降低(P0.05);骨代谢指标和脂代谢指标水平均明显恶化(均P0.05)。灌胃治疗后,与对照组比较,雌激素组和实验组大鼠的股骨和股骨近端的骨密度水平明显升高(P0.05),并且两组大鼠的PING、TRACP5b、BGP水平均较显著提高(均P0.05),而OPG水平显著降低(P0.05)。此外,雌激素组和实验组大鼠的脂代谢指标水平均较对照组明显改善(均P0.05)。结论温肾固疏方通过有效提高绝经后骨质疏松大鼠的骨密度,调节骨代谢和脂代谢指标水平,达到改善骨质疏松和调节血脂代谢的效果。     

培本固疏方对去势大鼠骨代谢及骨生物力学的影响

目的观察培本固疏方对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度、骨生物力学及骨代谢指标的影响。方法将42只SD大鼠随机分为假手术组(SHAM)、模型对照组(OVX)、中药低剂量组(D)、中药中剂量组(Z)、中药高剂量组(G)和西药组(X),通过切除大鼠双侧卵巢建立骨质疏松症模型,假手术组仅切除卵巢周围约1 g的脂肪组织。造模4周后进行药物干预,各组持续灌胃8周。计算子宫指数,测定股骨骨密度(bone mineral density,BMD)及股骨生物力学弹性载荷、极限载荷、弹性模量等指标;采用ELISA法测定血清骨代谢指标TRACP5b、sRANKL、OPG及氧化应激指标MDA、AGEs的含量。结果与SHAM组比较,OVX组子宫指数、股骨近端和股骨中段BMD、弹性载荷、弹性模量均明显降低(P0. 05),OVX组血清MDA、AGEs含量明显升高(P0. 01),血清TRACP5b含量明显升高(P0. 01),而OPG、OPG/sRANKL比值下降(P0. 01);与OVX组相比,各治疗组子宫指数、骨强度均有所改善。Z组、G组及X组BMD均明显增高(P0. 05)。Z组、G组及X组TRACP5b含量下降(P0. 05)、OPG含量升高(P0. 05)、RANKL含量降低、OPG/sRANKL比值升高(P0. 05)。Z组、G组血清MDA、AGEs含量降低(P0. 05)。结论培本固疏方可以增加骨强度,通过OPG/RANKL/RANK通路来抑制破骨细胞形成,减缓骨基质吸收,抗氧化应激机制也可能参与其中,具体机制有待探讨。     

补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨组织TNF-α表达的影响

目的观察复方中药补肾健脾活血方对绝经后骨质疏松症大鼠模型骨组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响.方法将84只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、中药对照组、西药对照组、补肾健脾活血方大、小剂量组共7组,采用卵巢切除的方法建造绝经后骨质疏松症动物模型,灌药90 d后取腰椎骨用免疫组化的方法检测TNF-α的表达.结果补肾健脾活血方能明显减少TNF-α表达的阳性细胞数,其作用强于单纯补肾中药和西药治疗,并且与剂量呈正相关.结论补肾健脾活血方通过影响细胞因子TNF-α的表达来减少骨吸收.     

维生素K2对SD去卵巢大鼠基质Gla蛋白(MGP)及腰椎基因表达的影响

目的研究MGP在绝经后骨质疏松发病机制中的作用及维生素K2对MGP及基因表达的影响。方法 36只10个月龄雌性SD大鼠,随机分成3组,假手术组、去卵巢(OVX)组、去卵巢加维生素K2干预(OVX+Vitamin K2)组,每组12只。OVX+Vitamin K2组在手术2周后给予维生素K2灌胃(30mg/kg,每周5次,持续12周)。各组大鼠在术后每3周留取血清及尿液。18周后处死大鼠,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清及尿液中MGP的浓度;病理切片观察大鼠腰椎组织结构变化,免疫组化法观察腰椎未羧化MGP的表达;荧光实时定量PCR观察腰椎MGP基因的表达水平。结果 (1)去卵巢18周后,各组血清MGP含量逐渐上升,维生素K2组上升幅度较假手术组及OVX组大(P<0.05),尿液中MGP变化不明显;(2)免疫组化切片中OVX组未羧化MGP(ucMGP)呈阳性染色,维生素K2组较OVX组表达明显减少;(3)腰椎MGP mRNA的表达:OVX+Vitamin K2组及假手术组明显低于OVX组(P<0.05),且OVX+Vitamin K2组高于假手术组(P<0.05)。结论腰椎组织中MGP基因表达增高可能是绝经后骨质疏松发生的作用机制之一,调节MGP mRNA表达可能是维生素K2治疗骨质疏松的一种作用途径。     

血清β-胶原降解产物、组织蛋白酶K和骨保护素对绝经后骨质疏松患者诊断的研究

目的观察血清β-胶原降解产物(β-CTX)、组织蛋白酶K(Cathe K)和骨保护素(OPG)在绝经后骨质疏松患者的诊断意义。方法选择2011年1月至2017年12月在同济医院和第八医院就诊诊断为绝经后骨质疏松的患者110例,为骨质疏松组。选择同期在我院诊断为骨量减少者(65例)和骨量正常者(30例)分别为骨量减少组和骨量正常组。观察各组血清β-CTX,Cathe K和OPG水平,骨质疏松患者血清β-CTX,Cathe K和OPG与骨折的关系和椎体骨折严重程度的关系,骨质疏松患者血清β-CTX,Cathe K和OPG水平的相关性分析,及血清β-CTX,Cathe K和OPG的受试者工作特征曲线(ROC)在诊断椎体骨折的价值。结果骨质疏松组的血清β-CTX和Cathe K水平明显高于骨量减少组和骨量正常组(P0.01),骨量减少组明显高于骨量正常组(P0.01),而骨质疏松组的OPG水平明显低于骨量减少组和骨量正常组(P0.01),而骨量减少组明显低于骨量正常组(P0.01)。骨折组的血清β-CTX和Cathe K水平明显高于未骨折组(P0.01),而骨折组的OPG水平明显低于未骨折组(P0.01)。骨质疏松患者血清β-CTX和Cathe K水平随着骨折严重程度的增加出现升高(P0.01),而OPG水平随着严重程度增加而降低(P0.01)。骨质疏松患者血清β-CTX与Cathe K呈正相关(r=0.816,P0.05),与OPG水平呈负相关(r=-0.763,P0.05),Cathe K与OPG水平呈负相关(r=-0.687,P0.05)。通过ROC来预测骨质疏松发生椎体骨折的灵敏度和特异性,联合检测ROC曲线下的面积明显高于β-CTX(Z=2.389,P=0.017),Cathe K(Z=2.707,P=0.007)和OPG(Z=2.926,P=0.003)检测,而β-CTX、Cathe K和OPG的比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论联合检测β-CTX、Cathe K和OPG对骨质疏松患者合并椎体骨折的诊断具有重要的临床价值。     

中医不同方法对骨质疏松症大鼠骨骼、 骨骼肌I型胶原蛋白表达影响的实验研究

目的观察骨质疏松症大鼠骨骼、骨骼肌I型胶原蛋白表达变化的影响,探讨中医防治骨质疏 松症的作用机制。方法将120只雌雄各半的大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、补肾中药组、 健脾中药组、活血化瘀中药组和骨疏康中药组6个组。采用Western blot方法测定大鼠骨骼、骨骼肌 I型胶原蛋白表达。结果①各组大鼠骨组织均可检测到I型胶原的蛋白表达。与正常组比较,各 组大鼠骨组织I型胶原的蛋白表达均明显下降（！<0.01);与模空组比较,各治疗组大鼠骨组织I型 胶原的蛋白表达均明显升高,其中补肾组、骨疏康组升高趋势最显著（P<0. 01 )。②各组大鼠骨骼肌 均可检测到I型胶原的蛋白表达。与正常组比较,各组大鼠骨骼肌I型胶原的蛋白表达均明显下降 (P<0.01);与模空组比较,各治疗组大鼠骨骼肌I型胶原的蛋白表达均明显升高（!<0.01),其中补 肾组升高趋势最明显。结论①骨质疏松症的形成,可能与骨骼、骨骼肌I型胶原表达的异常变化有 关。②补肾、健脾方法通过调控骨质疏松症大鼠的骨骼、骨骼肌I型胶原蛋白表达,对骨质疏松症具 有一定的防治作用。     

中药干预模拟失重大鼠股骨Ⅰ型胶原表达的研究

目的:研究3周模拟失重对大鼠股骨Ⅰ型胶原表达的影响和中药复方的干预作用。方法:雄性Wistar大鼠,30只,随机分为空白组、悬尾模型组和悬尾中药组;后两组不悬吊适应1周,悬尾吊3周模拟失重,中药组予中药复方(含熟地黄、怀牛膝、黄芪、当归、牡蛎醋酸水解物等)水煎剂灌胃。实验结束取左股骨,免疫组化法观察股骨颈骨组织中Ⅰ型胶原表达。结果:经过3周尾吊模拟失重,与空白组比较,模型组股骨Ⅰ型胶原阳性计数和IOD值均出现显著下降(P0.001);中药组股骨Ⅰ型胶原阳性计数和IOD值较空白组变化不显著(P0.05),较模型组则有显著增加(P0.001)。结论:3周模拟失重可造成模型动物股骨Ⅰ型胶原蛋白合成严重障碍,受试中药复方对此有显著的改善作用。     

大鼠牙齿移动牙周组织中Ⅰ型胶原和MMP-1及TIMP-1的表达

目的：观察大鼠正畸牙齿移动过程中I型胶原和MMP-i、TIMP-1在上颌第-磨牙牙周组织中的表达和变化。方法：建立大鼠正畸磨牙移动模型，分为对照组和术后1、3、5、7、10、14天组，用免疫组织化学方法观察各组中Ⅰ型胶原和MMP-1、TIMP-1表达的变化。结果：I型胶原和MMP-1、TIMP-1在大鼠正畸牙周组织中的阳性表达明显强于对照组，且有时间依赖性。结论：Ⅰ型胶原在牙周组织改建中具有重要的作用，MMP-1、TIMP-1参与了正畸牙周组织细胞外基质的代谢过程。     

益肾泄浊方对TGF-β_1诱导大鼠肾小管上皮细胞Ⅰ型胶原及FN表达的影响

目的：探讨益肾泄浊方对TGF-β1诱导大鼠肾小管上皮细胞Ⅰ型胶原及FN表达的影响。方法：采用灌胃法分别给予健康大鼠益肾泻浊方冲剂、缬沙坦以及益肾泻浊方＋缬沙坦联合治疗,取给药后大鼠的血清分组干预经TGF-β1刺激72h后的大鼠肾小管上皮（NRK52E）细胞,用RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原、FNmRNA的表达,用ELISA方法检测FN蛋白水平的表达。结果：益肾泻浊方、缬沙坦均能抑制TGF-β1诱导的NRK52EⅠ型胶原、FN的表达,而益肾泻浊方与缬沙坦联用后,对NRK52E细胞FN表达的抑制作用更为显著。结论：益肾泻浊方抑制TGF-β1诱导大鼠肾小管上皮细胞Ⅰ型胶原及FN的表达,可延缓肾脏纤维化的进展。     

异补骨脂素对去卵巢大鼠骨代谢的影响研究

目的研究异补骨脂素对去卵巢大鼠骨代谢的影响。方法取3月龄雌性SD大鼠40只,随机分为4组,假手术对照组,模型组,雌二醇组(苯甲酸雌二醇0.2 mg/kg,皮下注射,每周1次),异补骨脂素组。手术6 w后,异补骨脂素组用25 mg/kg(此浓度经过前期浓度筛选得到)异补骨脂素灌胃,每天1次,1周停止1次,模型组灌胃与用药组等体积生理盐水,假手术组正常饲养。12 w后双能X骨密度仪检测全身骨密度后处死,分离骨组织,于AG-X系列台式电子万能试验机检测左侧股骨和椎骨生物力学指标,血清中骨钙素(osteocalcin,OC)和抗酒石酸性磷酸酶5b(tartrate resistant acid phosphatase 5b,TRACP5b)检测,右侧股骨护骨素(osteoprotegerin,OPG),RANKL免疫组织化学染色,剥离心、肝、脾、肺、肾、肾上腺和子宫称重,计算器官指数,并做常规病理学检测。结果与假手术组比较,模型组大鼠体质量、全身骨密度、股骨骨密度、腰椎骨密度及血清OC、TRACP 5b,胫骨微组织结构和股骨生物力学性能差异极显著,有统计学意义(P0.01),说明骨质疏松造模良好;与模型组比较,异补骨脂素组大鼠体质量、全身骨密度、股骨骨密度、腰椎骨密度及血清OC、TRACP 5b,胫骨微组织结构和股骨生物力学性能显著差异有统计学意义(0.01P0.05)。与模型组比较,阳性对照组大鼠全身与股骨骨密度、血清OC、TRACP 5b和股骨生物力学性能极显著差异有统计学意义(P0.01)。药物处理组与阳性对照相比无统计差异。结论 25 mg/kg的异补骨脂素能增加SD大鼠骨密度,改善骨组织微结构,有效提升骨生物力学性能,促进骨形成,降低骨质疏松骨折发生的风险。     

牛膝提取物对去卵巢大鼠骨密度、骨转换及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的 观察牛膝醇提取物对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度(BMD)、骨转换和骨组织Ⅰ型胶原蛋白表达的影响.方法 背侧切口切除大鼠双侧卵巢,分为去卵巢组,牛膝提取物高、中、低剂量组和雌激素对照组,另设一假手术组,分别给予基础饲料和不同剂量治疗药物,12w后使用双能X线骨密度仪测量股骨、胫骨和腰椎的骨密度;采用酶联免疫吸附法对骨转换指标血清骨碱性磷酸酶(BAP)、血清骨钙素(BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)、尿Ⅰ型胶原氨基末端肽(NTx)/肌酐比值(NTx/Cr)进行测定,并利用Western免疫印迹法检测骨组织Ⅰ型胶原蛋白表达的变化.结果 大鼠去势后骨密度和Ⅰ型胶原蛋白的表达显著下降(P<0.01),骨转换指标有较大变化.牛膝醇提取物高、中剂量组可使去势大鼠骨密度和Ⅰ型胶原蛋白的表达显著提高,改善骨转换指标的变化,且存在一定的剂量-效应关系.结论 牛膝醇提取物能提高去势大鼠的骨密度和Ⅰ型胶原蛋白的表达.     

克伦特罗及普萘洛尔对去势大鼠骨代谢的影响

目的 研究克伦特罗及普萘洛尔对去势大鼠骨代谢的影响.方法 48只2月龄雌性大鼠随机分为6组,其中3组切除卵巢,另外3组不切除.饲养3个月后,分别给予β2肾上腺素受体激动剂克伦特罗(Clenbuterol)及β肾上腺素受体阻滞剂普萘洛尔(Propranolol)腹腔注射3个月.使用骨密度测量仪测量其股骨及腰椎骨密度,酶联免疫吸附试验法检测大鼠体内血清骨钙素浓度.处死后取胫骨,分别进行脱钙HE染色后观察.结果 未去势大鼠股骨及腰椎的骨密度分别是0.230±0.011g/cm2及0.226±0.009 g/cm2,OVA组大鼠股骨及腰椎的骨密度分别是0.201±0.010 g/cm2及0.201±0.011 g/cm2,OVA+Clen组大鼠的股骨及腰椎骨密度分别为0.187±0.012 g/cm2及0.189±0.013g/cm2,OVA+Pro组大鼠的股骨及腰椎骨密度分别为0.213±0.009 g/cm2及0.213±0.008 g/cm2;未去势组大鼠骨钙素浓度为2.941±0.066μg/L,OVA组大鼠骨钙素浓度为4.162±0.080μg/L,OVA+Clen组大鼠骨钙素浓度为3.973±0.088μg/L,OVA+Pro组大鼠骨钙素浓度为4.255±0.058μg/L.结论 克伦特罗能显著降低去势大鼠股骨骨密度;增加血清骨钙素的浓度.普萘洛尔能增加去势大鼠腰椎及股骨的骨密度,降低血清骨钙素的浓度.     

去卵巢大鼠骨组织中羟基磷灰石及胶原含量的变化

骨质疏松是由多种原因引起的一种严重危害中老年人群特别是绝经妇女身心健康的代谢性骨病小,其病理特点是骨密度明显降低,单位体积内骨组织总量的绝对减少,骨力学性能降低,骨组织结构发生改变等。天然骨由无机物和生物大分子有机结合的复合体。笔者就骨质疏松症与羟基磷灰石及胶原含量的变化关系作了研究,现将研究结果总结如下。     

龟地散对骨质疏松大鼠骨代谢的影响

目的 本实验对龟地散在去卵巢大鼠所致骨质疏松大鼠骨代谢方面的影响进行了探讨。结果 实验显示，龟地散能明显降低骨质疏松大鼠尿羟脯氨酸和尿钙含量（P＜0．01，P＜0．05），并可明显增加血清碱性磷酸酶含量（P＜0．01）和骨钙素水平（P＜0．05）。结果还显示，龟地散对血清钙水平有显升高作用（P＜0．05），但对血清磷水平的影响却不明显。结论 提示龟地散能明显改善去势大鼠所致骨质疏松。     

补肾法对卵巢切除大鼠骨组织白细胞介素-6mRNA表达的影响

目的探讨补肾法治疗绝经后骨质疏松症的分子作用环节.方法以卵巢切除大鼠作为骨质疏松实验模型,通过斑点杂交技术,在mRNA水平分析模型组、密骨片组及假手术组白细胞介素-6(IL-6)表达.通过原位杂交技术,研究了IL-6 mRNA在骨组织细胞的分布.结果模型组大鼠IL-6 mRNA表达较假手术组明显升高(P＜0.01);而密骨片组治疗后IL-6 mRNA表达明显下降(P＜0.01).IL-6 mRNA主要在成骨细胞、骨衬里细胞和骨细胞胞浆内表达.结论 IL-6在骨质疏松骨丢失过程中起重要作用;补肾法抗骨质疏松疗效部分是通过降低IL-6产生而介导的.     

香豆雌酚对去卵巢大鼠骨代谢生化指标的影响

目的 研究香豆雌酚对去卵巢大鼠骨代谢生化指标的影响,探讨香豆雌酚对绝经后骨质疏松的防治作用.方法 36只6月龄雌性SD大鼠,随机分为去卵巢模型组,香豆雌酚组,17β-雌二醇组和假手术组,手术后14d,各组开始进行干预治疗.17β-雌二醇组按300μg/kg皮下注射,每周两次;香豆雌酚组按60 mg/kg皮下注射,1次/d;去卵巢模型组与假手术组每日皮下注射与17β-雌二醇组和香豆雌酚组同等体积的生理盐水.在干预治疗开始的第1～10周,每周测1次大鼠质量.第11周时测定尿钙、尿磷、尿肌酐和尿脱氧吡啶啉;计算大鼠子宫系数;测血钙、血磷、血碱性磷酸酶、血雌二醇浓度;测量大鼠右侧股骨密度.结果 与去卵巢模型组相比,香豆雌酚组大鼠骨密度( g/cm2)明显升高(0.141 ±0.002和0.126±0.003,P＜0.05),血碱性磷酸酶(1.26±0.15和2.42±0.70)、尿钙/尿肌酐(0.207±0.059和0.217+0.047)、尿脱氧吡啶啉/尿肌酐(6.056±1.715和0.572±3.140)(P均＜0.05)下降,差异有显著性意义,血雌二醇(7.13±4.11和3.41 ±1.98)升高;与17β-雌二醇组相比,香豆雌酚组子宫系数(g/kg)明显降低(1.056±0.715和4.133±1.121,P＜0.01),差异有显著性意义.结论 香豆雌酚具有减少骨吸收,促进骨形成,增加骨密度的作用,而其对子宫组织的副作用弱于雌激素.