雷帕霉素抑制mTOR信号通路对EC9706细胞生长及凋亡的影响

目的:检测食管鳞状细胞癌组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的活性及雷帕霉素(rapa)对食管鳞状细胞癌细胞系EC9706细胞生长及凋亡的影响.方法:采用免疫组织化学SP法检测50例食管鳞状细胞癌组织及15例正常食管组织中mTOR蛋白的表达.分别用不同浓度(20、50和100 nmol/L)的rapa处理食管鳞状细胞癌EC9706细胞系,以未处理组作为阴性对照,采用流式细胞术测定细胞周期和凋亡率.结果:食管鳞状细胞癌组织中mTOR蛋白的阳性表达率为64.0%(32/50),高于正常组织的13.3%(2/15)(χ2=11.873,P=0.001).与对照组比较,rapa可使细胞停滞于G0/G1期(F=102.609,P=0.001),且明显促进细胞凋亡(F=916.882,P=0.001).结论:mTOR信号通路在食管鳞状细胞癌中被显著激活,rapa能抑制食管鳞状细胞癌细胞生长并诱导细胞凋亡.     

mTOR在动脉粥样硬化中的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,主要通过蛋白复合物mTORC1和mTORC2参与调控细胞增殖、生长、代谢和自噬等生物学过程。mTOR在动脉粥样硬化(AS)的发生发展中发挥重要作用,本文将从AS的危险因素：血管壁炎症反应、内皮细胞功能紊乱、平滑肌细胞增殖与迁移、细胞自噬、斑块内血管新生、脂质浸润等方面来回顾mTOR调控AS相关的多个细胞和分子过程,mTOR抑制剂的正确临床应用将为AS的临床治疗提供新思路。     

mTOR信号通路在皮肤恶性肿瘤中的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在细胞生长、增殖、分化、细胞周期调控等多个方面起到重要作用.近年来研究发现mTOR在皮肤恶性肿瘤(基底细胞癌、鳞状细胞癌、黑色素瘤、皮肤淋巴瘤、隆突性皮肤纤维肉瘤、血管肉瘤等)中异常表达,并通过影...     

mTOR信号抑制剂对幼鼠痫性发作后早期炎性因子的影响

目的:探讨mTOR抑制剂对幼鼠痫性发作后早期炎性因子的影响,为预防慢性癫痫形成寻找新的途径。方法:侧脑室注射海人藻酸(KA)诱导幼鼠(P10d)痫性发作(SE),mTOR抑制剂雷帕霉素(RAP)在SE发作后4h腹腔注射给药进行干预1周。分为KA组,KA+RAP组及生理盐水对照组(NS组)。观察慢性期自发性癫痫(SRS)发生率在各组的差异。痫性发作1周后实时定量RT-PCR检测炎性因子白细胞介素1-β(IL-1β)、转移生长因子-1(TGF-1)及环氧合酶-2(COX-2)在各组的表达差异。SE发作后2周Western blotting检测上述3种炎性因子蛋白表达水平在各组的差异。结果:在KA组,20只幼鼠中有14只观察到SRS发作,SRS发生率为70%,而在KA+RAP组中,21只幼鼠中有10只观察到SRS发生,发生率为47.6%,RAP干预明显降低慢性期SRS的发生率(P<0.05)。SE发作后1周IL-1β、TGF-1和COX-2基因表达水平在KA组表达明显增高,KA+RAP干预组较KA组减低,但较NS组表达增高。SE发作后2周IL-1β、TGF-1和COX-2基因表达水平在KA组表达明显增高,KA+RAP干预组较KA组减低,但较NS组表达增高。三种炎性因子表达水平在三组呈现相似变化趋势。结论:mTOR抑制剂能减少慢性期SRS的发生,抑制痫性发作后早期炎性因子IL-1β、TGF-1和COX-2基因和蛋白水平的表达。可能为预防慢性癫痫的形成提供新的思路和途径。     

mTOR信号通路与心脏疾病

细胞内信号转导通路在心脏疾病的发展演变特别是心肌细胞的生长增生过程中发挥重要作用。其中,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of ra-pamycin,mTOR)信号转导通路已逐渐被认识。本文就mTOR的分子结构和相关信号通路及其与心脏疾病的关系做一综述。一、mTOR的分子结构m     

mTOR抑制剂联合其他药物治疗肿瘤的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)在多种肿瘤的发生、发展中扮演着十分重要的调控作用,因此mTOR抑制剂在肿瘤治疗中拥有巨大的潜力。进一步研究发现,mTOR抑制剂在发挥抗肿瘤作用的同时,不但产生了许多不良反应,而且还诱导肿瘤细胞耐药和复发,这在一定程度上限制了mTOR抑制剂的应用。mTOR抑制剂与其他药物联合使用,不仅弥补了单一药物治疗的不足,还能作用于肿瘤细胞的不同靶点,因此能够更大程度发挥mTOR抑制剂的抗肿瘤作用,这将为肿瘤治疗的临床研究提供新策略。本文就近年来mTOR抑制剂联合其他药物在肿瘤治疗中的研究进展进行综述。     

mTOR信号转导通路与心肌纤维化

哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白简称mTOR,是磷脂酰肌醇激酶-相关激酶家族(PIKKs)的一员,除蛋白激酶功能外,还是一种重要的信号转导分子,是控制蛋白质翻译和细胞周期进展的重要调控因子,也是调控PIKKs和蛋白激酶B(PKB/Akt)途径的关键因子,能够活化下游蛋白激酶核糖体生物合成和mRNA翻译过程,对细胞由G1期向S期发育起重要作用,控制多种生物酶的产生和活化,对转录也有重要的调控作用。mTOR促进心肌纤维化作用的机制主要为调控胶原蛋白的合成与稳定,并与TGF-β和αvβ3整合素信号通路相互作用,影响细胞外基质的产生。     

柚皮素通过激活mTOR/p70S6K信号通路减轻胰岛素抵抗 并改善H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激损伤

目的：观察柚皮素（naringenin,NAR）对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的影响,并探索其机制。方法：通过CCK-8检测细胞存活率,筛选出H2O2的半数致死浓度,用该浓度H2O2同时加入20、40、80 μmol/L柚皮素处理SH-SY5Y细胞4 h,通过CCK-8检测细胞存活率,选择适宜柚皮素浓度。按所选H2O2和柚皮素浓度进行后续实验。将实验分为3组。control组：细胞不进行任何干预处理;H2O2组：只加入600 μmol/L H2O2;H2O2+NAR组：同时加入600 μmol/L H2O2与40 μmol/L柚皮素。4 h后,通过ANNEXIN V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（reactive oxy－gen species,ROS）,Western blot检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）、核糖体蛋白S6激酶（p70 ribosomal S6 kinase,p70S6K）,以及各自磷酸化形式蛋白[p-mTOR（Ser2448）、p-p70S6K（Thr389）],用胰岛素受体底物-1（insulin receptor substrate 1,IRS1）及其丝氨酸636+639位点磷酸化[p-IRS1（Ser636+Ser639）]蛋白的表达来观察胰岛素抵抗（insulin re－sistance,IR）。结果：H2O2降低SH-SY5Y细胞的存活率,呈剂量依赖性,600 μmol/L浓度为半数致死剂量。柚皮素明显降低了H2O2诱导的SH-SY5Y细胞死亡,最适剂量为40 μmol/L。与control组比,H2O2明显增加了细胞凋亡率、胞内ROS的产生,降低了p-mTOR（Ser2448）、p-p70S6K（Thr389）的表达,增加了p-IRS1（Ser636+Ser639）蛋白的表达（P<0.05）;加入柚皮素后,相对于H2O2组,上述作用明显减弱（P<0.05）。结论：在体外氧化应激模型中,柚皮素能明显降低细胞内ROS的积累,提高细胞的存活率。其机制可能与激活mTOR/p70S6K信号通路、改善IR有关。     

雷帕霉素抑制人结肠癌细胞体外增殖及其机制研究

目的 研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTTOR特异性抑制荆雷帕霉素(Rapamycin)对体外培养的人结肠癌Lovo细胞生长的抑制作用,并初步探讨其机制.方法 分别用0.5、1.0、2.5和5.0ug/mL雷帕霉素对Lovo细胞进行干预,采用MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达.结果 雷帕霉素对Lovo细胞表现出明显的增殖抑制作用,细胞增殖活性随浓度增加、时间延长逐渐降低,呈现量-效、对-效关系.雷帕霉素呈浓度依赖性诱导细胞凋亡,并明显降低Lovo细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达水平.结论 雷帕霉素通过下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,诱导结肠癌Lovo细胞凋亡,从而抑制其增殖及生长.     

雷帕霉素对Yap1-β-连环蛋白诱导儿童肝母细胞瘤抑制作用的研究

目的 探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)抑制剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)影响转录共刺激因子-Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)1-β-连环蛋白(β-catenin)诱导的儿童肝母细胞瘤(Hepatoblas...     

高氧性肺损伤中MAPK信号途径的表达及其作用机制

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路三亚族ERK,p38,JNK在大鼠高氧性肺损伤动物模型中的表达及作用.方法:24只3周龄Wistar大鼠随机分成4组:空气对照组和高氧暴露3,7和14 d组,每组动物6只.高氧暴露组置于常压高氧仓中(O2≥95%),空气对照组置于常压空气中(O2=21%).光镜下观察肺组织病理学改变,采用二步法免疫组化检测磷酸化ERK,p38,JNK在肺组织中的分布.Western Blot检测磷酸化MAPK蛋白表达变化.结果:高氧暴露3,7 d组出现急性肺损伤的典型病理学特征,高氧暴露14 d组肺间质及纤维细胞增生明显.免疫组化显示空气对照组仅肺泡上皮细胞及气道上皮细胞见少量磷酸化ERK,p38,JNK阳性表达,高氧暴露组则阳性细胞明显增多,广泛分布于肺内细胞中:肺泡上皮细胞、气道上皮细胞、胸膜间皮细胞、浸润炎细胞及间质纤维细胞,p38阳性表达尤多见于炎性细胞中.Western Blot显示高氧暴露组较空气对照组磷酸化蛋白表达明显增强,ERK,JNK高氧暴露7 d组表达最强(P＜0.05),p38在高氧暴露14 d组表达最为明显(P＜0.05).结论:高浓度氧可激活MAPK信号途径,磷酸化ERK,p38,JNK在高氧损伤肺组织表达明显增加,MAPK三亚族ERK,p38,JNK活性变化在时间上并不具有同步性.     

下调SIK2可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤：基于mTOR-ULK1信号通路的下调与细胞自噬的减少

目的 探究盐诱导激酶2（SIK2）对大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响及机制。方法 建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、缺血再灌注组、SIK2抑制剂组,5只/组（造模前24 h左股静脉注射博舒替尼10 mg/kg）。超声检测大鼠心功能,HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌细胞自噬情况,蛋白免疫印迹法检测各组大鼠心肌组织中SIK2和LC3B、Beclin-1、p62等自噬相关蛋白以及p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1相关通路蛋白含量。结果 与假手术组比较,缺血再灌注组心肌组织病理损伤严重,自噬小体数量增加（P<0.05）,同时SIK2蛋白表达增多（P<0.01）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组SIK2蛋白表达减少（P<0.01）,心肌组织病理损伤较轻,自噬小体数量减少（P<0.05）。与假手术组相比,缺血再灌注组LVEF、FS值降低（79.33±3.40 vs 38.67±2.49,59.33±5.25 vs 19.33±1.25,P<0.001）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组LVEF、FS值升高（38.67±2.49 vs 59.33±3.40,19.33±1.25 vs 30.67±3.40,P<0.05）,3组IVSDd、LVPWDd无明显差别（P>0.05）。与假手术组相比,缺血再灌注组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达增多,p62蛋白表达减少（P<0.01）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达减少,p62蛋白表达增多（P<0.05）。与假手术组相比,缺血再灌注组p-ULK1（Ser757）蛋白表达增多（P<0.01）,p-mTOR蛋白表达减少（P<0.0001）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组p-ULK1（Ser757）蛋白表达减少（P< 0.01）,p-mTOR蛋白表达增多（P<0.05）;各组mTOR、ULK1无明显差异（P>0.05）。结论 SIK2可能通过mTOR/ULK1信号通路促进细胞自噬,对SIK2进行抑制,可以减少异常自噬,缓解心肌缺血再灌注损伤。     

高氧肺损伤中肺细胞凋亡及JNK信号通路调控机制

目的:观察高氧暴露下肺组织细胞凋亡和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达的变化,并探讨JNK信号转导通路对高氧诱导的肺细胞凋亡的调控机制.方法: 48只3 wk龄Wistar大鼠随机分为空气对照组、高氧暴露3,7,14d组、空气 JNK抑制剂干预组、高氧暴露7 d JNK抑制剂干预组.光镜下观察肺组织病理学改变,末端标记法(TUNEL)分析肺组织细胞凋亡的变化,免疫组化检测肺组织p-JNK的表达分布,Western Blot检测肺组织p-JNK蛋白质的表达含量.结果: 与空气对照组比较,高氧暴露各时间点组肺组织出现典型急、慢性肺损伤的病理学改变,肺组织细胞凋亡指数和p-JNK蛋白表达含量均显著增加(P<0.05),肺组织p-JNK阳性细胞明显增多.JNK抑制剂SP600125在空气和高氧暴露下均能明显阻断JNK的激活(P<0.05),SP600125干预后高氧暴露肺组织细胞凋亡指数显著减少(P<0.05).结论: 细胞凋亡是高氧肺损伤的一个重要病理组织学特点.JNK信号转导通路在高氧肺损伤中被激活,可能发挥促细胞凋亡效应.     

降钙素基因相关肽在高氧致幼年鼠肺损伤中的动态变化及意义

目的：探讨降钙素基因相关肽（CGRP）在高氧肺损伤形成过程中的作用．方法：SD大鼠64只按随机数字表法分为8组,每组8只,分别为空气对照组和高氧暴露1d组、3d组、7d组、14d组．通过肺组织形态学及肺组织湿／干质量,了解高氧肺损伤炎症水肿的病理改变、放射免疫法检测肺组织匀浆中CGRP含量,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定肺组织内CGRP的两个亚型（α-CGRP,β-CGRP）的mRNA表达．结果：高氧暴露组3～7d肺组织充血水肿,大量炎性细胞侵润;14d肺泡腔扩大,肺纤维细胞增生;高氧暴露7～14d组肺湿／干质量明显高于空气对照组;随高氧暴露时间延长,肺组织匀浆中CGRP浓度逐渐增高,于第3日达峰值,之后逐渐下降,第14日降至正常水平;肺组织中CGRP两个亚型mRNA表达不同,α—CGRPmRNA在高氧刺激24h内表达开始增高,高表达持续至高氧暴露7d,7d后表达明显降低;β-CGRPmRNA表达晚于α-CGRPmRNA,在高氧刺激3d时表达开始增高,高氧暴露14d仍处于高表达状态．结论：CGRP参与高氧肺损伤的形成过程,并在减轻高氧致肺损伤方面可能起着重要的作用．     

MAPKs通路在高氧肺损伤发病机制中的作用

目的:观察丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinases.MAPKs)信号通路细胞外信号调节激酶(Extracellularsignal-regulated kinase,ERK)、C-jun氨其未端激酶(C-JunN-terminal kinase,JNK)、p38MAPKs在高氧肺损伤肺组织的分布以及表达,应用信号途径抑制剂,研究MAPKs信号在高氧诱导肺损伤发生发展中的作用.方法:幼年Wistar大鼠随机分为如下各组(n=6):空气对照组(A)、高氧暴露3、7、14 d组(O3、O7、O14组)、高氧7 d+ERK抑制剂PD98059(O PD)组、高氧7 d+p38抑制剂SB203580(OT+SB)组、高氧7 d+JNK抑制剂SP600125(O P)组及相应空气+抑制剂组.其中,PD98059 0.3ms/ks及SB2035800.2 mg/kS由大鼠尾静脉注入,SP600125 15 mg/ks经腹腔注射.光镜下观察肺组织形态学改变并进行肺损伤病理评分;测定肺湿/干重比(Wet/drg ratio,W/D)、肺泡灌洗液(Bronchoalvedar lavage fluid,BALF)蛋白含量及肺通透系数;免疫组化检测磷酸化MAPKs在肺组织的分布,Western blot检测MAPKs蛋白含量变化.结果:与空气暴露组比较,高氧暴露各组肺组织可见不同程度损伤,O7及O14组肺W/D、BALF蛋白含量、肺通透系数明显增加(P＜0.05);而抑制剂组中O SB、O SP组肺泡结构较O7组有明显改善,肺损伤病理学评分降低,同时W/D、总蛋白、肺通透系数较也明显下降(P＜0.05);MAPKs阳性细胞在高氧组表达明显增多,分布广泛;各相应抑制剂组中其阳性细胞显著减少;Western blot结果显示,高氧组ERK、p38、JNK蛋白含量明显高于空气组,在高氧各组中以O7组ERK及O14组p38、JNK表达最强.各信号通路抑制剂均能有效抑制相应MAPKs蛋白的表达.结论:高浓度氧可激活肺组织ERK、p38、JNK信号途径;p38及JNK可能促进了高氧肺损伤的发生发展.     

右美托咪定预处理通过抑制NLRP3炎性小体激活减轻大鼠肠缺血再灌注诱导的急性肺损伤

目的 探讨右美托咪定（Dex）对大鼠肠缺血再灌注（II/R）所致急性肺损伤（ALI）的保护作用以及核苷酸结合域样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体活性的影响。方法 将32只健康雄性SD大鼠,随机分为4组（8只/组）。假手术组（Sham组）仅暴露肠系膜上动脉（SMA）,肠缺血再灌注组（II/R组）阻断SMA 1 h后再灌注2 h,II/R+右美托咪定处理组（Dex+II/R组）右美托咪定干预后行再灌注,Dex假手术组（Dex组）右美托咪定预处理假手术组。Sham组和II/R组腹腔注射等量生理盐水。采取夹闭SMA 1 h再灌注2 h的方法建立肠缺血再灌注损伤模型。测定各组大鼠肺部组织湿/干质量比值（W/D）、髓过氧化物酶（MPO）活性,HE染色评估肺组织病理学变化以及行肺损伤评分;ELISA检测肺部组织中炎性因子TNF-α、IL-18、IL-1β水平;Western blot检测肺部组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Caspase-1及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）蛋白的表达水平。结果 相较于Sham组,II/R组肺组织病理损伤明显,W/D值、MPO活性及肺组织中的TNF-α、IL-18、IL-1β表达显著升高（P<0.05）,肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加（P<0.05）,p-AMPK蛋白表达减少（P<0.05）;相较于II/R组,Dex+II/R组肺组织病理损伤轻微,W/D值、MPO活性及肺组织中的TNF-α、IL-18、IL-1β表达明显下降（P<0.05）,肺组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达明显下降（P<0.05）,p-AMPK蛋白表达明显增加（P<0.05）。结论 右托美咪定通过对NLRP3炎性小体激活的抑制,减轻炎性反应,进而改善大鼠II/R所致的ALI。     

雌激素对新生大鼠高氧肺损伤的影响

[目的]探讨雌激素对高氧所诱发新生大鼠肺损伤的影响.[方法]选用生后2d、体重为5～10g的新生Wistar大鼠,雌雄不拘,随机分为空气对照组、高氧模型组及雌激素治疗组.将空气对照组新生大鼠暴露在室内空气中,其他各组新生大鼠暴露在90%(体积分数)氧中共14d,雌激素治疗组新生大鼠每日分别腹腔内注射给予雌激素2mg/kg,空气对照组和高氧模型组腹腔内注射给予生理盐水.实验开始第3,7,14天时间点记录各组新生大鼠自然死亡数目,计算死亡率;每组处死10只,取肺组织,在光学显微镜下观察肺组织的病理变化,采用免疫组织化学染色方法观察肺组织中γ干扰素(IFN-γ)的表达.[结果]随着高氧暴露时间的延长,高氧模型组及雌激素治疗组死亡率均呈增高趋势,高氧模型组暴露7 d后开始死亡率迅速升高,而雌激素治疗组死亡率明显降低,相比较差异具有统计学意义(P<0.05).空气对照组IFN-γ无阳性表达,而高氧模型组中的阳性表达在第7天时达到高峰,第14天时明显下降,但仍高于空气对照组;雌激素治疗组中的IFN-γ表达强度在各时间段均明显低于高氧模型组(P<0.01).[结论]雌激素对新生大鼠高氧肺损伤有保护作用.     

AKT/mTOR信号通路介导神经病理性疼痛对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨神经病理性疼痛对大鼠心肌缺血灌注损伤的影响及蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路参与该过程的调节机制.方法 SD大鼠42只,体质量250～320 g(10周龄),采用随机数字表法分为3组:对照组(Con组)、心肌缺血再灌注损伤组(I/R组)、神经病理性痛+心肌缺血再灌注损伤组(NP...     

盐酸氨溴索对成年大鼠高氧肺损伤的影响

目的研究盐酸氨溴索对成年大鼠高氧肺损伤的影响。方法成年雄性SD大鼠48只,随机分为6组每组8只。对照组（0h组）吸入空气,其余5组氧舱内吸入100%浓度O2,根据吸氧时间不同分为24h组、48h组、72h组、96h组、盐酸氨溴索（ABX）组（吸氧96h）;ABX组予ABX 30mg/kg腹腔内注射1次/d。到达实验终点后颈动脉采血行动脉血气分析,测定血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎症因子水平,肺组织酶活性和Bax、Bcl-2蛋白表达。结果随高氧暴露时间延长,大鼠氧合指数呈逐渐下降趋势,96h达到最低值。血清及BALF中TNF-α、IL-1β水平逐渐增高,48h达到高峰,此后开始下降,IL-6在72h达高峰。肺组织Bax蛋白表达逐渐增多,Bcl-2表达逐渐下降。ABX干预组同96h组相比氧合指数增加（P〈0.01）,血清及BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6水平下降（P〈0.01）,肺组织中Bax蛋白表达显著下降（P〈0.01）,Bcl-2蛋白表达显著增高（P〈0.01）。结论盐酸氨溴索通过抗炎、抗氧化及抗凋亡作用能够减轻成年大鼠高氧肺损伤。