足细胞自噬在足细胞病中的研究进展

对近年来足细胞自噬在足细胞病中的作用及其机制的研究进行了概述,阐述了哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在足细胞自噬中扮演的角色。足细胞自噬活性的改变与足细胞病的进程密切相关,mTOR 信号通路介导的自噬途径是足细胞保持自身稳定的重要调节器,以调控足细胞自噬平衡体系为干预靶点可能成为足细胞病防治的新靶点。     

高糖对体外培养的足细胞自噬的影响

目的:研究不同葡萄糖浓度?不同作用时间对体外培养的足细胞自噬的影响?方法:体外培养小鼠永生性足细胞系,给予不同浓度的葡萄糖(5.6?11.0?20.0?30.0 mmol/L)刺激,作用时间分别为6?12?24?36 h?Western blot检测足细胞自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ的表达;透射电镜观察足细胞自噬小体的形成;荧光显微镜观察足细胞转染GFP-LC3荧光蛋白后绿色荧光蛋白颗粒的变化?结果:①与0 h相比,30 mmol/L葡萄糖刺激后足细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达随着作用时间的延长逐渐增加,到24 h时增加最明显,差异有显著性(P < 0.05)?24 h时,透射电镜下足细胞自噬小体形成最多;荧光显微镜下足细胞转染GFP-LC3绿色荧光蛋白颗粒最多?②与对照组5.6 mmol/L相比,随着葡萄糖刺激浓度的增加足细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达明显增加,30 mmol/L浓度时最明显,差异有显著性(P < 0.05)?结论:高糖呈浓度和时间依赖性增加体外培养的足细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达?诱导足细胞自噬体的形成?     

IgA肾病足细胞自噬体的改变及其临床意义

目的 观察IgA肾病(IgAN)足细胞自噬体的数量变化,初步探讨足细胞自噬与IgAN进展的关系。 方法 回顾性分析浙江省人民医院2013年1月—2014年12月经肾活检确诊且具有完整临床资料的35例IgAN患者。据病理将患者分为LeeⅡ级、Ⅲ级和Ⅳ级。据尿蛋白分为大量蛋白尿组(尿蛋白≥3.5 g/d)和非大量蛋白尿组(尿蛋白＜3.5 g/d)。据eGFR分为2组:eGFR≥60 ml/min和eGFR＜60 ml/min组。据性别分为男性组和女性组。光镜和透射电镜分别观察肾脏组织病理学变化以及足细胞结构和自噬体的数量。每5例患者分为一组,每组患者随机选取30个足细胞记录足细胞自噬小体数量,然后计算出每个足细胞内自噬小体的数量。最后分析自噬体数量与病理分期、性别、肌酐清除率和尿蛋白的关系。 结果 与正常对照组比较,IgAN组患者足细胞自噬体数量明显减少,差异有统计学意义(P＜0.001)。然而随着IgA肾病Lees分期级别的增加,足细胞自噬体数量又呈增加趋势。其中Lee Ⅱ期患者与Lee Ⅳ期患者相比,差异有统计学意义(P=0.001)。另外,足细胞自噬体数量的减少在女性患者中更为明显,差异有统计学意义(P=0.035)。肾功能较差的患者(男性和Lee Ⅳ期患者)拥有更多的足细胞自噬体,但差别无统计学意义。自噬体数量在不同尿蛋白组之间的差异无统计学意义。 结论 足细胞自噬参与着IgA肾病的进展。      

基于“虚气留滞”探讨足细胞自噬在糖尿病肾脏病中的作用

自噬是指细胞降解受损的细胞器、变性蛋白质等代谢产物的过程,是机体自我保护、自我更新的重要机制。足细胞作为肾小球滤过屏障的主要成分,其自噬功能缺陷,可破坏滤过屏障,导致蛋白尿的产生以及肾小球硬化。“虚气留滞”是糖尿病肾脏病（diabetic kidney disease,DKD）的核心病机,贯穿疾病始末。“虚气”指脾肾亏虚,为发病之本;“留滞”指脾肾亏虚日久,正气不足,气化不利,津液代谢障碍,导致痰湿瘀毒等病理产物阻滞,为发病之标。足细胞自噬不足,清除与降解能力减弱,代谢毒物异常堆积于肾,从而引发疾病的发生,与“虚气留滞”具有相互贯通之处。因此,文章将DKD“虚气留滞”理论与足细胞自噬不足相结合,探讨二者在DKD中的相关性,全面诠释“虚气留滞”病机的科学内涵,进一步从分子水平探讨DKD的发病机制,以期为DKD日后的防治提供新思路以及科学理论依据。     

miR-155调控线粒体自噬对足细胞损伤的机制研究

目的探讨miR-155对足细胞凋亡的影响,并深入研究其机制。方法 MPC5细胞(经H₂O₂预处理)分为miR-155抑表达组、miR-155过表达组、对照(空质粒)组、空白组。分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot法检测线粒体自噬通路相关因子FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin1、p62及凋亡相关因子Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA或蛋白表达;JC-1探针检测线粒体膜电位;ELISA检测细胞内ROS含量;CCK8、流式细胞术检测细胞活性及凋亡。结果相较于对照组,miR-155抑表达组的FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin1和Bcl-2表达明显升高,细胞活性和线粒体膜电位明显增加(P<0.05),p62、Caspase-3和Bax的表达明显降低,ROS含量和细胞凋亡率显著下降(P<0.05);miR-155过表达组的FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin1、Bcl-2的表达明显下调,细胞活性和线粒体膜电位明显降低(P<0....     

过表达FOXO1脂肪干细胞调控自噬对高糖诱导足细胞损伤修复的机制研究

目的 本研究旨在探究过表达FOXO1的脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)在高糖诱导足细胞损伤修复中的作用机制。方法 利用胶原酶消化法分离ADSCs。通过慢病毒感染ADSCs来构建过表达FOXO1的ADSCs。实验分为对照组、高糖组、高糖+ADSCs组、高糖+ADSCs(FOXO1+)组和高糖+ADSCs(FOXO1+)+自噬抑制剂3-MA组。利用茜素红染色检测ADSCs成骨分化能力。应用油红O染色检测ADSCs成脂分化能力。通过CCK-8法和流式细胞术检测MPC5细胞活力和细胞凋亡。通过免疫荧光检测MPC5细胞自噬相关蛋白LC3。采用Western blot法检测FOXO1、Bax、Bcl-2、p62和LC3-Ⅱ的蛋白表达。结果 流式细胞术检测显示CD29和CD90在ADSCs中高表达,而CD34和CD45表达极低;此外,茜素红染色和油红O染色结果都证实了成功分离了ADSCs。Western blot法检测结果显示,FOXO1在ADSCs(FOXO1+)细胞中高表达,表明慢病毒转染成功;同时,ADSCs(FOXO1+)细胞与MPC5细胞间接共培养明显提高MPC5细胞的FOXO1表达水平。CCK-8和流式细胞术检测发现,FOXO1过表达能够显著增强高糖诱导的MPC5细胞活力和减弱细胞凋亡。另外,免疫荧光检测表明FOXO1过表达能够促进高糖抑制的MPC5细胞自噬。同时,加入自噬抑制剂3-MA可减弱ADSCs(FOXO1+)细胞对高糖诱导足细胞损伤的修复作用。结论 过表达FOXO1的ADSCs具有修复糖尿病肾病足细胞损伤的作用,其作用机制是通过促进细胞自噬有效抑制高糖诱导的MPC5细胞凋亡。     

足细胞凋亡在糖尿病肾病发病中的作用

糖尿病肾病是糖尿病患者最常见的慢性并发症之一,也是导致终末期肾衰竭的重要原因。近年研究发现,作为肾小球滤过屏障结构成分的足细胞在糖尿病肾病发生发展过程中起重要作用。多种因素如糖脂毒性、血管紧张素、糖基化终末产物等可引起足细胞的凋亡,促使糖尿病肾病的发生。     

保肾通络方含药血清调节线粒体自噬对高糖诱导下足细胞氧化损伤的影响

目的 观察保肾通络方含药血清对高糖培养下足细胞氧化损伤的影响,并对保肾通络方的作用机制进行探讨。方法 以体外培养的肾小球足细胞为研究对象,给予高浓度葡萄糖刺激,采用CCK-8法分析足细胞活力以确定最佳模型及给药浓度,分为正常对照组、高糖组、保肾通络方组,采用鬼笔环肽进行细胞骨架染色,Western blotting法检测足细胞裂孔膜蛋白nephrin,自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,ATG5)、ATG7、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达,流式细胞术检测足细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)及线粒体膜电位,免疫荧光共标LC3B及线粒体,观察各组足细胞内线粒体自噬泡的生成情况。结果 30 mmol/L高糖干预48 h可显著降低足细胞活力(P＜0.05),保肾通络方含药血清可使高糖诱导的足细胞活力明显提升(P＜0.01);与正常对照组相比,高糖组足细胞骨架褶皱呈多边形,应力纤维束被破坏,ROS生成显著增多(P＜0.01),足细胞nephrin、ATG5、ATG7表达显著降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P＜0.05),LC3B与线粒体共标减少,线粒体膜电位下降(P＜0.01);与高糖组相比,保肾通络方组足细胞骨架改善,ROS生成减少(P＜0.01),nephrin、ATG5、ATG7表达显著增加(P＜0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上升(P＜0.05),LC3B与线粒体荧光共标增多,线粒体膜电位升高(P＜0.01)。结论 保肾通络方含药血清能够减轻高糖诱导的足细胞氧化损伤,其作用可能与改善足细胞线粒体自噬有关。     

达格列净通过mTOR自噬信号通路改善糖尿病肾病大鼠足细胞损伤

目的 探讨达格列净对糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)大鼠足细胞损伤的影响及相关分子机制。方法 46只Wistar雄性大鼠以随机数字表法分为对照组(NC组,n=10)和造模组(n=36)。成功构建DN模型的30只造模组大鼠随机分为模型组(DN组)、达格列净组(Dapa组)、达格列净+雷帕霉素组(Dapa+Rapa组),每组10只。各组大鼠均给药干预12周,1次/d。采用血糖仪检测大鼠空腹血糖(FBG)。全自动生化分析仪测定大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白(UP)。HE染色观察大鼠肾组织病理形态学。透射电子显微镜观察大鼠肾脏足细胞变化。Western blot法检测足细胞标志蛋白(nephrin、podocin)、自噬蛋白(Beclin-1、LC3Ⅱ、P62)及mTOR信号通路相关蛋白(mTOR、p-mTOR)表达。结果 与NC组比较,DN组大鼠肾小球体积增大,肾小管上皮细胞空泡变性,存在大量炎性细胞浸润;足细胞足突融合,排列紊乱,可见明显线粒体嵴断裂或空泡化。与DN组比较,Dapa组和Dapa+Rapa组大鼠肾脏病理损伤明显减轻;足细胞...     

淋巴细胞自噬性凋亡的超微结构细胞化学研究

本实验用诱电镜和细胞化学染色法放线菌酮处理和γ射线照射大鼠胸腺、脾脏和肠系膜淋 的超微结构。结果显示，放线菌酮注射后４ｈ；或γ射线照射２ｈ后引起大鼠胸腺、脾脏及肠系膜淋巴结中的淋巴细胞凋亡。凋亡淋巴细胞发生一系更的形态学变化，其胞核染色持凝集，重排、使核呈没的形态；凋亡淋巴细胞的线粒体，内质网、溶酶体等细胞器大量增殖，我们称之为细胞反跳现象；大部分凋亡淋巴细胞凋恨时呈现典型的自噬性凋亡特征，即内持     

自噬与糖尿病肾病相关性研究进展

自噬是细胞为应对内外环境压力变化而出现的一种正常反应,是细胞内物质成分被溶酶体降解的过程。近年来研究发现,自噬在糖尿病肾病（DN）的发生发展中起着重要作用,是DN治疗的潜在靶点,与肾足细胞的生长发育和生理病理活动密切相关,是一种细胞的自我保护机制,调控自噬相关信号通路可影响DN发生发展。因此,本文就DN的发病机制、自噬在肾固有细胞中的作用以及调控自噬相关信号通路对糖尿病肾病发生发展的影响等方面进行综述。     

舒洛地特调控miR-27a介导自噬调控糖尿病肾病足细胞损伤机制研究

目的分析舒洛地特调控微小RNA-27a(miR-27a)介导自噬调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制。方法选取45只中15只大鼠作为正常组不做任何处理,其余大鼠建立糖尿病肾病大鼠模型,随机分为模型组、舒洛地特组各15只。舒洛地特组大鼠给予舒洛地特肌内注射,正常组和模型组给予等体积生理盐水肌内注射。观察各组大鼠病理组织学变化,血糖、血脂和肾功能指标、足细胞自噬体情况、凋亡率,足细胞特异性蛋白Nephrin、Desmin、GPR124及miR-27a、AMPK-mTOR信号通路蛋白表达量。结果舒洛地特组血糖、血脂和肾功能指标、足细胞凋亡率、Desmin、miR-27a、AMPK-mTOR信号通路蛋白表达量均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。舒洛地特组足细胞自噬体数量、Nephrin、GPR124蛋白表达量均高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论舒洛地特可通过下调miR-27a介导AMPK、mTOR、Bax蛋白表达量降低,进而抑制AMPK-mTOR信号通路,促进糖尿病肾病足细胞自噬、抑制糖尿病肾病足细胞凋亡、减轻糖尿病肾病足细胞损伤。     

细胞自噬与凋亡关系的分子机制研究进展

自噬活跃在所有细胞中,在缺血缺氧状态或者营养缺乏条件下其表达上调.诱导的自噬不仅促进了受损细胞成分的降解,且为细胞提供了能量.凋亡和自噬均为程序性细胞死亡,现在已知自噬和凋亡在疾病病理进展过程中起着重要作用,包括神经退行性病变、老化、癌症、自身免疫疾病.本文就自噬与凋亡关系的分子机制研究进展做一综述.     

细胞自噬在三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡中的作用研究

【摘要】 目的 研究细胞自噬在三氧化二砷（ATO）诱导的肝癌细胞死亡中的作用,观察调控细胞自噬对ATO诱导的细胞凋亡有何影响。方法 以人肝癌HepG2细胞为研究对象,在ATO作用于HepG2细胞的基础上,加入自噬激动剂〔雷帕霉素（Rap）〕和自噬抑制剂〔三甲基腺嘌呤（3-MA）〕进行调控。以MTT法检测细胞生存率,透射电镜观察自噬体结构,免疫印迹法分析自噬相关蛋白LC-3和Beclin1的表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 5~20 μmol/L ATO与10 mmol/L 3-MA联用时HepG2细胞存活率比同剂量ATO单独作用时降低（P <0.05）,凋亡率增加（P <0.05）,细胞内呈现典型凋亡反应特征,自噬蛋白LC3和Beclin1表达低于ATO单独作用组（P <0.05）。相反,5~20 μmol/L ATO与0.25 μmol/L Rap联用时,HepG2细胞的存活率比ATO单独作用时显著增加（P <0.05）,凋亡率降低（P <0.05）,细胞内出现大量自噬体结构,自噬蛋白LC3和Beclin1的表达较ATO单独作用组有增加趋势,但差异无统计学意义（P >0.05）。结论 特异性自噬抑制剂能显著增强ATO杀伤肝癌细胞的敏感性,其机制与增强肝癌细胞凋亡有关。     

糖尿病肾病足细胞损伤机制及中药干预研究进展

糖尿病肾病是糖尿病常见并发症,发病率逐年上升。作为肾小球滤过屏障的组成部分,足细胞在糖尿病肾病的发生发展过程中起着重要作用。文章从足细胞的结构功能、损伤表现出发,探讨糖尿病肾病状态下足细胞损伤的机制,并总结近年来中药在干预糖尿病肾病足细胞损伤中发挥的作用。     

健脾滋肾方抑制系统性红斑狼疮患者的足细胞自噬：基于网络药理学和临床研究

目的 基于网络药理学结合分子对接,通过临床验证,探讨健脾滋肾方从足细胞自噬途径治疗系统性红斑狼疮（SLE）潜在机制。方法 运用TCMSP、GeneCards、OMIM及TTD数据库获取健脾滋肾方及SLE、足细胞自噬相关靶点;取三者交集得到健脾滋肾方经足细胞自噬途径治疗SLE的潜在作用靶点。Cytoscape3.9.1构建“复方-成分-疾病-潜在靶点”网络及蛋白质互作网络,筛选出关键活性成分和靶点,进行分子对接。并临床纳入46例SLE患者和10例健康人,将SLE患者随机分为观察组（n=22）和对照组（n=21）。对照组口服醋酸泼尼松及吗替麦考酚酯,观察组在其基础上加用健脾滋肾方,疗程均为12周。运用ELISA检测SLE组及健康人群尿液中nephrin、synaptopodin水平;使用Western blot检测外周血内p-JAK1/JAK1、pSTAT1/STAT1、LC3II/LC3I、p62蛋白水平,并观察经健脾滋肾方干预后对SLE患者足细胞相关蛋白（nephrin、synaptopodin）、自噬水平（LC3II/LC3I、p62）及p-JAK1/JAK1、p-STAT1/STA...     

细胞自噬在多柔比星诱导淋巴瘤细胞凋亡中的作用

目的 研究细胞自噬在阿霉素诱导Raji细胞发生细胞凋亡过程中所起的作用。 方法 采用Western Blot法观察阿霉素杀伤Raji细胞过程中自噬相关蛋白的表达,并用MDC染色法观察Raji细胞内的自噬体和自噬溶酶体的形成情况;并在给予阿霉素的同时使用PI3K通路抑制剂3-MA和自噬溶酶体抑制剂NH4Cl对细胞自噬进行抑制后利用MTT和流式细胞术测定Raji细胞的细胞活力与凋亡。 结果 阿霉素能诱导Raji细胞发生细胞自噬,并且通过抑制自噬能显著地增强阿霉素诱导的Raji细胞的细胞凋亡（p<0.05, p<0.01）从而增加阿霉素的疗效。 结论 在阿霉素杀伤Raji细胞的过程中,阿霉素诱导的细胞自噬能减弱阿霉素诱导的细胞凋亡作用;并且自噬抑制剂3-MA和NH4Cl抑制细胞自噬能增强阿霉素诱导的Raji细胞的细胞作用,增强对Raji细胞的杀伤,并提示抑制自噬可能能增强阿霉素对淋巴瘤的杀伤。     

tRF-011690对阿霉素诱导的足细胞自噬的影响

目的：探究tRNA衍生片段-011690(tRNA-derived fragment-011690,tRF-011690)在阿霉素（adriamycin,ADR）诱导的足细胞自噬中的作用及机制。方法：用ADR(1μg/mL)和tRF-011690 mimic干预足细胞,分为Control组、ADR组、ADR+tRF-011690 mimic组和ADR+tRF-011690 NC组;RT-qPCR法检测各组tRF-011690、LC3和p62的mRNA表达水平;Western blot法测定各组LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的表达量。用ADR(1μg/mL)和雷帕霉素（Rapamycin）200 ng/mL干预足细胞,分为Control组、ADR组、ADR+Rapamycin组和Rapamycin组;RT-qPCR法检测各组tRF-011690表达水平,Western blot检测各组p-mTOR、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白相对表达量。结果：同Control组相比,ADR组足细胞中tRF-011690表达水平下降,LC3和p62 mRNA表达水平升高,LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白表达量显著增加（P ...