以OATP1B1/OATP1B3转运体为作用靶点的何首乌肝毒性成分筛选

目的 建立以有机阴离子转运多肽1B1（OATP1B1）和OATP1B3为作用靶点的何首乌肝毒性成分快速筛选方法。方法 使用Discovery Studio 2.5软件将何首乌主要单体成分（48个）与OATP1B1/OATP1B3蛋白进行分子对接,以OATP1B1和OATP1B3主要转运底物胆红素作为阳性对照,对目标化合物进行虚拟筛选;采用CCK-8法考察芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷（AEG）、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷（EG）、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷（PG）、2,3,5,4''-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（TSG）处理24 h后对人源肝永生化肝细胞HepaRG的毒性强弱,并采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）技术测定4种化合物对HepaRG细胞的OATP1B1和OATP1B3 mRNA表达量的影响。结果 与OATP1B1对接结果显示,polygonumnolide B3、cis-emodin-physcionbianthrones、polygonumnolide B2、大黄素甲醚-8-β-D-（6''-O-乙酰基）-葡萄糖苷、trans-emodin-physcionbianthrones、大黄素-3-甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、polygonumnolide B4、大黄酚-8-O-葡萄糖苷、EG、大黄素-1-O-β-D-葡萄糖苷、AEG、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-葡萄糖苷高于胆红素打分值的80%,可被初步认定为潜在毒性成分;与OATP1B3对接结果显示,trans-emodin-physcionbianthrones、PG、polygonumnolide A4及虎杖苷高于胆红素打分值的80%,可被初步认定为潜在毒性成分。CCK-8实验进一步证实AEG、EG及PG均具肝细胞毒性作用,半数抑制浓度分别为16.10、49.43、69.44 μg·mL^-1,与分子对接结果一致。与对照组比较,AEG、EG均可显著下调OATP1B1的mRNA表达水平（P<0.05）;PG可显著下调OATP1B3的mRNA表达水平（P<0.05）。结论 以OATP1B1/OATP1B3分子对接技术为切入点,可有效预测何首乌潜在肝毒性成分,实现快速高效的高通量筛选,为中药安全性评价提供新思路。     

基于毒理学软件和细菌回复突变试验的大黄素型蒽醌基因突变风险评价

目的 使用毒理学软件和细菌回复突变（Ames）试验评价大黄素型蒽醌类化合物的致突变风险，分析不同取代基及所在位置对大黄素型蒽醌致突变风险的影响。方法 使用Toxtree、Derek Nexus和Sarah Nexus毒性预测软件对大黄素、羟基大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酸、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-1-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷的致突变风险进行预测，并使用鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535和TA1537及大肠杆菌WP2 uvrA开展基于6孔板的Ames试验，评价10种大黄素型蒽醌的致突变性。结果 基于蒽醌母核结构，Toxtree、Derek Nexus和Sarah Nexus毒性预测软件提示所有大黄素型蒽醌均存在致突变风险。在非S9代谢活化状态下，芦荟大黄素导致TA98和WP2 uvrA Ames菌落数增加，大黄酚、大黄酸导致WP2 uvrA Ames菌落数增加。在大鼠肝S9代谢活化状态下，大黄素和大黄酸导致TA98和TA1537 Ames菌落数增加，羟基大黄素导致TA97、TA98、TA1537和WP2 uvrA Ames菌落数增加，芦荟大黄素导致TA98、TA1537和WP2 uvrA Ames菌落数增加，大黄素甲醚导致TA1537 Ames菌落数增加，大黄酚导致TA1537和WP2 uvrA回复菌落突变数增加，大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷可引起TA1537回复突变菌落数增加。结论 大黄素型蒽醌类化合物在大黄素母核的基础引入羟基后其诱变能力显著升高，较大葡萄糖苷基团的引入反而使受试物诱变能力降低。     

炆何首乌饮片中蒽醌糖苷类成分变化与减毒效应

目的 揭示炆法炮制特点,并从蒽醌糖苷类成分的变化探讨炆何首乌饮片的减毒效果。方法 采用HPLC进行何首乌药材、炆何首乌饮片、制何首乌饮片的指纹图谱及含量测定研究,并通过SPSS 19.0软件对含量测定结果进行聚类分析;同时采用LC-MS分析何首乌炆制前后化学成分的变化情况。结果 首次发现何首乌经过炆制会出现大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、决明酮-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-丙二酰-吡喃葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷4个蒽醌糖苷类成分的显著性消失。结合制何首乌实验数据,推测由于制何首乌炮制时间较短,结合蒽醌只是部分水解成游离蒽醌,但炆制时间过长,使得蒽醌糖苷类成分糖苷键断裂,因此结合蒽醌与总蒽醌的比值从89.4%减少到51.9%,存在化学成分显著性变化。结论 何首乌经炆制,使得结合蒽醌水解为游离蒽醌,从而使毒性更低。     

基于UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1抑制探讨二蒽酮的潜在肝毒性

目的 基于胆红素代谢酶UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1（UGT1A1）靶点评价何首乌中二蒽酮类成分的潜在肝毒性。方法 采用Discovery Studio 2.5软件的From Receptor Cavities模块对UGT1A1酶蛋白空腔进行自动识别，将反式-大黄素-大黄素二蒽酮（trans-EMD）、顺式-大黄素-大黄素二蒽酮（cis-EMD）与UGT1A1酶蛋白进行对接，确定待测单体与酶蛋白的作用方式以及连接的紧密程度；应用大鼠肝微粒体孵育体系，加入底物胆红素对照品溶液，评价trans-EMD、cis-EMD（0.037、0.110、0.330、0.990、2.970 μg·mL^-1）对UGT1A1酶的作用，同时启动Ⅰ、Ⅱ相代谢，以表观抑制常数（K_i）为评价指标；CCK-8法检测trans-EMD、cis-EMD（0.04、0.10、0.30、1.00、3.00 μg·mL^-1）作用24 h对HepaRG细胞的毒性作用；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验检测trans-EMD、cis-EMD（0.04、0.30、3.00 μg·mL^-1）作用24 h对HepaRG细胞UGT1A1 mRNA水平的影响。结果 分子对接实验显示trans-EMD、cis-EMD可与UGT1A1结合于site F，2个化合物10或10''位不同氢键构型可引起化合物空间构型的改变，影响其与UGT1A1的结合强弱；体外酶抑制实验表明trans-EMD、cis-EMD对UGT1A1酶均表现出竞争型抑制作用，抑制作用较强；细胞毒性实验表明trans-EMD（IC₅₀为1.333 μg·mL^-1）和cis-EMD（IC₅₀为1.715 μg·mL^-1）均表现出较明显的HepaRG细胞毒性，IC₅₀值较小；与对照组比较，trans-EMD和cis-EMD 0.30、3.00 μg·mL^-1均可显著下调UGT1A1 mRNA表达水平（P＜0.05），且作用存在浓度相关性。结论 具有大黄素（10→10''）大黄素或大黄素（10→10''）大黄素母核结构的二蒽酮化合物是一类具有潜在肝毒性的化合物，其毒性作用可能与抑制胆红素代谢酶UGT1A1相关。     

基于网络药理学与分子对接技术探讨大黄肝毒性的作用机制

目的 利用网络药理学和分子对接技术探讨大黄肝毒性的分子作用机制。方法 在TCMSP检索大黄活性成分及文献获取潜在肝毒性成分，利用Swiss Target Prediction数据库获取成分靶点，通过GeneCards和OMIM数据库获取人类肝毒性相关靶点。利用STRING数据库将Venn图获得成分与疾病共同靶标进行（PPI）网络分析，用Cytoscape软件构建“大黄成分–肝毒性作用靶点”网络，并且利用DAVID数据库进行基因本体（GO）功能富集和京都基因与基因组百科全书（KEGG）（KEGG）通路富集。将部分肝毒性核心成分和关键靶点进行分子对接。结果 共获取大黄潜在肝毒性成分21种，对应靶点724个，人类肝毒性相关靶点957个，大黄与肝毒性的共同靶点151个，核心成分可能是大黄酸、大黄酚、β-谷甾醇、大黄素-1-O-β-D-葡萄糖硫苷、大黄素甲醚二葡萄糖苷、芦荟大黄素等，关键靶点可能是白蛋白（ALB）、蛋白激酶B1（Akt1）、肿瘤蛋白p53（TP53）等。KEGG通路显示癌症通路、前列腺癌通路等可能在大黄肝毒性中起关键作用。分子对接结果表明，大黄肝毒性核心成分与关键靶点对接良好。结论 大黄通过多成分、多靶点、多通路机制导致肝毒性作用。     

基于体外Pig-a基因突变试验的大黄素型蒽醌致突变风险评价

目的 对相同母核结构的8种大黄素型蒽醌类化合物开展体外Pig-a基因突变试验，分析不同大黄素型蒽醌结构与致突变性的关联。方法 L1578Y细胞分别与系列浓度的大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酸、羟基大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷作用4 h（有S9）或24 h（无S9），给药24 h后应用细胞计数板进行计数，计算细胞相对倍增速率（RPD）评价受试物细胞毒性；细胞表达8 d后经APC-anti-CD45和PE-anti-CD90.2标定后，使用流式细胞仪检测突变细胞（CD45^＋CD90^－）发生率。结果 所有受试物在有或无S9代谢活化条件下所设浓度组RPD均大于50%，未见明显细胞毒性作用，可排除试验中假阳性结果。在非S9代谢活化条件下芦荟大黄素25 μg·mL^-1组Pig-a基因突变率与溶媒对照组比较显著升高（P<0.001）； S9代谢活化条件下，与溶剂对照组比较，大黄素50 μg·mL^-1组，羟基大黄素6.25、12.5、25 μg·mL^-1组，大黄酚25、50、100 μg·mL^-1组和大黄酸12.5、25、50 μg·mL^-1组Pig-a基因突变率显著升高（P<0.05、0.01、0.001）。结论 羟基取代基的多寡及所在位点是蒽醌类化合物致突变性强弱的决定性因素，其体内致突变性及致癌性作用仍需进行大量体内研究证实。     

HPLC法测定通乐颗粒中2, 3, 5, 4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷

目的 建立测定通乐颗粒中2, 3, 5, 4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的方法。方法 采用HPLC法,色谱柱为Phenomenex C₁₈柱,检测波长为320 nm,流动相为乙腈-水（20∶80）,体积流量为1.0 mL/min。结果 2, 3, 5, 4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在10～100 μg/mL与峰面积呈良好线性关系（r＝0.999 7）,平均回收率为99.74%。结论 本方法准确、简便、重复性好,可用于通乐颗粒中2, 3, 5, 4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。     

制首乌中两个新化合物

目的：研究制首乌(Radix Polygoni multiflori Preparata)化学成分。方法：应用硅胶、Sephadex、反相硅胶柱色谱对制首乌正丁醇萃取部分中化学成分进行分离纯化,应用理化常数测定和光谱(IR,MS,¹HNMR,¹³CNMR,2D-NMR)分析技术鉴定结构。结果：分离并鉴定了5个单体化合物：大黄素甲醚-8-O-β-D-葡糖苷(Ⅰ)、大黄素-8-O-β-D-葡糖苷(Ⅱ)、决明蒽酮-8-O-β-D-葡糖苷(Ⅲ)、6-甲氧基-2-乙酰基-3-甲基-1,4-萘醌-8-O-β-D-葡糖苷(Ⅳ)、2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-(2″-O-乙酰基)-β-D-葡糖苷(Ⅴ)。结论：Ⅳ和Ⅴ为新化合物。     

HPLC测定安尔眠胶囊中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷

目的 建立安尔眠胶囊中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（C₂₀H₂₂0₉）的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱（HPLC）法,以Dionex Acclaim 120^® C₁₈色谱柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）为分离柱,以乙腈-1%甲酸溶液（23：77）为流动相,体积流量1.0 mL/min,检测波长320 nm,柱温25 ℃。结果 2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.010～0.200 μg呈现良好的线性关系（r=0.999 6）,平均回收率为97.35%,RSD为2.07%。结论 该方法<准确可靠,适用于安尔眠胶囊中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。     

知母皂甙E1和E2

应用硅胶柱色谱、高效液相色谱等分离手段,从中药知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)分离得到2种新的呋甾皂甙,经光谱(IR,ESI MS,¹HNMR,¹³HNMR)分析和化学反应,鉴定其结构分别是:(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5-β-呋甾-3β,15α,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙(1),(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-5β-呋甾-3β,15α,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙(2)。(1)是新化合物,命名为知母皂甙E1;(2)是(1)的甲醚化人工产物,命名为知母皂甙E2。对知母皂甙-I(A)的结构分析作了简单说明。     

藤梨根化学成分的研究

A number of constituents were isolated from the root of Actinidia chinensis Planch. Seven of them were indentified as physcion (emodin-6-methyl ether) (T₁), emodin (frangala-emodin) (T₂), emodin-8-β-D-glucoside (T₃), questin (emodin-8-methyl ether) (T₅), citreorosein (ω-hydroxyemodin) (T₆), emodic acid (T₇) and β-sitosterol (T₄).Comparison of the ¹HNMR data of emodin (T₂) and its 8-glucoside (T₃) shows that the aromatic proton experiences a downfield shift of about 0.5 ppm upon glycosidation of an ortho phenolic group, a fact which can be used to advantage for the allocation of the glycosidic linkage.     

银杏叶中的黄酮醇苷类成分

目的　对银杏（Ginkgo biloba L.）叶的化学成分进行分离、鉴定。方法　采用各种色谱技术进行分离,用IR,UV,MS,¹HNMR,¹³CNMR和2DNMR光谱技术确定化合物的结构。结果　分得8个黄酮醇苷类成分：槲皮素-3-O-β-D-葡糖苷（1）,山奈酚-3-O-β-D-葡糖苷（2）,芦丁（3）,山奈酚-3-O-β-D-芸香糖苷（4）,异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷（5）,槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷（6）,山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷（7）,异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷（8）。结论　化合物8为新化合物。     

何首乌乙酸乙酯不溶部分化学成分的研究

从四川何首乌(polygonu mnultiflorum Thunb)块根乙醇提取物的乙酸乙酯不溶部分分离得到五个单体,经理化常数测定,光谱(IR,UV,FAB-MS,¹HNMR,¹³CNMR,¹H-¹³CCOSY和NOE差谱)分析及衍生物制备,确定了两个化合物的结构为新化合物。化合物Ⅰ1,3-二羟基-6,7-二甲基酮-1-O-β-D-葡萄糖甙,命名为何首乌乙素,化合物Ⅱ为2,3,5,4′-四羟基-二苯乙烯-2,3-二-O-β-D葡萄糖甙,命名为何首乌丙素。其余三个结晶因量少有待进一步分离、鉴定。     

基于指纹图谱、多指标定量及网络药理学的大黄质量标志物预测分析

目的 建立大黄HPLC指纹图谱及多指标定量分析方法,结合网络药理学预测大黄潜在质量标志物。方法 采用HPLC对20批掌叶大黄样品中的没食子酸、儿茶素、表儿茶素等13种指标性成分进行含量测定,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行相似度分析,以13种指标成分含量进行主成分分析、正交偏最小二乘判别分析,采用网络药理学预测大黄相关成分的作用靶点和通路,构建成分-靶点-通路网络图并对核心靶点进行器官定位分析以预测大黄的潜在质量标志物。结果 指纹图谱相似度在0.882～0.998,共确定了15个共有峰,大黄素甲醚、儿茶素、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷是差异化合物,可用于鉴别和区分大黄质量。经筛选得到15个化合物,8个核心靶点,包括AKT1、TP53、JUN、HSP90AA1、CASP3、EGF、TNF、IL-6,涉及对氧化应激的反应、对脂多糖的反应、内肽酶活性,涉及脂质和动脉硬化、MAPK信号传导途径、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、非酒精性脂肪性肝病等通路,并构建成分-靶点-通路图,预测没食子酸、儿茶素、芦荟大黄素、大黄酸...     

In vitro metabolism of eupatilin by multiple cytochrome P450 and UDP-glucuronosyltransferase enzymes

Eupatilin, a pharmacologically active flavone derived from Artemisia plants, is extensively metabolized to eupatilin glucuronide, 4-O-desmethyleupatilin and 4-O-desmethyleupatilin glucuronide in human liver microsomes. This study characterized the human liver cytochrome P450 (CYP) and UDP-glucuronosyltransferase (UGT) enzymes responsible for the metabolism of eupatilin. The specific CYPs responsible for O-demethylation of eupatilin to the major metabolite, 4-O-desmethyleupatilin were identified using a combination of correlation analysis, immuno-inhibition, chemical inhibition in human liver microsomes and metabolism by human cDNA-expressed CYP enzymes. UGT enzymes involved in the eupatilin glucuronidation were identified using pooled human liver microsomes and human cDNA-expressed UGT enzymes. Eupatilin was predominantly metabolized by CYP1A2 and, to a lesser extent, CYP2C8 mediated O-demethylation of eupatilin to 4-O-desmethyleupatilin. Eupatilin glucuronidation was catalysed by UGT1A1, UGT1A3, UGT1A7, UGT1A8, UGT1A9, and UGT1A10.     

Anticomplementary activity of stilbenes from medicinal plants

The anticomplementary activity of stilbenes from medicinal plants in Korea was investigatedin vitro. 3,5-Dihydroxy-4′-methoxystilbene (3) was most potent with IC₅₀ value of 1.5×10⁻⁴ M followed by rhapontigenin (4), oxyresverastrol (2), 2,3,4′,5-tetrahydroxystilbene-2-O-β-glucoside (9), rhaponticin (8), resverastrol (1), and piceid (7). The activity was found to be increased by a methylation on a hydroxy group of C-4′ of1, but decreased by further methylation on hydroxy groups of C-3 and C-5 and glucosylation on any hydroxy group of1. Addition of hydroxy group on C-2′ of1 or C-3′ of3 was little affected on the anticomplementary activity but the activity was increased byO-glucosylation on C-2 of1.     

Two new anthraquinone glycosides from the roots of Rheum palmatum

Two new anthraquinone glycosides, named 1-methyl-8-hydroxyl-9,10-anthraquinone-3-O-β-d-(6′-O-cinnamoyl)glucopyranoside (1) and rhein-8-O-β-d-[6′-O-(3″-methoxyl malonyl)]glucopyranoside (2), have been isolated from the roots of Rheum palmatum, together with seven known compounds, rhein-8-O-β-d-glucopyranoside (3), physcion-8-O-β-d-glucopyranoside (4), chrysophanol-8-O-β-d-glucopyranoside (5), aleo-emodin-8-O-β-d-glucopyranoside (6), emodin-8-O-β-d-glucopyranoside (7), aleo-emodin-ω-O-β-d-glucopyranoside (8), and emodin-1-O-β-d-glucopyranoside (9). Their structures were elucidated on the basis of chemical and spectral analysis.     

基于网络药理学和分子对接技术分析川楝子致肝毒性机制

目的 通过网络药理学及分子对接技术探究川楝子肝毒性机制。方法 通过TCMSP、PubChem、SwissADME数据库及文献检索筛选川楝子的潜在毒性成分,利用SwissTargetPrediction数据库预测潜在毒性成分的作用靶点,再通过GeneCards数据库搜索与肝脏损伤相关的靶点,将毒性成分预测靶点与肝脏损伤靶点取交集靶点,获得毒性成分肝脏潜在作用靶点,再利用软件Cytoscape 3.8.2版进行毒性成分–预测靶点、毒性成分–潜在作用靶点、蛋白相互作用（PPI）网络、毒性成分–潜在作用靶点–核心通路网络的构建,采用AutoDock 1.5.6版进行分子对接,并应用PyMOL软件对对接结果进行可视化示例。结果 筛选得到6个川楝子潜在毒性化合物,分别是toosandanin、meliasenin B、trichilinin D、1-O-tigloy-1-O-debenzoylohchinal、butenolide、5-hydxoymethylfurfural,与肝脏损伤共同作用靶点103个。GO和KEGG结果显示,川楝子通过蛋白质磷酸化、凋亡过程的负调控、对异种生物刺激的反应、酶激活的正向调控等过程引起肝脏毒性。分子对接结果显示,川楝子中toosandanin、trichilinin D、1-O-tigloy-1-O-debenzoylohchinal与关键靶点具有较好的结合能力。结论 应用网络药理学及分子对接技术对川楝子致肝毒成分、机制、靶点、通路进行了初步探索,为进一步对川楝子的临床应用研究和效应机制提供数据支持。     

Two new phenolic glycosides from Inula cappa

Two new phenolic glycosides, syringic acid-4-O-α-L-rhamnoside (1) and ( ? )-hydnocarpin-7-O-β-D-glucoside (2), were isolated from the traditional Chinese medicinal herb Inula cappa. The structures of the new compounds were elucidated by means of spectroscopic methods such as 1D, 2D NMR, and HR-ESI-MS.