茅苍术中苍术酮、茅术醇、β-桉叶醇和苍术素的同时含量测定及其聚类分析

目的:建立气相色谱法同时测定茅苍术药材中苍术酮、茅术醇、β-桉叶醇和苍术素的含量,根据含量水平对茅苍术药材进行聚类分析。方法:HP-1弹性石英毛细管色谱柱(0.25 mm×30 m,0.25μm);氢火焰离子化检测器(FID);载气氮气;起始温度145℃,保持25 min,以10℃.min-1升温至250℃,保持10 min;进样方式为分流进样,分流比为40∶1;进样量为2μL;采用SPSS 13.0统计软件进行聚类分析。结果:苍术酮、茅术醇、β-桉叶醇和苍术素进样浓度分别在0.012~2.32(r=0.999 8),0.008~1.68(r=0.999 8),0.008~1.76(r=0.999 9),0.016~3.20 g.L-1(r=0.999 7)呈良好线性关系;平均回收率(n=3)分别为98.0%~99.0%,97.7%~99.4%,98.4%~99.2%,97.8%~99.7%;所分析的茅苍术药材大致划分为两类。结论:该方法准确、简便,具有良好的重复性和稳定性,可用于茅苍术药材中苍术酮、茅术醇、β-桉叶醇和苍术素含量的同时测定;道地产区茅苍术与其它非道地产区茅苍术4种活性成分含量的差异较大。     

不同采收期和干燥方法对茅苍术药材品质的影响研究

目的 对茅苍术不同采收期和干燥方法所得产品的有效成分含量与性状进行比较和分析.方法 称重法测定干燥失重率;采用高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱法(GC)分别对不同采收期所得茅苍术和茅苍术不同干燥产品中苍术素和β-桉叶醇进行分析鉴定;用外标法计算各成分的相对百分含量.结果 干燥方法研究中苍术素和β-桉叶醇都以45℃烘...     

肥料配施对北苍术3种倍半萜类成分及2种生物合成关键酶基因表达的影响

目的 探讨不同肥料配施对北苍术Atractylodes chinensis (DC.) Koidz. 3种倍半萜成分苍术酮、白术内酯II和β-桉叶醇含量及2种生物合成关键酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（3-hydroxy-3-methylglutarate monoacylase A reductase,HMGR）和法呢基焦磷酸合酶基因（farnesylpyrophosphatesynthase,FPPS）活性及基因表达的影响。方法 在不同的肥料配施下,采用高效液相色谱法测定北苍术3种倍半萜类成分的含量,采用试剂盒法（双抗体夹心法）测定北苍术根茎中HMGR和FPPS的活性;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定北苍术HMGR和FPPS的表达量;采用SPSS软件对生物合成关键酶活性和基因表达量进行相关性分析。结果 适宜的氮磷钾配施,可促进北苍术倍半萜类成分的积累,并显著提高其生物合成关键酶活性及基因表达。该试验区所代表的土壤肥力状况下有利于倍半萜类成分积累的最优施肥方案为氮肥（N）180kg/hm2,磷肥（P2O5）225kg/hm2,钾肥（K2O）105kg/hm2...     

强光胁迫对茅苍术生长、生理生化及关键酶基因表达的影响

目的:探究不同梯度的强光胁迫对茅苍术生长、生理生化及关键酶基因表达的影响,为规范化栽培茅苍术提供科学依据。方法:以两年生茅苍术种苗为实验材料,杨树林下(透光率18.26%~36.04%)作为对照组(ck),采用不同密度的遮荫网于7月下旬模拟不同程度(51.10%,80.73%,100%)的强光进行胁迫。观察茅苍术生长状态,于第0,5,10,15,20天测定茅苍术叶片的生理生化指标丙二醛(MDA)含量、细胞膜透性、脯氨酸(Pro)含量、抗氧化酶活性及叶绿素含量。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术测定强光胁迫后茅苍术叶片中3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A,HMGR)和法呢基焦磷酸合酶基因(farnesyl pyrophosphate synthase,FPPS)的相对表达量。结果:经过强光胁迫后,茅苍术叶片颜色由深绿色变为浅绿、黄绿色,叶片灼伤越来越严重;MDA含量、电导率及Pro含量随光强的增加总体呈上升趋势;过氧化物酶(POD),超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)均呈先升高再降低的趋势;叶绿素含量随光强的增加呈下降趋势;茅苍术叶片中HMGR相对表达量随光强的增加呈下降趋势而FPPS表达量呈先升后降的趋势。结论:实验结果表明在一定的强光胁迫下,茅苍术可通过提高抗氧化酶活性及调节渗透压物质含量以缓解强光胁迫的抑制作用;过高的强光胁迫则会导致茅苍术代谢机制失调,严重抑制植株生长。     

HPLC测定道地产地和主产地茅苍术中β-桉叶醇及其他成分的含量

目的:通过测定道地产地和主产地茅苍术中有效成分及其他成分的含量,综合评价茅苍术的药材品质。方法:采用HPLC对不同产地的茅苍术中的β-桉叶醇、苍术素、苍术素醇和苍术内酯Ⅱ进行含量测定。结果:不同产地的茅苍术中成分的含量差异显著,各地的茅苍术药材质量存在较大差异。β-桉叶醇和苍术素醇含量最高的是湖北英山的野生品;苍术素和苍术内酯Ⅱ含量最高的产地是江苏茅山。结论:综合考虑茅苍术中苍术素、β-桉叶醇、苍术素醇和苍术内酯Ⅱ主产地的茅苍术的质量要比道地产地茅苍术的质量优,该结果为茅苍术的产业化发展提供依据。     

RP-HPLC测定茅苍术中β-桉叶醇的含量

目的:采用RP-HPLC测定茅苍术中β-桉叶醇的含量,为茅苍术质量标准研究提供依据.方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Inertsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相乙腈-水(68:32);流速1.0 mL·min-1;检测波长200 nm;柱温为25 ℃.结果:测得10批茅苍术药材中β-桉叶醇含量为0.833～4.466 mg·g-1,β-桉叶醇为0.048～1.200 μg,r=0.999 9,平均回收率99.3%,RSD 1.4%(n=9).结论:建立了高效液相色谱法测定茅苍术中β-桉叶醇含量的方法,该方法准确,可靠,可用于茅苍术药材的测定.     

北苍术苍术素、苍术酮、β-桉叶醇测定及特征图谱研究

目的研究北苍术药材中苍术素、苍术酮和β-桉叶醇的GC测定及特征图谱研究方法,为科学评价其质量提供依据。方法采用GC色谱法,以Agilent HP-5毛细管色谱柱,载气为氮气,FID检测器,程序升温,分流进样,进样口温度250℃,检测器温度250℃,柱温130℃;外标法,测定承德与其他市场采购的25批北苍术样品中苍术素、苍术酮和β-桉叶醇的量;建立特征图谱并利用中药色谱指纹图谱评价系统进行相似度分析。结果建立了北苍术药材苍术素、苍术酮和β-桉叶醇量测定和GC特征图谱研究方法,指认了9个特征峰;β-桉叶醇线性范围20.00~406.10μg/m L(r=0.999 9),平均加样回收率为100.75%,RSD为1.17%,最低检测限0.12 ng;苍术酮线性范围35.00~348.70μg/m L(r=0.999 5),平均加样回收率为99.84%,RSD为1.29%,最低检测限0.04 ng;苍术素线性范围在16.46~329.30μg/m L(r=0.999 6),平均加样回收率为100.12%,RSD为0.88%,最低检测限0.06 ng。结论建立的苍术素、苍术酮、β-桉叶醇定量测定和特征图谱方法简便、灵敏、稳定性和重复性良好,测定结果准确可靠。     

麸炒对茅苍术中三种聚乙烯炔类成分含量的影响

目的建立同时测定茅苍术中三种聚乙烯炔类成分的方法,考察麸炒对三种成分含量的影响。方法采用高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)检测茅苍术麸炒前后三种聚乙烯炔类成分苍术素、苍术素醇及(4E,6E,12E)-十四癸三烯-8,10-二炔-1,3-二乙酸酯的含量,Agilent TC-C18(4.6mm×250 mm,5μm)色谱柱,检测波长340 nm。结果茅苍术经麸炒后,三种聚乙烯炔类成分均发生量的改变,其中苍术素醇和苍术素的含量减少,而(4E,6E,12E)-十四癸三烯-8,10-二炔-1,3-二乙酸酯的含量增加。结论该方法操作简单,重复性好。麸炒对茅苍术中三种聚乙烯炔类成分的含量均有一定的影响。     

内生真菌诱导子对茅苍术细胞生长及苍术素积累的影响

目的:研究内生真菌诱导子对茅苍术细胞生长以及苍术素积累的影响.方法:采用细胞悬浮培养方法研究内生真菌诱导子不同浓度、不同加入时间对茅苍术细胞生长、苍术素合成以及相关酶活性的影响.结果:低浓度诱导子对细胞生长没有明显的影响,但高浓度诱导子显著抑制细胞生长,当诱导子质量浓度达到100 mg·L-1时,细胞生长抑制率达到46.7%;此外,从茅苍术内生真菌中筛选获得6株具有较强诱导作用的内生真菌,其中Rhizoctonia SP1诱导子的作用较强,20～60 mg·L-1 Rhizoctonia SP1诱导子显著促进苍术素的生物合成.在细胞培养至12 d时,添加40 mg·L-1 Rhizoctonia SP1诱导子,苍术素的含量在第21天达到最大值28.06μg·L-1,比对照提高了48.3%;且细胞多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性出现了显著提高.结论:内生真菌诱导子能有效提高茅苍术细胞悬浮培养体系中苍术素的产量.     

不同光质对茅苍术生长、抗氧化酶活性及挥发油含量的影响

目的:基于茅苍术在林下栽培优于露地栽培,开展不同光照试验,研究不同光质对茅苍术生长发育及挥发油成分含量的影响。方法:分别设置CK(空白组),红光,蓝光,红光-蓝光(9∶1)[简称红蓝(9∶1)],红蓝(6∶1),红蓝(3∶1)共6个不同光质组,生长9个月后采样分析。结果:红蓝(9∶1)光照条件下茅苍术的生物量(23.18 g)及4种挥发油成分(苍术素、苍术酮、苍术醇和β-桉叶醇)总量(3.74%)最高;其次是红蓝(6∶1)组,生物量18.32 g,4种成分总量2.97%。红蓝(9∶1)光照条件下净光合速率、蒸腾速率、气孔导度和胞间CO_2浓度等光合参数均高于其他处理组,且大部分具有显著性差异。不同光质处理组下超氧化物歧化酶、过氧化物酶、还原型谷胱甘肽、还原型抗坏血酸和过氧化氢酶等抗氧化酶活性均高于空白组,且大部分具有显著性差异;红蓝(9∶1)光照下丙二醛含量显著低于空白组。结论:综合各项指标结果发现,红蓝(9∶1)光照条件最适合茅苍术的生长发育,为茅苍术产量及质量的提升提供新的种植模式。     

苍术化学成分和药理的研究进展

苍术中的化学成分主要有倍半萜及其苷类、烯炔类、三萜和甾体类、芳香苷类、苍术醇类等,药理活性研究表明苍术具有抑制胃酸分泌、促进肠胃运动及胃排空、降血糖、抗菌抗炎、心血管保护和神经系统作用等。该文对苍术的化学成分和药理活性进行了综述,以期为苍术的深入研究和开发利用提供依据。     

干旱胁迫下苍术幼苗生理特性变化研究

目的：探讨干旱胁迫下苍术幼苗的生理适应性变化。方法：采用聚乙二醇(PEG-6000)模拟干旱胁迫处理苍术Atractylodes lancea幼苗，检测幼苗体内丙二醛(MDA)含量、可溶性蛋白含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性的动态变化。结果：15%和25%PEG胁迫下，苍术幼苗体内MDA含量随胁迫时间的延长显著增加，且高浓度胁迫下增加幅度较大；可溶性蛋白含量分别于胁迫后3 d和1 d显著提高；SOD，POD，CAT，APX活性表现出先升高后降低的变化趋势，且高浓度变化幅度较大，POD，APX均于胁迫后3 d达到峰值，SOD，CAT活性高峰期根据浓度大小而不一致。结论：干旱胁迫下苍术幼苗可通过提高可溶性蛋白含量来降低水势以适应干旱胁迫；增强抗氧化酶活性，使之相互协调以提高抗氧化能力从而减轻干旱胁迫伤害。     

泡囊丛枝菌根(AM)对苍术生长发育及挥发油成分的影响

目的:观察泡囊丛枝菌根(AM)对苍术生长发育及挥发油组分的影响,以及产生该影响的土壤环境变化。方法:通过含5个重复的盆栽对照实验,比较施加AM真菌Glomus m osseae(GM)后,苍术生物量、挥发油成分及根际区土壤养分、有机质及微生物群落功能多样性的变化。结果:①苍术对AM依赖性达到245%。t检验表明,VA组苍术的株高、叶片数、叶面积、生物量都显著高于对照组(P<0.05);②根茎挥发油的GC-MS分析,结合聚类分析和主成分分析表明,AM组与CK组苍术挥发油中归一化百分含量相对较大的主要组分基本没有差别;③土壤养分检测表明,AM组根际土全氮、碱解氮、有效磷及有效钾的含量均低于CK组;④GC-MS分析发现,AM组和CK组土壤有机质变化不完全相同,表现为AM组的组分5,6比CK组高,而CK组的组分9~11比AM组高;⑤土壤微生物多样性的B iolog检测发现,AM组的AWCD值在整个温育过程中始终高于CK组,在反应192 h后,AM和CK 2组土壤的AWCD值分别达到0.66和0.46。t检验表明,72 h和168 h时AM组和CK组的微生物shannon及M cIntosh s均匀度基本一致,shannon多样性指数及M cIntosh s多样性指数在72 h差异不明显,而168 h AM组均高于CK组(P<0.05)。结论:接种AM真菌,能促进了苍术根系对土壤养分的吸收,提高苍术根际土壤微生物的功能多样性及代谢活性,影响苍术根际区有机质组成,从而显著促进苍术的营养生长,但在实验期间未造成苍术挥发油质量的变异。     

濒危药用植物茅苍术法呢基焦磷酸合酶基因克隆及其表达分析

目的克隆茅苍术Atractylodes lancea倍半萜类成分生物合成关键酶法呢基焦磷酸合酶(FPPS)基因全长并分析其表达规律。方法以茅苍术总RNA为模板,运用同源克隆法和RACE技术克隆茅苍术FPPS基因(Al FPPS)的c DNA全长,并进行生物信息学分析;用q RT-PCR和GC-MS分析不同生长阶段FPPS在茅苍术根茎中的表达及倍半萜类成分量变化,并分析二者的相关性。结果获得Al FPPS基因全长c DNA为1 320 bp(Gen Bank accession no.KX443242),含一个长1 029 bp的开放阅读框,编码342个氨基酸,包含5个保守功能域,其中2个富含天冬氨酸(DXXDD)。q RT-PCR及GC-MS结果显示不同时期茅苍术Al FPPS基因表达量与倍半萜类成分量呈显著正相关。结论首次克隆获得Al FPPS基因的全长c DNA,初步证明Al FPPS基因是茅苍术倍半萜类成分生物合成途径中的重要调控位点,为茅苍术倍半萜类成分生物合成途径阐明与生物工程应用提供科学依据。     

温度调控对人参皂苷积累及其关键酶基因表达的影响

目的探究温度调控对人参皂苷积累及其合成途径关键酶基因表达量的影响。方法以培养23 d人参愈伤组织为实验材料,置于5、10、15、20、25、30℃6个培养箱中恒温培养,每天取样1次连续取样8 d,测定干、鲜质量和皂苷含量,确定响应敏感温度,以GAPDH为内参基因,real-timePCR检测皂苷合成途径中9个关键酶3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR2)、法尼基焦磷酸合成酶(FPS)、角鲨烯合成酶(SS1)、角鲨烯环氧酶(SE1)、达玛烷二醇合成酶(DS-Ⅱ)、β-香树素合成酶(PNY1)、β-香树素C-28位羟基化酶(CYP716A52v2)、原人参三醇合成酶(CYP716A53v2)、原人参二醇合成酶(CYP716A47)基因表达量。结果 20℃为人参愈伤组织干、鲜质量积累最佳温度,5、10、15℃皂苷含量2～3 d达到最大值,5℃为人参皂苷积累响应敏感温度,与对照组差异显著,人参皂苷Re、Rg1和总皂苷分别为对照组1.93、11.93和1.54倍。HMGR2、SS1、DS-Ⅱ、SE1和CYP716A52v2基因表达量在低温2～4d均达最大值,为对照组2.8、1.6、3....     

茅苍术DXS基因的克隆与分析

目的:克隆茅苍术萜类化合物生物合成关键酶1-脱氧木糖-5-磷酸合酶(DXS)基因,并进行序列特征分析和组织特异性表达分析。方法:根据转录组测序所得的DXS基因片段,克隆出全长c DNA序列。运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),以tublin为内参基因,检测DXS基因在不同组织中的表达量。结果:克隆得到的DXS基因全长c DNA序列为2 151 bp,编码716个氨基酸,并在Gen Bank注册(登录号KY659208)。氨基酸序列系统发育分析表明,该序列与甜叶菊等菊科植物DXS基因有较高的同源性。Real-time PCR法检测发现茅苍术DXS在叶片中表达量最高,其次为花,而在根茎和根中表达很低。结论:获得了茅苍术DXS基因的全长c DNA序列,对其进行了初步生物信息学分析,揭示了其组织差异性表达特征,为进一步阐述该基因在茅苍术萜类成分生物合成途径中的功能奠定了基础。     

不同生境下茅山苍术的种群构件生物量分析

目的：通过生物量结构分析研究茅山苍术的生态环境。方法：通过苍术道地产区茅山的野外实地调查，建立样方，探讨了苍术在茅山的生长状况和生态环境的关系，将苍术的生长环境分成乔木林，灌木林，灌木杂草林和杂草。研究4种生态环境下苍术的株生物量，株高，茎粗，叶片数和盖度。结果：茅山苍术在各项指标的最大值和最小值以及平均值的变化是规律的，均表现为灌木丛中苍术的株生物量，株高，茎粗，叶片数，冠幅最大，灌木杂草林次之，杂草第三，乔木林最差。结论：茅山苍术更趋向于分布于灌木丛和灌木杂草丛中。     

基于地理信息系统的苍术道地药材气候生态特征研究

目的:寻找苍术道地产区生境特征。方法:通过逐步回归分析寻找影响苍术质量的生态主导因子;通过实地调查、文献分析结合气候数据分析明确影响苍术生长发育的生态限制因子;使用IDIRIEIW软件对苍术研究样地30年间生态主导因子和限制因子的均值进行空间插值,提取茅山地区气候因子参数进行空间叠加分析,寻找茅山地区生境特征。结果:研究发现降雨量是影响苍术挥发油含量的重要生态主导因子之一;高温是影响苍术生长发育的生态限制因子之一;苍术道地药材原产地生境特征为年均温高于15℃,冷月平均最低温度为(- 2～- 1)℃,热月平均最高温度在32℃左右,极端低温(- 17～- 15 )℃,旱季约为1～2个月,年降水量约为10 0 0～116 0mm。结论:茅山地区气候具有高温、旱季短、雨量充足的特点;苍术道地药材形成具有逆境效应。     

栽培苍术根际土壤微生物变化

目的：观察苍术栽培中根际土壤微生物数量和群落结构的变化规律。方法：稀释平板法测定一至二年生栽培苍术根际区土壤微生物群落细菌、真菌、放线菌总量；提取苍术根际区土壤微生物DNA,使用E. coli的27 f和1 492 r引物扩增16S rDNA,Hinf内切酶酶切,比较一至二年生栽培苍术根际区土壤微生物群落结构的变化。结果：二年生苍术根际区土壤中细菌、真菌、放线菌普遍低于一年生样品,三者分别下降46.14%,49.25%,31.88%,土壤细菌、真菌及放线菌三者的比例改变；所有一至二年生的8个样品扩增后均得到重复性好且稳定清晰的16S rDNA条带,片段长度约为1 500 bp。Hinf酶切后多数样品在1 000 bp附近均出现主带,其他弱带不完全相同。就多数样品而言,一年生与二年生苍术根际区土壤样品的酶切谱带在年间变异大于年内的变异。结论：多年栽培苍术病虫害的发生,可能与其根际区土壤微生物数量和群落结构的改变有关。