姜黄素改善N2a/APP695swe细胞线粒体功能和抑制细胞凋亡的作用

目的：观察姜黄素（curcumin）对N2a/APP695swe细胞线粒体形态和功能及细胞凋亡的影响;探讨其可能的神经保护机制。方法：实验细胞分为4个组：N2a/APP695组（WT）、N2a/APP695swe组（APP）、溶剂对照组（DMSO,5 μmol/L）、姜黄素组（Curcumin,5 μmol/L）。流式细胞术分别检测细胞凋亡、活性氧水平和膜电位水平、免疫细胞化学检测细胞色素C的表达、电镜观察细胞线粒体形态的改变,Western blot检测Caspase3、Caspase9蛋白表达,分光光度检测Caspase3、Caspase9酶活性。结果：流式细胞术结果显示,Curcumin组细胞的凋亡率、活性氧水平较APP组明显降低[（0.05±0.01） vs. （0.18±0.01）,P=0.000;（49.67±4.16） vs. （197.67±8.08）,P=0.000];而Curcumin组线粒体膜电位较APP组升高[（1.00±0.03） vs. （0.64±0.03）,P=0.000]。电镜结果发现姜黄素可以减轻线粒体的肿胀,改善其形态。同时免疫细胞化学结果显示姜黄素减少了细胞色素C的释放。Western blot检测发现,与APP组相比,Curcumin组Caspase3、Caspase9蛋白的表达均降低[（0.62±0.12） vs. （1.39±0.10）,P=0.000;（0.64±0.20） vs. （1.78±0.03）,P=0.000];并且Curcumin组较APP组的Caspase3与Caspase9的活性明显降低[（0.66±0.04） vs. （2.12±0.06）, P=0.000;（0.58±0.04） vs. （0.93±0.03）, P=0.000]。结论：姜黄素能抑制N2a/APP695swe细胞的凋亡,其机制可能与改善线粒体功能有关。     

姜黄素抑制脂多糖诱导视网膜色素上皮细胞炎症反应

目的：探讨姜黄素（curcumin）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelial cells, RPE）炎症反应的抑制作用。方法：体外培养人RPE细胞株ARPE-19,CCK-8测定不同浓度姜黄素（5、10、20、30、40 ?滋mol/L）或不同浓度姜黄素和脂多糖（5 ?滋g/mL）刺激后细胞的活性,以此确定姜黄素的最适作用浓度。实时荧光定量（real-time poly－merase chain reaction, RT-PCR）检测白细胞介素（interleukin,IL）-8和IL-6的mRNA表达变化,酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定IL-6和IL-8的蛋白表达水平。Western blot检测IκB-α、p-IκB-α蛋白表达变化。结果：CCK-8：不同浓度姜黄素对ARPE-19细胞活性无影响（P5 ?滋mol/L=0.998,P10 ?滋mol/L=1.000,P20 ?滋mol/L=0.124,P30 ?滋mol/L=0.092,P40 ?滋mol/L=0.078）,预先作用不同浓度的姜黄素对细胞活性有保护作用,20 ?滋mol/L保护作用明显（P=0.041）。PCR：姜黄素+LPS组IL-8的mRNA相对表达量（4.965±3.863）比LPS组（106.331±37.314）明显降低（P=0.000）,姜黄素+LPS组IL-6的mRNA相对表达量（0.992±0.374）比LPS组（2.175±0.560）明显降低（P=0.005）。ELISA：姜黄素+LPS组IL-8的蛋白表达量[（191.600±18.773） pg/mL]比LPS组[（589.025±38.880） pg/mL]明显降低（P=0.000）,姜黄素+LPS组IL-6的蛋白表达量[（113.906±27.947） pg/mL]比LPS组[（243.380±38.001） pg/mL]明显降低（P=0.000）。Western blot：与LPS组相比较,姜黄素+LPS组的p-IκB-α蛋白的表达水平降低（P=0.001）。结论：姜黄素通过抑制NF-κB活性抑制了脂多糖诱导视网膜色素上皮细胞的炎症反应,保护视网膜色素上皮细胞。     

姜黄素对非酒精性脂肪性肝炎肝细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨姜黄素对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）肝细胞凋亡的影响及其相关机制。 方法 将HL-7702细胞分为对照组、模型组和治疗组,其中对照组给予普通培养基培养,模型组培养基内加入1mmol/L的游离脂肪酸（FFA）诱导NASH模型,治疗组在加入FFA的同时给予20μmol/L的姜黄素干预。48小时后收集细胞,检测细胞凋亡率、活性氧（ROS）含量及线粒体膜电位水平。 结果 模型组肝细胞的早期凋亡率及总凋亡率均明显高于对照组[（10.34±0.13）% vs.（0.55±0.08）%,P<0.05; （13.30±0.10）% vs.（2.15±0.91）%,P<0.05],治疗组与模型组相比,肝细胞早期凋亡率及总凋亡率均明显降低[（0.83±0.35）% vs.（10.34±0.13）%,P<0.05;（3.11±1.06）% vs.（13.30±0.10）%;P<0.05];模型组肝细胞内ROS含量明显高于对照组（233.58±8.00 vs. 187.24±10.60,P<0.05）,而线粒体膜电位水平则明显低于对照组（1.08±0.03 vs. 1.25±0.04,P<0.05）;治疗组肝细胞内ROS含量较模型组显著降低（192.57±23.86 vs. 233.58±8.00,P<0.05）,而线粒体膜电位水平则显著升高（1.17±0.04 vs. 1.08±0.03,P<0.05）。 结论 姜黄素可调节NASH肝细胞凋亡,该作用可能与其线粒体保护作用相关。     

脓毒症大鼠脑线粒体功能损伤与氧化应激的关系

目的：探索脓毒症脑组织线粒体功能及可能损伤机制．方法：选取40只清洁级雄性SD大鼠（180～220g）,以抽签方式随机分为4组：正常对照组,3h脓毒症组（3LPS组）,6h脓毒症组（6LPS组）和24h脓毒症组（24LPS组）,每组10只．腹腔注射革兰阴性菌脂多糖（LPS）溶液建立脓毒症大鼠动物模型,各脓毒症组大鼠在相应时点处死后分离获得线粒体．测定各组大鼠脑线粒体膜电位、线粒体丙二醛（mtMDA）含量、线粒体一氧化氮合酶（mtNOS）活性以及线粒体一氧化氮（mtNO）浓度．结果：3LPS组大鼠脑线粒体膜电位较正常对照组明显降低[（0．5±0．5）vs（1．2±0．6）,P〈0．05];6LPS组和24LPS组大鼠脑线粒体膜电位与正常对照组无明显差异[（1．4±0．7）vs（1．2±0．6）,（1．6±0．7）vs（1．2±0．6）]．3LPS组和6LPS组大鼠脑mtMDA含量较正常对照组明显升高[（12．0±2．1）μmol／L vs（5．7±0．8）μmol／L,（8．7±0．8）μmol／L vs（5．7±0．8）μmol／L,P〈0．01];24LPS组大鼠脑mtMDA含量较正常对照组无明显差别[（6．5±1．6）μmol／L vs（5．7±0．8）μmol／L]．3LPS组和6LPS组大鼠脑mtNOS活性较正常对照组明显升高[（74±24）μkat／g vs （16±13）μkat／g,P〈0．01;（32±10）μkat／g vs（16±13）μkat／g,P〈0．05];24LPS组大鼠脑mtNOS活性较正常对照组无明显差别[（28±12）μkat／g vs（16±13）μkat／g]．3LPS组、6LPS组和24LPS组大鼠脑mtNO浓度均较正常对照组明显升高[（15．4±4．8）μmol／g vs（1．2±2．6）μmol／g,（6．5±3．8）μmol／g vs（1．2±2．6）μmol／g,（3．6±2．1）μmol／g vs（1．2±2．6）μmol／g,P〈0．01]．脓毒症大鼠脑mtMDA含量、mtNOS活性和mtNO浓度与脑线粒体膜电位存在明显负相关性（r=-0．677,P〈0．01;r=-0．738,P〈0．01;r=-0．715,P〈0．01）．结论：大鼠脓毒症病程中存在可逆?     

Curcumin联合放射对人结肠癌细胞株HT29的增殖抑制作用研究

目的探讨姜黄素（Curcumin,Cur）在放射线诱导的HT29细胞增殖及凋亡中的作用。方法常规培养HT29细胞,经6 Gy放射线照射和（或）Cur处理24 h后,通过MTT比色法分析空白对照组、6 Gy单独照射组及联合处理组（5μmol/L姜黄素＋6 Gy组、10μmol/L姜黄素＋6 Gy组、20μmol/L姜黄素＋6 Gy组）HT29细胞增殖率,采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡率,通过Elisa实验评价细胞中半胱氨酸蛋白酶Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性。结果 Cur和6 Gy联合处理组的细胞增殖率明显高于空白对照组和6 Gy单独照射组（P〈0.05）,细胞凋亡率亦显著高于空白对照组和6 Gy单独照射组（P〈0.01）;同时,Cur和6 Gy联合处理组细胞中Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性亦明显高于对照组和6 Gy单独照射组（P〈0.05）。结论 Cur可通过促进细胞凋亡相关因子活性,进而诱导HT29细胞凋亡,抑制其增殖,发挥HT29细胞对放射线的增敏作用,此可为结肠癌放射治疗的临床研究提供新的思路。     

姜黄素对脂多糖诱导肺细胞损伤的作用及其机制研究

目的 探究姜黄素通过介导长链非编码RNA THRIL(lncRNA THRIL)表达对脂多糖（LPS）诱导的人正常肺上皮细胞（BEAS-2B）损伤的影响。方法 LPS诱导BEAS-2B细胞复制体外急性肺损伤细胞模型,并加入姜黄素处理。采用Lipofectamine?2000转染试剂将lncRNA THRIL过表达/敲降载体或空载体转染到BEAS-2B细胞中。通过实时荧光定量聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测lncRNA THRIL及炎症细胞因子[白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平;CCK-8法和流式细胞术分别检测LPS、姜黄素及THRIL对细胞活性和细胞凋亡的影响。结果 姜黄素组与对照组lncRNA THRIL相对表达量比较,差异无统计学意义（P>0.05）,LPS组较对照组升高（P <0.05）,LPS+姜黄素2.5μmol/L组、LPS+姜黄素5μmol/L组、LPS+姜黄素7.5μmol/L组较LPS组降低（P <0.05）。姜黄素组与对照组细胞凋亡率比较,差异无统计学意义（P>0.05）,LPS组...     

双去甲氧基姜黄素及姜黄素在SD大鼠体内的药代动力学特征对比研究

目的 探讨双去甲氧基姜黄素（CurⅢ）及姜黄素（CurⅠ）在SD 大鼠体内的药代动力学特征。方法 选取16 只雄性SD 大鼠作为研究对象,随机分成甲乙两组,其中甲组大鼠给予双去甲氧基姜黄素混悬液灌服,乙组大鼠给予姜黄素混悬液灌服,测定两种混悬液的性质;于不同时间点抽取大鼠静脉血,利用DAS2.1.1 软件计算动力学参数,分析两种药物在大鼠体内的药代动力学特征。结果 CurⅢ的lgP 值、粒径及Zeta 电位分别为（0.71±0.04）、（510.35±18.31）nm、（-56.83±-3.44）mV,CurⅠ的lgP 值、粒径及Zeta 电位分别为（1.62±0.13）、（841.29±26.38）nm、（-75.21±-4.06）mV,两种成分差异有统计学意义;相同条件下,CurⅢ释放速率更快、溶解度更大;CurⅢ的Tmax、MRT0～72h、MRT0～∞、AUC0～72h、AUC0～∞分别为（0.76±0.13）h、（8.91±0.54）h、（9.73±0.66）h、（281.02±17.22）μg/（L·h）、（291.27±18.05）μg/（L·h）,CurⅠ的Tmax、MRT0～72h、MRT0～∞、AUC0～72h、AUC0～∞分 别 为（0.24±0.02）h、（5.61±0.31）h、（8.37±0.52）h、（171.56±11.16）μg/（L·h）、（190.28±12.38）μg/（L·h）,药代动力学参数差异有统计学意义。结论 与姜黄素相比,双去甲氧基姜黄素水溶性更好、物理稳定性更高,溶解度较大,药物吸收更好,生物利用度较高。     

重度肥胖病人的淋巴细胞线粒体呼吸链中复合酶体的变化

目的：研究重度肥胖病人淋巴细胞线粒体呼吸链的功能。方法：测定５９例重度肥胖女性（肥胖组，体重指数为４９．６±１．７，年龄为４１．１±１．１岁）与６０例正常体重女性（对照组，体重指数为２２．５±０．６，年龄为４４．１±１．６岁）的淋巴细胞线粒体呼吸链中第三对复合酶体－辅酶Ｑ细胞色素ｃ氧化还原酶（ＣⅢ）的活性及酶动力学分析。结果：肥胖组ＣⅢ的活性显著高于对照组（Ｐ＜０．０１），以Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｏｎ酶动力学方法分折，肥胖组ＣⅢ的最大反应速率（Ｖｍａｘ）及米氏常数（Ｋｍ）均显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）。结论：肥胖病人淋巴细胞线粒体呼吸链中电子流量增加伴复合酶体的效率下降，可能导致线粒体中自由基产生的增加．各种疾病的发病率增加。     

姜黄素影响N2a/APP695swe细胞中ABCA1表达的机制研究

目的：研究姜黄素（Curcumin）对N2a/APP695swe细胞钙调神经磷酸酶（Calcineurin,CaN）活性和三磷酸腺苷结合转运子A1（ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1）表达的影响;探讨Curcumin影响N2a/APP695swe细胞中ABCA1表达的可能机制。方法：MTT法分别检测1、5、10、20、40 μmol/L Curcumin或0.1、0.5、1、2、4 μmol/L CaN活性抑制剂环孢素A（Cyclospo－rinA,CsA）对N2a/APP695swe细胞存活率的影响;依据MTT筛选结果,分为正常对照组、模型组、Curcumin组：5 μmol/L Cur－cumin处理24 h的N2a/APP695swe细胞、CsA组：0.5 μmol/L CsA处理48 h的N2a/APP695swe细胞。酶底物显色法检测CaN活性,real-time PCR、Western blot检测ABCA1表达水平的变化。结果：与未处理组比较,5 μmol/L Curcumin组细胞存活率[（110.495±4.005）%]最高（P=0.023）;0.1、0.5、1、2、4 μmol/L CsA组细胞存活率依次为（105.532±4.292）%、（115.211±4.826）%、（76.317±4.475）%、（69.177±5.267）%、（54.687±3.912）%,与未处理组比较,0.5、1、2、4 μmol/L CsA组差异均有统计学意义（P值依次为0.001、0.000、0.000、0.000）;酶底物显色法显示与正常对照组[（18.519±1.664） nmol/mg]比较,模型组CaN活性[（24.488±3.041） nmol/mg]增加（P=0.007）,Curcumin组[（16.717±2.055） nmol/mg]、CsA组[（4.928±1.232）nmol/mg] CaN活性明显受到抑制（P值依次为0.002、0.000）;real-time PCR和Western blot显示Curcumin组ABCA1表达量（real-time PCR：1.988±0.355;West－ern blot：0.294±0.015）高于模型组（real-time PCR：1.000±0.000;Western blot：0.175±0.008）,差异有统计学意义（real-time PCR：P=0.009;Western blot：P=0.000）;与模型组比较,CsA组（real-time PCR：4.000±0.464;Western blot：0.470±0.016）的ABCA1表达水平增加（real-time PCR：P=0.000;Western blot：P=0.000）。结论：Curcumin能上调N2a/APP695swe细胞中ABCA1的表达,其机理可能与抑制CaN活性有关。     

高原世居藏族人胎盘线粒体呼吸功能的初步研究

目的比较高原世居藏族和移居汉族胎盘线粒体氧化磷酸化功能,探讨世居高原藏族低氧适应的线粒体机制。方法采用Clark电极法检测高原世居藏族和移居汉族胎盘线粒体Ⅲ态呼吸（ST3）、Ⅳ态呼吸（ST4）和呼吸控制率（RCR）,计算氧化磷酸化效率（OPR）;称量世居藏族和移居汉族胎盘重量和新生儿体重;测量胎盘体积及新生儿身长。结果（1）高原世居藏族胎盘重量、体积和新生儿体重、身长均明显高于移居汉族[分别为0．509kg±0．090kg vs0、429kg±0．099kg（t=0．695,P=0．004）、657．66cm^3±167．10cm^3 vs500．46cm^3 ±140、69cm^3（t=1．834,P=0．001）、3．495kg±0．439kg vs2．952kg±0．388kg（t=3．365,P=0．004）、49．81cm±2．56cm vs 48．10cm±2．30cm（t=2．025,P=0．000）];（2）高原世居藏族胎盘线粒体RCR、ST3、OPR明显高于移居汉族[4．22±0．97vs3．21±0．37（t=3．232,P=0．004）、（67．78±13．57）nmol O·min^-1·mg pro^-1 vs（41、27±10．49）nmol O·min^-1·mg pro^-1（t=5．257,P=0．000）、（117．93±32．69）nmol O·min^-1·mg pro^-1 vs（68．94±28．88）nmol O·min^-1·mg pro^-1（t=2．985,P=0．001）],ST4组间差异无统计学意义[（16．58±3．53）nmol O·min^-1·mg pro^-1 vs（14．79±4．69）nmol O·min^-1·mg pro^-1（t=1．069．P=0．297）]。结论高原世居藏族胎盘线粒体氧化磷酸化程度显著高于移居汉族,这提示高原世居藏族在高原低氧环境下较移居汉族具有更强的利用氧的能力,可能是其高原低氧适应的重要机制。     

抗精子抗体和抗子宫内膜抗体与不孕及流产的关系

目的　探讨抗精子抗体（ＡｓＡｂ）与抗子宫内膜抗体（ＥＭＡｂ）在不孕、流产中的作用及二者关系,进一步 揭示不孕、流产的病因。方法　采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）同时检测３４５例不孕、流产妇女血清中的ＡｓＡｂ与 ＥＭＡｂ,按ＡｓＡｂ检测结果分阳性组和阴性组,比较两组ＥＭＡｂ阳性率的差异。结果　原发不孕及自然流产妇女中, ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率高达１６．６７％和１９．５１％,而ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率高达４３．６４％和４２．８６％,显著高于 ＡｓＡｂ（－）组（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）。继发不孕妇女中ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率为１８．１８％,ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率 为３２．２％,二者无显著性差异（０．０１＞Ｐ＞０．０５）。结论原发不孕及自然流产妇女中因个体免疫反应差异使某些 人易对体内、外物质发生免疫反应而产生抗体,从而导致不孕或流产。     

亚硝基脲类和亚硝基硫脲类的理化性质及致突变能力

本题选择N,N′-二甲基亚硝基脲(DMNU),N,N′-二乙基亚硝基脲(DENU),及其类似物N,N′-二甲基亚硝基硫脲(DMNTU)、N,N′-二乙基亚硝基硫脲(DENTU)为代表,测定了这些化合物的水解反应速度、脂溶性(HPLC的logk′值)、水解产物和致突变能力。证明了硫脲的脂溶性大于脲的脂溶性。DMNTU对TA100菌株的致突变能力最强,其它较弱。     

气血与足月妊娠分娩关系的探讨

论述足月妊娠分娩的发动和维持依靠气的推动、温煦、气化、固摄功能和血的营养、濡润功能。顺利分娩既要气血充足，还要气顺血和。临床研究结果表明调补气血，是促进产程，预防难产的重要手段。实验研究结果阐明调补气血中药加强产力、促进产程主要是从改善产妇全身情况，提高机体抗应激、抗疲劳、耐缺氧能力，即所谓使产妇气血充足调和，充分发挥气血在分娩过程中的生理作用。     

水疗联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响

目的探讨新生儿游泳联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响。方法将经阴道顺产分娩的正常新生儿100例随机分为两组，观察组（水疗联合抚触组）50例，对照组（单纯沫浴组）50例。①测定两组10日、28日的体重、身长、上臂围；②观察记录胎便转黄时间，测定皿清胆红素；③记录24h睡眠时间。结果两组新生儿10日、28日体重、身长、上臂同增长有显著差异（P〈0．05），两组新生儿5日时，胎便转黄时间及黄疸指数比较均有显著性差异（P〈0．01），两组睡眠时间比较有统计学意义（P〈0．05），两组并发症比较无统计学意义（P〉0．05）。结论新生儿水疗联合抚触可促进新生儿的生长发育，能加速胎粪的早排出，减轻生理性黄疸程度，有效地降低新生儿高胆红素血症的发病率，提高睡眠质量。