虫草素通过抑制NF-κB途径增强A549细胞对顺铂的敏感性

 目的 通过研究虫草素和顺铂单用或联用对肺癌细胞A549的抗肿瘤效应,探讨其可能的作用机制,为临床肿瘤治疗提供新思路。方法 四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度的虫草素与顺铂单用或虫草素与顺铂(3 μg·mL^-1)联用对A549的增殖抑制作用,并计算IC₅₀;采用Hoechst 33258染色法及流式细胞术检测虫草素与顺铂单用或联用诱导A549细胞凋亡情况;Western blot法检测不同处理组的细胞核内NF-κBp65及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平。结果 虫草素与顺铂联用对A549细胞的抑制作用显著增加,增强了顺铂对A549的敏感性; Hoechst 33258染色及流式细胞术显示,与虫草素和顺铂单独用药相比,联合用药能够明显增加顺铂诱导的细胞凋亡;Western blot结果显示,与对照组相比顺铂能够增加细胞核内NF-κBp65的活性,然而虫草素却能抑制NF-κBp65的活性,联合用药后NF-κBp65的活性明显下调;与顺铂单独用药相比,联合用药组能够使促凋亡蛋白Bax表达显著增高,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达则降低。结论 虫草素能够增强顺铂对肺癌细胞A549的敏感性,其作用机制是通过抑制NF-κB途径,调节下游信号分子 Bax和Bcl-2的表达而实现。     

肺岩宁方调控EMT逆转非小细胞肺癌顺铂耐药

目的 观察肺岩宁方（肺岩宁）对非小细胞肺癌顺铂耐药的影响，并探究其可能存在的机制。方法 细胞增殖与活性检测（CCK-8）法观察顺铂（0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mg?L^-1）对A549和A549/DDP（顺铂耐药）细胞细胞增殖能力的影响，肺岩宁（0、100、200、300、400、500、600 mg?L^-1）对A549/DDP细胞增殖能力影响；免疫荧光染色、蛋白免疫印迹法（WB）观察A549和A549/DDP组上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达；将A549/DDP细胞分为空白组、肺岩宁组（200 mg?L^-1）、顺铂组（6.0 mg?L^-1）和联合用药组［肺岩宁（200 mg?L^-1）+顺铂（6.0 mg?L^-1）］，并进行相应处理，侵袭小室（transwell）实验比较各组侵袭能力；WB检测各组EMT相关蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和免疫荧光染色分别检测各组耐药因子mRNA和蛋白表达。结果 与A549组比较，A549/DDP组对顺铂耐药性显著增高（P<0.01）；E-钙黏蛋白（E-cadherin）蛋白表达降低，波形蛋白（Vimentin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、锌指转录因子（Snail）蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）。经肺岩宁、顺铂处理后，与空白组比较，肺岩宁可浓度依赖性抑制A549/DDP细胞增殖（P<0.01）；肺岩宁组、顺铂组、联合用药组侵袭能力降低（P<0.01）；与顺铂组比较，联合用药组侵袭能力显著降低（P<0.01）。与空白组比较，肺岩宁组E-cadherin蛋白表达升高，N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达降低（P<0.01），顺铂组E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低，Snail蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）；联合用药组E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达降低（P<0.01）；与顺铂组比较，联合用药组E-cadherin蛋白表达升高，N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达降低（P<0.01）。与空白组比较，肺岩宁组肺耐药相关蛋白（LRP）、多药耐药因子1（MDR1）蛋白和mRNA表达降低，拓扑异构酶Ⅱα （TOPO Ⅱα）蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）；顺铂组LRP、MDR1、TOPO Ⅱα蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）；联合用药组LRP蛋白和mRNA表达无明显改变，MDR1、TOPO Ⅱα蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）；与顺铂组比较，肺岩宁组、联合用药组LRP、MDR1蛋白和mRNA表达降低，TOPO Ⅱα蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）；与肺岩宁组比较，联合用药组LRP、MDR1、TOPO Ⅱα蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）。结论 肺岩宁方能够逆转非小细胞肺癌顺铂耐药，其机制可能与调控EMT进程相关。     

槐耳清膏对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的影响及顺铂耐药逆转作用

目的:探讨槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞和A549/DDP细胞增殖的抑制影响及其顺铂耐药细胞A549/DDP的逆转作用。方法:以体外培养的人肺腺癌A549及A549/DDP细胞为实验模型,采用MTT法测定不同浓度槐耳清膏对A549细胞及A549/DDP细胞的增殖抑制率,并运用流式细胞术检测顺铂联合槐耳清膏对A549/DDP细胞的变化,以及增敏作用效应。结果:槐耳清膏对A549细胞及A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,随着药物浓度的增加,其抑制率逐渐增加,具有明显的量-效关系(P0.05)。顺铂40μmol/L作用于A549及A549/DDP细胞48 h后,其凋亡率分别为(27.61±3.45)%和(17.93±1.73)%,两组间有统计学差异(P0.01)。槐耳清膏1 mg/m L作用于人肺腺癌A549和A549/DDP细胞40 h后,再以相同浓度顺铂诱导,A549细胞凋亡率为(32.35±2.68)%,A549/DDP细胞凋亡率为(30.01±3.65)%,两组间无统计学意义,但与单独DDP作用相比,差异具有显著意义(P0.01)。结论:槐耳清膏能显著抑制人肺腺癌A549及A549/DDP细胞的增殖,诱导细胞凋亡,还可以增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

桔梗皂苷-D诱导肺腺癌A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞

目的:探究桔梗皂苷-D(Platycodin-D,PD)诱导肺腺癌细胞(A549)和A549顺铂耐药细胞(A549/DDP)凋亡和周期抑制的作用机制,为PD治疗非小细胞肺癌和产生顺铂耐药的非小细胞肺癌提供实验基础。方法:采用MTT法检测细胞的增殖抑制率和耐药指数;流式细胞术检测细胞周期阻滞和凋亡作用;Hoechst-33258荧光染色观察细胞核形态的变化;Western-blot蛋白印迹法分析凋亡通路和细胞周期相关蛋白表达水平的变化。结果:MTT检测结果显示,PD对A549和A549/DDP细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性。Hoechst 33258荧光染色发现,随着PD浓度增加,两种细胞核形态都有明显的改变。进一步流式细胞术结果表明,PD诱导A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞。Westernblot检测结果表明,PD通过上调Bax、Caspase-9、cleaved-Caspase-3和PARP的表达,下调Bcl-2和Caspase-3的表达诱导A549和A549/DDP细胞凋亡。此外,PD通过下调Cyclin-D1、Cyclin-D3、CDK4、CDK6、E2F1和p-Rb及上调P18的蛋白水平诱导A549细胞周期G0/G1阻滞。同时,PD通过下调Cyclin-B1、p-Cdc2、E2F1和p-Rb及上调P27的蛋白表达诱导A549/DDP细胞周期G2/M阻滞。结论:PD通过线粒体途径诱导A549和A549/DDP细胞凋亡诱导,并且引发A549细胞G0/G1周期阻滞和A549/DDP细胞G2/M阻滞周期阻滞。     

顺铂诱导肺癌A549细胞保护性自噬及肺岩宁对自噬蛋白Atg5、Atg7的影响

目的观察顺铂作用肺癌A549细胞后自噬的发生,及肺岩宁对自噬相关蛋白Atg5、Atg7的影响。方法顺铂和肺岩宁处理肺癌A549细胞,CCK-8筛选顺铂和肺岩宁的优化给药浓度,CCK-8检测各组A549细胞增殖能力,Western blot检测各组自噬蛋白表达。结果与单药顺铂相比,3 mg/L的顺铂联合20 mmol/L的自噬抑制剂氯喹明显提高了A549细胞增殖的抑制率(P0.05)。同时,顺铂导致了微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3Ⅱ)蛋白表达增加(P0.01)。肺岩宁干预A549细胞后,自噬蛋白Atg5蛋白表达低于模型组和顺铂组(P0.05),Atg7蛋白表达显著低于模型组和顺铂组(P0.01)。结论顺铂诱导了A549细胞产生保护性自噬,肺岩宁可能通过抑制肺癌细胞自噬来发挥抗肺癌细胞增殖作用。     

补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响

目的研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响。方法采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备补中益气汤高剂量（补中益气汤1.134 g/mL,2 mL）、中剂量（补中益气汤0.576 g/mL,2 mL）、低剂量（补中益气汤0.284 g/mL,2 mL）含药血清,采用MTT法检测不同剂量和浓度的补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞的增殖抑制效应,计算耐药逆转倍数;采用免疫细胞化学法、Western blot技术、免疫荧光三种方法检测Survivin在两细胞株中的表达。结果补中益气汤含药血清对A549和A549/DDP细胞有明显抑制作用,10%各剂量组抑制率均高于5%相应剂量组,且随着剂量浓度的升高,抑制率也逐渐升高;与10%空白组比较,10%中、低剂量组抑制率升高（P〈0.05）;10%中剂量含药血清作用后,A549和A549/DDP IC50均降低（P〈0.05）,逆转倍数均升高,对A549/DDP细胞的逆转倍数达到2.46,使A549/DDP对顺铂的耐药性下降;与本组A549比较,免疫细胞化学法、Western blot法、免疫荧光法均检测到A549/DDP细胞中Survivin的表达量均降低（P〈0.05）,与10%空白组比较,10%中剂量组A549/DDP均降低（P〈0.05）。结论 10%中剂量补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞都有抑制作用,并可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,其逆转机制可能与减少细胞内Survivin的表达,增强A549/DDP对化疗药物的敏感性有关。     

中药复方对人肺腺癌A549细胞作用机制研究进展

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率呈上升趋势,因肺癌的病因及发病机制复杂,对其治疗与预后的效果仍需深入探讨。中药复方治疗肺癌,是以中医基础理论为依据,发挥多靶点、多环节的综合干预作用。故以中医理论为指导思想,以A549细胞株为实验研究平台,探索中药复方对肺癌的药理机制研究,已成为目前研究的热点。查阅2012年至今相关中药复方作用于人肺腺癌A549细胞的文献,对其进行梳理,并做出概括及评价,在诱导A549细胞凋亡,抑制A549细胞增殖,干预A549细胞的局部蔓延、转移及逆转A549细胞多药耐药方面进行综述。为中药复方更系统化治疗肺癌提供参考。     

补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠A549/DDP细胞顺铂耐药的影响

目的:探讨补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠肿瘤细胞A549/DDP顺铂耐药的影响,并确定最佳用药浓度。方法:36只BALB/C裸鼠随机分为空载组,模型组,顺铂组,补中益气汤低、中、高剂量(1.46,2.92,5.84 g·kg~(-1))组。空载组接种转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)空载慢病毒转染的A549/DDP细胞,余接种TGF-β_1稳定过表达的A549/DDP细胞。药物干预后处死裸鼠。称量小鼠瘤重,计算抑瘤率;镜下计数肿瘤肝、脾、肺转移情况;病理观察肺组织形态学改变;免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测移植瘤中肺耐药相关蛋白(lung resistance-related protein,LRP),多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-related protein,MRP),P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达情况。结果:与模型组比较,补中益气汤组瘤重降低,肺转移结节数量减少,随着补中益气汤剂量增加,瘤重逐渐减小,抑瘤率上升,高剂量组效果最为明显(P0.05)。肝、脾未见明显转移结节。病理切片显示,模型组肺部结构紊乱,出现明显肺损伤,补中益气汤组肺泡、肺泡囊、肺间隔形态逐渐恢复,高剂量组效果最好。与空载组比较,模型组LRP,MRP,P-gp蛋白和mRNA表达均明显上调(P0.05);与模型组和顺铂组比较,补中益气汤中、高剂量组LRP,MRP,P-gp蛋白和mRNA表达明显下调(P0.05);高剂量组下调效果最为明显。结论:补中益气汤能抑制肺腺癌移植瘤生长及转移,减轻肺损伤,改善A549/DDP顺铂耐药,该作用有一定的量效关系,高剂量(5.84 g·kg~(-1))为最佳裸鼠体内用药浓度。     

紫杉醇联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的：观察紫杉醇（PTX）加顺铂（DDP）联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌的近期疗效及毒副反应。方法：PTX135-175mg／m。静脉滴住，第1天，DDP75mg／m^2,分三次用完。每21天为一个周期。连用2或3周期。结果：可评价疗效者30例（CR＋PR）总有效率为53．3％。毒副反应主要是骨髓抑制和恶心呕吐。结论：PTX＋DDP治疗晚期非小细胞肺癌可获得较高疗效，毒副反应轻，是一个较好的联合化疗方案。     

消岩汤药物血清对A549/DDP多药耐药逆转作用的研究

[目的]探讨消岩汤药物血清对接种S180昆明小鼠肿瘤的抑制作用,及对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/耐顺铂(DDP)的耐药逆转作用。[方法]通过建立小鼠肿瘤模型,观察消岩汤对小鼠S180移植肿瘤生长的影响;以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验(MTT)方法,探讨消岩汤对肺癌耐药细胞的多药耐药逆转作用。[结果]消岩汤高、低剂量组的抑瘤率分别是48.36%和27.87%;消岩汤荷瘤动物含药血清高、低剂量组分别与DDP合用时,对耐药细胞A549/DDP的杀伤作用分别是DDP组的1.78倍和1.57倍。[结论]消岩汤可改善小鼠生活质量,拮抗恶病质,并能够抑制肿瘤生长;消岩汤含药血清对A549及A549/DDP均有生长抑制作用,且能增强DDP对肺癌敏感细胞和耐药细胞的杀伤作用,具有耐药逆转作用。     

芦荟大黄素脂质体逆转人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂多药耐药的作用研究

目的：研究芦荟大黄素脂质体(aloe emodin liposomes，AE-L)在体外对耐药人肺腺癌细胞系A549/DDP对顺铂(DDP)的耐药性。方法：采用MTT检测方法得出AE-L的无毒细胞浓度、低毒细胞浓度以及空脂质体(empty liposomes,E-L)的无毒浓度；再以E-L无毒浓度做对照组，分别测出AE-L无毒细胞浓度组、低毒细胞浓度组耐药细胞逆转倍数；电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定各组细胞内顺铂浓度。结果：AE-L无细胞毒浓度组(2.0 mg·L^-1)使A549/DDP细胞对DDP的IC₅₀由16.81 mg·L^-1降至5.86 mg·L^-1；低细胞毒浓度(7.0 mg·L^-1)组的IC₅₀降至4.34 mg·L^-1；2组均明显提高DDP在A549/DDP细胞内的浓度。结论：AE-L能部分逆转A549/DDP细胞的多药耐药(MDR)，其机制与增加细胞内药物浓度有关。     

彗星电泳判断川陈皮素诱导的A549细胞死亡方式

目的:探讨川陈皮素诱导的A549细胞死亡方式。方法:40、80μg/ml的川陈皮素分别处理A549细胞12、24、46h后,用彗星电泳法来检测DNA的损伤情况,并判断细胞的死亡方式。结果:40μg/ml的川陈皮素能诱导A549细胞凋亡,而80μg/ml的川陈皮素则诱导A549细胞坏死。结论:当川陈皮素作用剂量较小时,以诱导A549细胞凋亡为主;而当作用剂量较大时,则以诱导坏死为主。     

秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡

目的探讨秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用。方法 MTT法检测肺癌细胞A549的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶caspase3、8、9的活性,免疫印迹法检测K-Ras、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达的变化。结果秦皮甲素可抑制人肺癌细胞A549的增殖,IC50值为0.4 mmol/L,并诱导凋亡;caspase3和caspase9表达增强,caspase8表达无明显改变。p-ERK1/2和K-Ras蛋白表达减弱,而ERK1/2蛋白表达无明显变化。结论秦皮甲素通过显著抑制K-Ras的表达和ERK1/2的磷酸化水平诱导人肺癌细胞A549凋亡。     

补中益气汤含药血清对A549/DDP中p-Akt和P-gp表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)耐顺铂(DDP)作用及其对磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:采用血清药理学方法制备含药血清,随机对照法将24只SD大鼠分为空白对照组(给生理盐水10 mL·kg-1),补中益气汤高、中、低剂量组(11.34,5.67,2.84 g·kg-1,10 mL·kg-1),每日ig给药1次,连续7d后提取血清.将A549/DDP分为空白血清组,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组,阻滞剂组,高剂量含药血清联合阻滞剂(LY294002)组,MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,并计算耐药逆转倍数.免疫细胞化学法检测各组细胞中p-Akt和P-gp蛋白的表达;逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞中Akt和P-gp的mRNA表达.结果:与空白血清组比较,补中益气汤中剂量以上的含药血清可明显降低A549/DDP对DDP的IC50(P＜0.05),并呈浓度依赖效应,与阻滞剂联合效果最佳(P＜0.05);与A549/DDP空白血清组相比,补中益气汤中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的p-Akt和P-gp的表达显著下降(P ＜0.01,P＜0.05),其中以高剂量联合阻滞剂组下降最多(P＜0.01);与A549/DDP空白血清组相比,中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的P-gp的mRNA表达量都显著减少(P＜0.01,P＜0.05),中、高剂量含药血清组,高剂量联合阻滞剂组的p-Akt的mRNA表达量也显著减少(P＜0.05).结论:补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,与LY294002联合应用效果更佳,其逆转机制可能与减少细胞内p-Akt和P-gp的表达,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.     

苦参碱抑制人大肠癌HT29细胞增殖及诱导凋亡作用与机制

目的探讨苦参碱对人大肠癌HT29细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及其可能机制。方法分别采用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡、透射电镜观察细胞结构变化、基因芯片检测细胞基因表达改变。结果0.0625～0.5mg/mL苦参碱处理48h后,细胞增殖明显受抑制;但1mg/mL时增殖抑制率降低而凋亡诱导作用明显增强;苦参碱对细胞G2/M和G1/S期均有阻滞作用;电镜下可见凋亡的形态学变化;基因芯片检测发现苦参碱影响细胞增殖、周期和凋亡相关基因的表达。结论苦参碱通过影响HT29细胞一些与增殖、周期和凋亡相关基因的表达发挥增殖抑制和凋亡诱导作用,且与苦参碱质量浓度相关。