心胸腺联合移植结合胸腺内注射供体胸腺细胞诱导大鼠同种异体心脏移植免疫耐受

目的：研究供体胸腺细胞经胸腺注射对大鼠心脏及胸腺移植的影响。方法：将SD大鼠的胸腺细胞注入Wistar大鼠胸腺内,2周后行心脏及心胸腺联合移植（SD→Wistar）,观察移植心存活时间和病理排斥反应,检测血中及移植心中IL-2及IL-4水平。结果：单纯心脏移植及心胸腺联合移植在环孢素短期（7d及14d）应用下,可延长移植心及胸腺的存活时间,但不能诱导耐受;经胸腺注射供体胸腺细胞后,行单纯心脏移植及心胸腺联合移植,在短期环孢素作用下,移植心及胸腺均获长期存活;在移植物长期存活组IL-4保持较高水平,而IL-2处于较低水平。结论：经胸腺注射胸腺细胞可以诱导对同种异体心脏及胸腺的耐受;胸腺移植有利于耐受的诱导和维持。     

滋阴固本颗粒对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠视神经MBP表达的影响

目的:探讨滋阴固本颗粒对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠视神经碱性髓鞘蛋白(MBP)表达的影响。方法:雌性Wistar大鼠随机分成正常组、模型组、激素组及滋阴固本颗粒(中药)低、中、高剂量组。除正常组外,均用豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)+完全福氏佐剂(CFA)+百日咳疫苗(PV)致敏雌性Wistar大鼠,建立EAE模型。造模后次日即给予相应干预,激素组给予醋酸地塞米松6.25 mg·kg~(-1)·d~(-1),中药低、中、高剂量组分别给予中药液13.33 g·kg~(-1)·d~(-1)、26.67 g·kg~(-1)·d~(-1)、53.33 g·kg~(-1)·d~(-1),正常组和模型组给予等容量0.9%Na Cl溶液,1次/d,连续灌胃14 d。干预结束后对大鼠进行神经功能评分,免疫组化法检测视神经组织内MBP表达情况。结果:与正常组比较,模型组神经功能评分明显升高(P0.01);与模型组比较,激素组与中药中、高剂量组大鼠的神经功能评分均明显降低(P0.01)。与正常组比较,模型组视神经MBP表达明显降低(P0.01),激素组和中药低、中、高剂量组MBP表达水平均明显高于模型组(P0.01);激素组与中药高剂量组MBP表达差异无统计学意义(P0.05),中药中、高剂量组MBP表达高于中药低剂量组(P0.01)。结论:滋阴固本颗粒对EAE大鼠具有防治作用,其作用可能与其增强视神经组织内MBP的表达有关。     

胸腺内注射异基因骨髓细胞诱导特异性免疫耐受的实验研究

目的:探索通过胸腺内注射异基因骨髓细胞加腹腔注射环磷酰胺,以小鼠皮肤移植为模型,诱导移植免疫耐受,为免疫耐受提供理论和实验依据.方法:提取供体B6小鼠(H-2b)骨髓细胞,注入受体BALB/C(H-2d)小鼠胸腺内,48 h后腹腔注射200 mg/kg的环磷酰胺,2周后移植供体小鼠(H-2b)和无关供体C3H(H-2k)小鼠皮肤.共设空白对照组、CP对照组、BM对照组、实验组、第三方供体组5个组.观察皮肤存活时间;皮肤移植2周后对受体小鼠作单向混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)、脾细胞增值反应及迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)耐受状态的检测.结果:受体小鼠获得了对供体小鼠的特异性皮肤移植耐受,实验组移植皮肤平均存活时间(MST)为(22.00±2.51)d,对照组MST为(8.75±1.04)d,耐受的受体小鼠对第三供体C3H小鼠的移植皮肤仍正常排斥,MST为(10.25±1.91)d.单向混合淋巴细胞反应和迟发型超敏反应证明耐受的BALB/C小鼠对B6小鼠的脾细胞的反应性特异性降低,而仍保持对第三方供体C3H小鼠的免疫反应.耐受的受体小鼠脾细胞对丝裂原(ConA)的增殖反应在正常范围.结论:使用胸腺内注射供体异基因骨髓细胞,结合腹腔应用环磷酰胺的方法,可在成年动物诱导出对供体移植物的特异性免疫耐受,无非特异性免疫抑制.小鼠皮肤移植模型是观察免疫耐受状态的可靠动物模型.     

胸腺内接种同种脾细胞诱导新生期大鼠免疫耐受的研究

为了诱导新生大鼠免疫耐受。方法：将 ２．５ ｘ １０７个 Ｗｉｓｔａｒ大鼠脾淋巴细胞通过胸腺途径注射给 新生ＳＤ大鼠,４－６周龄时取其脾淋巴细胞与Ｗｉｓｔａｒ大鼠脾淋巴细胞（２０ Ｇｙ照射）进行混合培养,作氚标记并测定 放射强度。结果：实验组放射强度平均为（１０．８５±２．５６）Ｂｑ;对照组为（２４．８２±５．４４）Ｂｑ,２组比较差异显著（Ｐ＜ ０．００１）。结论：新生期大鼠胸腺内接种同种脾淋巴细胞可以诱导其免疫耐受。     

脑疏宁对脑外伤大鼠脑水肿及脑组织AQP4表达的影响

目的 观察脑疏宁对脑外伤大鼠脑组织含水量及水通道蛋白4(AQP4)表达的影响,探讨其治疗创伤性脑水肿的机制.方法 SD大鼠264只,随机分为假手术组(88只)、模型组(88只)和脑疏宁组(88只),建立大鼠创伤性脑损伤模型.分别在6 h,1、3、5 d 4个时间点测定脑组织含水量、伊文思蓝(EB)含量,并采用免疫组化方法检测脑组织AQP4蛋白的表达,电镜观察血脑屏障超微结构改变.结果 模型组大鼠伤后各时间点伤侧脑组织含水量、EB含量及伤灶周围AQP4蛋白表达水平明显高于假手术组(均P<0.001);电镜下内皮细胞紧密连接开放、星形胶质细胞足突肿胀.中药治疗组各时间点脑组织含水量、EB含量及AQP4表达水平均较模型组降低(P<0.05);血脑屏障紧密连接的破坏减少、星形胶质细胞足突肿胀减轻.结论 脑疏宁可改善血脑屏障损伤,减轻创伤后脑水肿.其作用可能与抑制AQP4在损伤脑组织中的表达、减轻星形胶质细胞损害有关.     

应用磁共振显像动态观察脑疏宁对大鼠创伤脑水肿的干预作用

目的 通过观察大鼠脑挫裂伤后脑水肿的磁共振显像(MRI)动态变化,分析中药脑疏宁对脑水肿的干预效果.方法 SD雄性大鼠114只,随机分为脑疏宁组、模型组和假手术组.采用自由落体撞击法建立大鼠脑挫裂伤模型,术后连续动态观察T_2加权像(T_2WI)病灶区信号强度(SI)与体积变化,采用干湿重法测定脑组织含水量.结果 外伤后术侧大脑半球见T_2WI高信号改变,1 d时信号强度最高、体积最大,至7 d下降至最低点,与脑组织含水量的变化一致.脑疏宁组各时间点T_2WI信号强度、水肿体积及脑含水量均显著小于模型组(P＜0.05),术后7 d水肿吸收率显著高于模型组(P＜0.005).结论 无创性MRI检查能够对大鼠脑外伤及用药后脑水肿程度作出定量分析,是评价药物疗效的可靠手段;中药脑疏宁能够促进大鼠脑挫裂伤后脑水肿的吸收.     

胸腺内注射不同剂量的异基因抗原诱导大鼠同种异体神经移植的免疫耐受反应

目的 探讨大鼠胸腺内注射不同剂量异基因抗原(MHC),诱导大鼠同种异体坐骨神经产生的特异性免疫耐受反应.方法 雄性Wistar大鼠20只为供体,选用清洁级雄性SD大鼠50只为受体,受体随机分为5组,每组10只:A:新鲜自体神经移植组;B:新鲜异体神经移植组;C、D、E组分别为低、中、高剂量异基因抗原注射异体神经移植组,剂量分别为1 5 mg、3 0 mg、6 0 mg.术后2周进行运动神经传导速度、病理学、混合淋巴细胞培养(MLC)和血清sIL-2R检查.结果 胸腺内抗原注射组动物肢体的生理功能、免疫学、组织学及透射电镜指标恢复,其中,E组动物各项指标恢复最明显,与A组指标类似.结论 胸腺内注射异基因抗原可以诱导大鼠对异体坐骨神经移植的免疫耐受,在一定范围内,免疫耐受的程度与抗原量有关.     

胸腺内注射异基因脾细胞诱导移植心免疫耐受的实验研究

目的通过大鼠同种异体心脏异位移植,探讨胸腺内注射异基因脾细胞对移植心的影响.方法用供体脾细胞(SC)在心脏移植前21d预处理受体鼠,术后1周每日腹腔注射环孢素A(CsA)10mg/kg.检测移植心存活时间、混合淋巴细胞反应(MLR)及细胞介导的细胞毒试验(CML).结果胸腺注射脾细胞抗原联合短期应用CsA组的移植心平均存活时间较其他组显著延长(P＜0.05),移植心耐受的受体鼠中MLR增殖活跃,产生免疫耐受的受体鼠的T细胞对供体鼠的靶细胞无明显的细胞毒作用.结论胸腺内注射供体脾细胞抗原预处理受体同时联合短期应用CsA,可诱导产生移植心脏的免疫耐受,且诱导移植耐受的抗原量以2.5×107脾细胞为好.     

去骨瓣减压对大鼠心肺复苏后血清CK-BB和MBP表达的影响

目的:通过观察去骨瓣减压时血清磷酸肌酸激酶脑型同工酶(CK-BB)、髓鞘碱性蛋白(MBP)表达水平的变化,探讨去骨瓣减压对脑复苏的影响。方法:采用改良的窒息法制备大鼠复苏模型,成年雄性Wistar大鼠48只,随机均分为假手术组、对照组和去骨瓣组。对照组与去骨瓣组采用窒息致大鼠心脏骤停和心肺复苏(CPR)模型;去骨瓣组在大鼠CPR成功1 h后行去骨瓣减压;假手术组仅行气管插管、股动静脉置管术。每组处理后又分为6、12、24、48 h 4个亚组,每个亚组4只。分别于各时间点取血和组织标本;ELISA法检测血清CK-BB、MBP水平,HE染色观察海马及大脑皮质细胞凋亡的变化。结果:3组大鼠处理后6 h血清CK-BB水平差异无统计学意义(P>0.05),对照组和去骨瓣组术后12 h、24 h和48 h血清CK-BB水平均明显高于假手术组,去骨瓣组术后24 h血清CK-BB水平低于对照组(P<0.05)。3组大鼠术后6、12、24和48 h血清MBP水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:去骨瓣减压能降低大鼠CPR后血清中CK-BB的表达,从而减轻脑损伤。     

大鼠脑及胸腺内SR蛋白特异性激酶1的定位研究

目的观察SR蛋白特异性激酶(SRPK)1在大鼠脑和胸腺等组织细胞内的分布.方法采用免疫组化以及免疫电镜技术对SRPK1组织学分布和超微结构定位进行系统研究.结果光镜下SRPK1或SRPK1类蛋白免疫阳性细胞广泛存在于大鼠脑及胸腺内.在中枢神经系统内存在核团差异性.在肾和肝脏组织内未见SRPK1免疫阳性细胞,SRPK1免疫阳性物质在脑神经元和胸腺细胞核内呈斑点状分布 .电镜下SRPK1或SRPK1类蛋白主要分布在染色质间颗粒簇(IGc)和染色质周边纤维(PGs)上,核仁内主要存在于DFC区.结论 SRPK1主要分布于大鼠的脑和胸腺细胞内.     

家兔脑损伤后经颈动脉注射地塞米松对血清髓鞘碱性蛋白的影响

目的 :体液髓鞘碱性蛋白 (myelinbasicprotein ,MBP)是急性脑损害的特异性生化指标 ,可标志脑病理程度。本研究通过MBP变化来观察经颈动脉途径注射地塞米松对家兔脑损伤的治疗作用。方法 :3 0只家兔分为A、B、C 3组 ,每组 10只。A组 :经颈动脉注射地塞米松 ;B组 :注射生理盐水 ;C组 :仅行颈动脉显露 ,不作注射。以血清MBP作为观察指标。采用骨窗成形后硬膜外打击法造成家兔脑挫裂伤模型 (右半球 )。致伤前测定血清MBP作为正常对照值。致伤后解剖、显露右颈总及颈内动脉。A组穿刺颈内动脉后注射 0 5mg/kg地塞米松稀释液 ,每 2 4h 1次 ,共 3次 ;B组同样方法注射等量生理盐水 ;C组仅作颈内动脉显露。 72h后取 3组动物血清MBP测定 ,并行统计学分析。结果 :家兔血清MBP正常值为 ( 1 61± 0 68) μg/L。致伤后 72h ,A、B、C 3组动物血清MBP平均值分别为 ( 3 2 5± 1 12 ) μg/L ,( 5 95± 2 0 5 ) μg/L和 ( 5 78± 1 75 ) μg/L ,均较正常值为高 (P <0 0 5 )。但A组和B、C 2组比较 ,血清MBP较低 (P <0 0 5 ) ,而B、C 2组比较差异不显著 (P >0 0 5 )。结论 :兔脑挫裂伤后血清MBP明显升高 ,经颈动脉注射地塞米松后可降低血清MBP ,故MBP可作为一项评估损伤程度和判断疗效的敏感指标     

电针预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后颈静脉血糖及脑水肿的影响

目的观察电针预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后颈静脉血糖和脑组织含水量的影响。方法健康雄性Wister大鼠90只,随机分为假手术组（SH组,n=30只）,脑缺血再灌注组（IR组,n=30只）,电针预处理加脑缺血再灌注组（EA组,n=30只）。采用阻断双侧颈总动脉合并全身低血压方法建立大鼠全脑缺血模型,缺血15 min实施脑血流再灌注。电针预处理组在脑缺血开始前给予电针刺激穴位预处理30 min,穴位选择＂百会＂（Du20）与＂水沟＂（Du26）穴。在缺血再灌注后2、6、24 h,从颈静脉抽取血样测定血糖含量,然后断头取血,采用干-湿重法测定大鼠脑组织含水量。结果 IR组和SH组以及EA组的脑含水量在术后2 h无明显差别。与SH组比较,IR组和EA组脑含水量在再灌注后6 h明显升高（P〈0.01）。EA组在再灌注后6 h和24 h脑含水量显著低于IR组（P〈0.01）。和SH组比较,EA组和IR组在再灌注后2 h血糖明显升高,6 h达到高峰至24 h后有所回落（P〈0.01）。EA组在再灌注2 h,6 h和24 h血糖值显著低于IR组（P〈0.01）。结论电针预处理能够显著降低脑缺血灌注大鼠血糖上升水平,可以减轻脑缺血再灌注后脑水肿,从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

创伤性脑损伤病灶中的凝血酶对脑水肿的影响

目的在大鼠局灶性脑挫裂伤模型上,研究脑挫裂伤组织中凝血酶对周围脑水肿的影响.方法选择健康成年SD大鼠60只,随机分为四组:对照组(TBI组),凝血酶(T)组,全血(WB)组和生理盐水(S)组.各组又按其存活时间分为注入后1,3,5 d三个亚组,分别于注入不同物后24,72,120 h处死,取挫裂伤区脑组织测其含水量及钠含量.结果脑外伤后第1天,T组与WB组脑含水量和脑组织钠含量较其他两组明显增高;脑外伤后第3,5天,WB组脑含水量和脑组织钠含量较其他三组明显增高.T组在伤后第1天的脑含水量和脑组织钠含量最高,在第3,5天逐渐下降;WB组在伤后第3天的脑含水量和脑组织钠含量最高.结论脑挫裂伤伤灶中的凝血酶可加重伤灶周围的脑水肿,第1天为水肿的最高峰,第3天仍可见水肿,第5天水肿明显消退.脑挫裂伤伤灶中的全血和凝血酶在注入后的第1天均可导致脑水肿,且相比较无差异,提示全血在注入后的第1夭所致的脑水肿可能与血肿中的凝血酶有关.     

电针对坐骨神经损伤大鼠血清中髓鞘碱性蛋白及其抗体的影响

目的从髓鞘修复的角度探讨电针治疗坐骨神经损伤(SNI)的机制。方法选SD大鼠随机分为5组:正常组、假手术组、模型组、模型对照组、电针组。除正常组和假手术组外,采用坐骨神经夹持损伤法建立SNI大鼠模型。电针组采用电针仪治疗,电流2 m A,频率为5 Hz,疏密波,选取的穴位为伤侧环跳、殷门、阳陵泉和承山。模型对照组造模后,与电针组治疗同时开始束缚大鼠。治疗每天1次,每次10 min,10次为1个疗程,共2个疗程。正常组、假手术组、模型组不干预。用髓鞘染色法观察脊髓及坐骨神经损伤点髓鞘的损伤及修复情况,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中髓鞘碱性蛋白(MBP)及其抗体的表达量。结果干预20次后,模型组、模型对照组白质中髓鞘松散,髓鞘化程度非常低;电针组髓鞘化程度较高,髓鞘、轴突结构完整。模型组及模型对照组血清中MBP、MBP抗体浓度明显高于正常组(P0.05),电针组明显低于模型组及模型对照组(P0.05),电针组MBP、MBP抗体表达量与正常组接靠近,稍高于正常组。结论电针可以降低MBP在血清中的表达,从而减少髓鞘、轴突崩解;电针可以降低MBP抗体在血清中的表达,减少大鼠自身免疫反应,从而减少对髓鞘的二次损伤,保护髓鞘,进而促进损伤的坐骨神经修复。     

脑组织伊文思兰含量和细胞内游离钙离子浓度与冷冻伤性脑水肿的关系

在大鼠冷冻伤性脑水肿时，观察脑组织伊文思蓝（ Ｅ Ｂ） 含量和突触体内游离钙离子浓度（［ Ｃａ２ ＋ ］ｉ）变化，及其与脑组织水份含量变化之间的关系。结果表明：脑组织水份含量变化与伊文思蓝含量和［ Ｃａ２ ＋ ］ｉ 变化之间，均呈高度正相关。冷冻伤性脑水肿具有细胞毒性脑水肿和血管源性脑水肿特性，即冷冻伤性脑水肿是一种混合性脑水肿。     

大鼠冷冻伤血管源性脑水肿模型的建立与评价

目的改进目前建立大鼠颅骨外冷冻伤血管源性脑水肿模型的方法,以获得更加理想的脑冷冻伤模型。方法运用自制的小口径液氮冷冻器作用于大鼠左侧项颅骨60s,建立脑冷冻伤模型,通过观察脑组织含水量、冷冻伤脑组织的伊文思蓝蓝染范围及病理改变,对模型进行评价。结果大鼠脑水肿明显,伊文思蓝蓝染的程度稳定,动物死亡率低。结论按此方法建立的脑冷冻伤模型,方法简单,可比性强,重复性高,是研究脑水肿较理想的模型。     

小脑延髓池注射谷氨酸单钠对猫创伤性脑水肿的影响

目的：探讨兴奋性氨基酸对创伤性脑水肿的影响及作用机理。才法：在已建立的猫创伤性脑水肿模型基础上，伤后２０ｍｉｎ小脑延髓地内注入谷氨酸单钠溶液，伤后６ｈ测定两侧大脑半球脑含水量及阳离子含量变化。结果：与对照组比较，脑含水量及Ｎａ＋，Ｃａ２＋含量明显增加；Ｋ＋，Ｍｇ２＋含量则相应降低，这种变化具有剂量依赖性。结论：谷氨酸有加重创伤性脑水肿的作用，谷氨酸使Ｎａ＋和Ｃａ２＋内流增加可能是其加重脑水肿的主要病理生理机理。     

大鼠脑出血后脑含水量变化及其与凝血酶关系的研究

目的　探讨大鼠脑出血后脑含水量变化及凝血酶与脑水肿的关系。方法　以SD大鼠为研究对象,随机将大鼠分为生理盐水组、脑出血组、凝血酶组。以自体血、凝血酶注入大鼠尾状核,建立脑出血模型,采用干湿重法观察脑水肿情况。每组每时相(4h ,12h ,2 4h ,4 8h ,72h ,7d)各6只大鼠。结果　在4h、12h、2 4h、4 8h、72h脑出血组和凝血酶组脑含水量比生理盐水组高(P <0 .0 5 ) ,而7d这个时相点各组间无明显差异(P >0 .0 5 )。脑出血组与凝血酶组脑含水量各时相间无明显差异(P >0 .0 5 )。结论　大鼠脑出血早期(4h)引起明显脑水肿,其高峰时间为2 4～4 8h ,3天后水肿开始消退,7天后逐渐趋于正常,其中凝血酶在脑水肿中起关键作用。     

去甲肾上腺素对严重烧伤大鼠脑水肿的影响

目的观察去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对严重烧伤24 h大鼠脑水肿的影响.方法健康Wistar大鼠48只,完全随机分为正常对照组,高、中、低剂量NE组各1组,烧伤组1组,烧伤前腹腔注入高、中、低剂量NE组各1组,共分为8组,每组6只,采用40%TBSAⅢ度烫伤大鼠模型,通过组织病理学观察、血脑屏障通透性观察、脑含水量测量方法,观察脑组织水肿情况.结果病理观察显示烧伤和烧伤应激时脑组织水肿明显,血脑屏障通透性增高,较正常对照组,差异明显,尤以烧伤应激时更加严重.结论 NE诱导了严重烧伤24 h大鼠脑水肿,故认为烧伤后机体的应激反应是促进脑水肿形成的一个重要因素.