白藜芦醇对LPS诱导的MC3T3-E1成骨细胞的骨保护作用

目的 探讨白藜芦醇对脂多糖(LPS)诱导的MC3T3-E1成骨细胞的骨保护作用.方法 采用CCK-8法检测白藜芦醇不同浓度下MC3T3-E1成骨细胞的细胞增殖活性,对硝基苯磷酸盐法检测白藜芦醇不同浓度下MC3T3-E1成骨细胞ALP活性.将MC3T3-E1成骨细胞分为空白组(基础培养基)、对照组(LPS 2 μg/mL)和实验组(LPS 2μg/mL+白藜芦醇20 μmol/L).采用qRT-PCR检测三组成骨相关基因Runx2、ALP、骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN)mRNA表达,Western blot法检测三组细胞沉默调节蛋白1(SIRT1)蛋白表达.结果 白藜芦醇20 μmol/L是MC3T3-E1成骨细胞最适成骨浓度(P＜0.05).与空白组比较,实验组成骨相关基因Runx2、ALP、OCN和OPN mRNA表达水平和SIRT1蛋白表达水平均降低(P＜0.05);与对照组相比,实验组成骨相关基因Runx2、ALP、OCN和OPN mRNA表达水平和SIRT1蛋白表达水平升高(P＜0.05).结论 白藜芦醇能够通过提高Runx2、ALP、OCN、OPN和SIRT1相关成骨因子的表达对LPS诱导的MC3T3-E1成骨细胞发挥骨保护作用.     

自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用

目的:探讨自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用。方法:构建PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧模型,采用米诺环素(MC,1、10、100μmol/L)或3-甲基腺嘌呤(3-MA,5mmol/L)进行干预,MTT检测细胞活力,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬泡,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ)、泛素结合蛋白P62/SQSTM l的表达。结果:氧糖剥夺处理后,1μmol/L和10μmol/L的MC能显著提高PC12细胞的存活率,而100μmol/L则会加重细胞的损伤。蛋白LC3Ⅱ和Beclin1的表达与MC的浓度呈正相关性,自噬抑制剂3-MA能够降低LC3Ⅱ和Beclin1,增加P62/SQSTM l的表达逆转MC的保护作用。结论:低剂量(1、10μmol/L)MC能够通过增加LC3Ⅱ和Beclin1的表达,诱导PC12细胞产生自噬从而保护氧糖剥夺-复糖复氧处理后的PC12细胞。     

芫花素对于MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化的影响

目的探索芫花素对于MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化的影响。方法采用芫花素1、5、10、15μmol/L处理MC3T3-E1细胞14 d,采用MTS法检测芫花素对MC3T3-E1细胞增殖的抑制作用;实时定量PCR和Western blotting法检测测芫花素对MC3T3-E1细胞中ALP、HDAC1和Runx2 m RNA和蛋白表达的影响。结果芫花素5、10、15μmol/L可以显著促进MC3T3-E1细胞中ALP、Runx2 m RNA和蛋白表达水平的提高(P0.05),HDAC1 m RNA和蛋白表达水平的下调(P0.05),表明芫花素可以促进MC3T3-E1向成骨细胞分化。结论芫花素具有促进MC3T3-E1细胞可以促进成骨细胞分化,对成骨细胞的分化过程有一定的调节作用。     

葛根素对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化及TRPM3 mRNA表达的影响

目的观察葛根素对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化及TRPM3 mRNA表达的影响。方法分别采用CCK-8法、碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色测定葛根素对MC3T3-E1细胞增殖、成骨分化、矿化作用的影响。流式细胞术检测葛根素对MC3T3-E1细胞周期及细胞内钙离子浓度的影响。RT-PCR检测葛根素对TRPM3基因m RNA表达的影响。结果 0.1、1、10μmol·L~(-1)葛根素能明显促进MC3T3-E1细胞增殖,使G1期细胞比例减少,G_2+S期细胞比例增加,其中0.1μmol·L~(-1)浓度效果最为明显;与正常对照组相比较,0.1μmol·L~(-1)葛根素组细胞的ALP活性和矿化结节面积均明显提高;0.1μmol·L~(-1)葛根素组细胞的TRPM3 m RNA表达水平和细胞内钙离子浓度明显降低。结论葛根素可促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化和矿化,可降低TRPM3 mRNA表达水平和细胞内钙离子浓度。     

异槲皮苷对MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响作用

目的研究异槲皮苷对体外培养MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化的影响作用。方法以细胞矿化结节染色鉴定MC3T3-E1成骨细胞株骨矿化功能,以MTT法测定成骨细胞的增殖率,以试剂盒法测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果在终浓度为1.08×10-6mol·L-1、1.08×10-7mol·L-1、1.08×10-8mol·L-1时,异槲皮苷能极显著促进MC3T3-E1成骨细胞增殖(P<0.01);终浓度为1.08×10-6mol·L-1时,异槲皮苷作用96h后能极显著提高细胞内ALP的活性(P<0.01)。结论一定浓度的异槲皮苷能够显著促进MC3T3-E1成骨细胞增殖和分化。     

二甲双胍调控PI3K/Akt通路对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬的影响研究

摘 要 目的：探讨二甲双胍调控磷脂酰肌醇3 激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬的影响。 方法: 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、二甲双胍低（150 mg·kg-1）、中（300 mg·kg-1）、高（500 mg·kg-1）剂量组、自噬激动剂组（雷帕霉素,5 mg·kg-1）,制备心肌缺血再灌注大鼠模型,药物处理组于建模前3 d以不同剂量二甲双胍及雷帕霉素每天灌胃治疗,模型组及假手术对照组采用等体积生理盐水灌胃,持续3 d。造模成功12 h后,处死大鼠,三苯基氯化四氮唑（TTC）染色观察各组大鼠心肌梗死面积,酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒检测血清中磷酸肌酸同工酶（CK MB）及肌钙蛋白I（cTnI）含量,免疫组织化学检测自噬相关蛋白Beclin 1、LC3、P62阳性细胞比例,蛋白免疫印迹（Western blot）检测自噬相关蛋白Beclin 1、LC3（包括LC3 Ⅰ、LC3 Ⅱ）、P62及PI3K/Akt 通路蛋白p PI3K、PI3K、Akt、p Akt表达情况。 结果: 与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积、血清中CK MB、cTnI含量、心肌组织中P62阳性细胞比例、P62、p PI3K、p Akt蛋白表达明显升高,心肌组织中Beclin 1、LC3阳性细胞比例、Beclin 1、LC3 Ⅱ蛋白表达明显降低（P＜0.05）;心肌组织中LC3 Ⅰ、PI3K、Akt蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）。与模型组比较,各药物处理组大鼠心肌梗死面积、血清中CK MB、cTnI含量、心肌组织中P62阳性细胞比例、P62、p PI3K、p Akt蛋白表达明显降低,心肌组织中Beclin 1、LC3阳性细胞比例、Beclin 1、LC3 Ⅱ蛋白表达明显升高（P＜0.05）,且二甲双胍各组呈剂量依赖性。二甲双胍低、中剂量组与自噬激动剂组比较,以上各指标差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论: 二甲双胍通过促进心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬,发挥心肌保护作用,其机制可能与下调PI3K/Akt通路有关。     

二甲双胍通过自噬缓解氨诱导的星形胶质细胞老化

目的确定二甲双胍对氨致星形胶质细胞老化的保护作用,并从自噬角度探讨其抗老化机理。方法将星形胶质细胞分为对照组、氯化铵组、二甲双胍(250、500μmol·L~(-1))组。细胞先以二甲双胍预处理30 min,随后加入3 mmol·L~(-1)氯化铵共同作用72 h。以BeyoClick~(TM) EdU-488细胞增殖检测试剂盒检测DNA合成情况;以蛋白质免疫印迹法检测自噬和老化标志蛋白的表达。结果 3 mmol·L~(-1)氯化铵明显增加自噬蛋白LC3II、Beclin1和p62的表达。在Bafilomycin存在的情况下,氨可进一步诱导LC3Ⅱ表达的上调。二甲双胍预处理进一步增加氨诱导的LC3 II上调,但抑制氨诱导的p62增加。二甲双胍预处理缓解氨诱导的星形胶质细胞增殖抑制和p16蛋白的过表达。结论二甲双胍可通过促进细胞自噬缓解氨诱导的星形胶质细胞老化。     

成骨生长肽对MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响及其可能机制

目的探讨成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)对MC3T3-E1成骨细胞的增殖的影响及其机制。方法常规培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,分为OGP高、中、低剂量组(1×10-8、1×10-10、1×10-12mol/L)以及对照组,利用MTT法检测OGP作用24 h、48 h以及72 h对MC3T3-E1成骨细胞增殖作用,利用免疫化学染色法检测成骨细胞I型胶原蛋白水平,ELISA法检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)含量。结果在24 h时,各剂量OGP对MC3T3-E1的增殖无影响;作用48、72 h,OGP 10-10mol/L以及OGP 1×10-8mol/L显著促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05),其中OGP 1×10-8mol/L 48 h促进MC3T3-E1细胞增殖作用最强。作用24 h,各组成骨细胞I型胶原蛋白IOD值差异均无统计学意义;作用48 h,OGP 1×10-8mol/L组细胞I型胶原蛋白IOD值显著高于对照组(P<0.05);作用72 h,OGP 1×10-10mol/L组以及OGP 1×10-8mol/L组细胞I型胶原蛋白IOD值均显著高于对照组(P<0.05)。作用24 h,各组成骨细胞OPN OD值差异均无统计学意义;作用48 h、72 h,OGP 1×10-10mol/L组以及OGP1×10-8mol/L组细胞OPN OD值显著高于对照组(P<0.05)。结论 OGP能够明显促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖,其可能的作用机制是增加成骨细胞I型胶原蛋白的表达以及OPN的表达,且其作用与浓度密切相关,在1×10-8mol/L时,其促成骨细胞增殖作用最强。     

雷公藤甲素诱导自噬促进人肾小管上皮HK-2细胞凋亡

目的 研究自噬在雷公藤甲素(triptolide, TP)诱导人肾近端小管上皮HK-2细胞凋亡中的作用。方法 以HK-2细胞为研究对象,CCK-8法检测细胞存活率;倒置荧光显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位MMP变化;激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内LC3荧光强度变化;Western blot检测细胞凋亡及自噬相关蛋白cleaved caspase 9、caspase 9、Bax、Bcl-2、LC3、p62和Beclin 1的表达;采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)和自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin, Rap)研究自噬对TP诱导HK-2细胞凋亡的影响。结果 TP降低HK-2细胞存活率,诱导细胞凋亡和自噬,降低MMP水平,增加胞内LC3Ⅱ荧光强度,上调Beclin 1表达,下调p62表达,升高cleaved caspase 9/caspase 9、Bax/Bcl-2和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。此外,与TP组相比,3-MA+TP组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和cleaved caspase 9/caspase 9比值降低,p...     

卡托普利对MC3T3-E1细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的观察卡托普利对MC3T3-E1细胞增殖、分化和Ⅰ型胶原基因表达水平影响。方法在MC3T3-E1细胞中加入不同浓度的卡托普利,应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、RT-PCR的方法观察卡托普利对MC3T3-E1细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。结果 10-11 mol.L-1浓度的卡托普利作用24 h能明显促进MC3T3-E1细胞增殖,作用3 d能明显促进MC3T3-E1细胞表达碱性磷酸酶。卡托普利可刺激MC3T3-E1细胞表达Ⅰ型胶原,以10-11 mol.L-1作用最强。结论卡托普利有促进MC3T3-E1细胞增殖、促进碱性磷酸酶表达和增加Ⅰ型胶原mRNA表达的作用。     

3-二甲胺基-3-苯基丙醇的制备

苯甲醛和丙二酸经Knoevenagel缩合、NaBH4-I2体系还原得3-氨基-3-苯基丙醇，再经Eschweiler-Clark反应制得3-二甲胺基-3-苯基丙醇，总收率29％。     

^3H—天麻素和^3H—天麻甙元的制备

本文介绍了一种催化氚法制备^3H-天麻素和^3H-天麻甙元的方法，所得产物放射性比活度为510。6GBq(13.8Ci)/mmol。放化纯度大于95%。     

Cyanidin-3-rutinoside increases glucose uptake by activating the PI3K/Akt pathway in 3T3-L1 adipocytes

In this study, the effect of cyanidin-3-rutinoside (C3R) on glucose uptake by 3T3-L1 adipocytes was studied. C3R significantly increased glucose uptake, which was associated with enhanced plasma membrane glucose transporter type 4 (PM-GLUT4) expression in 3T3-L1 adipocytes. The potentiating effect of C3R on glucose uptake and PM-GLUT4 expression was related to enhanced phosphorylation of insulin receptor substrate 1 (IRS-1) and Akt, as well as augmented activation of phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K) in the insulin signaling pathway. C3R induced glucose uptake was inhibited only by the PI3K inhibitor, but not by an AMPK inhibitor in 3T3-L1 adipocytes. Therefore, C3R likely up-regulates glucose uptake and PM-GLUT4 expression in 3T3-L1 adipocytes by activating the PI3K/Akt pathways.     

蚯蚓蛋白对NIH3T3细胞的促进增殖作用研究

目的探讨蚯蚓蛋白(EFP)对NIH3T3细胞的促进增殖作用。方法 MTT法测定EFP对大鼠成纤维细胞(NIH3T3)的促进增殖作用;细胞划痕法测定EFP促进NIH3T3细胞划痕创面愈合作用;测定NIH3T3细胞培养液中胶原降解产物羟脯氨酸的含量。结果 EFP具有促进NIH3T3细胞的增殖作用,促进划痕创面愈合作用,增加了NIH3T3细胞培养液中羟脯氨酸的含量。结论 EFP具有促进NIH3T3细胞增殖和划痕创面愈合作用。     

Synthesis and Activity of the Glutathione Analogue γ-(L-γ-Oxaglutamyl)-L-cysteinyl-glycine

An efficient synthesis of the backbone modified glutathione analogue γ-(L-γ-oxaglutamyl)-L-cysteinyl-glycine ( 7 ), characterized by the presence of an urethane O-CO-NH linkage replacing the γ-glutamylic CH₂CO-NH fragment is described. The new analogue has been fully characterized by ¹H- and ¹³C-NMR, and FAB-MS. Compound 7 was tested for inhibition of γ-glutamyl-transferase activity and was found to be a non-competitive inhibitor of hog kidney γ-glutamyltransferase (EC 2.3.2.2).     

3-（3-羟基-1-甲基丙氧基）-1-丁醇和3-（3-羟基丁氧基）-1-丁醇的合成及其工艺改进

目的合成3-（3-羟基-1-甲基丙氧基）-1．丁醇（Ⅰ）和3-（3-羟基丁氧基）-1-丁醇（Ⅰ），并改进工艺提高产品纯度。方法以1，3-丁二醇为起始原料，通过硫酸催化双分子缩合、三苯甲基选择性保护、分离提纯、脱保护基4步反应得到目标化合物。结果与结论化合物Ⅰ的结构经。H．NMR13C-NMR谱确证，其含量经C-C测定，大于99．5％。化合物Ⅰ的纯度为90．0％，与文献相比纯度都有相应提高。     

Synthesis and activity of the glutathione analogue γ-(L-γ-azaglutamyl)-L-cysteinyl-glycine

The backbone-modified glutathione analogue γ-(L-γ-azaglutamyl)-L-cysteinyl-glycine 7, characterized by the presence of a NHCONH urea linkage deriving from the replacement of the native Glu γ-CH₂ with the aza (NH) group, was synthesized and fully characterized by FAB-MS, ¹H- and ¹³C-NMR. Potential of 7 and its oxidized form 6 as γ-glutamyltransferase inhibitors was investigated. Both compounds 7 and 6 were found to be competitive inhibitors of hog kidney y-glutamyltransferase (EC 2.3.2.2.) by binding at the donor site: the reduced analogue is a more efficient inhibitor than glutathione of the γ-glutamyl transfer reaction. Inhibition at the acceptor site, which is also present, appears to be more complex. In particular, un-competitive inhibition is observed for compound 7. The results indicate that γ-azapeptides of type 7 may represent interesting targets in the search for stable inhibitors of γ-glutamyltransferases. © Munksgaard 1995.     

Arctigenin promotes bone formation involving PI3K/Akt/PPARγ signaling pathway

This study investigated the mechanisms through which arctigenin promotes osteogenesis. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) from ovariectomized (OVX) rats were differentiated into osteoblasts, and osteogenesis was evaluated via Alizarin Red S (ARS) staining and alkaline phosphatase (ALP) measurements in cultured BMSCs. The levels of phosphorylated AKT serine/threonine kinase 1 (p‐Akt), and peroxisome proliferator‐activated receptor gamma (PPARγ) expression were quantified by Western blot analysis. The levels of urine calcium (U‐Ca), urine phosphorus (U‐P), serum ALP, and bone mineral density (BMD) of OVX rats were assessed in vivo. The results showed that treatment with arctigenin in rat BMSCs enhanced mineralization, increased ALP activity, increased the expression of Akt and p‐Akt, and decreased PPARγ expression, consistent with its ability to promote osteoblast differentiation. Furthermore, arctigenin prevented OVX‐induced osteoporosis in rats by increasing BMD and ALP activity and inhibiting the loss of Ca and P. In contrast, treatment with LY294002, a selective inhibitor of the phosphatidylinositol 3‐kinase (PI3K), produced the opposite phenotype. These data suggest that the protective effects of arctigenin on BMSCs and OVX rat models result from the induction of osteogenesis involving the PI3K/Akt/PPARγ axis.     

PI3K-Akt-mTOR信号通路对Foxp3基因表达的影响

目的研究PI3K-Akt-mTOR信号通路对Foxp3基因表达的影响。方法将SPF级昆明系小鼠60只随机分为对照组(A)和实验组(B、C、D),B、C、D三组分别灌胃雷帕霉素0.2、0.4、0.6 mg.d-1,A组每天予以无菌水灌胃,共3周。3周后,无菌条件下心脏采血,EDTA抗凝,分离脾脏,制备单细胞悬液,采用流式细胞仪检测小鼠外周血和脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞水平(CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的百分比),RT-PCR检测小鼠脾细胞Foxp3mRNA的表达,免疫组织化学SP法染色观察小鼠脾脏中p-mTOR蛋白表达的变化,并利用计算机图像分析技术测量各实验组及对照组中p-mTOR蛋白表达的平均光密度。结果 Foxp3 mRNA在实验组(B、C、D)小鼠脾脏中表达的程度分别为(0.4853±0.0574、0.7886±0.1085、0.9639±0.2015),明显高于对照组A(0.1345±0.0271)(P<0.05);实验组(B、C、D)小鼠脾脏中p-mTOR蛋白表达的平均光密度分别为(0.2326±0.0431、0.1156±0.0223、0.0556±0.0041),明显低于对照组A(0.4223±0.0534)(P<0.05);两指标经pearson相关分析,小鼠脾脏中Foxp3mRNA的表达与p-mTOR蛋白表达呈负相关。结论抑制PI3K-Akt-mTOR信号通路会促使Foxp3的表达增强;PI3K-Akt-mTOR信号通路的激活程度与Foxp3的表达程度呈负相关。     

SYNTHESIS OF γ-L-GLUTAMYL-TAURINE*

Glu(Tau), a bioactive substance previously isolated from the protein free aqueous extract of bovine parathyroid powder, has been synthesized. The intermediate derivative Z-Glu(Tau)-OBzl was prepared in three different ways from Z-Glu-OBzl and (1) cystamine by using the mixed anhydride method followed by oxidation, (2) Tau by the active ester procedure via Z-Glu(ONp)-OBzl, (3) Tau applying mixed anhydride coupling. The protecting groups were removed by hydrogenolysis.