CIP2A在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的探讨CIP2A在宫颈癌(Cervical cancer)、宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial,CIN)及正常宫颈组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化S-P法检测50例宫颈鳞状细胞癌、34例CINⅠ、40例CINⅡ、45例CINⅢ及12例正常宫颈组织中CIP2A蛋白的表达。结果 CIP2A蛋白在宫颈癌中的表达明显高于宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织,且与宫颈癌淋巴结转移及临床分期有关,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CIP2A在宫颈鳞状细胞癌中过表达,且与宫颈癌的恶性临床病理特征密切相关,为将来发展以CIP2A为靶分子的宫颈癌临床诊断和新的治疗策略提供了新的思路。     

SUSD2基因对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制

目的 探讨sushi结构域蛋白2(sushi domain containing 2,SUSD2)基因对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法 利用GEPIA在线工具检索SUSD2基因在卵巢癌与正常卵巢组织中的表达差异及其对卵巢癌生存率的影响。选取我院病理科收集的60例卵巢癌组织和30例正常卵巢组织,采用免疫组化SP法检测SUSD2基因表达水平。采用慢病毒载体分别转染SUSD2基因干扰片段或无义链至SKOV-3细胞,并筛选出稳定表达株,分别命名为sh-SUSD2组和sh-NC组。采用CCK-8、平板克隆形成实验评估细胞增殖能力;Transwell实验评估细胞迁移、侵袭能力。通过在线工具筛选SUSD2共表达基因集,选取高度相关基因TRIM29为共表达基因,利用GEPIA在线工具检索TRIM29在卵巢癌和正常卵巢组织中的表达差异,采用免疫组化SP法检测我院病理标本两组间TRIM29基因表达水平差异。应用Western blot检测分析sh-SUSD2组和sh-NC组SKOV-3细胞中SUSD2和TRIM29蛋白表达水平。结果 GEPIA分析及我院组织标本免疫组化SP法结果均一致显示,SU...     

组蛋白去乙酰化酶1基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移及侵袭能力的影响

目的：观察组蛋白去乙酰化酶1（HDACl）基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移及侵袭能力的影响.方法：体外合成针对HDAC1的小干扰RNA （siRNA）,利用脂质体转染入人卵巢癌SKOV3细胞;通过Western blot方法检测细胞内HDAC1蛋白和乙酰化组蛋白H4（Ac-H4）的表达,利用荧光定量PCR方法检测HDAC1、尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）和尿激酶型纤溶酶原激活因子受体（uPAR）基因的mRNA表达;通过划痕实验检测细胞迁移能力,利用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果：经转染HDAC1基因siRNA后,卵巢癌SKOV3细胞HDAC1基因mRNA和蛋白表达水平均下调,细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加;SKOV3细胞迁移速度降低,穿过Transwell滤膜的细胞数量减少;SKOV3细胞内uPA和uPAR基因mRNA表达也降低.结论：HDAC1基因沉默能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力,机制可能与增加组蛋白乙酰化水平、抑制uPA和uPAR基因表达有关.     

CIP2A在喉癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)在喉癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系和对预后的影响。方法采用免疫组化方法检测61例喉癌标本(包括40例对应癌旁正常组织),9例不典型增生和8例喉乳头状瘤中CIP2A的表达,结合临床病理资料进行分析。结果 CIP2A在正常癌旁组织中低表达或不表达,在喉鳞状细胞癌中的表达比在喉乳头状瘤和不典型增生中明显增高(P<0.05)。61例喉癌中,CIP2A阴性表达11例(18.0%),弱阳性13例(21.3%),阳性25例(41.0%),强阳性12例(19.7%),其阳性程度与喉癌的年龄、性别、吸烟和嗜酒无关(P>0.05),而与肿瘤的分级分期、淋巴转移、组织分化程度和预后相关(P<0.05)。喉癌中CIP2A表达越高,其预后越差,高表达组总生存率和无瘤生存率低于低表达组(P<0.05)。结论 CIP2A参与喉癌的发生、发展过程,对评估喉癌预后有重要作用,可能成为喉癌治疗的有效分子靶标之一。     

CIP2A在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义

目的探讨CIP2A在甲状腺乳头状癌、甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及甲状腺正常组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化法检测67例甲状腺乳头状癌、26例甲状腺腺瘤、23例结节性甲状腺肿、22例甲状腺正常组织中CIP2A蛋白的表达情况。结果 CIP2A在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显高于甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及正常组织,差异有统计学意义(P0.05);CIP2A在甲状腺乳头状癌中的表达水平与淋巴结转移相关(P0.05),与甲状腺乳头状癌患者的性别、年龄、肿瘤大小及p TNM分期等无关(P0.05)。结论 CIP2A在甲状腺乳头状癌组织中过表达,且与其恶性临床病理特征紧密相关,提示CIP2A作为一个新的靶点可能为甲状腺乳头状癌的临床诊断与治疗策略提供新的方向。     

微小RNA-145对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 评估微小RNA-145(miR-145)对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 选取上皮性卵巢癌细胞株SKOV3及3AO,过表达miR-145后,qRT-PCR检测转染前后细胞株miR-145的表达,Transwell小室实验检测转染前后细胞迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法特异预测出miR-145靶基因zeb-2后,通过双荧光素酶报告实验进行验证,再敲低zeb-2后检测细胞移动能力。 结果 过表达miR-145后,SKOV3(t=10.752,P=0.000;t=5.617,P=0.005)及3AO细胞(t=10.111,P=0.001;t=21.746,P=0.000)的迁移及增殖能力均明显下降。双荧光素酶报告实验结果显示,共转染miR-145 mimic和WT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性明显低于共转染mimic control和WT 3’UTR表达载体的细胞(SKOV3:t=4.572,P=0.010;3AO:t=3.528,P=0.024),共转染miR-145mimic和MUT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性与共转染mimic control和MUT 3’UTR表达载体细胞差异无统计学意义(SKOV3:t=0.227,P=0.831;3AO:t=0.040,P=0.970)。过表达miR-145 48 h后,实时定量PCR检测结果显示,与阴性对照相比,SKOV3(t=1.490,P=0.211)和3AO细胞(t=0.114,P=0.914)中zeb-2 mRNA表达差异无统计学意义。过表达miR-145 72 h后,Western blot检测结果显示,与阴性对照相比,SKOV3(t=3.769,P=0.020)及3AO细胞(t=4.452,P=0.011)中zeb-2蛋白的表达水平明显下降。转染zeb-2 siRNA 72 h后,Western blot检测结果显示,SKOV3(t=4.660,P=0.010)和3AO细胞(t=4.594,P=0.010)中的zeb-2蛋白表达水平明显下调;Transwell小室实验检测结果显示,SKOV3(t=18.655,P=0.000;t=18.026,P=0.000)及3AO(t=5.500,P=0.005;t=8.780,P=0.001)细胞的迁移和侵袭能力明显下降。结论 miR-145可能是通过靶向抑制zeb-2来抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭能力。     

Nek2基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力的影响

目的研究RNA干扰Nek2表达对卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力的影响以及相关的分子机制。方法设计合成3条针对Nek2基因的siRNA,转染至SKOV3细胞中,采用Real-time RT-PCR和Western blot技术筛选出抑制效率最高的Nek2-siRNA序列,用Transwell方法检测转染该序列的SKOV3细胞侵袭能力的改变,并用Western blot方法检测Nek2-siRNA转染后SKOV3细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白表达的变化。结果①RNA干扰序列2对SKOV3细胞中Nek2的抑制效果最明显;②与未转染组和阴性对照组相比,转染了Nek2-siRNA的SKOV3细胞侵袭能力明显下降(P<0.01);③Western blot检测表明,与未转染组和阴性对照组相比,Nek2-siRNA转染48 h后SKOV3细胞中MMP-2、MMP-9的表达明显下调,而TIMP-1的表达明显上调(P<0.01)。结论 Nek2-siRNA能有效得沉默SKOV3细胞中Nek2的表达,通过下调MMP-2、MMP-9的表达,上调TIMP-1的表达,从而抑制SKOV3细胞的侵袭转移。     

ELK-3蛋白在肝癌组织中的表达及其对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响

目的：探讨转录因子ELK-3与肝癌患者临床病理特征的关系及ELK-3对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法：选取80例肝癌患者癌组织及49例癌旁正常组织石蜡标本、18例肝癌患者癌组织及癌旁正常组织新鲜术后标本,采用免疫组织化学法和Western blotting法检测ELK-3蛋白在肝癌及癌旁正常组织中的表达,探讨ELK-3与肝癌患者临床病理特征的关系。选取处于对数生长期的人肝癌HepG2细胞,设立对照组（control-siRNA）和ELK-3干扰组（ELK-3-siRNA）,将ELK-3 siRNA转染至HepG2细胞,通过细胞划痕实验及体外Transwell小室实验观察肝癌HepG2细胞的迁移和侵袭能力。结果：石蜡组织标本免疫组织化学染色,与癌旁正常组织比较,肝癌组织中ELK-3蛋白阳性表达率明显升高（P<0.05）,且ELK-3蛋白阳性表达率与肝癌患者肿瘤数、TNM分期、Edmondson分级和门静脉浸润有关联（P<0.05）。新鲜术后标本Western blotting法检测,与癌旁正常组织比较,18例肝癌患者肝癌组织中ELK-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与对照组比较,ELK-3-siRNA组细胞的迁移距离明显变短（P<0.05）,侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论：ELK-3在肝癌组织中的表达水平明显升高。干扰ELK-3会抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,表明ELK-3蛋白可以通过抑制肝癌细胞的迁移和侵袭对其产生影响,从而在肝癌发生发展过程中起重要作用。     

沉默WNT4基因对稳定转染PAX2基因大鼠肾小管上皮细胞迁移和侵袭能力的影响

目的：探讨沉默WNT4基因对稳定转染配对盒基因2（PAX2）大鼠肾小管上皮细胞迁移和侵袭能力的影响,阐明PAX2基因是否通过WNT4基因调控细胞生物学活性。方法：选取对数生长期的PAX2基因稳转细胞系,分为稳转组和对照组。稳转组细胞分为稳转对照组（不应用WNTsiRNA沉默）和沉默72 h组（应用WNTsiRNA沉默72h）。Western blotting法检测稳转组和对照组大鼠肾小管上皮细胞中PAX2和WNT4蛋白的相对表达量,Realtime PCR法检测稳转对照组和沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞中WNT4 mRNA相对表达量,细胞划痕实验检测稳转对照组和沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率,Transwell实验检测稳转对照组和沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的穿膜细胞数。结果：Western blotting法检测,稳转组大鼠肾小管上皮细胞中PAX2和WNT4蛋白相对表达量高于对照组（P<0.05）。Real-time PCR法检测,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞中WNT4 mRNA相对表达量低于稳转对照组（P<0.05）。细胞划痕实验10 h后,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率低于稳转对照组,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;细胞划痕实验18 h后,沉默72h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率低于稳转对照组（P>0.05）。Transwwell实验,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的穿膜细胞数低于稳转对照组（P<0.05）。结论：PAX2基因可能通过WNT4基因调控细胞的生物学活性。     

EphA2基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的 探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2（EphA2）基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 取对数生长期人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、空载组及沉默组,分别转染Lipofectamine^TM 2000、含无义随机序列（siRNA-NC-PGCsi3.0）和EphA2干扰序列（EphA2-siRNA-PGCsi3.0）质粒和脂质体的复合物。稳定转染后,Brd U法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR和Western blotting分别检测细胞中EphA2、Wnt1、β-连环蛋白（β-catenin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）mRNA及蛋白相对表达量。结果 对照组、空载组、沉默组Brd U阳性率分别为（26.48±2.79）%、（23.52±2.57）%、（13.29±2.06）%,Brd U阳性率组间比较,差异有统计学意义（F =38.560,P =0.000）。与对照组、空载组比较,沉默组Brd U阳性率降低（P <0.05）;对照组与空载组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。对照组、空载组、沉默组细胞划痕愈合率分别为（83.16±8.31）%、（82.35±7.24）%、（34.24±5.27）%,细胞划痕愈合率组间比较,差异有统计学意义（F =78.869,P =0.000）。与对照组、空载组比较,沉默组细胞划痕愈合率降低（P <0.05）;对照组与空载组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。对照组、空载组、沉默组穿膜细胞数分别为（326.74±33.15）个、（331.27±34.59）个、（126.23±26.18）个,穿膜细胞数组间比较,差异有统计学意义（F =68.997,P =0.000）,与对照组、空载组比较,沉默组穿膜细胞数减少（P <0.05）;对照组与空载组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。细胞中EphA2、Wnt1、β-catenin、E-cadherin、Vimentin mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,与对照组、空载组比较,沉默组Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA相对表达量降低（P <0.05）,E-cadherin mRNA相对表达量升高（P <0.05）。对照组、空载组、沉默组细胞中EphA2、Wnt1、β-catenin、E-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,与对照组、空载组比较,沉默组EphA2、Wnt1、β-catenin、Vimentin蛋白相对表达量降低（P <0.05）,E-cadherin蛋白相对表达量升高（P <0.05）。对照组和空载组上述指标比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 EphA2基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移和侵袭有一定的抑制作用,其机制可能与阻止Wnt/β-catenin信号通路相关。     

FBXO22对结肠癌细胞侵袭迁移的影响及相关机制

目的： 探讨结肠癌细胞FBXO22基因表达沉默后对细胞侵袭迁移的影响及其相关分子机制。方法：利用siRNA-Ctrl和siRNA-FBXO22小干扰片段转染结肠癌SW620和HCT116细胞,干扰FBXO22基因表达,Western blot 检测细胞转染效率,Transwell细胞迁移实验分析干扰FBXO22对细胞侵袭迁移的影响,Western blot检测细胞侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9和MDM2水平的变化。结果：转染FBXO22 siRNA后,结肠癌SW620和HCT116细胞FBXO22的表达量明显下降、细胞侵袭转移能力降低,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低,而MDM2蛋白表达水平上调。结论： FBXO22与结肠癌细胞侵袭迁移相关,其机制可能通过调节MMP-2和MMP-9表达而实现。     

半乳糖凝集素-3 (Gal-3)在上皮性卵巢癌中的表达及其对增殖、迁移和侵袭的影响

 目的  研究半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)在上皮性卵巢癌中的表达及对人上皮性卵巢癌细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法  分别采用real-time PCR和Western blot法检测上皮性卵巢癌中Gal-3的mRNA及蛋白表达;在上皮性卵巢癌细胞中运用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和慢病毒感染方法,分别下调和过表达Gal-3后,采用CCK-8试剂盒检测细胞的增殖,Matrigel和Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白表达水平。结果  与正常卵巢组织相比,Gal-3在上皮性卵巢癌组织中高表达,并与临床分期有关(P＜0.05)。在上皮性卵巢癌细胞中分别过表达和下调Gal-3后,癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力均相应地增强和下降,与对照组比较均有明显统计学意义(P＜0.001),Cyclin D1和MMP-9蛋白表达分别上调和下调,而E-钙黏蛋白表达分别出现下调和上调。结论  Gal-3在上皮性卵巢癌中高表达,并促进上皮性卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

胃癌中高表达的CBX7对细胞迁移、侵袭的影响

探究人胃癌组织中染色盒同源物7（CBX7）的表达及对胃癌细胞侵袭能力的影响。方法收集2013 年1 月1 日-2015 年1 月1 日间于该院普通外科行手术切除的45 例胃癌及对应癌旁组织,免疫组织化学染色观察CBX7蛋白表达,分析胃癌组织中CBX7 蛋白表达高低与肿瘤临床特征的关系。通过重组质粒在胃癌SGC-7901 细胞中过表达CBX7,经Transwell 小室实验确定CBX7 过表达对胃癌细胞迁移侵袭的作用。结果CBX7 在胃癌组织中表达较癌旁组织下降（ t=3.517, p=0.000）,胃癌组织低表达CBX7 与肿瘤淋巴结转移（χ2=5.829,p =0.022）及高TNM 分期（Ⅲ+Ⅳ期,χ2=4.465, p=0.047）相关。过表达CBX7 对SGC-7901 的迁移（t =42.040,p =0.000）及侵袭（ t=40.119,p =0.000）具有显著的削弱作用。结论CBX7 在胃癌组织中表达降低,过表达CBX7 能够通过抑制胃癌细胞迁移及侵袭发挥抗肿瘤作用。     

MicroRNA-182在宫颈癌中的表达及对肿瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响

探讨MicroRNA（miR-182）在宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变组织（CIN）和正常宫颈组织中的表达,及其对宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法应用实时聚合酶链反应（real-time PCR）技术方法检测78例宫颈癌组织、30 例CIN组织及20例正常宫颈组织中miR-182的表达,并分析其与宫颈癌临床病理特征之间的关系。在宫颈癌细胞株CaSki中,应用细胞转染技术上调miR-182的表达,应用Cell CountingKit-8（CCK-8）试剂盒检测细胞增殖能力的变化,Transwell 实验检测细胞侵袭迁移能力的变化。结果RealtimePCR结果显示miR-182 在宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变（CIN）组织与正常宫颈组织比较,差异有统计学意义﹙p <0.05﹚;两两比较,miR-182 在宫颈癌组织和CIN组织中的表达较正常宫颈组织降低﹙ p<0.05﹚,miR-182 在宫颈癌组织与CIN组织比较,差异无统计学意义（p >0.05）,宫颈癌组织中miR-182 的表达与分化程度、淋巴转移密切相关,而与年龄、肿瘤直径、浸润深度及临床分期等无关（p >0.05）。在人宫颈癌上皮细胞（CaSki）中,上调miR-182表达能够抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移﹙p <0.05﹚,但不改变细胞的增殖能力。结论miR-182在宫颈癌组织中低表达,miR-182的表达水平与分化程度和淋巴结转移有关,上调miR-182的表达能够抑制宫颈癌CaSki细胞的迁移及侵袭。     

CIP2A在鼻咽癌中的表达及其与鼻咽癌临床病理特征的关系研究

目的分析蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子（CIP2A）在鼻咽癌组织中的表达情况,并探讨其与鼻咽癌临床病理特征的关系。方法选取鼻咽癌病理标本70例,另择正常鼻咽部组织30例作为对照。采用免疫组化法检测CIP2A蛋白表达情况,采用RT-PCR法检测CIP2AmRNA表达情况。观察并比较CIP2A蛋白、mRNA在鼻咽癌及鼻咽部正常组织中的表达情况;分析CIP2AmRNA表达水平与鼻咽癌临床病理特征的关系。结果鼻咽癌组织中CIP2A蛋白、mRNA阳性表达率均高于鼻咽部正常组织（65.71%vs26.67%、81.43%vs16.67%,均P＜0.05）。CIP2AmRNA表达水平与鼻咽癌患者性别、年龄、病理类型无关（均P＞0.05）,而与表示肿瘤范围的T分期、淋巴结有无转移的N分期及综合的临床分期有关（均P＜0.05）。结论CIP2A与鼻咽癌的发生和浸润转移有关,可作为判断鼻咽癌恶性程度的一个重要生物学指标。     

BRG1对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制探讨

目的探讨沉默BRG1基因对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法体外化学合成BRG1小干扰RNA（siRNA）和Control siRNA（si—Ctr1）,脂质体介导转染乳腺癌MDA—MB-231和BT-549细胞,Transwell迁移实验和侵袭实验观察沉默BRG1基因对2种乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,明胶酶谱实验检测基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）变化,Westernblot检测基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2）及MMP-2蛋白表达。结果转染BRG1 siRNA可以有效减少乳腺癌MDA—MB-231和BT-549细胞BRG1的表达,细胞迁移和侵袭能力下降。BRG1沉默后TIMP-2表达升高,MMP-2表达下降且酶活性降低。结论BRG1沉默后通过上调TIMP-2抑制MMP-2的表达,破坏TIMP-2／MMP-2平衡,最终抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭能力。