足细胞自噬与糖尿病肾病的关系及中医药调控研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)严重的微血管并发症之一,是世界范围内终末期肾脏病(ESRD)的主要病因.通过降糖、降压、阻断肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)等方法虽可一定程度的降低血糖、血压和尿蛋白,但有时仍难以阻止DN的进展.中医药对DN的疗效肯定,但其作用机制尚未完全阐明.自噬(autophagy)是哺乳...     

保肾通络方对KK-Ay小鼠足细胞p38通路及凋亡的作用机制研究

目的探讨保肾通络方对KK-Ay小鼠肾脏足细胞p38通路及凋亡的影响,进而阐明保肾通络方防治DN的分子机制。方法 30只KK-Ay小鼠随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,另选取10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。保肾通络方组和缬沙坦组分别给予保肾通络方和缬沙坦灌胃,正常对照组和模型组予等剂量蒸馏水灌胃,实验周期为12周。结果与正常对照组相比,模型组足细胞p38通路显著激活,足细胞凋亡数目明显增加(P0.05);与模型组相比,保肾通络方组及缬沙坦组小鼠足细胞p38通路激活被抑制,足细胞凋亡数目明显减少(P0.05)。结论保肾通络方可以抑制DN小鼠足细胞p38通路激活,减轻足细胞凋亡,可能是其降低DN蛋白尿,延缓疾病进展的分子机制。     

益智仁-乌药配伍通过调控细胞自噬对糖尿病肾病小鼠足细胞的保护作用研究

目的 研究益智仁-乌药配伍通过调控细胞自噬对糖尿病肾病(DN)小鼠足细胞的保护作用.方法 C57BL/KSJ-db/db小鼠60只随机分为模型组(Mo组,n=10),益智仁-乌药低、中、高剂量组(L组、M组、H组,n=10),二甲双胍组(MF组,n=10)和缬沙坦组(V组,n=10);治疗组各组小鼠分别给予相应药物灌胃...     

中药治疗糖尿病肾病足细胞自噬机制及作用研究进展

糖尿病肾病(DKD)主要特征为持续蛋白尿及肾小球滤过率下降。足细胞是肾小球滤过屏障的最终防线,其损害和蛋白尿关系密切。自噬是通过降解错误折叠的蛋白质和受损的细胞器来维持细胞内稳态,高糖可导致足细胞自噬异常,使肾小球滤过屏障结构发生变化,从而产生蛋白尿。中药能通过调节足细胞自噬来减轻糖尿病肾损伤。研究显示,中药对DKD足细胞自噬的调节呈现出多种方式,中药单体可直接靶向足细胞或动物实验模型自噬靶点和信号通路调节自噬发挥保护肾脏作用;中药复方多属于益气活血祛瘀、补益脾肾类方剂,其调节DKD足细胞自噬的作用与"气虚浊瘀、脾肾亏虚"存在DKD自噬紊乱的假说相吻合。从中药对DKD模型足细胞自噬的综合调节作用来看,其治疗DKD可能是多靶点、多通路和多系统共同作用的结果。     

保肾通络方含药血清对高糖培养下足细胞p38通路及凋亡的作用研究

目的探讨保肾通络方含药血清对于高糖培养下足细胞p38通路及凋亡的作用。方法足细胞分为正常对照组、高糖组、保肾通络方含药血清低、中、高剂量组。CCK-8法检测各组足细胞活力,WB检测足细胞P-p38及p38蛋白表达,免疫荧光、RT-PCR检测足细胞凋亡相关蛋白caspase-3蛋白及mRNA表达,Hochest33258染色检测足细胞凋亡情况。结果与正常对照组相比,高糖组足细胞活力明显降低(P <0.05),与高糖组相比,保肾通络方含药血清组细胞活力明显升高(P <0.05)。与正常对照组相比,高糖组足细胞P-p38蛋白表达明显上调(P <0.05),与高糖组相比,保肾通络方含药血清组P-p38蛋白表达明显下调(P <0.05)。与正常对照组相比,高糖组足细胞caspase-3蛋白及mRNA表达明显上调(P <0.05),与高糖组相比,保肾通络方含药血清组足细胞caspase-3蛋白及mRNA表达明显下调(P <0.05)。与正常对照组比较,高糖组足细胞凋亡数目明显升高(P <0.05),与高糖组比较,保肾通络方含药血清组足细胞凋亡数目明显降低(...     

姜黄素对小鼠肾足细胞系(MPC5)自噬作用的影响

目的:通过研究姜黄素(curcumin)对小鼠肾足细胞系(MPC5)自噬作用的影响,探讨姜黄素对糖尿病肾病足细胞保护作用的可能机制。方法:将足细胞分为6组:正常对照组(5.5 mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、姜黄素低、中、高浓度组(1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)、雷帕霉素组(10 nmol/L)。Western blot分别检测LC3B、Beclin-1、Synaptopodin及Nephrin蛋白表达。将足细胞分为6组:正常对照组(5.5 mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、姜黄素低、中、高浓度组(1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)、LY294002组(10μmol/L)。Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路中p-mTOR、p-Akt蛋白表达水平。结果:高糖组自噬相关蛋白LC3II/I比值及Beclin-1蛋白表达明显低于正常对照组(P0.05);姜黄素组LC3B、Beclin-1等自噬标志性蛋白表达均高于高糖组(P0.05);姜黄素组足细胞功能性标志蛋白表达水平明显高于高糖组(P0.05);姜黄素组p-mTOR、p-Akt蛋白表达水平均低于高糖组(P0.05)。结论:姜黄素能明显改善高糖刺激对小鼠肾足细胞的自噬抑制作用,并且通过抑制P13K/Akt/mTOR信号途径减轻足细胞损伤。     

加味济生肾气汤对STZ诱导的糖尿病肾病大鼠足细胞及其自噬的影响＊

目的 探究加味济生肾气汤对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞和自噬作用的影响，为糖尿病肾病的中药治疗奠定一定基础。方法 将66只SD大鼠按照随机数字表法分成对照组，模型组，羟苯磺酸钙组，加味济生肾气汤低、中、高剂量组。造模后，各组分别以生理盐水，羟苯磺酸钙，1 mL/kg/d、4 mL/kg/d、10 mL/kg/d药物浓度的加味济生肾气汤处理。6周后，取大鼠肾脏，电镜观察肾脏足细胞形态；免疫组化检测Nephrin的表达；Western blot检测LC3II/I和P62的表达。结果 模型组大鼠肾小球基底膜可见显著增厚，足细胞排列较紊乱，数目减少，足突融合，在加味济生肾气汤中剂量组和高剂量组中上述症状得以缓解；与对照组比较，模型组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显降低，LC3II/I比值显著下降，P62水平显著升高。与模型组比较，加味济生肾气汤高剂量组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显升高，LC3II/I比值均显著升高，P62水平显著降低（P < 0.05）。结论 加味济生肾气汤通过提高自噬水平，减少足突发生融合，提高肾脏的过滤功能。     

左归降糖益肾方对2型糖尿病肾病小鼠足细胞凋亡的影响

目的探讨左归降糖益肾方治疗糖尿病肾病(DN)的效果及可能作用机制。方法 40只MKR小鼠随机分为MKR鼠组、模型组、中药组和西药组,每组10只,同期另设10只C57小鼠为对照组。模型组、中药组、西药组均予高脂饮食联合右肾切除建立糖尿病肾病模型,术后8周中药组给予左归降糖益肾方溶液28g/(kg·d),西药组给予格列喹酮片7.9mg/(kg·d)和贝那普利片1.3mg/(kg·d),其余各组均以等量蒸馏水灌胃,每日1次,连续8周。检测各组小鼠空腹血糖、尿微量白蛋白(Um A1b)、肾小球足细胞凋亡水平及Bcl-2 mRNA、Bax mRNA和蛋白表达水平。结果模型组可见凋亡细胞明显增多,多数为肾小球内的足细胞,中药组及西药组足细胞凋亡情况较模型组明显减少。与对照组比较,MKR鼠组和模型组小鼠空腹血糖、Um A1b和Bcl-2、Bax mRNA和蛋白表达均明显升高,并且模型组明显高于MKR鼠组(P0.01);给药后,中药组与西药组空腹血糖、Um A1b及Bax mRNA和蛋白表达均较模型组明显降低,Bcl-2mRNA和蛋白升高(P0.01),而中药组与西药组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论足细胞凋亡参与了DN的发病,左归降糖益肾方可能通过影响Bcl-2、Bax的表达以及抑制足细胞凋亡从而保护肾脏。     

电针对糖尿病肾病大鼠肾功能及肾脏自噬表达的影响

目的:观察电针对糖尿病肾病(DN)大鼠肾功能及自噬表达的影响,探讨电针治疗DN的可能机制.方法:将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,每组8只.采用高脂饮食+链脲佐菌素腹腔注射(35 mg/kg)法制备DN大鼠模型.电针组电针双侧"肾俞""足三里",每次20 min,每周5次,连续6周.分别检测治疗前后24...     

活血解毒方对HSG细胞凋亡及自噬表达的影响

目的 观察活血解毒方对HSG细胞凋亡及自噬表达的影响。方法 活血解毒方中药冻干粉干预IFN-γ+TRAIL联合诱导的HSG细胞凋亡,以白芍总苷(total glucosides of paeony, TGP)作为阳性对照组,实时荧光定量(quantitative real-time fluorescence, PCR)及蛋白印迹法(Western blotting)检测细胞凋亡内源性途径中及自噬相关蛋白与m RNA的表达、激光共聚焦检测自噬情况。结果 与空白组比较,模型组Bax、LC3B蛋白相对表达量明显升高(P <0.01),而Bcl-2蛋白相对表达量明显降低(P <0.01);与模型组比较,两治疗组Bax、LC3B蛋白相对表达量明显降低(P <0.01),Bcl-2蛋白相对表达量明显升高(P <0.01);与TGP组比较,中药组LC3B蛋白相对表达量降低(P <0.05);与空白组比较,模型组Bax mRNA相对表达量明显升高(P <0.01),Bcl-2m RNA相对表达量明显降低(P <0.01);与模型组比较,两治疗组Bax mRNA...     

紫苏叶提取物通过AMPK/mTOR自噬信号通路改善糖尿病肾病大鼠肾脏损伤研究

目的：研究紫苏叶提取物在STZ诱导的大鼠糖尿病肾病(DN)中的治疗作用及相关分子机制。方法：取60只SD大鼠以随机数字表法分为空白对照组、模型组、紫苏叶提取物低剂量组(给予紫苏叶提取物200 mg/kg)、紫苏叶提取物高剂量组(给予紫苏叶提取物400 mg/kg)、厄贝沙坦组(给予厄贝沙坦13.5 mg/kg)共5组,每组12只,各给药组大鼠按照其分组进行给药干预7周,1次/d,空白对照组和模型组给予等量生理盐水。实验结束后收集大鼠血、尿及肾脏样本进行分析检测。结果：与模型组相比,紫苏叶提取物干预的糖尿病肾病模型大鼠体质量、24 h尿量、随机血糖、肾脏指数、24 h尿蛋白及肾小球局部纤维化病变得到明显改善(P<0.01),自噬信号通路相关蛋白Sesn2、LC3表达水平明显增加,p-mTOR/mTOR比值增加。结论：紫苏叶提取物能够改善DN模型大鼠肾小球局部损伤,其作用机制可能与Sesn2/AMPK/mTOR自噬信号通路有关。     

基于肾脏足细胞自噬探讨苏木提取物对Heymann肾炎模型小鼠的肾保护作用

目的:研究苏木提取物对被动型Heymann肾炎模型小鼠的影响及对足细胞自噬反应的作用机制.方法:将实验动物随机分成5组,即正常对照组、Heymann肾炎模型组和低、中、高剂量苏木提取物组,给药21 d后检测各组小鼠24 h尿蛋白、血清白蛋白、肌酐等指标;光镜观察肾组织病理变化,免疫荧光染色法检测肾脏C5b-9沉积,蛋白...     

迷迭香酸抑制自噬诱导HepG2细胞凋亡的作用研究

目的:观察迷迭香酸(RA)对HepG2细胞凋亡和自噬的作用,探讨自噬与凋亡之间的相互作用。方法:用不同浓度迷迭香酸作用于HepG2细胞24h、48h、72h。MTT法检测细胞存活率,观察迷迭香酸对HepG2细胞核形态的影响,流式细胞术检测细胞凋亡变化,台盼蓝染色法观察细胞自噬泡情况,透射电镜观察HepG2细胞的自噬变化,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bcl-2和自噬相关蛋白(LC3)、p62的表达水平。采用迷迭香酸+3-甲基腺嘌呤(3-MA,自噬抑制剂)或迷迭香酸+雷帕霉素(RAP,自噬诱导剂)分别培养处理HepG2细胞,观察细胞增殖、细胞凋亡情况及相关蛋白表达变化。结果:与对照组相比,迷迭香酸(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)均能降低HepG2细胞的存活率,诱导HepG2细胞发生凋亡,具有量效和时效关系,减少细胞内自噬泡和自噬小体,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3、p62蛋白的表达。与迷迭香酸25μmol/L处理组相比,迷迭香酸25μmol/L+3-MA 1.0μM/mL应用可诱导HepG2细胞凋亡增加,可进一步减少细胞内自噬泡和自噬小体数目,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,进一步抑制HepG2细胞的自噬水平,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3和p62表达;迷迭香酸25μmol/L+RAP 1.0μM/mL处理HepG2细胞,增加细胞内自噬泡和自噬小体数目,升高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,可以抑制和逆转迷迭香酸诱导的细胞自噬水平下降,增加Bcl-2的表达,减少Cleaved Caspase-3和p62表达,细胞凋亡水平下降,这说明抑制或增强自噬时,迷迭香酸能改变对HepG2细胞的凋亡影响作用。结论:迷迭香酸可通过抑制自噬促进HepG2细胞的凋亡。     

糖尿病肾病足细胞损伤机制及中药干预研究进展

糖尿病肾病是糖尿病常见并发症,发病率逐年上升。作为肾小球滤过屏障的组成部分,足细胞在糖尿病肾病的发生发展过程中起着重要作用。文章从足细胞的结构功能、损伤表现出发,探讨糖尿病肾病状态下足细胞损伤的机制,并总结近年来中药在干预糖尿病肾病足细胞损伤中发挥的作用。     

糖肾宁对KK-Ay小鼠肾脏病理及足细胞凋亡的影响

目的观察糖肾宁对KK-Ay小鼠肾脏病理及足细胞凋亡的影响。方法利用KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病模型,将造模成功的KK-Ay小鼠随机分为模型组、糖肾宁组及缬沙坦组。另外选取相同数量的C57BL/6J小鼠作为正常对照组。糖肾宁组小鼠予20 g·kg~(-1)·d~(-1)的糖肾宁灌胃,缬沙坦组小鼠予10 mg·kg~(-1)·d~(-1)的缬沙坦灌胃,正常对照组及模型组予等剂量蒸馏水灌胃。灌胃时长为12周。分别在灌胃0、4、8、12周时检测24 h尿蛋白,灌胃12周后心尖取血检测血肌酐及尿素氮水平。HE、PAS染色观察各组小鼠肾脏病理改变,免疫组化及RT-PCR检测各组小鼠足细胞Caspase-3蛋白表达,TUNEL染色观察各组小鼠足细胞凋亡情况。结果①与正常对照组比较,模型组小鼠24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平明显升高(P0.05)。与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平明显降低(P0.05)。②与正常对照组比较,模型组小鼠肾小球系膜细胞增多,细胞外基质增生;与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠肾小球系膜细胞减少,细胞外基质增生减轻。③与正常对照组比较,模型组小鼠足细胞Caspase-3蛋白及mRNA表达明显上调(P0.05);与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠足细胞Caspase-3蛋白及mRNA表达明显下调(P0.05)。④与正常对照组比较,模型组小鼠足细胞凋亡数目明显升高(P0.05);与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠足细胞凋亡数目明显降低(P0.05)。结论糖肾宁能够降低糖尿病肾病蛋白尿,改善肾功能,其机制可能与其改善肾脏病理及减轻足细胞凋亡有关。     

当归芍药散对高糖诱导的足细胞损伤的保护作用研究

目的 探讨当归芍药散对高糖诱导的足细胞损伤的保护作用。方法 用含有高、中、低剂量的当归芍药散的药物血清以及厄贝沙坦含药血清对高糖诱导的足细胞损伤进行干预,观察足细胞的凋亡及其活性,并运用免疫荧光对各组Nephrin与Podocin蛋白表达进行检测,运用Western blot对自噬相关蛋白进行检测。结果 和对照组(Normal)相比高糖组(HG)的足细胞存活率、细胞凋亡情况、免疫荧光中Nephrin与Podocin蛋白表达、Western blot中LC3Ⅱ与Beclin-1的蛋白表达明显降低(P<0.01);和HG组相比当归芍药散含药血清高(HG+DS-H)、中剂量(HG+DS-M)组,足细胞在厄贝沙坦含药血清组的干预下存活率显著增加,足细胞凋亡率降低,免疫荧光中Nephrin与Podocin蛋白表达均显著增加,Western blot中LC3Ⅱ的蛋白表达与Beclin-1的蛋白表达也都显著增加(P<0.01)。结论 当归芍药散可以调节高糖诱导足细胞的损伤,但具体机制有待进一步明确。     

苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及细胞凋亡的影响

目的:研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及凋亡的影响,并分析其机制,探索二者之间潜在的关系。方法:采用MTT法和Annexin V/PI双染法检测细胞增殖活力和凋亡率;自噬双标腺病毒法(mRFP-GFP-LC3)和透射电镜法检测细胞自噬水平;Western Blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3及凋亡相关蛋白Caspase-3、cleavedCaspase-3、cleaved-Caspase-9的表达;运用自噬抑制剂(3-MA)和凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)对上述相关指标进行干预。结果:苦参碱在未加入抑制剂干预的情况下可显著抑制MCF-7细胞的增殖,提高凋亡率和自噬水平,可上调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3和凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase9的表达(P<0.05或P<0.01)。加入自噬抑制剂(3-MA)后,细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05);加入凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)后,自噬水平显著升高(P<0.05)。结论:苦参碱可诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和细胞自噬,二者之...     

槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞凋亡及诱导自噬、抑制侵袭的作用

目的 探讨槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞凋亡及诱导自噬、抑制侵袭的作用。方法 取人骨肉瘤MG-63细胞,分为二甲基亚砜组和槲皮素组,分别给予0.1%二甲基亚砜、200μg/mL槲皮素处理。培养48 h后,使用流式细胞仪检测2组细胞凋亡情况,运用腺病毒双荧光载体mRFP-GFP-LC3转染技术检测2组人骨肉瘤MG-63细胞自噬情况。另取人骨肉瘤MG-63细胞,设空白对照组,采用Transwell侵袭小室试验检测不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)槲皮素处理后的细胞侵袭能力。结果 与二甲基亚砜组比较,槲皮素组MG-63细胞早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率均明显增高(P均<0.05),MG-63活细胞率明显降低(P<0.05),MG-63细胞自噬水平明显上调(P<0.05)。25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L槲皮素处理后的穿膜细胞数分别为空白对照组的(86.48±5.02)%,(70.02±4.93)%和(42.87±4.62)%,呈浓度依赖性降低,两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 槲皮素可诱导骨肉瘤MG-...