长链非编码RNA ENSMUST00000127391对小鼠肾小球系膜细胞增殖和纤维化的影响

目的：探究长链非编码RNA ENSMUST00000127391（lncRNA 127391）在高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞（mice mesangial cell,MMC）中的表达及功能。方法：在成功构建重组质粒pCDH?lncRNA 127391的基础上,将重组质粒pCDH?lncRNA 127391和对照质粒pCDH分别转染MMC细胞,通过RT?qPCR法检测lncRNA 127391表达水平。蛋白质免疫印迹法检测增殖和纤维化相关蛋白水平;CCK8法检测lncRNA 127391对MMC细胞增殖的影响;流式细胞术检测对细胞凋亡的影响。结果：过表达lncRNA 127391的MMC细胞构建成功。CCK8结果显示,lncRNA 127391表达增加后,MMC细胞增殖速度减慢;蛋白质免疫印迹结果表明过表达lncRNA 127391后,MMC细胞中细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、纤维连接蛋白（FN）和Ⅰ型胶原（Col?1）蛋白表达水平均下降;流式分析结果显示,过表达lncRNA127391后,MMC细胞凋亡数增加。两两比较,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论：lncRNA 127391可以抑制高糖培养的MMC细胞增殖和纤维化。     

B细胞淋巴瘤因子6高表达对大鼠肝细胞凋亡的抑制作用

[摘要] 目的：克隆大鼠B细胞淋巴瘤因子6（B-cell lymphoma 6 protein,Bcl6）基因,构建绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-Bcl6,初步探讨大鼠Bcl6转录因子在大鼠肝细胞中的生物学作用。方法：首先提取大鼠肝脏总RNA,经反转录和巢式PCR扩增Bcl6编码区的CDS序列后,通过基因重组的方法构建并鉴定pEGFP-Bcl6重组质粒;然后利用脂质体转染法将重组质粒导入大鼠肝细胞BRL-3A中,利用实时定量PCR和蛋白印迹的方法检测其表达;最后应用流式细胞术分析转染融合表达质粒后肝细胞的凋亡及应用MTT法检测肝细胞的增殖情况。结果: 通过PCR法和测序法鉴定重组质粒pEGFP-Bcl6构建成功,通过实时定量PCR法和蛋白印迹法鉴定重组质粒瞬转成功,通过流式细胞术证实Bcl6具有抑制肝细胞凋亡的功能,通过MTT法证实Bcl6具有促进肝细胞增殖的功能。结论:成功克隆了大鼠Bcl6基因,构建了Bcl6绿色荧光蛋白表达载体,在大鼠肝细胞中初步证明Bcl6具有促进肝细胞增殖和抑制凋亡的功能。     

过表达羧肽酶E对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞增殖和凋亡的影响

目的：探究羧肽酶E（carboxypeptidase E,CPE）对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）增殖、周期及凋亡的影响。方法：PCR法扩增CPE基因片段,将其插入表达载体 pcDNA3.1质粒中以构建重组质粒pcDNA3.1?CPE。将质粒转染GMC细胞,通过蛋白质免疫印迹法检测CPE标签蛋白、增殖标志物细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）以及凋亡标记物Cleaved?caspase?3的表达;采用平板克隆、Cell Counting Kit?8（CCK?8）法以及流式分析法检测过表达CPE对高糖培养的GMC细胞增殖、细胞周期以及凋亡的影响。结果：成功构建CPE过表达的GMC细胞。平板克隆以及CCK?8实验表明,过表达CPE可以抑制GMC细胞的增殖能力。流式细胞学检测表明,与对照组相比,CPE过表达明显促进了细胞凋亡;细胞周期中G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少,差异有统计学意义（P < 0.01）。结论：过表达CPE可以抑制高糖培养的小鼠GMC细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

含人SOX18基因真核表达载体的构建及其重组蛋白诱导血管内皮细胞增殖的研究

目的：构建含人SOX（SRY related high mobility group box）18的重组表达质粒,并研究其对血管内皮细胞增殖能力的影响。方法：通过RT?PCR技术从血管内皮细胞中扩增SOX18编码基因序列,将其插入真核表达载体pSecTag?2B构建重组表达质粒pST?SOX18,分别转染人胚肾上皮细胞HEK293T和血管内皮细胞,通过免疫印迹技术检测SOX18的蛋白表达情况;进一步通过CCK?8实验检测SOX18对血管内皮细胞增殖能力的影响。结果：成功构建重组质粒pST?SOX18,重组蛋白能够在HEK293T和血管内皮细胞中表达;SOX18的过表达促使血管内皮细胞合成血管内皮生长因子（VEGF）,促进血管内皮细胞增殖。结论：SOX18重组蛋白能够促进血管内皮细胞增殖。     

人源极光激酶A在毕赤酵母和MCF-7细胞中的表达及纯化

目的：构建人源极光激酶A（AURKA）真核表达载体,检测其在毕赤酵母X33和MCF-7细胞中的表达及纯化。方法：将双酶切PCR扩增的目的基因与真核表达载体连接,构建重组质粒。电转法转染重组质粒,筛选后采用SDS-PAGE和Western blotting法检测AURKA蛋白的表达,Ni-NTA柱法纯化表达的蛋白;放射自显影法检测AURKA的生物活性;细胞计数法检测转染重组质粒后MCF-7细胞增殖情况。结果：2种重组质粒经PCR均扩增出1212 bp目的基因,表明真核表达载体构建成功。重组AURKA蛋白相对分子质量约为50000,且可磷酸化其底物组蛋白H3,表明重组AURKA具有活性。与转染空质粒和野生型MCF-7细胞比较,转染AURKA 24 和48 h后MCF-7活细胞数量明显增加。结论：AURKA在毕赤酵母和MCF-7细胞中成功表达和纯化,且其过表达可促进细胞增殖。     

pCMV －Myc －MyD88重组质粒构建及其在293 T细胞中的表达

目的：构建髓样分化因子88（MyD88）真核表达质粒,并检测其在293T细胞中的表达,为进一步研究应用奠定实验基础。方法从大鼠肝星状细胞株T－6中提取总RNA,应用PCR技术扩增MyD88基因编码序列片段,克隆入真核表达载体pCMV－Myc质粒中,对重组质粒经酶切和测序鉴定后,以钙离子转染法转染至293T细胞中,采用Western blot的方法检测MyD88蛋白的表达,以观察转染及表达效果。结果酶切及测序结果证明pCMV－Myc－MyD88重组质粒的DNA序列正确,将其转染至293T细胞后,MyD88蛋白表达明显增加。结论pCMV－Myc－MyD88重组质粒构建成功,并能在293T细胞中表达,为进一步研究针对MyD88分子的疾病治疗及其生物学功能奠定了实验基础。     

肌细胞增强因子2A基因真核表达质粒的构建及对乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的影响

目的：构建肌细胞增强因子2A（MEF2A）基因真核表达重组质粒,并转染乳腺癌细胞株观察其对细胞增殖能力的影响。方法：实时定量聚合酶链反应（RT-QPCR）检测MCF-7、BT474及MDA-MB-231等3种乳腺癌细胞中MEF2A mRNA的表达。采用全基因合成法合成MEF2A编码区序列,克隆入pcDNA3.1（＋）-HA载体,构建重组质粒pcDNA3.1-MEF2A-HA。重组质粒转染乳腺癌细胞,采用Western blot及RT-QPCR检测MEF2A的表达效率。细胞计数实验检测细胞的增殖能力。结果：3株乳腺癌细胞中,MDA-MB-231细胞中MEF2A mRNA表达水平较低;其基因测序结果显示与预期片段大小一致,表明MEF2A重组质粒构建成功。将MEF2A重组质粒瞬时转染MDA-MB-231细胞后,MEF2A表达质粒组与对照组比较,其MEF2A表达升高,细胞增殖能力增强。结论：成功构建MEF2A过表达重组质粒,在MDA-MB-231中过表达MEF2A促进细胞的增殖能力。     

人COX1蛋白真核表达载体的构建及其生物信息学分析

目的：构建表达重组环氧合酶1（COX1）真核表达载体，验证其体外能够催化底物合成前列腺素E1（PGE1），以寻找高效获得PGE1的方法。方法：提取人微血管内皮细胞（HMECs）总RNA，逆转录成cDNA，以cDNA为模板，PCR扩增人COX1基因，经双酶切后与真核表达载体pCMV6连接，构建重组pCMV6-COX1真核表达质粒。通过生物信息学在线工具分析COX1蛋白的疏水性、跨膜区域、信号肽、二级结构和三级结构。采用脂质体将重组质粒转染至HEK-293F细胞中，将细胞随机分为对照组（未转染重组质粒的HEK-293F细胞）、转染重组质粒2 d组和转染重组质粒5 d组，分别收集细胞和细胞培养上清，Western blotting法检测COX1蛋白表达水平。比较真核表达的COX1蛋白与羊精囊提取法制备的粗酶混合物催化底物二高-γ-亚麻酸合成PGE1的酶活性。结果：经PCR、双酶切和测序鉴定，成功构建pCMV6-COX1重组载体，目的基因长度约为1800 bp。生物信息学分析，COX1蛋白为水溶性蛋白，1~53位氨基酸为信号肽，34~53位氨基酸处于跨膜区域，有36个丝氨酸磷酸化位点、14个苏氨酸磷酸化位点和9个酪氨酸磷酸化位点。二级结构预测，不规则卷曲所占比例为46.20%，其次为α螺旋占41.03%。延伸链和β-转角分别占10.18%和2.58%。Western blotting法检测，重组质粒成功转染至HEK-293F细胞中，与转染重组质粒2 d组比较，转染重组质粒5 d组细胞培养上清中COX1蛋白表达水平明显升高（P<0.05），蛋白相对分子质量为70000。当底物浓度为1%时，COX1蛋白催化底物合成PGE1的含量为（50.01±1.37） ng·L^-1，其活性相当于5个羊精囊制备的粗酶活性的（90.30±0.06）%。结论：通过基因工程技术构建和表达的COX1蛋白能够催化底物合成PGE1并满足临床要求。     

卡波氏肉瘤病毒K9基因重组慢病毒表达载体的构建及其编码蛋白功能初探

目的: 构建卡波氏肉瘤病毒（Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV）K9基因的重组慢病毒载体,并探究K9基因编码的病毒干扰素调节因子1（viral IFN regulatory factor 1,vIRF1）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）增殖的影响。方法: 根据K9基因的核酸序列设计聚合酶链式反应（PCR）的上下游引物。以实验室已有的真核表达载体pCI-K9-Flag为模板,PCR扩增K9基因序列。PCR产物经限制性内切酶双酶切后插入慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-Izs Green(简称pHAGE）中,构建重组慢病毒质粒pHAGE-K9。将pHAGE-K9质粒与包膜质粒pMD2.G、包装质粒psPAX2共同转染人胚肾上皮细胞（293 T细胞）,包装K9基因的重组慢病毒。采用病毒梯度稀释法测定病毒滴度。慢病毒感染HUVECs后,观察绿色荧光蛋白(GFP）的表达,蛋白质印迹法检测HUVECs中K9编码的vIRF1蛋白的表达。采用流式分选技术获得稳定表达vIRF1蛋白的HUVECs。运用细胞增殖实验检测vIRF1对HUVECs增殖的影响。结果： 核酸序列测定结果表明,重组慢病毒质粒pHAGE K9构建成功。蛋白质印迹结果显示,K9基因重组慢病毒感染HUVECs后其编码蛋白成功表达。细胞增殖实验结果表明,稳定表达vIRF1的HUVECs增殖能力显著强于对照组。结论： KSHV K9基因编码的vIRF1能够促进HUVECs的增殖。     

过度表达G蛋白调节子16促进大鼠胶质瘤C6细胞增殖

目的 探讨G蛋白调节子16（RGS16）对大鼠胶质瘤C6细胞的生物学特性的影响。方法 利用脂质体介导法将RGS16基因导入C6细胞中，在倒置显微镜下观察细胞形态变化和贴壁情况；^13H-TdR法检测C6细胞在转染不同梯度pCMV5-RGS16和pCMV5质粒后的增殖情况；免疫细胞化学法检测转染前后PGS16蛋白的表达情况；流式细胞仪检测转染pCMV5-RGS16和pCMV5质粒36h后细胞周期变化和细胞是否有凋亡发生。结果 转染pCMV5-RGS16质粒24h后30％细胞贴壁性降低，突起收缩，细胞变圆；RGS16蛋白表达阳性；^3H-TdR法检测显示C6细胞增殖速度与转染pCMV5-RGS16的量呈正相关；细胞周期结果显示G1期细胞百分数减少10％，而S期细胞百分数增多14％；未发现RGS16与凋亡直接关系。结论 RGS16可能促进C6细胞的增殖。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …