淫羊藿不同提取物的体外抑菌实验研究

摘 要 目的：考察淫羊藿不同提取物的体外抑菌作用。方法: 采用倍比稀释法考察淫羊藿不同提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和枯草芽孢杆菌的抑菌作用,测定抑菌圈大小、最小抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。结果: 淫羊藿提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和枯草芽孢氏菌均呈现不同程度的抑菌能力,水提物的抑菌能力强于醇提物（P<0.05或P<0.01）;水提物经过不同温度热处理后对各菌株的抑菌能力无显著差异（P>0.05）,醇提物经高温处理后抑菌能力呈下降趋势,温度越高抑菌能力越弱（P<0.05）。淫羊藿水提物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的MIC和MBC相同,分别为7.81,1.95,31.25 mg·mL^-1,白色念珠菌的MIC和MBC分别为15.63,31.25 mg·mL^-1;淫羊藿醇提物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的MIC和MBC相同,分别为15.63,3.91,62.5,62.5  mg·mL^-1。结论:淫羊藿提取物具有明显的抑菌效果,其中水提物优于醇提物。淫羊藿不同化学成分的极性会对抑菌效果产生影响。     

蒙药巴特日七味丸不同提取部位体外抗菌活性筛选和急性毒性研究

目的 考察蒙成药巴特日七味丸不同提取部位对临床常见7种致病菌的体外抗菌活性,并对筛选出的有效活性部位进行急性毒性评价。方法 采用微孔板TTC法和微孔板比浊法测定吸光度（OD）值和最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）,观察巴特日七味丸不同提取部位的抗菌作用,并初步确定其有效活性部位;以巴特日七味丸水提物为对照,采用小鼠半数致死量（half lethal dose,LD₅₀）和最大耐受量试验对巴特日七味丸有效活性部位进行急性毒性评价。结果 巴特日七味丸6种提取部位,包括石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、乙酸乙酯-正丁醇和水残余等部位均具有一定的抗菌活性,其中乙酸乙酯-正丁醇部位具有较强的抗菌活性,并对金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌的抑菌作用较强,MIC分别为0.04,0.08 mg·mL^-1。巴特日七味丸水提物和有效活性部位均没有出现LD₅₀值;最大耐受量相当于临床成人（体质量70 kg）安全用药剂量的120倍左右,均未出现急性毒性现象。结论 巴特日七味丸不同提取部位均具有抗菌活性,其乙酸乙酯-正丁醇部位活性较强,并且急性毒性较低,其作用机制有待于进一步研究。     

白及花与块茎石油醚部位成分分析及其生物活性的比较研究

目的 分析白及花和块茎石油醚部位成分及生物活性。方法 以石油醚（60~90℃）为提取溶剂,采用索氏提取法提取白及花和块茎脂溶性成分,采用GC-MS分析其化学成分,通过滤纸片扩散法、CCK8法和分光光度法分别对其进行抑菌、抗肿瘤和α-淀粉酶抑制作用研究,通过检测DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基的清除率考察其体外抗氧化活性。结果 白及花和块茎中共鉴定出20种石油醚部位成分,其中花11种,块茎19种,共有成分10种,α-乙酰基-γ-丁内酯（15.20%,21.84%）和苄醇（12.07%,24.10%）为主要成分。白及花中石油醚部位成分的抑菌活性高于块茎,对枯草芽孢杆菌效果最好,最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为0.41,0.51 g·L^-1和0.53,0.66 g·L^-1。当质量浓度为5.0 mg·mL^-1时,白及块茎石油醚部位成分对A₅₄₉细胞的抑制率为29.451%,高于花中石油醚部位成分27.621%的抑制率,前者对α-淀粉酶的IC₅₀为1.819 mg·mL^-1,后者的IC₅₀为2.028 mg·mL^-1。两者对DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基的清除率均随质量浓度的增大而增大,当浓度达到1.0 mg·mL^-1时,前者对ABTS自由基和羟自由基的清除率分别为99.67%和92.22%,高于后者90.07%和38.11%的清除率,后者对DPPH自由基的清除率为31.23%,高于前者18.94%的清除率,两者均低于Vc的清除率。结论 白及花和块茎中石油醚部位成分主要为酯类和醇类,2种石油醚部位成分均具有一定的生物活性,具有潜在的药用价值,并可为白及花的资源开发提供参考。     

枇芩颗粒剂体外抑制金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的作用

目的 研究枇芩颗粒剂对金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的体外抑制作用。方法 采用滤纸片或牛津杯的琼脂扩散法观察枇芩颗粒剂对金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的体外抑菌作用,同时定量测定枇芩颗粒剂对这2种菌的最低抑菌浓度。结果 枇芩颗粒剂对金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌均有明显抑菌作用,对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度为0.05 g·mL^-1,对痤疮丙酸杆菌最低抑菌浓度为0.10 g·mL^-1。结论 枇芩颗粒剂对金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌均具有明显的抑制作用。     

刘寄奴醇提物抗局灶性脑缺血有效部位筛选研究

目的 筛选刘寄奴醇提物抗局灶性脑缺血的有效部位。方法 将ICR小鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组（10 mg·kg^-1）、刘寄奴醇提物石油醚萃取部位（部位Ⅰ）、刘寄奴醇提物乙酸乙酯萃取部位（部位Ⅱ）、刘寄奴醇提物正丁醇萃取部位（部位Ⅲ）和刘寄奴醇提物剩余水层（部位Ⅳ）,其中部位Ⅰ~Ⅳ各设3.25,6.50 g·kg^-1 2个剂量组,于造模前连续给药7 d。采用改进的Zea Longa方法建立局灶性脑缺血动物模型。造模6 h后,测定小鼠神经功能评分、脑指数、脑含水量、脑梗死体积及脑组织病理形态学等指标;分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测定刘寄奴醇提物有效部位3.25,6.50 g·kg^-1剂量组脑组织中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量。结果 与模型组相比,部位Ⅰ、部位Ⅱ和部位Ⅲ均能在不同程度上改善局灶性脑缺血引起的脑水肿,其中部位Ⅲ能显著降低小鼠神经功能评分、脑指数、脑含水量、脑梗死体积（P<0.01或P<0.05）。病理组织切片显示,与模型组相比,部位Ⅲ能明显改善脑组织神经元核溶解程度、核体不规则程度（P<0.01）。与模型组相比,部位Ⅲ 3.25,6.50 g·kg^-1剂量组均能显著升高小鼠脑组织中超氧化物歧化酶活性（P<0.01,P<0.05）,降低丙二醛含量（P<0.05）。结论 初步筛选出刘寄奴醇提物正丁醇萃取部位（部位Ⅲ）为刘寄奴抗局灶性脑缺血的有效部位,其作用机制可能与其抗氧化损伤有关。     

仙鹤草水提液对胰腺癌细胞BXPC-3和PANC-1增殖的抑制作用研究

目的 研究仙鹤草水提液对胰腺癌细胞BXPC-3和PANC-1增殖的抑制作用。方法 SRB法检测不同浓度仙鹤草水提液对胰腺癌细胞BXPC-3（仙鹤草水提液浓度：0.15,0.3,0.6,1.2,2.4,4.8 mg·mL^-1）和PANC-1（仙鹤草水提液浓度：0.125,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0 mg·mL^-1）分别作用24,48,72 h后的增殖抑制率;流式细胞仪检测0.5,1,2 mg·mL^-1仙鹤草水提液对胰腺癌细胞BXPC-3周期分布的影响;Annexin V-FITC/PI双染法检测1,2,4,8 mg·mL^-1仙鹤草水提液对BXPC-3细胞凋亡的影响。结果 仙鹤草水提液可显著抑制BXPC-3和PANC-1细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性;仙鹤草水提液可显著增加BXPC-3细胞停滞在G1期的百分率,促进BXPC-3细胞的早期凋亡和晚期凋亡。结论 仙鹤草水提液可通过或部分通过诱导胰腺癌细胞BXPC-3和PANC-1的凋亡,抑制胰腺癌细胞的增殖,发挥抗胰腺癌作用。     

分心木镇静催眠作用探究

目的：研究分心木水提物和醇提物的中枢抑制作用,为该药后续的保健品开发、镇静催眠的临床应用提供实验依据。方法：观察分心木水提物和醇提物对30 mg·kg^-1和45 mg·kg^-1浓度的戊巴比妥钠的协同作用,探究分心木水提物和醇提物与戊巴比妥钠合用对小鼠睡眠发生率、睡眠时间和自主活动的影响。结果：分心木醇提物能显著缩短睡眠潜伏时间,有协同戊巴比妥钠的作用,能提高睡眠发生率,大幅度延长睡眠时间。分心木水提物有部分镇静催眠趋势,但无统计学意义。结论：分心木具有一定的镇静催眠作用,具有开发相应保健品的价值。     

HPLC测定盐酸达泊西汀片中的异构体

目的 建立盐酸达泊西汀片剂中异构体的HPLC检测方法。方法 采用DAICEL CHIRALPAK OZ-H色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,柱温：40℃,检测波长：293 nm,流速：1.0 mL·min^-1,流动相：正己烷-异丙醇-二乙胺（80：20：0.05）。结果 盐酸达泊西汀及其异构体在0.01~0.50 mg·mL^-1内具有良好的线性关系（r=0.999 9）,盐酸达泊西汀定量限为0.002 mg·mL^-1（相当于0.02%）,最低检测限为0.001 mg·mL^-1（相当于0.01%）;异构体定量限浓度为0.001 mg·mL^-1（相当于0.01%）,最低检测限为0.000 5 mg·mL^-1（相当于0.005%）。结论 该方法操作简便,结果准确,可用于盐酸达泊西汀片剂中异构体的含量测定。     

补肝散不同分离组份抗抑郁活性筛选

目的 对补肝散醇提物不同分离组份的抗抑郁活性进行筛选。方法 采用慢性不可预知温和应激（chronicunpredictable mild stress,CUMS）对小鼠进行为期8周的造模,造模4周后,分别以盐酸帕罗西汀（paroxetine hydrochloride,PX）、补肝散醇提物、石油醚（A）、二氯甲烷（B）、乙酸乙酯（C）及正丁醇（D）4个分离组份进行为期4周的灌胃治疗,考察各组小鼠的行为学及脑内神经递质含量的变化。结果 连续给药4周（造模8周）后,PX组（0.026 g·kg^-1）、补肝散醇提物组（1.92 g·kg^-1）及其分离组份C（0.232 g·kg^-1）、D（1.04 g·kg^-1）和B（0.160 g·kg^-1）组均能明显逆转模型小鼠的抑郁表现如糖水偏好率下降、强迫游泳不动时间延长等抑郁症状。能不同程度地增加其脑内额叶皮质中5-羟色胺和多巴胺的含量,其中PX、醇提物及分离组份C的作用更为明显（与模型组比较,P<0.05或<0.01）。结论 补肝散醇提物的抗抑郁活性部位主要集中于乙酸乙酯和正丁醇分离组份,其次是二氯甲烷分离组份。     

注射用奥扎格雷钠细菌内毒素检查方法研究

目的：探讨注射用奥扎格雷钠细菌内毒素检查方法替代家兔热原检查法的可行性。方法：采用2个不同厂家的鲎试剂,用凝胶法进行干扰预试验及干扰试验;用灵敏度为0.5EU·mL^-1鲎试剂和0.8mg·mL-1的奥扎格雷钠溶液进行细菌内毒素检查。结果：注射用奥扎格雷钠稀释到0.8mg·mL^-1时,对鲎试剂与内毒素的凝集反应无干扰作用;样品的细菌内毒素限值确定为0.625EU·mL^-1。结论：注射用奥扎格雷钠可用细菌内毒素检查法替代原有的家兔热原检查法。     

青天葵甲醇提取物通过ERK信号通路诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡

目的 研究青天葵甲醇提取物（Nervilia fordii methanol extracts，NFME）体外对鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡作用及其作用机制。方法 MTT法检测不同浓度（0，0.25，0.5，1，2，3 mg·mL^-1）的NFME处理CNE-2细胞24，48 h对CNE-2细胞生长抑制率的影响；克隆原形成试验观察NFME对CNE-2细胞克隆形成率的影响；Hoechst凋亡染色观察NFME对CNE-2细胞凋亡的影响；Western blotting测定NFME作用下caspase-3、ERK1/2和c-Raf蛋白磷酸化水平的变化。结果 MTT试验结果显示，与对照组相比，在给药24 h时0.5 mg·mL^-1的NFME就能抑制CNE-2细胞的增殖（P<0.05），抑制率为12.64%。而在给药48 h时0.25 mg·mL^-1的NFME就能抑制CNE-2细胞增殖（P<0.05），抑制率为22.43%；克隆原形成能力试验表明，0.25 mg·mL^-1的NFME能够抑制CNE-2细胞集落的形成（P<0.05）；Hoechst33258凋亡染色观察到0.25 mg·mL^-1的NFME作用24 h能够观察到CNE-2细胞发生凋亡（P<0.05），凋亡率达到17.91%；Western blotting结果表明0.5 mg·mL^-1的NFME能使CNE-2细胞中caspase-3发生剪切，随着给药浓度增加其剪切作用越明显（P<0.01），同时0.5 mg·mL^-1的NFME能够降低CNE-2细胞中ERK1/2和c-Raf蛋白的磷酸化水平（P<0.05）。结论 青天葵甲醇提取物能抑制鼻咽癌CNE-2细胞的增殖并诱导其发生凋亡，其作用机制可能与抑制ERK信号通路有关。     

金荞麦提取物体外抗流感病毒作用研究

目的 研究金荞麦提取物的体外抗流感病毒作用。方法 采用血凝试验,考察金荞麦提取物对鸡胚内流感病毒增殖的抑制作用;采用MTT法检测细胞活性,考察金荞麦提取物对流感感染细胞活性的影响。结果 与病毒对照组比较,金荞麦提取物高剂量组（10 mg·mL^-1）、中剂量组（5 mg·mL^-1）均能显著降低鸡胚尿囊液的血凝滴度（P<0.01）,而低剂量组（2.5 mg·mL^-1）则无显著性差异;在0.63~2.50 mg·mL^-1浓度内,金荞麦提取物各剂量组流感感染细胞的活性均明显高于病毒对照组,组间均存在显著性差异（P<0.01）,且病毒抑制率随着药物浓度的增大而增高,呈一定的量效关系,其中金荞麦提取物最大无毒浓度（2.5 mg·mL^-1）对流感病毒的直接抑制率达66.12%。结论 金荞麦提取物具有一定的体外抗流感病毒作用。     

青天葵甲醇提取物通过ERK通路抑制人肝癌细胞增殖并诱导其凋亡

目的 研究青天葵甲醇提取物（Nervilia fordii methanol extracts，NFME）体外对人肝癌SMMC7721和HepG2细胞的凋亡作用及其作用机制。方法 紫外-可见分光光度法测定青天葵中总黄酮和总多酚的含量；MTT法检测不同浓度（0，0.25，0.5，1，1.5，2 mg·mL^-1）NFME处理24 h对SMMC7721、HepG2和LO2细胞生长抑制率的影响；克隆形成试验观察NFME对SMMC7721和HepG2细胞克隆形成率的影响；Hoechst凋亡染色观察NFME对SMMC7721细胞凋亡的影响；流式细胞术检测NFME对SMMC7721细胞凋亡和细胞周期的影响；Western blotting测试NFME作用下caspase3、PARP、ERK1/2和c-Raf蛋白磷酸化水平的变化。结果 NFME中总多酚含量为（4.25±0.46）mg·g^-1，总黄酮含量为（4.72±0.13）mg·g^-1；MTT试验结果显示，与对照组相比，在给药24 h时0.5 mg·mL^-1的NFME就能抑制SMMC7721和HepG2细胞的增殖（P<0.001）；克隆形成试验表明，0.125 mg·mL^-1的NFME能够抑制SMMC7721和HepG2细胞集落的形成（P<0.001）；Hoechst凋亡染色观察到0.25 mg·mL^-1的NFME作用24 h能够观察到SMMC7721细胞发生凋亡（P<0.05）；流式细胞试验结果证实0.5 mg·mL^-1的NFME能够诱导SMMC7721细胞的凋亡（P<0.01），凋亡率14.43%，阻滞细胞周期于S期；Western blotting结果表明NFME能使SMMC7721细胞中caspase3发生剪切，随着给药浓度增加其剪切作用越明显（P<0.05），活化的caspase3剪切下游PARP的表达；同时NFME能够降低SMMC7721细胞中ERK1/2和c-Raf蛋白的磷酸化水平（P<0.05）。结论 NFME能抑制人肝癌SMMC7721和HepG2细胞的活性并诱导其发生凋亡，其作用机制可能与抑制ERK信号通路从而诱导细胞凋亡有关。     

灰树花多糖体外抑菌及抗氧化活性研究

目的 研究灰树花多糖的抑菌及抗氧化活性。方法 采用紫外分光光度法,以D-无水葡萄糖为对照品,测定灰树花提取物中多糖含量;采用纸片扩散法,以头孢哌酮为阳性对照,测量不同浓度灰树花多糖提取物金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径;采用DPPH法和T-AOC试剂盒法,以清除率为指标,研究灰树花多糖的抗氧化活性。结果 灰树花提取物中多糖含量为53.49%;灰树花提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均有一定的抑菌作用,抑菌圈直径分别为13,11,10 mm;灰树花多糖浓度为0.05~10 mg·mL^-1时,对DPPH自由基具有一定的清除能力,当浓度高于0.5 mg·mL^-1时,开始显示出总抗氧化能力。结论 灰树花多糖具有一定的抑菌和抗氧化能力。     

HPLC测定人血浆中吡非尼酮浓度的不确定度评定

目的 建立HPLC测定人血浆中吡非尼酮浓度的不确定度分析方法。方法 分析HPLC测定吡非尼酮浓度的全过程,分析测量不确定度的来源和大小,量化各个测量不确定度分量,合成标准测量不确定度并报告扩展测量不确定度。结果 人血浆中低浓度（0.511 0 mg·mL^-1）、中浓度（2.038 mg·mL^-1）和高浓度（19.95 mg·mL^-1）的扩展不确定度分别为0.105 1,0.137 6,1.069 mg·mL^-1（P=95%）。结论 本方法不确定度来自标准曲线的拟合,其适用于HPLC测定人血浆吡非尼酮的不确定度评定。     

荔枝叶药材质量标准研究

目的 建立荔枝叶药材的质量标准。方法 建立荔枝叶药材的性状、显微特征、薄层鉴别及含量测定方法;按照中国药典2020年版第四部通则中相关方法,对荔枝叶药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分及浸出物等项目进行测定。结果 荔枝叶药材在性状、显微特征和薄层色谱方面均具有专属性特征。药材水分含量为2.66%～6.42%,总灰分含量为2.96%～4.52%,酸不溶性灰分含量为0.17%～0.94%,水溶性浸出物含量为15.38%～19.87%,醇溶性浸出物含量为24.94%～30.33%。没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素、芦丁、紫云英苷、槲皮素、山柰酚8种成分分别在0.003 3～0.052 0 mg·mL^–1、0.006 9～0.109 6 mg·mL^–1、0.013 0～0.208 0 mg·mL^–1、0.057 5～0.920 0 mg·mL^–1、0.013 4～0.213 6 mg·mL^–1、0.013 2～0.211 2 mg·mL^–1、0.002 9～0.0...     

蜡菊中圣草酚和木犀草素含量测定、抗氧化活性及其反应动力学特性

目的 建立测定蜡菊中圣草酚和木犀草素含量的方法，并对圣草酚和木犀草素的体外抗氧化活性进行评价。方法 采用UPLC进行含量测定方法学研究，以维生素C和Trolox作为对照，通过测定圣草酚和木犀草素清除DPPH自由基的IC₅₀，比较抗氧化活性的强弱；通过4 h内清除自由基速度的变化，初步阐释二者清除DPPH自由基的反应动力学特性。结果 圣草酚和木犀草素分别在0.005 4~0.545 0，0.005 3~0.535 0 mg·mL^–1内，峰面积与浓度线性关系良好（R=0.999 7），方法精密度、稳定性、加样回收率结果满意。4种化合物清除自由基能力由高到低依次为木犀草素>圣草酚>维生素C>Trolox。不同于维生素C和Trolox，圣草酚和木犀草素清除自由基的过程总体呈现先快后慢的3个阶段。结论 含量测定方法较为简便，分析速度快，能用于蜡菊中圣草酚和木犀草素含量测定。圣草酚和木犀草素具有优异的抗氧化活性，蜡菊资源值得进一步开发。     

湿生扁蕾不同提取物抗氧化活性与主要成分相关性研究

目的 探究湿生扁蕾不同提取物抗氧化活性与其中所含当药黄素、当药醇苷、木犀草素的相关性。方法 采用HPLC同时检测湿生扁蕾不同提取物中当药黄素、当药醇苷、木犀草素含量;通过DPPH·自由基清除实验和ABTS+自由基清除实验两种体系,评价各提取物的抗氧化活性;采用Pearson相关性分析和灰色关联分析法,研究湿生扁蕾不同提取物中当药黄素、当药醇苷、木犀草素含量与抗氧化活性之间的相关性。结果 湿生扁蕾乙酸乙酯提取物中当药黄素含量最高,为68.19 mg·g^-1;95%乙醇提取物中当药醇苷含量最高,为21.03 mg·g^-1;正丁醇提取物中木犀草素含量最高,为19.38 mg·g^-1。95%乙醇提取物对DPPH·自由基清除能力最强,IC50值为0.124 mg·mL^-1;正丁醇提取物对ABTS+自由基清除能力最强,IC₅₀值为0.036 mg·mL^-1。Pearson相关性分析发现,与木犀草素相比,当药醇苷含量与DPPH·清除能力、ABTS+清除能力相关性较好,相关系数R2分别为0.994、0.823;而木犀草素相关系数分别为0.875、0.746。然而,灰色关联分析结果表明木犀草素含量和当药醇苷含量与DPPH·清除能力、ABTS+清除能力均有较强的关联度。结论 湿生扁蕾提取物中的当药醇苷和木犀草素与其体外抗氧化性有较好的相关性,当药醇苷含量可作为评价湿生扁蕾提取物体外抗氧化性的主要指标性成分。