蛭龙活血通瘀胶囊对心肌梗死大鼠血管新生的作用研究

目的：通过观察蛭龙活血通瘀胶囊对心肌梗死大鼠血管新生的影响,探讨蛭龙活血通瘀胶囊对心肌梗死大鼠模型心肌保护的可能机制。方法：采用冠状动脉左前降支动脉结扎法制备心肌梗死模型大鼠。健康SD大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组、通心络组,每组大鼠10只。术后假手术组及模型组每日予生理盐水灌胃,其余各组分别给予相应药物灌胃14d。分别于术后7d、14d检测血清内皮生长因子（VEGF）;术后14d免疫组化检测梗死心肌边缘区新生血管数。结果：术后第7、14d,与假手术组比较,模型组、低、中、高剂量组及通心络组VEGF均升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。各药物治疗组与模型组比较VEGF升高（P〈O．05）,其中高剂量组及通心络组升高明显,差异有统计学意义（P〈0．01）。与通心络组比较,低剂量组、中剂量组差异有统计学意义（P〈O．05）,高剂量组差异无统计学意义（P〉0．05）。MVC计数结果：与假手术组比较,模型组、低、中、高剂量组及通心络组均增加（P〈0．01）,与模型组相比,各药物治疗组MVC均升高（P〈0．01）。与通心络组比较,低剂量组、中剂量组差异有统计学意义（P〈O．05）,高剂量组差异无统计学意义（P〉O．05）。结论：蛭龙活血通瘀胶囊可促进心肌梗死边缘区新生血管形成,其机制可能与促进血清VEGF表达及维持VEGF高分泌状态有关。     

蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠的长期毒性实验

目的:观察大鼠口服蛭龙活血通瘀胶囊的长期毒性作用。方法:采用临床拟用剂量法(ACD法)以7.875、15.75、31.5g·kg-1·d-1生药(相当于临床用药剂量的15、30、60倍)连续灌胃给药12周,观察大鼠的生长发育、血液学、血液生化学、脏器系数、组织病理学变化及停药2周后上述指标的变化。结果:连续灌胃12周后,大鼠体重、行为活动、重要脏器系数、大鼠血液学和血液生化学指标与对照组比较均未见明显影响,主要脏器的病理组织学检查与对照组比较亦未见明显病理改变;停药2周恢复期大鼠各项观察指标与对照组比较,差异无显著性。结论:在本实验条件下,蛭龙活血通瘀胶囊对受试动物未见明显的长期毒性作用,表明该药具有良好的安全性。     

蛭龙活血通瘀胶囊对血管性痴呆大鼠氧化应激损伤的保护

目的：研究蛭龙活血通瘀胶囊对血管性痴呆大鼠氧化应激损伤的保护。方法：双侧颈总动脉永久结扎法制备大鼠血管性痴呆模型,Morris水迷宫测大鼠认知功能;化学比色法测定皮层中MDA含量、SOD及GSH-PX的活力;HE染色,光镜观察海马神经元损伤情况。结果：与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长,在平台象限停留的时间及跨越虚拟平台的次数明显减少;大脑皮层GSH-Px、SOD活性明显下降（P〈0.05）,MDA含量明显增加（P〈0.05）。与模型组比较,各用药组大鼠逃避潜伏期明显缩短,在平台象限停留的时间及跨越虚拟平台的次数明显增加;大脑皮层GSH-Px、SOD活性明显提高（P〈0.05）,MDA含量明显下降（P〈0.05）;光镜观察发现,与假手术组相比,模型组大鼠海马神经元以缺血改变为主,伴坏死及细胞脱失.而各用药组有不同程度的改善。结论：蛭龙活血通瘀胶囊对血管性痴呆大鼠海马神经元氧化应激损伤具有较好的保护作用。     

蛭龙活血通瘀胶囊对急性脑梗塞血清VEGF、CRP含量变化的影响

目的:通过蛭龙活血通瘀胶囊对急性脑梗塞治疗前后血清血管内皮生长因子(VEGF)、C反应蛋白(CRP)含量变化影响的研究,验证蛭龙活血通瘀胶囊对治疗急性脑梗塞的脑保护作用。方法:78例急性脑梗塞患者,随机均分A组(常规治疗组)、B组(常规治疗加蛭龙活血通瘀胶囊治疗)。对治疗前后神经功能缺损(ESS)、日常生活能力(ADL)评分和血清VEGF、CRP含量的变化进行比较分析。结果:A、B两组治疗后ESS、ADL比较有统计学意义(P<0.05);A、B两组血清VEGF、CRP含量在治疗7d后达高峰,但B组较A组值低(P<0.05),治疗后28d两组无统计学意义(P>0.05)。结论:蛭龙活血通瘀胶囊对急性脑梗塞有脑保护作用,同时检测急性脑梗塞患者血清中VEGF、CRP水平变化对了解疾病发展、指导用药具有重要的临床价值。     

蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠脑缺血再灌注炎性细胞因子的影响

目的研究蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法采用线栓法建立大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型,分组灌胃,测定大鼠局灶性脑缺血神经系统症状,检测血清白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、内皮素（ET）、一氧化氮（NO）的含量。结果与模型组相比,蛭龙活血通瘀胶囊治疗组神经系统症状减轻,血中血清IL-6、TNF-α、ET含量下降,NO含量上升。结论蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注具有保护作用,其作用机制可能与抑制炎性反应有关。     

蛭龙活血通瘀胶囊治疗风痰瘀阻型急性脑梗死的临床研究

目的探讨应用蛭龙活血通瘀胶囊治疗风痰瘀阻型急性脑梗死的临床疗效。方法将60例急性脑梗死病人,中医辨证属风痰瘀阻型,随机分为观察组30例,对照组30例。观察组采用基础治疗加蛭龙活血通瘀胶囊4粒,一日三次,对照组采用基础治疗,2周为一疗程。观察对比中医证候、中国脑卒中临床神经功能缺损评分（CSS）、美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分、日常生活活动能力量表Barthel指数（BI）评分、实际完成日常生活活动的量表改良Rankin量表（MRS）评分。结果治疗后观察组疗效（有效率93.33%）,优于对照组（有效率76.67%）;治疗后两组CSS、NIHSS、BI、MRS评分均有不同程度改善,观察组CSS及BI两项评分改善较对照组显著;观察组治疗后口舌歪斜、头晕目眩、痰多而粘、舌象等症状均有改善,且观察组改善症状优于对照组。结论蛭龙活血通瘀胶囊治疗急性脑梗死疗效较为满意,能有效改善神经功能缺损评分及中医证候疗效。     

蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠神经细胞保护作用的研究

目的:观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与蛋白酶激活受体-1 (PAR-1)表达的动态变化及蛭龙活血通瘀胶囊的干预作用,探讨蛭龙活血通瘀胶囊可能的脑保护作用.方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组.自体血注入法制备脑出血大鼠模型,TUNEL法测定凋亡细胞,免疫组化法测定PAR-1蛋白.结果:与模型组比较,蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组的凋亡细胞与PAR-1表达均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).与低剂量组比较,中、高剂量组各时间点的凋亡细胞与PAR-1表达均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:蛭龙活血通瘀胶囊能明显抑制PAR-1活化,减少细胞凋亡,对脑出血大鼠具有明显的脑保护作用,且存在一定量效关系.     

蛭龙活血通瘀胶囊对肾性高血压大鼠心肌损伤的保护机制

目的：HE染色光镜观察心肌组织病理学改变,免疫组化法检测心肌组织TNF-α的表达,探讨蛭龙活血通瘀胶囊对肾性高血压大鼠心肌损伤的保护机制。方法：动物分为6组：正常对照组、模型组、假手术组、蛭龙活血通瘀胶囊高剂量组、蛭龙活血通瘀胶囊中剂量组、蛭龙活血通瘀胶囊低剂量组。造模后,用药组给予蛭龙活血通瘀胶囊,HE染色光镜观察心肌组织病理学改变,采用免疫组化法检测心肌组织TNF-α的表达。结果：除假手术组外,其余各组大鼠心肌细胞肥大,部分排列紊乱,周围出现大量的结缔组织,但高剂量组、中剂量组较模型组和低剂量组轻。模型组大鼠心肌TNF-α表达较正常组、假手术组心肌高,差异有统计学意义（P〈0.05）。高、中剂量组及低剂量组心肌TNF-α表达与模型组比较,高、中剂量组表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,低剂量组降低不明显,差异无统计学意义（P〉0.05）,高剂量组、中剂量组与低剂量组之间比较明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,高剂量组与中剂量组之间比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：蛭龙活血通瘀胶囊可防止肾性高血压所致大鼠心肌肥厚,且两者间具有一定量效关系。     

蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠脑缺血再灌注模型的影响

目的观察蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型的影响。方法将150只健康雄性大鼠随机分为6组,通过线栓法建立大鼠大脑中动脉（MCA）局灶性脑缺血再灌注模型,对照组按成人用量的10倍给药每天一次,动物经给药10次,观察蛭龙活血通瘀胶囊对脑缺血大鼠的行为状态、脑组织形态学和胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）蛋白表达的作用。结果蛭龙活血通瘀胶囊能明显改善大鼠脑缺血后的行为状态,缩小缺血范围,降低缺血程度,使病变的脑组织得到明显地改善,减少缺血区神经元的死亡,有明显的保护作用。     

蛭龙活血通瘀胶囊对缺血性脑卒中患者急性期脑水肿及hs-CRP的影响

目的:通过蛭龙活血通瘀胶囊对缺血性脑卒中患者急性期脑水肿及hs-CRP含量变化影响的观察,验证其对缺血性脑卒中急性期的脑保护作用。方法:72例缺血性脑卒中患者,随机分为对照组(常规治疗)和治疗组(常规治疗加蛭龙活血通瘀胶囊)。对治疗前后神经功能缺损(ESS)、日常生活能力(ADL)评分和脑水肿、hs-CRP含量动态变化进行分析。结果:两组经药物治疗后,ESS、ADL比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01);患侧CEI扰动系数值与hs-CRP均在第3 d开始升高,第5 d达到高峰,且呈正相关关系,治疗组明显低于观察组(P<0.05或P<0.01)。结论:蛭龙活血通瘀胶囊对缺血性脑卒中急性期有脑保护作用,且hs-CRP可能参与脑水肿的发生、发展过程,为临床早期检测提供新的指标。     

蛭龙活血通瘀胶囊对COPD并肺心病心力衰竭心功能、HS-CRP、BNP的影响

目的：观察蛭龙活血通瘀胶囊对COPD 并肺心病心力衰竭心功能、HS-CRP 及 BNP 的影响。方法：将60例COPD并肺心病心力衰竭患者随机分为治疗组和对照组,所有患者予以常规抗心衰治疗,治疗组加服蛭龙活血通瘀胶囊,疗程4周。治疗前后观察心功能,ELISA法和散射比浊法测定血浆N-末端脑钠肽前（NT-proBNP）、高敏C反应蛋白（HS-CRP）水平。结果：治疗组总有效率为90%,明显高于对照组总有效率73%,心功能明显好转,血浆NT-proBNP、HS-CRP水平均明显下降,（P＜0.05）。结论：蛭龙活血通瘀胶囊治疗肺心病心力衰竭效果确切,其主要作用机制为降低血浆NT-proBNP、HS-CRP水平。     

培哚普利对急性心肌梗死伴2型糖尿病患者内皮祖细胞动员及预后的影响

目的观察应用培哚普利治疗急性心肌梗死(AMI)伴2型糖尿病(T2DM)患者的预后,血浆血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子(SDF-1α)水平,骨髓内皮祖细胞(EPC)动员情况。方法将20例AMI伴T2DM患者随机分为培哚普利组(10例,予口服培哚普利4mg/d)及对照组(10例,未予培哚普利)。采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,应用流式细胞仪检测AMI不同时间点[急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)前,PCI后1、3、5、7、14和28d]外周静脉血中CD45-/low+/CD34+/CD133+/KDR+早期EPC数量。采用酶联免疫吸附法检测血浆中VEGF、SDF-1α及超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。结果培哚普利组在PCI后7d的外周静脉血中EPC数量为(211±78)个/1×106,显著高于对照组的(147±57)个/1×106(P<0.05),且在PCI后5d较PCI前显著升高(P<0.05)。培哚普利组在PCI后5、7d的血浆中VEGF水平[(172±72)、(183±63)ng/L]均显著高于同时间点的对照组[分别为(105±63)、(77±37)ng/L,P值均<0.05]。培哚普利组在PCI后7d(高峰点)的SDF-1α水平为(3296±680)ng/L,显著高于同时间点的对照组[(2115±570)ng/L,P<0.05]。培哚普利组在PCI后3d(高峰点)的hs-CRP水平为(26.2±6.5)mg/L,显著低于同时间点的对照组[(33.8±10.6)mg/L,P<0.05]。随访6个月时培哚普利组的左心室射血分数(LVEF)为0.491±0.059,显著高于入院时的0.469±0.051(P<0.05);对照组LVEF分别为0.482±0.054、0.479±0.052,差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用培哚普利治疗AMI伴T2DM患者,可改善其组织缺血后SDF-1α、VEGF-EPC动员通路障碍,并改善其预后。     

不同剂量阿托伐他汀对心肌梗死兔内皮祖细胞水平的影响

目的 观察不同剂量阿托伐他汀对心肌梗死兔循环内皮祖细胞水平的影响.方法 新西兰大白兔结扎左冠状动脉前降支制成急性心肌梗死模型后,随机分成生理盐水对照组和阿托伐他汀治疗组[5 mg/ (kg·d) 或20 mg/ (kg·d) ],通过灌胃给药8周后,采用密度梯度离心法从外周血分离单个核细胞,接种于添加了内皮细胞生长培养基-2促微血管添加剂 (EGM-2 MV single quots) 的内皮细胞基础培养基-2 (EBM-2) 中,进行循环内皮祖细胞培养,1周后,贴壁细胞用激光共聚焦显微镜鉴定FITC标记的异凝集素 (FITC-UEA) 和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白 (Dil-acLDL) 双染色阳性细胞为正在分化的循环内皮祖细胞,在倒置荧光显微镜下记数.结果 常规剂量的阿托伐他汀明显增加外周血循环内皮祖细胞的数量,为 (321.44±30.27) ,比对照组 (211.17±18.65) 和大剂量组的 (240.29±44.37) 明显增多 (P<0.05) .大剂量组比对照组略有增加,但差异无显著性 (P>0.05) .结论 常规剂量阿托伐他汀能增加心肌梗死后兔外周血循环内皮组细胞的数量,而且这种作用不依赖于他汀类药物的降脂作用.但是加大剂量并不能进一步增加内皮祖细胞的数量.     

骨内单次注射小剂量辛伐他汀对大鼠心梗后血管新生的影响

目的 研究骨内局部单次注射小剂量辛伐他汀对大鼠心梗后血管新生和心功能的影响。方法 Wistar大鼠随机分为假手术组、心肌梗死模型组和骨内注射辛伐他汀组（n=12）。冠状动脉左前降支结扎建立大鼠心肌梗死模型。24 h后实验组左胫骨内单次注射辛伐他汀0.5 mg,4周后分别通过小动物超声心动图评价左室功能,三苯基氯化四氮唑（TTC）染色计算心肌梗死面积,免疫荧光染色检测局部血管新生情况。结果 超声心动图结果表明心肌梗死4周后左心室收缩功能明显下降,骨内注射辛伐他汀对大鼠心肌梗死后左心室功能未见明显改善;TTC染色发现骨内注射辛伐他汀组心肌梗死面积未见明显减少;免疫荧光染色显示,骨内注射辛伐他汀组心肌血管密度没有显著增加。结论 大鼠心梗24 h后骨内单次注射小剂量辛伐他汀（0.5 mg）,心肌梗死面积、血管新生及心脏功能无显著改善。     

兔外周血内皮祖细胞的培养与鉴定

目的研究兔外周血内皮祖细胞(EPCs)的分离和定向培养的方法,并对其功能进行鉴定。方法从兔股静脉插管抽取静脉血20 mL,采用淋巴细胞分离液进行密度梯度离心法分离单个核细胞,接种于人纤连蛋白包被的培养板上,分别予含血管内皮生长因子(VEGF)20 ng／mL或内皮细胞生长添加剂(ECGS)30μg／mL的M199培养基培养。培养2周后进行免疫荧光染色鉴定内皮祖细胞。结果每毫升外周血可分离1×106～2×106个单个核细胞,两组均于接种后第2～3天细胞胞体增大,有的呈多边形或梭形;第4天出现条带或栅栏状分布;第7～8天梭形细胞增多;第14天左右出现细胞集落,其特点是中央为圆形细胞,外周是梭形细胞;添加VEGF的培养基组每接种5×105个单个核细胞出现5～10个细胞集落,而添加ECGS者出现8～15个。第4周,添加VEGF的培养基组的细胞开始脱落而死亡,而添加ECGS的细胞仍持续稳定生长,呈铺路石样分布。两组在荧光显微镜下均可见双阳性的EPCs,血管性假性血友病因子(vWF)染色阳性。结论采用VEGF和ECGS均可体外培养兔外周血内皮祖细胞,且均能使其诱导分化为内皮样细胞,而ECGS较VEGF诱导效果更佳。     

ST段抬高性急性心肌梗塞患者循环血管内皮祖细胞与血管内皮生长因子及心功能的关系及意义

目的:研究ST段抬高性急性心肌梗塞(STEMI)患者循环血管内皮祖细胞与血管内皮生长因子及心功能的关系.方法:选取本院心内科行冠状动脉造影确诊STEMI患者124例,收集一般临床资料,并检测其就诊时循环血管内皮祖细胞与血管内皮生长因子,并进行分析.结果:血管内皮祖细胞、血管内皮生长因子进行Pearson相关性分析,表明血管内皮祖细胞与VEGF水平呈正相关(r=0.0057,P=0.001).病程6～12 h循环血管内皮祖细胞与血管内皮生长因子高于病程＜6 h分层组患者,差异均有统计学意义(P＜0.05);病程12～24 h循环血管内皮祖细胞与血管内皮生长因子高于病程6～12 h分层组,差异均有统计学意义(P＜0.05);按照不同心功能Killip分级患者循环血管内皮祖细胞与血管内皮生长因子从高到低依次为:KillipⅡ级＞KillipⅢ级＞Killip Ⅰ级＞KillipⅣ级,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:STEMI患者血管内皮祖细胞与VEGF呈正相关,合严重心功能不全时导致的循环障碍可能减缓VEGF分泌与CEPCs归巢激活.     

粒细胞集落刺激因子对内皮前体细胞的动员

目的：研究重组人粒细胞集落刺激因子（G-CSF）在不同时相对内皮前体细胞（EPC）的动员作用。方法：将16只体重为2-2．5kg的雄性新西兰兔随机分为两组，即正常对照组和G-CSF组，每组8只。用药后1、2、3和4周测量外周血EPC含量。采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC），将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养瓶、板中，培养3d收集贴壁细胞，用流式细胞仪计数EPC，PE-CD34／FITC-CD133双阳性细胞为EPC；荧光显微镜鉴定FITC-UEA-1／Dil-acLDL双染色阳性细胞为EPC。用药第3周测血清-氧化氮（NO）、血脂。结果：用药1、2、3和4周两组外周血EPC曲线：正常对照组为一低水平基线；G-CSF组持续稳定于高水平，两组间差异有显著性意义（P〈0．01）。第3周检测血清NO及血脂，两组血脂均在正常范围内，NO亦无显著性差异。结论：G-CSF对EPC有显著而持续的动员作用，该作用与血清NO无关。     

粒细胞集落刺激因子对大鼠心肌梗死后血管再生及心功能的影响

目的探讨粒细胞集落刺激因子（pCSF）对大鼠心肌梗死后血管再生及心功能的影响。方法实验组：为G-CSF注射组,于结扎大鼠左前降支动脉前24h及术后6天给予G-CSF10μg／（kg·d）皮下注射;对照组：为生理盐水注射组,皮下注射同等剂量的生理盐水。体外分离培养大鼠EPCs,免疫荧光法检测其FITC—UEA-1及Dil—acLDL的表达。心梗后4周,心脏超声检查心功能,处死大鼠,留取心脏标本作HE病理染色,并对梗死区心肌组织进行毛细血管密度测定。另设假手术组10只为正常对照。结果培养获得EPCs,其表型为Dil—acLDLq-、FITc—UEA-1＋,实验组EPCs密度明显高于对照组。心梗后4周,实验组大鼠左心室射血分数及左心室短轴缩短率较对照组明显提高。实验组梗死心肌处血管密度较对照组明显增高。结论①用密度梯度离心法从大鼠外周血MNC中可成功地培养出EPCs,G-CSF可促进EPCs的动员。②GCSF能促进梗死后心肌血管新生,改善心功能。