电针对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖表达的影响

目的观察电针对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)表达的影响,探讨电针对脊髓损伤修复的可能作用机制。方法将成年SD大鼠40只分为正常对照组、模型组和电针组。建立成年大鼠T9～T10段脊髓全横断损伤模型。除电针组于术后当天进行电针治疗外,3个组均分别于术后7、14、28 d取材,用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测脊髓内CSPGs的表达。结果术后7～28 d,与正常对照组相比模型组脊髓损伤邻近组织内CSPGs表达明显增强(P<0.05);与模型组相比,电针组脊髓损伤邻近组织内CSPGs表达明显受到抑制,差异显著(P<0.05)。结论电针能显著降低脊髓损伤后CSPGs的表达,从而减弱CSPGs对轴突再生的抑制作用,这可能是其促进脊髓损伤修复的可能机制之一。     

硫酸软骨素蛋白多糖在脊髓损伤中的研究进展

硫酸软骨素蛋白多糖（chondroitin sulfate proteoglycans,CSPGs）是中枢神经系统细胞外基质的组成部分,在中枢神经系统发育、正常维持及病理过程中都发挥着关键的作用。脊髓损伤后,损伤部位CSPGs的表达明显上调,这主要源于病变部位活化的星形胶质细胞。CSPGs的上调会限制脊髓损伤部位的轴突再生、传导和再髓鞘化,并且可以促进脊髓损伤中的炎症反应,不利于脊髓损伤后神经功能恢复。因此,抑制CSPGs可能是促进脊髓损伤后轴突再生和功能恢复的有效治疗方法。本文对CSPGs在脊髓损伤中的研究现状进行综述。     

大鼠脊髓挤压伤后硫酸软骨素蛋白多糖NG2在时间和空间的变化

目的：探讨大鼠脊髓挤压伤后硫酸软骨素蛋白多糖（CSPGs ）在时间和空间的变化。方法：①采用大鼠脊髓挤压伤模型,实验动物随机分为脊髓压迫后0h、8h、24h、48h、72h、1周、2周组。对不同时间点的脊髓标本进行 HE染色;计算脊髓损伤区的实际面积;②探讨脊髓挤压伤后CSPGs在时间和空间分布的变化,并观察CS-56在损伤后的表达及其和GFAP的关系。结果：CSPGs在脊髓损伤后表现出强大的抑制作用,免疫荧光染色结果显示,CS-56表达于24h内开始升高,3d后CS-56呈环状分布于损伤区周围,GFAP有少量表达,1周时空洞逐渐出现,2周时空洞轮廓明显,CS-56充填于空洞腔内。结论：分析硫酸软骨素蛋白多糖NG2在时间和空间分布的变化有助于确定抑制其分泌的时间窗,为细胞移植治疗脊髓损伤提供一定的内环境支持。     

硫酸软骨素蛋白多糖酶结合骨髓基质干细胞修复亚急性大鼠脊髓挤压伤的实验研究

目的 分析大鼠亚急性脊髓损伤(SCI)后联合应用骨髓基质干细胞移植和硫酸软骨素酶ABC的可行性,并探讨其相互作用.方法 取新生SD大鼠的股骨和胫骨分离培养MSCs,调整细胞浓度为2.0×105/cm2备用.取体质量220～240g健康成年雄性SD大鼠24只制备SCI动物模型,并随机分为4组,A组对照组,B、C、D组每组6只,分别于SCI损伤区注射5μLMSCs;5μL硫酸软骨素酶(ChABC)和ChABC+MSCs.采用BBB评分法评价伤后1、2、3、7、14d大鼠双后肢的运动功能.伤后14d取材行HE染色并计算损伤区最大横径和坏死总面积;行GFAP-CS56、GFAP-GAP-43和GFAP-NF160免疫荧光染色评价神经纤维束的再生情况.结果 损伤后算14天BBB评分结果示,A组与B、C、D组比较差异均有统计学意义(P<0.05),B、D组及C、D组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),B、C组间无显著性差异.HE染色显示14天时各组均有空洞形成,伤后坏死总面积比较,B、C、D组与A组比较均有显著性差异(P<0.05),B、C、D三组之间D组与前两组比较存在显著性差异(P<0.05).免疫组织化学染色示,A组GFAP反应最强,损伤区空洞明显可见且范围大于其他三组,D组介于B、C组之间;B、C和D组的GAP-43表达增多,且以D组为最:D组损伤区内的神经纤维通过明显多于其他三组.结论 硫酸软骨素酶ABC联合骨髓基质干细胞移植对脊髓损伤有一定修复作用.     

软骨素酶ABC促进大鼠脊髓损伤后轴突再生和功能恢复的初步研究

目的探讨软骨素酶ABC（ChABC）对大鼠脊髓横断损伤（SCI）后轴突再生和功能恢复的影响。方法SD大鼠随机分为实验组（SCI＋ChABC）,对照组（SCI＋NS）及正常组。采用T2-8脊髓完全横断模型,术后2周和10周脊髓标本分别行OBT、GFAP、NSE及NF免疫组化染色,术后1、2、3、4、5、6、8、10周进行行为学评分。结果行为学评分,术后3周实验组评分高于对照组（P〈0．05）,同时实验组疤痕中OBT和GFAP染色低于对照组（P〈0．05）,GFAP和NF染色高于对照组（P〈0．05）。结论ChABC能有效降低损伤部位硫酸软骨素蛋白多糖（CSPGs）的活性,从而促进SCI大鼠感觉、运动功能的恢复和轴突的再生。     

嗅鞘细胞抑制脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白聚糖表达的实验研究

目的:探讨嗅鞘细胞(OECs)移植的治疗作用及其对影响硫酸软骨素蛋白聚糖类分子(CSPGs)表达的影响。方法:将培养的OECs移植于脊髓半横断的Wistar大鼠,移植术后对模型进行数个时间点的BBB运动功能评分,损伤即移植术后4周,对实验组和对照组动物取材,进行免疫组织化学和Western blotting检测。结果:移植后4周,实验组动物的BBB评分高于对照组动物。免疫组织化学和Western blotting检测发现,实验组动物损伤处CSPGs物质表达低于对照组动物。结论:OECs促进脊髓损伤动物运动功能恢复的作用可能与抑制CSPGs分子表达有关。     

排斥导向分子B对大鼠脊髓损伤后功能恢复的影响

目的：探讨排斥导向分子（repulsive guidance molecule,RGM）Ｂ在大鼠脊髓损伤后的表达规律及其与脊髓功能恢复的相关性。方法：成年雄性SD大鼠65只,随机分成３组,A组：不应用硫酸软骨素酶ABC（chondroitinase ABC,ChABC）降解25只;B组：应用硫酸软骨素酶降解20只;C组：假手术组只暴露脊髓20只。A、B、C 3组分别在术后相同时间位点观察记录动物肢体运动情况并处死动物进行标本检测。采用BBB（Basso-Beattie-Bresnahan）评分法评价大鼠后肢的感觉、运动功能;HE染色计算损伤区总面积;Real-time PCR检测RGMB mRNA的表达;应用免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic pro－tein,GFAP）及神经丝蛋白-200（neurofilament-200,NF-200）双标表达情况。结果：伤后2~4周同一时间段B组BBB评分显著高于A组（P＜0.05）;伤后2周HE染色结果表明,2组损伤区均有空洞形成,B组损伤区面积显著小于A组（P＜0.05）;伤后2到4周GFAP/NF-200双重免疫荧光染色示B组GFAP表达逐渐下调,A组荧光强度值显著高于B组（P＜0.05）;NF-200免疫组化染色阳性纤维穿过损伤区,B组荧光强度值显著高于A组（P＜0.05）;RGMB mRNA表达量B组显著较A组下降（P＜0.05）。结论：微环境中的RGMB浓度在大鼠脊髓损伤后与其后期脊髓功能恢复呈负相关,RGMB抑制剂可能对临床治疗脊髓损伤有一定作用。     

硫酸软骨素蛋白多糖在脊髓损伤后修复中的抑制作用

目的综述硫酸软骨素蛋白多糖在脊髓损伤后修复中抑制作用的研究现状。方法查阅近年来有关硫酸软骨素蛋白多糖与脊髓损伤相关的文献。结果硫酸软骨素蛋白多糖是中枢神经系统细胞外基质中重要的抑制因子。结论研究能有效抑制硫酸软骨素蛋白多糖的方法可能促进损伤后脊髓的再生。     

细胞周期素依赖性激酶抑制剂olomoucine对大鼠脊髓损伤后轴突再生微环境的影响及其意义

目的 探讨细胞周期素依赖激酶抑制剂olomoucine对脊髓损伤后轴突再生微环境的影响及意义。方法 建立脊髓半切损伤模型,实验大鼠随机分为假手术组、损伤对照组和olomoucine干预组,采用Western印迹分析脊髓损伤后细胞周期相关蛋白的表达;应用免疫荧光技术检测损伤区域胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、硫酸软骨素蛋白多糖（CSPG）以及生长相关蛋白43（GAP-43）的表达;采用改良的Gale联合评分法对大鼠瘫痪后肢进行运动功能评估。结果 假手术组细胞周期素（cyclin）A、B1、E和增殖细胞核抗原以及GFAP、CSPG和GAP-43的表达较弱;脊髓损伤后cyclinA、cyclinB1、cyclinE和细胞周期素（PCNA）等细胞周期相关蛋白的表达显著增高,星形胶质细胞明显活化增殖,GFAP和CSPG的表达明显增强（均P〈0．01）,GAP-43的表达高于假手术组（P〈0．05）;给予olomoucine干预后,细胞周期相关蛋白的表达显著下调,损伤区域星形胶质细胞的增殖和胶质瘢痕形成受到抑制,胶质瘢痕产生的CSPG的表达明显减少,GAP-43的表达显著增高,瘫痪后肢的运动功能明显改善（均P〈0．05）。结论 olomoucine可通过调控细胞周期,抑制脊髓损伤后胶质细胞的活化增殖和胶质瘢痕的形成,减少抑制因子CSPG的表达以及上调有利于轴突再生的GAP-43的表达。改善损伤后轴突再生微环境最终促进瘫痪后肢的运动功能恢复。     

大鼠脊髓半横断损伤后硫酸软骨素蛋白多糖Aggrecan的变化

目的观察硫酸软骨素蛋白多糖Aggrecan在大鼠脊髓半横断损伤(HSCI)后的表达变化。方法 20只成年SD大鼠随机分为假手术对照组和HSCI 3、7和14 d组,建立成年大鼠HSCI(胸9～10)模型;取损伤位点头尾段胸9、胸10节段制作石蜡切片,用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测脊髓内Aggrecan的表达。结果 Aggrecan阳性产物主要分布于细胞外基质中,神经元和神经胶质细胞中也有分布;损伤后脊髓内Aggrecan表达较对照组明显增加。结论 HSCI后Aggrecan表达明显增加,可能参与损伤后轴突生长被抑制这一过程。     

褪黑素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达的影响

目的：探讨褪黑素对大鼠脊髓损伤后诱生型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用改良Allen’S撞击法制备脊髓损伤模型;成年SD大鼠110只随机分为假损伤组、损伤组和药物治疗组3组,其中损伤组和药物治疗组各50只,分5个时间点（8小时、24小时、72小时、7天、14天）处死;假损伤组10只,于手术后14天处死,采用HE染色和免疫组化检测脊髓损伤后脊髓组织中iNOS蛋白的表达。结果：与损伤组比较,药物治疗组大鼠损伤后脊髓组织iNOS表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：褪黑素可通过抑制iNOS蛋白表达对大鼠脊髓损伤起保护作用。     

脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白的表达及其意义

目的：研究脊髓损伤（SCI）后脊髓组织星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的变化，探讨反应性胶质化在脊髓损伤中的作用。方法：SD大鼠25只，随机分成5组（n＝5）；正常对照组，伤后1天组，伤后4天组，伤后7天组和伤后14天组，用免疫组织化学染色及图像分析的方法观察星形胶质细胞中GFAP的表达，和大量综合行为评分法（CBS）对各级大鼠神经功能评分。结果：SCI后星形胶质细胞中GFAP的表达与对照组比较明显增高（P＜0．01），1－14天内呈进行性增高趋势，损伤各组的CBS1－14天内呈降低趋势，两指标有显著的相关性（r=-0.775,P＜0．001）。结论：SCI后星形胶质细胞通过其反应性胶质化对脊髓的再生和自身修复起着重要作用。     

EGCG治疗大鼠脊髓损伤后脊髓水肿的机制研究

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)治疗脊髓损伤后继发脊髓水肿的可能机制.方法 取80只成年SD大鼠,随机分为假手术组,损伤对照组,EGCG组和甲基强的松龙(MPSS)组,每组20只.采用钳夹法制备脊髓损伤模型,造模24 h后,通过脊髓干湿重检测评估脊髓水肿情况,测定各组脊髓组织中丙二醛(MDA)与超氧化物歧化酶(SOD)含量,HE染色观察脊髓损伤后局部出血及坏死情况,免疫组化及Western blot检测损伤节段AQP4,GFAP,Kir4.1蛋白表达.结果 HE染色显示损伤对照组脊髓局部大量出血,神经细胞肿胀、坏死;EGCG组和MPSS组情况相近,出血范围较小,神经细胞轻度水肿.与假手术组比较,损伤对照组脊髓组织含水量增多,MDA水平增加,SOD活性下降,损伤节段AQP4,GFAP,Kir4.1蛋白表达增高,差异有统计学意义(P<0.05).与损伤对照组比较,EGCG组和MPSS组脊髓含水量降低、MDA水平下降、SOD活性增高、AQP4、GFAP、Kir4.1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),而EGCG组和MPSS组间上述指标没有明显差异(P>0.05).结论 EGCG能够减轻脊髓损伤后的脊髓水肿程度,可能是通过调节损伤节段AQP4和Kir4.1蛋白表达实现的,在这一过程中GFAP特异性表达的星形胶质细胞可能也参与其中.EGCG是安全有效的一种潜在治疗脊髓损伤的药物.     

硫酸软骨素蛋白多糖Versican V1和V2亚型在大鼠损伤脊髓中的表达

目的 探讨硫酸软骨素蛋白多糖Versican V1和V2亚型在成年大鼠损伤脊髓中的表达规律.方法 39只成年大鼠随机分为对照组（假手术组,n=9）和实验组（n=30）.利用纽约大学重物坠落装置建立实验组大鼠脊髓损伤模型.采用实时定量PCR、免疫组织化学法和免疫荧光法,分别观察大鼠脊髓损伤后Versican V1和V2亚型的表达变化.结果 实时定量PCR显示,与对照组比较,实验组Versican V1 mRNA的表达在脊髓损伤后4 h略有升高（P〉0.05）,损伤后1 d达到峰值（P〈0.01）,其高表达可维持至损伤后7 d（P〈0.01）;Versican V2 mRNA的表达升高较迟缓.脊髓损伤后1 d略有升高（P〉0.05）,峰值出现在损伤后7 d（P〈0.01）,然后迅速降低,损伤后14 d接近对照组水平（P〉0.05）.免疫组织化学检测显示,脊髓损伤后3 d,包括损伤中心在内的10 mm全长脊髓都可观察到Versican表达明显增强;免疫荧光染色显示,高表达Versican的细胞为BⅢ-tubulin阳性神经元、GFAP阳性星型胶质细胞和MBP阳性少突胶质细胞.结论 Versican表达增强可能与脊髓损伤后形成抑制神经再生的微环境有关;消除其影响作用时,应考虑在不同时间采用不同方法处理表达模式不同的Versican亚型.     

针刺对大鼠脊髓损伤后脊髓前角运动神经元功能的影响

目的探讨针刺对脊髓损伤(SCI)大鼠前角运动神经元功能恢复的影响。方法成年雄性SD大鼠60只,改良Allen法压迫致伤T8、T9,随机分为实验组和对照组,伤后分别给予电针刺激大鼠双下肢足三里和悬钟、伏兔和三阴交穴,取治疗2,4,6周伤段脊髓进行PCR扩增和组织切片。利用RT-PCR技术检测伤区脊髓胶质源性神经营养因子(GDNF)mRNA基因体内表达的变化;应用尼氏染色、酶组织化学染色方法观察大鼠SCI后伤区脊髓前角运动神经元存活的数目和乙酰胆碱酯酶(AChE)的变化;采用斜板试验和BBB评分法观察大鼠后肢运动功能恢复情况。结果实验组较对照组AChE活性显著增加(P<0.01);实验组脊髓前角大、中型神经元的数目较对照组明显增加(P<0.05);实验组GDNF mRNA基因体内表达较对照组明显增加(P<0.01);大鼠SCI 3周后针刺治疗组后肢运动功能评分均明显高于对照组(P<0.05)。结论针刺治疗对脊髓损伤后前角运动神经元的功能恢复有一定的促进作用。     

脊髓损伤后bFGF和GFAP的变化及其意义

目的：研究脊髓损伤后碱性成纤维细胞因子和胶质纤维酸性蛋白的变化及其两者的相关性,探讨脊髓损伤后脊髓的自身保护机制以及星形胶质细胞在脊髓损伤中的作用。方法：用免疫组织化学,组织学染色和图像分析的方法检测损伤脊髓碱性成纤维细胞及胶质纤维酸性蛋白表达的动态变化。结果：脊髓损伤后1d损伤脊髓中碱性成纤维细胞的表达明显增高,7d达到高峰,14d末回落,而胶质纤维酸性蛋白表达则在1－14d内呈进行性增高趋势,两指标相关性显著（r=0.777,P=0.001),结论：脊髓损伤后反应性星形细胞胶质化对脊髓的再生和自身修复起着重要作用,提示脊髓本身存在自身保护机制。     

大鼠脊髓半切损伤后突触分化诱导基因产物SynDIG1的表达增强

目的 探讨大鼠脊髓半切损伤后(spinal cord injury, SCI) 突触分化诱导基因产物(synapse differentiation induced gene 1,SynDIG1)的表达变化及意义.方法 SD大鼠随机分成对照组和脊髓损伤组(n=75),切断大鼠脊髓一半作为实验模型,只咬除椎板而不损伤大鼠脊髓作为对照模型.在手术后7、14、21、28、35天采集损伤区域的脊髓组织,用免疫荧光和免疫印迹技术检测各组各时间点SynDIG1的蛋白表达,并且与半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、神经生长蛋白43(GAP-43)等神经元特异性标志物做免疫荧光双标技术检测.结果 在脊髓损伤后第7天就发现神经元有SynDIG1表达,在第28天达到高峰,随后维持在较高水平.通过免疫荧光双标技术发现脊髓损伤后SynDIG1与GAP-43存在共表达.结论 脊髓损伤后中期神经元大量表达SynDIG1,激活了神经生长因子,促进神经元再生,有利于神经系统的修复.