大鼠脑缺血/再灌注损伤后血管内皮细胞生长因子的表达

目的　探讨大鼠局灶性脑缺血 /再灌注后脑组织内血管内皮细胞生长因子 (VEGF)的表达及意义。方法　制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,应用免疫组化 S- P法检测 VEGF蛋白的表达。结果　缺血再灌注损伤后 VEGF表达增加 ,随再灌注时间的延长 ,在缺血灶周边区 ,阳性表达的小血管数量明显增多。结论　脑缺血再灌注损伤可以诱导 VEGF表达增强 ,VEGF可促进毛细血管增生。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织肾上腺髓质素的表达

目的 探讨肾上腺髓质素（adrenomedullin，ADM）在不同月龄大鼠脑缺血再灌注（I／R）脑组织的表达情况。方法 采用栓线法制成大鼠大脑中动脉I／R模型，阻断血流2h后再灌注4h。应用免疫组织化学染色法检测不同月龄段大鼠局灶性脑I／R后血浆ADM。结果 正常大鼠脑内即有ADM表达，假手术后ADM表达略有增加，但与正常对照组相比无明显差异（P〉0．05）；大鼠脑I／R后ADM免疫阳性细胞增多，与正常对照组及假手术组相比差异显著（均P〈0．05）；大鼠脑I/R后缺血侧及缺血对侧ADM免疫阳性细胞均增多，但以缺血侧区域增多最为明显（P〈0．05）。老龄大鼠脑I／R后ADM免疫阳性细胞数明显高于青年大鼠（P〈0．05）。结论 脑I／R后ADM表达增强，ADM表达增强与血管硬化相关。     

降纤酶对大鼠局灶性脑缺血/再灌注血管内皮细胞超微结构及MMP-2和-9表达的影响

目的 观察降纤酶对大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)血管内皮细胞(VEC)的保护作用.方法 通过光镜、电镜来观察降纤酶对大鼠局灶性脑I/R VEC超微结构的改变以及采用免疫组织化学技术观察基质金属蛋白酶(MMP)-2和-9的表达.结果 在缺血3 h/6 h、6 h再灌组在缺血中心区及周边区VEC和神经细胞的损伤程度明显较降纤酶组重;I/R 3 h/6 h、I/R 6 h以及I/R 6 h/3 h组在缺血半影区模型组比降纤酶组MMP-9表达增强(P<0.05), 而MMP-2变化不明显.I/R 24 h、I/R 3 h/24 h和I/R 6 h/24 h在缺血半影区降纤酶组较盐水对照组MMP-9表达弱,而MMP-2表达增强(P<0.05).结论 降纤酶对局灶性脑缺血VEC具有保护作用.     

rhEPO对局灶性脑缺血再灌注脑损伤保护机制的研究

目的 观察rhEPO对缺血性卒中脑海马区不同时间点S100B蛋白表达的动态变化,研究rhEPO对局灶性脑缺血再灌注损伤影响的可能机制.方法 取66只SD大鼠建立局灶性脑缺血再灌注(I/R)模型,随机分成假手术对照组(n=6)、脑I/R组(n=30)、rhEPO治疗组(n=30),按再灌注时间分为5个亚组,每个亚组6只(6 h组、12 h组、1 d组、3 d组、7 d组),缺血2 h后开始再灌注.免疫组化法检测缺血不同时间各组脑海马缺血中心和周围区S100B蛋白,原位末端标记技术检测各组脑海马缺血中心和周围区神经细胞凋亡.结果 脑I/R损伤组与假手术对照组比较细胞凋亡数明显增多(P＜0.05),rhEPO治疗组与脑I/R组相比,凋亡细胞数明显减少(P<0.05);免疫组化检测结果显示,I/R组与假手术对照组相比,S100B蛋白表达明显增加(P<0.05),rhEPO治疗组与脑I/R组相比,S100B蛋白表达明显减少(P<0.05). 结论 rhEPO可能通过减少S100B蛋白表达、抗凋亡对局灶性脑缺血I/R产生保护作用.     

脑脉通对老龄大鼠脑缺血/再灌注细胞凋亡的影响

目的 研究脑脉通对老龄大鼠急性局灶性脑缺血／再灌注（I／R）后脑损伤的保护作用。方法 采用线栓法建立老龄大鼠急性局灶性I／R损伤模型，观察脑脉通及尼莫地平对老龄大鼠脑缺血3h及再灌注12、24、72h各组细胞凋亡的影响。结果 脑脉通与尼莫地平均可减少脑I／R后凋亡细胞数。与模型组比较有显著的统计学意义（P〈0．001）。结论 脑脉通可以抑制脑I／R后神经细胞的凋亡，对神经元起保护作用。     

缺血预适应对脑缺血再灌注大鼠皮质区血管内皮生长因子及存活素表达的影响

目的观察缺血预适应对局灶性脑缺血再灌注大鼠梗死灶周边皮质区血管内皮生长因子(VEGF)、存活素表达的影响,探讨其脑保护机制。方法 SD大鼠130只,随机分为假手术组10只、脑缺血组60只及预适应组60只,脑缺血组和预适应组按缺血后再灌注时间不同分为再灌注2、6、12、24、48和72h时间点,每个时间点10只。采用线栓法闭塞右侧大脑中动脉,制备大鼠局灶性脑缺血再灌注预适应模型。应用免疫组织化学法及Western blot检测观察梗死灶周边皮质区VEGF及存活素的表达。结果假手术组VEGF阳性细胞、存活素阳性细胞及皮质区VEGF蛋白和存活素蛋白表达较少。与脑缺血组比较,预适应组2、6、12、24、48和72hVEGF及存活素阳性细胞和蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论脑缺血预适应可诱导VEGF和存活素表达上调,这可能是脑缺血预适应诱导脑缺血耐受的脑保护作用机制之一。     

大鼠脑缺血再灌注后神经细胞NOS表达与细胞凋亡及米帕明的保护作用

目的探讨大鼠局灶性脑缺向再灌注后神经细胞一氧化氮合酶（NOS）的表达与神经细胞凋亡的关系及米帕明的保护作用。方法采用大脑中动脉内栓线阻断法（MCAO）造成局灶性脑缺血再灌注模型。用原位细胞凋亡检测方法观察神经细胞凋亡;用免疫组织化学方法检测大鼠神经细胞（nNOS、iNOS）的阳性表达的细胞数目。结果与假手术对照组比较,脑缺血再灌注2h后缺血侧神经细胞nNOS、iNOS表达升高,并出现神经细胞凋亡,随着再灌注时间的延长,神经细胞iNOS的表达明显增强,凋亡神经细胞数逐渐增多,至24h达高峰,但神经细胞nNOS的表达并未见明显增强。米帕明保护组神经细胞nNOS、iNOS的表达和凋亡神经细胞数明显低于缺血再灌组（p〈0．01）。结论脑缺血再灌注后缺血侧神经细胞nNOS的表达增强,iNOS的表达显著升高,使NO的形成增加,这可能是介导脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一。米帕明具有下调神经细胞nNOS、iNOS的表达,减少NO的生成、抑制细胞凋亡．减轻缺血再灌注对大鼠神经细胞损伤的作用。     

脑脉通对老龄大鼠脑缺血/再灌注纤溶酶原激活系调节作用的影响

目的 研究脑脉通对老龄大鼠脑缺血／再灌注（I／R）纤溶酶原激活系词节作用的影响。方法 采用线栓法复制局灶性脑I／R模型，将老龄大鼠分为假手术组、模型组、脑脉通组、尼莫地平组，后三组又分为脑缺血3h和I／R6、12、24h、3、6d组。采用电镜、免疫组化和酶谱分析等法，观察各组脑徽血管结构、纤溶酶原激活系的变化。结果 与假手术组比较，模型组脑徽血管病理损伤明显，t-PA（I3h-I／R6d）、u-PA（I／R12h-6d）、PAI-1（yR6h-3d）表达水平显著增强。与模型组比较，脑脉通组徽血管病理损伤明显改善，t-PA（I／R6h-3d）、u-PA（I／R12h-3d）的蛋白表达显著降低和PAI-1（I／R12h-3d）的蛋白表达显著增强。各组PAI-l的酶谱分析比较，其量的变化与免疫表达结果基本一致。结论 脑脉通对老龄大鼠脑VR徽血管基底膜损伤的保护作用与其对纤溶酶原激活系调节有关。     

老龄大鼠脑缺血/再灌注微血管生成及VEGF/VEGFR系统表达变化

目的从血管内皮生长因子(VEGF)/VEGFR系统因子表达方面揭示老年脑缺血/再灌注(I/R)损伤及脑微血管生成机制。方法 SD青年和老龄大鼠,随机分为青年假手术组、青年模型组、老龄假手术组、老龄模型组,模型组分为缺血(I)3 h、I/R 1 d、3 d、6 d、12 d时间点。采用线栓法制备局灶性脑I/R模型,运用免疫组化和原位杂交等技术测定脑微血管密度(MVD)、微血管场面积,VEGF、Flt-1、Flk-1的蛋白及其mRNA表达。结果老龄模型组MVD自I 3 h逐渐下降至I/R 12 d;血管场面积I/R 1 d达峰值,后逐步下降。VEGF表达I/R 1 d达峰值,逐步减弱至I/R3 d,I/R 6 d稍有增强,后明显减弱;Flt-1、Flk-1表达I/R 1 d达峰值后迅速。VEGF、Flt-1、Flk-1 mRNA表达随再灌注时间延长逐步增强,均于I/R 1 d达峰值;VEGF mRNA表达I/R1~3 d逐步减弱,后缓慢增强;Flt-1、Flk-1 mRNA表达I/R1 d后迅速减弱。结论老年I/R损伤后脑微血管生成能力明显减弱,其机制可能与VEGF、Flt-1、Flk-1的蛋白及其基因表达减弱有关,增龄可能是导致VEGF/VEGFR系统因子表达减弱的主要原因之一。     

老年大鼠缺血再灌注脑组织血管内皮生长表达及地塞米松对其表达的影响

目的　探讨局灶性脑缺血再灌注后血管内皮生长因子 (VEGF)蛋白表达的意义及地塞米松对其影响。　方法　采用老年雄性大鼠短暂性大脑中动脉闭塞 (MCAO)与再灌注模型 ,应用免疫组织化学方法观察大脑中动脉闭塞 90min再灌注 1～ 7d脑组织VEGF蛋白的表达及腹腔内注射地塞米松 ( 2mg·kg-1 ·d-1 ,持续 7d)对VEGF蛋白表达及脑组织含水量的影响。　结果　实验大鼠再灌注1h ,缺血半暗带神经元及同侧大脑中动脉供血区软脑膜开始表达VEGF ,1d达峰值 (P <0 0 1) ,前者于 1d后快速下降 ,后者维持高水平至 7d。缺血半暗带脑血管内皮细胞在 1～ 7d也有较丰富VEGF表达 (P <0 0 1)。地塞米松处理组缺血区的脑微血管内皮细胞VEGF表达明显减少 (P <0 0 1)。地塞米松在缺血再灌注 1～ 7d明显减少缺血脑组织含水量 (P <0 0 5)。　结论　局灶性脑缺血再灌注可诱导VEGF表达 ,地塞米松可抑制缺血再灌注脑组织血管内皮细胞VEGF表达     

缺血预适应对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区血管内皮生长因子及存活素表达的影响

目的通过观察缺血预适应后局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血侧海马CA1区血管内皮生长因子(VEGF)、存活素表达的变化,探讨缺血预适应的脑保护机制。方法 SD大鼠130只,随机分为假手术组(SO组)、脑缺血组(MCAO组)和脑缺血预适应组(BIP组),后两组按缺血后再灌注时间不同分为再灌注2 h、6 h、12 h、24 h、48 h及72 h 6个亚组。采用改良线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞(2 h)模型,应用免疫组化法与Western blot法观察脑缺血后再灌注各时间点海马CA1区VEGF、存活素的表达变化。结果与MCAO组比较,BIP组各时间点VEGF、存活素的阳性细胞数及蛋白量表达均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);两组组内各相邻时间点比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脑缺血预适应可能通过上调VEGF、存活素的表达,发挥脑保护作用。     

电刺激小脑顶核对局灶脑缺血再灌注大鼠bcl-xl、bax蛋白表达的影响

目的 观察电刺激小脑顶核对局灶性缺血再灌注大鼠bcl-xl、bax蛋白表达的影响,探讨电刺激小脑顶核中枢神经元保护的作用机制.方法 大鼠大脑中动脉线栓法制作脑缺血再灌注动物模型,随机分为假手术组(SC组),缺血再灌注组(I/R组),缺血再灌注+电刺激齿状核组(DN组),缺血再灌注组+电刺激小脑顶核组(FNS组). RT-PCR和免疫组织化学法检测凋亡抑制蛋白bcl-xl与促凋亡蛋白bax的表达,用图像分析仪测定光密度值.结果 I/R组与SC组比较,bcl-xl与bax的表达增高(P<0.05),与DN组比较,无显著差异(P>0.05),予以电刺激小脑顶核干预后,上调了bcl-xl的表达,bax的表达明显减少,与I/R组和DN组有显著差异(P<0.05).结论 电刺激小脑顶核增强局灶性缺血再灌注大鼠凋亡抑制蛋白bcl-xl的表达,下调促凋亡蛋白bax的表达,抑制局灶性缺血再灌注后神经细胞凋亡,可能是其中枢神经源保护作用机制之一.     

脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注血-脑脊液屏障损伤的保护作用

目的研究脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注（1／R）血-脑脊液屏障（BBB）损伤的保护作用。方法采用线栓法复制局灶性脑缺血模型，分为假手术组、模型组、脑脉通组、尼莫地平组，后3组又分为脑缺血（I）3h和I／R6、12、24h,3、6d时间点。观察脑组织含水量、病理变化、免疫球蛋白（IgG）表达。结果模型组脑组织含水量升高，IgG漏出增加，BBB通透性增加。脑脉通降低脑组织含水量（I／R24h、3d）、减少IgG漏出（I／R24h～6d）、降低BBB通透性。结论脑脉通改善I／R脑损伤作用显著，其机制可能与改善BBB通透性、降低脑水肿有关。     

脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的　从神经细胞凋亡方面研究脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注脑损伤的保护作用。方法　采用线栓法建立老龄大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤模型 ,观察脑脉通对老龄大鼠脑缺血 3h及再灌注 3h、6h、1 2h、2 4h、72h各组神经细胞凋亡及相关的Bcl 2、Bax基因表达影响 ,并与尼莫地平对照。结果　脑缺血再灌注脑组织细胞损伤明显 ,细胞凋亡显著 ,Bax表达增强。脑脉通和尼莫地平能够明显改善脑组织损伤 ,降低神经细胞凋亡。在脑缺血再灌注过程中 ,尼莫地平可使缺血 3h及再灌注 3h的Bcl 2表达增强 ,降低缺血再灌注过程中Bax表达。脑脉通可明显促进Bcl 2表达和降低Bax表达。脑脉通促进Bcl 2表达的作用明显强于尼莫地平。结论　脑脉通可以通过调控细胞凋亡相关基因Bcl 2 /Bax基因表达 ,对局灶性脑缺血 /再灌后神经元起保护作用     

脑缺血大鼠脑组织胰岛素受体基因表达特点及其机制

目的 观察局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织胰岛索受体基因表达的分布及不同再灌注时间的表达特点，探讨胰岛素受体参与脑缺血再灌注后组织病理生理变化的可能机制。方法 采用改良gealong线栓法建立大鼠大脑中动脉梗死模型。免疫组化法检测大鼠梗死组和正常对照组不同再灌注时间脑组织胰岛素受体蛋白表达。原位杂交法检测脑组织胰岛素受体mRNA表达。结果 梗死组脑组织胰岛素受体mRNA及蛋白表达较对照组明显增加（P〈0．01），再灌注12h达高峰，胰岛素受体阳性表达主要分布于梗死灶周围半暗带区神经元细胞浆、细胞膜、部分神经胶质细胞、血管内皮细胞等处；随再灌注时间延长，上述细胞变化各异。结论 脑缺血再灌注大鼠脑组织胰岛素受体基因和蛋白水平表达增加，半暗带区神经元、部分神经胶质细胞及血管内皮细胞等阳染细胞可能参与脑缺血后组织细胞的能量代谢、促新生细胞形成等病理生理调节过程，胰岛索受体在缺血区血管内皮细胞高表达提示其可能在缺血区血管的病理生理变化中起某种调节作用；胰岛素受体在不同细胞中表达增高可能是缺血脑组织对抗缺血缺氧损伤的自身保护机制之一。     

重组人骨形态发生蛋白-7对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法 采用线栓法建立局灶脑缺血再灌注模型,随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(I组)和rhBMP-7处理组(B组),B组于再灌注开始前30 min给予rhBMP-7 250 μg/ kg尾静脉注射,C组和I组给予等量生理盐水.于血流再灌注后24 h行神经功能缺陷评分后取脑,行脑含水量和梗死体积测定,计算脑梗死体积比,并电镜下观察脑超微结构变化.结果 B组大鼠脑局灶性缺血再灌注24 h后,神经功能缺陷评分明显下降,脑含水量和梗死体积比明显低于I组(P<0.01).神经细胞的坏死程度也明显轻于I组.结论 rhBMP-7缩小梗死体积,减轻脑水肿,对脑缺血再灌注损伤具有保护作用.     

氧化苦参碱对大鼠局灶性脑缺血再灌注后caspase-12表达的影响

目的 探讨氧化苦参碱（OMT）对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及机制。方法取150只SD雄性大鼠制作局灶性脑缺血再灌注后随机分为模型组、OMT组、假手术组各50只,分别采用免疫组化、RT-PCR技术检测各组caspase-12蛋白和mRNA的表达。结果模型组、OMT组随缺血再灌注时间延长,caspase-12蛋白和mRNA的表达逐渐增高;OMT组表达水平在各时间点均显著低于模型组。结论OMT可减轻脑缺血再灌注损伤,其机制为抑制内质网应激通路,减少神经元凋亡。     

盐酸戊乙奎醚预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

将雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I／R组）、东莨菪碱组（Sco组）和盐酸戊乙奎醚组（PH组）。观察测定各组脑梗死体积、大鼠海马神经细胞形态的变化及海马组织N-甲-D-天门冬氨酸（NMDA）受体NR1亚基mRNA的表达水平。结果显示，与I／R组比较，再灌注后PH组脑梗死体积显著减少，海马神经元细胞损伤显著减轻，NMDA受体mRNA表达水平显著降低。认为盐酸戊乙奎醚预处理可以显著改善大鼠局灶脑缺血再灌注后海马神经细胞损伤，从而对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。     

红景天苷对脑缺血再灌注大鼠脑神经元APE／Ref-1的影响

目的 研究红景天苷对局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤后神经可塑性和DNA修复酶APE/Ref表达的影响.方法 Wistar大鼠随机分为假手术组,I/R模型组和红景天苷干预组,采用线栓法制造大鼠大脑局灶缺血(2 h)/再灌注模型,于灌注后0.25、1、3、7 d 4个时间点断头取脑,HE和尼氏染色观察神经元形态学变化,免疫组化方法检测无嘌呤无嘧啶位点/氧化还原因子-1(APE/Ref-1)的表达.结果 与其他两组比较,红景天苷组梗死灶范围明显减小,梗死灶周围皮质神经元损伤明显减轻(P＜0.05);APE/Ref-1阳性细胞数表达显著增高(P＜0.05).结论 红景天可以易化脑I/R损伤后中枢神经系统神经再生和修复的可塑性,抑制APE/Ref-1降低可能是其在I/R早期发挥神经保护作用的一条重要途径.     

脑缺血再灌注大鼠局灶性脑缺血预处理后Nogo-A及NgR的表达

目的观察局灶性脑缺血预处理干预后大鼠脑内Nogo-A、NgR表达的情况。方法建立脑缺血再灌注及预处理模型,将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和缺血预处理组,每组又分为1、2、7 d 3个亚组,预处理时间为10 min,免疫组化法检测大鼠缺血海马区Nogo-A、NgR的表达,RT-PCR方法检测大鼠缺血海马区NgR mRNA的表达。结果与假手术组比较,缺血再灌注组在1、2、7 d 3个时间点Nogo-A及NgR表达均增高;脑缺血预处理干预后,Nogo-A及NgR在各个时间点的表达较缺血再灌注组均明显降低(P<0.05)。结论局灶性脑缺血预处理的干预可以降低大鼠脑内Nogo-A及NgR的表达而提高脑缺血耐受的神经保护作用。