氧化型低密度脂蛋白对巨噬细胞Notch1表达的影响

目的:探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激人单核/巨噬细胞对Notch1表达的影响.方法:将人单核细胞株(THP1)经氟波酯(PMA)刺激转化为巨噬细胞后给予不同浓度ox-LDL刺激,采用RT-PCR及Western blot法检测巨噬细胞中Notch1受体mRNA及蛋白水平的表达,采用RT-PCR及ELISA法测定血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和单核细胞趋化因子1(MCP-1)的表达.结果:与对照组比较,ox-LDL能显著上调巨噬细胞中Notch1受体mRNA及蛋白水平的表达(P＜0.05),增加促炎细胞因子VCAM-1和MCP-1的分泌,并在一定范围内与ox-LDL呈浓度相关性.结论:ox-LDL能够激活巨噬细胞Notch1信号,增加促炎细胞因子分泌,促进巨噬细胞活化.     

低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞源性巨噬细胞胆固醇代谢及低密度脂蛋白受体表达的影响

目的 研究动脉粥样硬化过程中低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞源性巨噬细胞胆固醇代谢和低密度脂蛋白受体表达的影响。方法 以佛波酯刺激分化的THP-1细胞作为单核细胞源性巨噬细胞模型。通过胆固醇酶联法测定细胞内胆圊醇含量，逆转录-聚合酶链反应检测细胞低密度脂蛋白受体mRNA的表达，Western blot检测细胞低密度脂蛋白受体蛋白的表达。结果 与低密度脂蛋白组、阴性组及IgG免疫复合物组比较，低密度脂蛋白免疫复合物组细胞内胆固醇水平明显增高，并且低密度脂蛋白受体mRNA及蛋白的表达增加。结论 低密度脂蛋白免疫复合物能显著增加巨噬细胞内胆固醇含量，亦能够促进低密度脂蛋白受体mRNA与蛋白的表达，提示低密度脂蛋白免疫复合物在动脉粥样硬化进展过程中起重要的作用。     

急性髓性白血病患者外周血Notch信号相关基因的表达变化及意义

目的 观察急性髓性白血病(AML)患者外周血Notch信号相关基因的表达变化,并探讨其临床意义.方法 初诊AML患者30例(初诊组)、完全缓解AML患者30例(缓解组)、健康体检者24例(正常组),采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法检测其外周血Notch1 mRNA、Delta4 mRNA、Jagged2 mRNA、HES1 mRNA.结果 与正常组比较,初诊组Notch1 mRNA、De1ta4 mRNA、Jagged2 mRNA、HES1 mRNA表达水平升高(P均＜0.05),缓解组HES1 mRNA表达水平亦升高(P＜0.05).结论 AML患者外周血Notch信号相关基因表达水平高于正常体检者,外周血Notch信号相关基因检测有助于AML的诊断.     

Notch信号通路相关基因在儿童急性髓系白血病中的表达及意义

目的 探讨Notch信号通路中相关基因在儿童急性髓系白血病(AML)中的表达及意义.方法 采用实时定量RT-PCR法检测20例初诊AML患儿(AML组)和20例完全缓解患儿(对照组)骨髓中Notchl、Notch2、Jagged1、Jagged2、Deha4的表达水平.结果 AML组和对照组骨髓中受体Notch1的表达水平分别为9 651.2±821.5和327.1±135.7,配体Jagged2的表达水平分别为5 291.2±102.3和143.7±25.3,配体Deha4的表达水平分别为16 749.3±382.7和803.5±183.2,两组比较均有统计学意义(P均＜0.01);两组受体Notch2、配体Jagged1的表达比较均无统计学意义(P均＞0.05).结论 儿童AML的发病与Notch信号通路中相关基因的突变或异常表达有关.     

急性冠脉综合征诱导单核-巨噬细胞中Notch信号受体1及炎性细胞因子的表达

目的:探讨在急性冠脉综合征（acute coronary syndrome,ACS）患者外周血单核-巨噬细胞中Notch1分子及炎性细胞因子的表达。方法: 以密度梯度离心法分离36例ACS患者、14例稳定型心绞痛患者及30例健康对照者外周血单核细胞,并以氟波酯（PMA）使之转化为巨噬细胞。分别采用实时（RT）-PCR和Western blot测定巨噬细胞中Notch1 mRNA和其蛋白的表达;采用RT-PCR和ELISA测定炎性细胞因子血管细胞黏附分子-1(VCAM-1) mRNA和其蛋白及单核趋化蛋白-1(MCP-1) mRNA和其蛋白的表达。结果: 与对照组比较,ACS患者巨噬细胞中Notchl mRNA和其蛋白的表达明显升高(P<0.05),ACS诱导的VCAM-1和MCP-1 mRNA和二者的蛋白浓度明显增高(P<0.05)。结论: Notch1信号通路及其介导的巨噬细胞天然免疫应答在动脉粥样硬化易损斑块的发生发展中发挥着重要的调节作用。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达及氧化型低密度脂蛋白摄取的影响

为了研究同型半胱氨酸对血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达及对氧化型低密度脂蛋白摄取的影响，分别在培养的人脐静脉内皮细胞中加入不同浓度的同型半胱氨酸孵育48h后，利用逆转录-聚合酶链反应检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达的改变；采用放射配基法检测细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取。结果发现，随着同型半胱氨酸浓度的增加。提示同型半胱氨酸能促进脐静脉血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达和对氧化型低密度脂蛋白的摄取，此效应可能与同型半胱氨酸致动脉粥样硬化作用有关。     

普伐他汀对氧化修饰低密度脂蛋白诱导的人外周血单核细胞 …

目的：探讨普伐他汀对氧化修饰低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）诱导的人外周血单核细胞（ＰＢＭｓ）增殖、粘附和分泌功能的影响及其除调脂外的抗动脉粥样硬化（ＡＳ）作用。方法在体外分离培养人ＰＢＭｓ,经ｏｘＬＤＬ诱导后,观察不同浓度普伐他汀对其增殖,粘附分子ＣＤ１１ｂ水平及对人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）的粘附和分泌ＴＮＦ－α、ＩＬ－８的影响。结果普伐他汀呈浓度依赖方式抑制ｏｘＬＤＬ诱导的ＰＢＭｓ增殖、粘附和分     

轻度氧化低密度脂蛋白对巨噬细胞内质网应激的诱导作用及其信号通路

目的研究巨噬细胞泡沫化过程中轻度氧化低密度脂蛋白(mm-LDL)对巨噬细胞内质网应激的诱导作用及其信号通路。方法体外培养鼠源RAW264.7巨噬细胞,分别给予mm-LDL(25、50和100 mg/L)和衣霉素(TM)处理6、12和24 h。采用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,酶比色法测定细胞内总胆固醇含量,免疫荧光细胞化学法观测转录激活因子6(ATF6)核转位情况,免疫印迹法检测内质网应激转导子1(IRE1)磷酸化水平和X盒结合蛋白1(XBP1)及内质网分子伴侣糖调节蛋白78(GRP78)蛋白的表达,RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达。结果 mm-LDL呈浓度依赖性增加细胞内总胆固醇含量,胞浆内可见大量油红O染色阳性脂质颗粒,以12 h时最为显著;与内质网应激诱导剂TM相似,mm-LDL显著诱导ATF-6由胞浆向细胞核内转移,并上调磷酸化IRE1及其下游信号分子XBP1和GRP78蛋白的表达,且表达强度随着mm-LDL诱导浓度的增加而增强;50 mg/L mm-LDL处理组GRP78 mRNA的表达于作用后6 h即发生显著上调,为对照组的3.7倍,而蛋白表达水平也明显增加,并于12 h达到高峰,此...     

氧化低密度脂蛋白对U937细胞凋亡的影响及其机制的研究

目的探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对培养的单核巨噬系细胞株U937细胞凋亡的影响,并进一步探讨凋亡产生的机制。方法应用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;Caspase-3、8、9的测定采用免疫组织化学技术。结果ox-LDL组细胞调亡率增加,并且随着作用时间的延长和浓度的增加,凋亡呈递增后递减变化,U937细胞在用ox-LDL培养后LOX-1和Caspase3、8、9表达都增加。结论ox-LDL可诱导U937细胞凋亡,ox-LDL诱导U937细胞凋亡既有线粒体通路,又包含了死亡受体。     

氧化型低密度脂蛋白对人血单核细胞基质金属蛋白酶表达及活性的影响

探讨氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶的表达及其活性的影响。采用体外培养人单核细胞源巨噬细胞，分别应用逆转录聚合酶链式反应和蛋白印迹检测基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9基因和蛋白表达，酶谱法检测基质金属蛋白酶活性。结果发现，不同浓度(10、20、40mg/L)氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9基因表达的影响均明显高于相应浓度低密度脂蛋白组；基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9蛋白表达也明显高于相应浓度低密度脂蛋白组；基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的活性明显高于相应剂量低密度脂蛋白组，又随剂量增加而增高。提示氧化修饰低密度脂蛋白可刺激人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9基因及蛋白的表达，增强其活性，因而有可能促进动脉粥样硬化斑块内基质降解，形成易损斑块，而易损斑块破裂可引起急性冠状动脉事件。     

Notchl信号在食管癌中的表达

目的检测Notchl和JAGl在食管癌的表达,分析Notch在食管癌中的作用和意义。方法应用RT-PCR检测126例食管癌组织和52例癌旁正常食管组织中Notchl和JAG1的表达,分析两者的表达水平与临床病理特征的关系。结果癌组织与癌旁组织中Notchl表达率分别为21．4％（27／126）和61．5％（32／52）,两者比较差异有显著性（P〈0．05）;癌组织中Notchl标准化系数低于癌旁组织,标准化系数中位数分别0．63和0．82,两者比较差异有显著性（P〈0．05）。JAGl在癌旁组织的表达率为10％（5／52）,在癌组织中无表达。Notchl表达与肿瘤大小、分化程度的相关性均有显著性差异（P〈0．05）。结论Notchl表达失调可能与食管癌发生发展相关。     

血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1在人脐静脉内皮细胞表达CD40中的作用

目的研究氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞表达CD40中血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的作用。方法在氧化低密度脂蛋白作用人脐静脉内皮细胞前预先用血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1阻断剂角叉(菜)胶(κ-carrageenan)和多聚肌苷酸(PIA)作用1h,应用亲合组织化学技术检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达,流式细胞技术检测细胞表面CD40的表达。结果预先加入血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1阻断剂PIA和角叉(菜)胶的CD40的表达低于氧化低密度脂蛋白组(P<0.05)。结论在人脐静脉内皮细胞的炎症反应中,氧化低密度脂蛋白通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1途径激活了CD40的表达。     

氧化型低密度脂蛋白诱导肝窦内皮细胞植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达

目的：探讨植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）受体1（LOX-1）在肝窦内皮细胞（HSECs）中的表达和ox-LDL对其表达的调控作用。方法使用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting法从基因和蛋白水平检测未经处理HSECs 中LOX-1的表达。应用不同浓度ox-LDL（0、20、40、60、80和100 mg/L）对HSECs作用24 h并应用80 mg/L ox-LDL对HSECs作用不同时间（0、12、24和48 h）,作用后实时定量PCR检测HSECs内LOX-1 mRNA的表达水平,Western blotting法检测细胞内LOX-1蛋白表达。给予80 mg/L ox-LDL干预组多聚肌苷酸250 mg/L作用24 h后,测定LOX-1 mRNA和蛋白的表达。采用单因素方差分析及t检验进行数据分析。结果 LOX-1 mRNA和蛋白在HSECs中均有表达。20～80 mg/L ox-LDL组HSECs中LOX-1 mRNA、蛋白表达水平随ox-LDL剂量增加而升高,与剂量有明显相关性（F＝38.7、3.43,均P＜0.05）。与80 mg/L ox-LDL组相比,100 mg/L ox-LDL 组 LOX-1 mRNA、蛋白表达下降,差异有统计学意义（ t ＝23.75、18.26, P ＜0.05）。80 mg/L ox-LDL对HSECs作用时间在0～24 h时,随着时间延长,LOX-1 mRNA、蛋白表达递增,与ox-LDL作用时间有明显相关性（F＝2.36、0.33,均P＜0.05）。与作用24 h相比,作用48 h组HSECs中LOX-1 mRNA、蛋白表达下降（t＝69.21、36.27,均P＜0.05）。与80 mg/L ox-LDL组相比,多聚肌苷酸组中LOX-1 mRNA和蛋白表达降低,两组差异均有统计学意义（ t＝54.93、28.19,均P＜0.05）。结论LOX-1存在于HSECs。在一定浓度和时间范围内,ox-LDL对HSECs LOX-1的调控作用具有时间和浓度依赖性,而多聚肌苷酸可部分抑制这种效应。     

氧化修饰低密度脂蛋白作为抗原被树突状细胞递呈的实验研究

目的探讨氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)是否能作为抗原被树突状细胞(DC)直接递呈给淋巴细胞。方法以贴壁法从人外周血分离单核细胞,加入500IU/ml的rhGM-CSF和500IU/ml的rhIL-4,培养6d后加入LPS(20ng/ml)、LDL(10μg/ml)、ox-LDL(10μg/ml),作用48h,以流式细胞仪检测DC表型(CD14、CD86和HLA-DR)的变化,与同种异体T淋巴细胞以1∶5和1∶10的比例行混合淋巴细胞增殖反应,培养4d,以MTT法检测增殖反应。结果ox-LDL10μg/ml可促进DCCD86和HLA-DR的表达,有效激发同种异体淋巴细胞反应。结论ox-LDL可在体外作为抗原被DC递呈,ox-LDL和DC均可能参与致动脉粥样硬化(AS)的特异性免疫反应。     

Cytotoxic effect of oxidized low density lipoprotein on macrophages

Macrophage or macrophage-derived foam cell death is one of the characteristic events in the development of cell-poor lipid-rich cores of the advanced atherosclerotic plaques. Although the in vivo mechanism for the death of macrophages is unclear, one possible candidate for the agent which induces macrophage cell death is oxidized low density lipoprotein (Ox-LDL). To investigate the mechanism of Ox-LDL-induced macrophage cell death, we have recently employed macrophage cell genetics and isolated mutant cells resistant to the cytotoxic effect of Ox-LDL from mutagenized populations of murine macrophage-derived J774 cells (Hakamata, H., Miyazaki, A., Sakai, M., Matsuda, H., Suzuki, H., Kodama, T., and Horiuchi, S. (1998) J. Lipid Res. 39, 482-494). The results obtained showed that one mutant form, JO21b cells, was characterized by reduced expression of type I and type II class A macrophage scavenger receptors (MSR-AI/AII) with a concomitant decrease in the uptake of Ox-LDL. Moreover, peritoneal macrophages obtained from MSR-AI/AII-knockout mice showed a higher resistance to the cytotoxic effect of Ox-LDL compared to those of their wild-type littermates. From these results, we have concluded that Ox-LDL cytotoxicity to macrophages is enhanced by effective endocytic uptake of Ox-LDL through MSR-AI/AII. These findings imply a possibility that formation of the cell-poor lipid-rich core is also enhanced by MSR-AI/AII-mediated uptake of Ox-LDL and subsequent macrophage cell death in atherosclerotic lesions.     

Src在氧化型低密度脂蛋白诱导平滑肌细胞表型转化中的作用

目的:探究Src对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导血管平滑肌细胞表型转化的调控作用。方法:体外培养小鼠原代平滑肌细胞,以不同浓度的oxLDL刺激血管原代平滑肌细胞,检测平滑肌细胞表型分子平滑肌细胞表型肌球蛋白重链11(MYH11)、巨噬细胞表型CD68的表达变化,以及Src的激活情况。通过小干扰RNA(siRNA)抑制Src蛋白表达,Src特异性抑制剂PP2抑制Src激活,观察Src对oxLDL诱导的平滑肌细胞表型转化的影响。结果:分别以0、12.5、25.0、50.0μg/mL oxLDL刺激血管平滑肌细胞后发现MYH11的mRNA及蛋白表达逐渐下降(P<0.05),CD68的mRNA及蛋白表达逐渐升高(P<0.05)。以不同浓度(12.5、25.0、50.0μg/mL)、不同时间(15、30、60 min)的oxLDL刺激平滑肌细胞后,发现Src活性逐渐升高(P<0.05)。敲减Src siRNA或以PP2抑制Src蛋白活性后,oxLDL诱导的平滑肌细胞向巨噬细胞转化的分子表型的表达水平受到抑制。结论:oxLDL可以通过提高Src活性,进而诱导平滑肌细胞表型改变。     

孤儿核受体Nur77抑制小鼠巨噬细胞脂质沉积

目的 探讨孤儿核受体Nur77对巨噬细胞脂质沉积的影响及其机制.方法 建市稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)和GFP-Nur77质粒cDNA的小鼠巨噬细胞RAW264.7单克隆细胞系,40 μg/ml氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激24 h后,用油红O染色定性观察细胞内脂质沉积,液相色谱-质谱联用法定量检测细胞内胆固醇酯,用荧光实时定量PCR(RT-PCR)检测CD36和腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA水平的变化,用流式细胞仪检测CD36蛋白表达,Western blot方法检测ABCA1蛋白表达.结果 Nur77能够显著减少ox-LDL诱导引起的巨噬细胞内脂质沉积.ox-LDL诱导前,GFP-RAW264.7组和GFP-Nur77-RAW264.7组细胞内总胆固醇含量分别为(38.66±0.13)μg/mg蛋白和(36.25±0.48)μg/mg蛋白,细胞内胆固醇酯含量为(18.85±0.03)μg/mg蛋白和(17.79±0.86)μg/mg蛋白.ox-LDL诱导24h后,GFP-RAW264.7组和GFP-Nur77-RAW264.7组细胞内总胆固醇含量分别为(68.98±1.68)μg/mg蛋白和(50.94±1.63)μg/mg蛋白,细胞内胆同醇酯含量为(35.92±2.28)μg/mg蛋白和(24.81±2.92)μg/mg蛋白.同时伴随CD36的mRNA及蛋白表达下降和ABCAI的mRNA及蛋白表达上调.结论 孤儿核受体Nur77通过减少脂质摄取和增加脂质排出而减轻巨噬细胞内脂质沉积,这可能是其抗动脉粥样硬化的重要机制之一.