李氏5号中药对D-半乳糖老化小鼠海马超微结构及胰岛素受体底物表达的影响

目的：观察李氏5号中药对D-半乳糖老化小鼠海马超微结构和磷脂酰肌醇酯3激酶(phosphatidyl inoditide-3’OH kinase，PI3K)、胰岛素受体底物-1[insulin-receptor substrate-1，IRS-1)、胰岛素受体底物-2(insulin receptor substrate-2，IRS-2)表达的影响。方法：将132只小鼠随机分为6组，正常对照(C)组、D-半乳糖模型(D)组、李氏5号大剂量(L)组、中剂量(M)组、小剂量(S)组、多奈哌齐(A)组。D，L，M，S，A5组每日皮下注射半乳糖100mg／kg.L，M，S3个治疗组分别灌胃李氏5号方1．2，0．6，0．3g／(kg&;#183;d)，A组多奈哌齐0．75mg／(kg&;#183;d)灌胃。4个月后，取小鼠海马CAl区组织进行电镜观察，行脑冷冻切片，用PI3K，IRS-1，IRS-2抗体进行免疫组化染色。结果：①电镜结构显示，D-半乳糖老化小鼠海马CA1区神经元核固缩，线粒体、高尔基体等细胞器肿胀，血管足突细胞肿胀，管腔变窄；李氏5号中药保护可以明显改善这种现象。②免疫组织化学染色结果显示3种抗体C组深染的阳性细胞在海马广泛分布，D组海马阳性反应细胞着色浅，少有突起，细胞数目少，分别为C组的48．8％，57．0％和60．8％。李氏5号方组染色结果与C组相似，A组亦有相同结果。结论：D-半乳糖老化小鼠海马CA1区出现明显超微结构病理改变，海马PI3K，IRS-1，IRS-2的表达明显下降；李氏5号中药保护能明显改善CA1区超微结构病理改变，上调以上3项指标的表达。     

李氏5号方水提液对D-半乳糖老化小鼠海马神经元凋亡级联反应的影响

目的:观察李氏5号方水提液对D-半乳糖老化小鼠海马神经元凋亡级联反应的影响。方法:将小鼠随机分为5组:正常对照组(C组)、D-半乳糖模型组(D组)、李氏5号方大剂量药物治疗组(L组)、中剂量药物治疗组(M组)、小剂量药物治疗组(S组)。D,L,M,S4组每日皮下注射半乳糖65mg/kg。L,M,S3个治疗组分别灌胃李氏5号方0.6,0.3和0.15g/kg,连续3个月。免疫组织化学染色方法和WesternBlotting检测海马神经元(凋亡诱导因子(AIF),Bax细胞色素C(CytC),Bcl-2的表达。结果:模型小鼠海马神经元AIF,Bax,CytC的阳性细胞数分别比正常对照小鼠增加4.4倍、6.2倍和4.4倍,而Bcl-2则仅为正常小鼠的12%。李氏5号方水提液3种不同剂量均不同程度使这4种蛋白质表达的异常有所恢复,但未能达到完全正常水平。结论:D-半乳糖老化小鼠的海马神经元存在明显的凋亡级联反应,李氏5号方水提液对改善凋亡级联反应有一定作用。     

李氏5号方水提液对D-半乳糖老化小鼠海马神经元凋亡级联反应的影响

目的：观察李氏5号方水提液对D-半乳糖老化小鼠海马神经元凋亡级联反应的影响。方法：将小鼠随机分为5组：正常对照组(C组)、D．半乳糖模型组(D组)、李氏5号方大剂量药物治疗组(L组)、中剂量药物治疗组(M组)、小剂量药物治疗组(S组)。D，L，M，S4组每日皮下注射半乳糖65mg／kg。L，M，S3个治疗组分别灌胃李氏5号方0．6，0．3和0．15g／kg，连续3个月。免疫组织化学染色方法和Western Blotting检测海马神经元(凋亡诱导因子(AIF)，Bax细胞色素C(Cyt C)，Bcl-2的表达。结果：模型小鼠海马神经元AIF，Bax，Cyt C的阳性细胞数分别比正常对照小鼠增加4．4倍、6．2倍和4．4倍．而Bcl-2则仅为正常小鼠的12％。李氏5号方水提液3种不同剂量均不同程度使这4种蛋白质表达的异常有所恢复，但未能达到完全正常水平。结论：D-半乳糖老化小鼠的海马神经元存在明显的凋亡级联反应，李氏5号方水提液对改善凋亡级联反应有一定作用。     

番茄汁对D-半乳糖衰老模型大鼠海马神经元的抗衰老作用

目的:探讨番茄汁对衰老模型大鼠海马神经元的抗衰老作用。方法:采用随机数字表将30只Wistar大鼠随机分成3组,建立D-半乳糖亚急性衰老模型,采用生化、光镜和电镜等方法,观察番茄汁对衰老大鼠海马神经元的影响。结果:番茄汁组大鼠大脑丙二醛含量犤(3.41±0.36)μmol/g犦,与乳糖组犤(4.01±0.27)μmol/g犦相比显著降低(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)活性犤(25.06±1.86)NU/mg犦与D-半乳糖组犤(20.63±2.52)NU/mg犦相比明显增高(P<0.01);海马神经元形态结构衰老征象明显减轻。结论:番茄汁可延缓海马神经元的衰老进程,具有一定的抗衰老作用。     

救脑益智胶囊对D-半乳糖老化小鼠海马神经元β-淀粉样肽及其相关蛋白表达的影响

背景D-半乳糖老化小鼠脑内存在的β-淀粉样肽(β-amyloid，Aβ)产生过多，是否与脑老化过程有关?目的观察中药救脑益智胶囊对D-半乳糖老化小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达的影响.设计随机对照的实验研究.地点和对象实验地点首都医科大学宣武医院神经生化室.昆明小鼠60只，无特定病原体动物环境(SPF)级，雄性，体质量26～28 g，由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供.方法采用免疫组织化学染色和免疫印记方法，检测D-半乳糖老化小鼠模型海马神经元Aβ、β-分泌酶、内质网Aβ结合蛋白(endoplasmicreticulum amyloid β-peptide inding protein，ERAB)和早老蛋白-1的表达水平，并观察中药救脑益智胶囊的保护作用.主要观察指标Aβ、β-分泌酶、ERAB和早老蛋白-1免疫组织化学染色结果和凝胶转移电泳分析.结果对照组小鼠海马CA1区神经元有少量的Aβ及其相关蛋白表达，而D-半乳糖老化小鼠海马CA1区神经元Aβ及其相关蛋白表达水平明显增加，与对照组比较差异有高度显著性意义(P＜0.01)，中药组上述各种蛋白的表达结果与对照组接近.结论D-半乳糖老化小鼠海马神经元存在着Aβ及其相关蛋白表达的上调，中药救脑益智胶囊可使之恢复正常水平，对神经元具有一定的营养和保护作用.     

APP17肽对D-半乳糖脑老化小鼠海马神经元凋亡的影响

目的 研究APP17肽对D-半乳糖脑病小鼠海马神经元凋亡的影响，为进一步探讨APP17肽对脑老化的临床治疗意义提供理论依据。方法 雄性昆明小鼠66只，按随机数字表法分为3组：正常对照组(C组)、D-半乳糖对照组(D组)、APP17肽治疗组(P组)，每组动物22只。用D-半乳糖制备脑老化模型，并皮下注射APE，17肽对D-半乳糖脑老化小鼠进行治疗，3个月后取脑组织做Bcl-2，Bax，CREB，Akt，AIF免疫组织化学染色。结果 D-半乳糖脑病小鼠海马内Bax，AIF阳性反应神经元细胞数目多，细胞计数与C组及P组有显著性差异；胞质与突起深染，而正常小鼠及APt，17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性细胞数目少，染色淡；D-半乳糖小鼠海马内Bct-2，CREB(cAMP反应结合蛋白)，AKt阳性细胞数目少，染色淡，细胞计数与C组及P组有显著性差异；而正常小鼠及APP17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元细胞数目多，胞质与突起深染。结论 促进凋亡的Bax，AIF(凋亡诱导因子)在D-半乳糖小鼠海马表达增加；与凋亡呈负相关的Bct-2，CREB，Akt在D-半乳糖小鼠海马表达降低APP17肽能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内Bcl-2，Bax．CREB，Akt，AIF的表达，使之接近正常。     

APP17肽和救脑益智胶囊水提液对D-半乳糖脑老化小鼠海马蛋白磷酸酯酶1表达的影响

背景：D-半乳糖衰老模型具有与人类自然衰老相类似的生化改变，蛋白磷酸酯酶1在D-半乳糖脑老化小鼠表达降低是否与脑老化过程有关还有待于进一步研究。 目的：探讨APPl7肽及救脑益智胶囊水提液对D-半乳糖脑老化小鼠海马蛋白磷酸酯酶1表达的影响。 设计：随机对照观察。 单位：首都医科大学基础医学院病理学教研室和宣武医院脑老化研究室。 材料：实验于2003—07／2004—07在首都医科大学文验动物中心完成，选用雄性昆明小鼠40只。购自中国医学科学院药物研究所。 方法：将昆明小鼠随机分为5组：正常对照组、D-半乳糖对照组、APP17肽治疗组、中药小剂量治疗组、中药大剂量治疗组，每组动物8只。脑老化小鼠模型D-半乳糖组，APP17肽治疗组，中药小剂量治疗组，中药大剂量治疗组4组每日皮下注射半乳精50mg／kg体质量，同时在APP17肽治疗组皮下注射APPl7肽，每次每只小鼠注射含APP17肽0．35μg的生理盐水0．1mL，1次／d，连续注射3个月。中药冶疗组分别给予0．3g/kg和1．0g/kg的救脑益智水提液（由北京朝阳门医院和山西曲沃传统医学研究所研制，其主要成分有：党参、白术、龟甲、穿山甲等）灌胃，1次／d。两个对照组每天注射和灌注等量的生理盐水，3个月后取脑组织做蛋白磷酸酯酶1免疫组织化学染色。 主要观察指标：免疫组织化学染色检测各组动物海马蛋白磷酸酯酶1的表达。 结果：40只小鼠均进入结果分析，无脱失值。D-半乳糖小鼠和大剂量救脑益智胶囊水提液治疗组小鼠海马蛋白磷酸酯酶1阳性细胞数目少，染色淡；正常小鼠、APP17肽保护和救脑益智胶囊水提液小剂量治疗的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经冗数目多，胞浆与突起深染。 结论：抑制凋亡的蛋白磷酸酯酶1在D-半乳糖小鼠海马表达降低。APP17肽和小剂量救脑益智胶囊水提液治疗能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内蛋白磷酸酯酶1的表达，使之接近正常。而大剂量救脑益智胶囊水提液治疗无此作用．其量效关系特点还需要进一步考察验证。     

蜕皮甾酮对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素受体底物表达的影响

目的：探讨蜕皮甾酮对胰岛素抵抗（IR）HepG2细胞胰岛素受体底物（IRS）蛋白表达的影响。方法：胰岛素抵抗HepG2细胞模型建立后,培养液中加入蜕皮甾酮共同孵育,观察蜕皮甾酮及吡格列酮对模型细胞葡萄糖掺入率的影响;应用免疫细胞化学染色法等方法观察蜕皮甾酮对胰岛素抵抗HepG2细胞IRS-1、IRS-2表达的影响。结果：与模型细胞组比较,1×10^-5mol／L蜕皮甾酮可使IR HepG2细胞IRS-1、IRS-2蛋白的表达显著增加。结论：蜕皮甾酮的胰岛素增敏作用可能与胰岛素信号转导分子IRS-1、IRS-2蛋白的表达增强有关。     

桑叶黄酮对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素受体底物表达的影响

目的 观察桑叶黄酮对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素受体底物(IRS)蛋白表达的影响,探讨桑叶黄酮时胰岛素敏感性的作用及可能的分子机制.方法 用高胰岛素诱导培养HepG2细胞,建立胰岛素抵抗细胞模型,于培养液中加入桑叶黄酮共同孵育,观察桑叶黄酮对HepG2细胞模型葡萄糖掺入率的影响;应用Western blot等方法观察桑叶黄酮对模型细胞IRS蛋白表达的影响.结果 桑叶黄酮(0.01g/L)可增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖掺入率[(33.9±1.0)nmol/(mg·h)],与模型组[(27.9±1.1)nmol/(mg·h)]相比,差异有统计学意义(P＜0.01);桑叶黄酮可使模型细胞IRS蛋白的表达显著增加(0.221±0.021),与模型组(0.132±0.014)相比,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 桑叶黄酮能提高胰岛素的敏感性,改善胰岛素抵抗,其胰岛素增敏作用可能与胰岛素信号转导分子IRS蛋白的表达增强有关.

Abstract：

Objective To observe the role of mulberry flavone on the expression of insulin receptor substrate(IRS)in HepG2 cells with insulin resistance, and to explore the possible molecular mechanism that mulberry flavone improves insulin resistance. Methods HepG2 cells were cultured to establish insulin-resistance cell model in high concentration of insulin, and then incubated with mulberry flavone. Effect of mulberry flavone on the HepG2 cell model of glucose incorporation rate was observed. Western blot was used to observe the variety of IRS protein expression. Results Mulberry flavone increased the glucose incorporation rate of (33. 9 ± 1.0)higher than that of Conclusions Mulberry flavone can improve insulin resistance. Furthermore, IRS protein expression increasing is the possible molecular mechanism that mulberry flavone improves insulin resistance.     

APP17肽和救脑益智胶囊水提液对D-半乳糖脑老化小鼠海马蛋白磷酸酯酶1表达的影响

背景:D-半乳糖衰老模型具有与人类自然衰老相类似的生化改变,蛋白磷酸酯酶1在D-半乳糖脑老化小鼠表达降低是否与脑老化过程有关还有待于进一步研究。目的:探讨APP17肽及救脑益智胶囊水提液对D-半乳糖脑老化小鼠海马蛋白磷酸酯酶1表达的影响。设计:随机对照观察。单位:首都医科大学基础医学院病理学教研室和宣武医院脑老化研究室。材料:实验于2003-07/2004-07在首都医科大学实验动物中心完成,选用雄性昆明小鼠40只。购自中国医学科学院药物研究所。方法:将昆明小鼠随机分为5组:正常对照组、D-半乳糖对照组、APP17肽治疗组、中药小剂量治疗组、中药大剂量治疗组,每组动物8只。脑老化小鼠模型D-半乳糖组,APP17肽治疗组,中药小剂量治疗组,中药大剂量治疗组4组每日皮下注射半乳糖50mg/kg体质量,同时在APP17肽治疗组皮下注射APP17肽,每次每只小鼠注射含APP17肽0.35μg的生理盐水0.1mL,1次/d,连续注射3个月。中药治疗组分别给予0.3g/kg和1.0g/kg的救脑益智水提液(由北京朝阳门医院和山西曲沃传统医学研究所研制,其主要成分有:党参、白术、龟甲、穿山甲等)灌胃,1次/d。两个对照组每天注射和灌注等量的生理盐水,3个月后取脑组织做蛋白磷酸酯酶1免疫组织化学染色。主要观察指标:免疫组织化学染色检测各组动物海马蛋白磷酸酯酶1的表达。结果:40只小鼠均进入结果分析,无脱失值。D-半乳糖小鼠和大剂量救脑益智胶囊水提液治疗组小鼠海马蛋白磷酸酯酶1阳性细胞数目少,染色淡;正常小鼠、APP17肽保护和救脑益智胶囊水提液小剂量治疗的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元数目多,胞浆与突起深染。结论:抑制凋亡的蛋白磷酸酯酶1在D-半乳糖小鼠海马表达降低。APP17肽和小剂量救脑益智胶囊水提液治疗能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内蛋白磷酸酯酶1的表达,使之接近正常。而大剂量救脑益智胶囊水提液治疗无此作用,其量效关系特点还需要进一步考察验证。     

施普善对D-半乳糖拟衰老小鼠学习记忆功能的影响

目的:探讨施普善对D-半乳糖拟衰老小鼠学习记忆能力的影响及其机制。方法:采用D-半乳糖诱导的脑老化小鼠动物模型,分别用游泳水迷宫测定小鼠学习记忆能力;用化学发光法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性;用硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛含量。结果:D-半乳糖模型组小鼠的游泳时间明显延长犤(44.91±12.86)s犦、正确次数明显降低犤(2.58±1.87)次/d犦,与正常对照组犤(28.11±12.75)s,(4.33±1.72)次/d犦相比,差异有显著性意义(t=3.694,t=3.258,P<0.01)。应用施普善6周后,其大、中剂量组小鼠的游泳时间明显降低犤(28.06±13.06),(27.85±13.21)s犦,正确次数明显增加(4.58±1.66),(4.63±1.81)次/d犦,与D-半乳糖组相比,差异均有显著性意义(t=3.574,3.508;t=3.416,3.349,P<0.01);并能显著提高脑组织中SOD的活性犤(30232.38±5133.53),(29653.26±4878.64)nkat犦,降低丙二醛含量犤(630.00±59.40),(626.74±49.68)nmol/g犦,与D-半乳糖组犤(22892.74±4540.07)nkat,(749.69±92.80)nmol/g犦相比,差异均有显著性意义(t=3.418,3.277;t=3.168,3.337,P<0.01)。结论:施普善能明显的改善D-半乳糖诱导的脑老化小鼠学习记忆能力,提高脑组织中SOD的活性,降低丙二醛的含量。     

D-半乳糖诱导衰老小鼠模型的建立与评价

背景:目前构建衰老动物模型的方法主要有注射D-半乳糖,臭氧损伤,去胸腺,采用老龄动物等.因D-半乳糖造模简单、试验周期相对较短,故目前广泛应用于衰老试验研究.目的:使用D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型,并对其进行行为学、生化以及免疫等方面的评价.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-03/08在南通大学医学院完成.材料:ICR小鼠35只,体质量(18±2)g,雌雄兼用.随机分为正常对照组15只,衰老模型组20只.方法:衰老模型组小鼠用D-半乳糖按120 mg/kg背部皮下注射6周,1次/d,造成亚急性衰老模型:正常对照组不予药物.主要观察指标:使用Y型电迷宫检测小鼠的学习、记忆功能;使用相关试剂盒测定血清中丙二醛浓度、超氧化物歧化酶活力和脑中脂褐质含量、单胺氧化酶-B活性以及肝中谷胱廿肽过氧化物酶活性等生化指标;单向琼脂扩散法测定血清中IgG含量;四甲基偶氮唑盐法测定小鼠脾淋巴细胞转化刺激指数;ELISA检测血清中细胞因子白细胞介素2,γ干扰素的浓度.结果:与正常对照组相比,γ迷宫显示衰老模型组小鼠记忆功能明显下降,表现为不同时间的正确反应率降低,潜伏期延长;生化指标显示模型小鼠血清中丙二醛及脑中脂褐质含量增加、血清中超氧化物歧化酶与肝中谷胱甘肽过氧化物酶活力下降,而脑中单胺氧化酶B活力没有明显改变:免疫相关指标显示模型小鼠血清IgG水平下降、脾淋巴细胞转化刺激指数降低、血清中细胞因子γ干扰素的浓度减少,白细胞介素2变化不明显.结论:D-半乳糖建立亚急性衰老模型小鼠记忆功能下降、氧自由基产物增加和抗氧化能力下降、免疫功能降低,可用于行为学、抗氧化、以及免疫等方面的抗衰老药效研究.     

草果知母汤对癫痫大鼠海马神经元超微结构的影响

目的：观察中药复方草果知母汤对癫痫大鼠海马神经元超微结构的影响。方法：实验于2005-03／05在广西中医学院中心实验室和广西医科大学电镜室完成。选择雄性SD大鼠32只，随机数字表法分为4组，即正常组、模型组、中药组和西药组；除正常组外，其他组动物均以戊四唑慢性诱导复制癫痫模型，造模同时给药，中药组每天给予草果知母汤（草果10g，知母10g，厚朴10g，半夏10g，黄芩10g，甘草10g等，广西中医学院第一附属医院研制，批号：20050108）灌胃，5g/kg；西药组每天给予苯巴比妥混悬液灌胃，60mg／kg；模型组和正常组每天均以双蒸水灌胃2mL／kg；1次／d，持续5周。从第2周开始，每周末造模后1h，各组抽取2只大鼠，采用透射电镜观察海马区神经元超微结构。结果：纳入大鼠32只，实验过程中，模型组有2只大鼠因惊厥发作而死亡；中药组、西药组各有1只大鼠不明原因死亡，进入结果分析28只。①模型组海马区神经元超微结构损伤显著，从第3周开始，神经元数目逐渐减少，至第5周，海马区出现较多的暗细胞，胶质细胞数目增多，神经元出现髓样变性，周围的线粒体肿胀，线粒体棘及其上的颗粒明显减少，滑面内质网空泡化，粗面内质网膨胀，其上的核糖体数量减少，高尔基体肿胀，胞内溶酶体数量增多，染色质浓染，核仁浓缩、变小，突触的数量明显减少，突触间隙及前后突触体内的囊泡的数量明显减少。（参中药组、西药组神经元数目略减少，形态结构未见明显改变。（固正常组未见明显改变。结论：戊四唑慢性诱导癫痫发作可致大鼠海马区神经元超微结构明显损伤，草果知母汤具有良好地抗损伤作用。     

草果知母汤对癫痫大鼠海马神经元超微结构的影响

目的:观察中药复方草果知母汤对癫痫大鼠海马神经元超微结构的影响。方法:实验于2005-03/05在广西中医学院中心实验室和广西医科大学电镜室完成。选择雄性SD大鼠32只,随机数字表法分为4组,即正常组、模型组、中药组和西药组;除正常组外,其他组动物均以戊四唑慢性诱导复制癫痫模型,造模同时给药,中药组每天给予草果知母汤(草果10g,知母10g,厚朴10g,半夏10g,黄芩10g,甘草10g等,广西中医学院第一附属医院研制,批号:20050108)灌胃,5g/kg;西药组每天给予苯巴比妥混悬液灌胃,60mg/kg;模型组和正常组每天均以双蒸水灌胃2mL/kg;1次/d,持续5周。从第2周开始,每周末造模后1h,各组抽取2只大鼠,采用透射电镜观察海马区神经元超微结构。结果:纳入大鼠32只,实验过程中,模型组有2只大鼠因惊厥发作而死亡;中药组、西药组各有1只大鼠不明原因死亡,进入结果分析28只。①模型组海马区神经元超微结构损伤显著,从第3周开始,神经元数目逐渐减少,至第5周,海马区出现较多的暗细胞,胶质细胞数目增多,神经元出现髓样变性,周围的线粒体肿胀,线粒体棘及其上的颗粒明显减少,滑面内质网空泡化,粗面内质网膨胀,其上的核糖体数量减少,高尔基体肿胀,胞内溶酶体数量增多,染色质浓染,核仁浓缩、变小,突触的数量明显减少,突触间隙及前后突触体内的囊泡的数量明显减少。②中药组、西药组神经元数目略减少,形态结构未见明显改变。③正常组未见明显改变。结论:戊四唑慢性诱导癫痫发作可致大鼠海马区神经元超微结构明显损伤,草果知母汤具有良好地抗损伤作用。     

神经节苷脂GM1对D-半乳糖致衰老模型小鼠脑海马区神经发生的保护作用

目的：观察神经节苷脂GM1对D-半乳糖致衰老模型小鼠脑海马神经发生的保护作用。方法：建立了D-半乳糖小鼠致衰老模型，采用免疫组织化学方法观察GM1干预对海马神经前体细胞的增殖、存活和神经元分化的作用。结果：在模型鼠海马DG区的颗粒细胞和CA1、CA3区可观察到锥形神经元的死亡，TUNEL阳性细胞位于神经前体细胞所在的颗粒细胞层和门区的交界处。GM1干预后明显保护海马区新生细胞的增殖和生存。结论：GM1通过对抗D-半乳糖导致的细胞凋亡和促进海马神经发生的途径发挥其延缓衰老的作用。