家族性高胆固醇血症性黄瘤病2例及家系分析

目的 了解原发性家族性高胆固醇血症性黄瘤病的临床及遗传特征。方法对2例家族性高胆固醇血症性黄瘤病患者进行家系分析，检查了患儿及其直系亲属的血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及甘油三酯(TG)等血脂情况，并通过重组DNA技术检测患者基因异常情况。结果2例先证者自幼出现皮肤黄色瘤，例1患者有角膜环。2例患儿及父或母TC、LDL-C或TG升高。其家系中有高血压或高血脂或猝死者。基因检测发现患者第19号染色体的外显子有基因突变。据临床特点、血脂情况、基因检测可确诊为原发性家族性高胆固醇血症性黄瘤病，其家系遗传方式符合常染色体显性遗传规律。结论家族性高胆固醇血症性黄瘤病是一常染色体显性遗传性疾病，黄色瘤及血清TC、LDL-C升高是其临床特征，该病为基因突变导致低密度脂蛋白受体(LDL-R)缺陷所致的遗传性疾病。     

应用改良连锁分析初筛家族性高胆固醇血症的候选基因

目的 应用改良连锁分析方法对2个纯合子家族性高胆固醇血症（FH）家系进行候选基因初筛,为后期测序明确方向,早期发现致病基因。方法 2010年6月和2010年7月首都医科大学附属北京安贞医院收治2例FH先证者,所有家系成员进行血脂测定、心电图、超声心动图及颈动脉超声检查,记录家系成员的其他临床资料（年龄、性别、发病年龄、病程、家族史及治疗情况）。选择新的微卫星位点和毛细管电泳仪进行连锁分析初筛,高度连锁者进一步测序明确致病基因。结果 先症者1心电图示左心室肥厚;先症者2心电图大致正常。先证者1超声心动图示主动脉瓣反流;先证者2超声心动图示左房室瓣反流。先证者1颈动脉超声示颈动脉内中膜增厚,颈动脉内斑块形成;先证者2颈动脉超声示颈动脉内中膜增厚。家系1中胆固醇增高者总胆固醇（TC）水平〔（6.98±1.99）mmol/L〕高于血脂正常者〔（3.20±1.02）mmol/L〕（t=7.023,P＜0.001）;胆固醇增高者低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平〔（3.02±2.26）mmol/L〕高于血脂正常者〔（1.98±0.93）mmol/L〕（t=3.497,P=0.004）。家系2中胆固醇增高者TC水平〔（8.12±3.65）mmol/L〕高于血脂正常者〔（4.37±1.01）mmol/L〕（t=4.355,P=0.001）;胆固醇增高者LDL-C水平〔（5.72±3.92）mmol/L〕高于血脂正常者〔（2.72±0.62）mmol/L〕（t=3.293,P=0.005）。改良连锁分析发现先症者1的致病基因与低密度脂蛋白受体（LDL-R）基因高度连锁,进一步核苷酸序列分析发现该患者LDL-R突变是中国罕见致病突变。先证者2的致病基因与已知致病基因均不连锁,推测可能存在第4种新的未知致病基因。结论 FH应用改良连锁分析方法成功发现1例中国罕见突变,推测可能还有新的未知致病基因存在。     

低密度脂蛋白受体功能与基因突变的关系

目的:分析家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体(LDLR)功能变化,寻找基因突变位点;阐明该基因突变类型对LDLR功能的影响。方法:患儿及其父系、母系三代共30人检查血脂和临床表现,作系谱分析,确定该患儿符合家族性高胆固醇血症纯合子的诊断;培养患儿皮肤成纤维细胞,用受体的放射性配体结合技术.定量测定细胞的LDLR的功能;提取外周血基因组DNA对LDLR基因的相应外显子进行PCR-SSCP及DNA序列分析。结果:系谱分析发现11个杂合子及1个纯合子;纯合子患儿LDLR结合功能基本正常,但其内移和降解功能只有正常人的3.6％及1.7％;DNA测序结果证实患儿第17外显子的第599和600密码子间插入一个碱基G,导致框移突变;第842密码子发生CCA→CCG的无义突变。结论:首次报道了一个新的LDLR突变位点;初步明确该突变位点对患者的影响较为显著。     

八个家族性高脂血症系谱分析

对八个家族性高脂血症家系(包括20个小家系)进行了分析。从先证者家系成员的发病率、男女发病率及连续几代的发病情况推断,高胆固醇血症,高甘油三酯血症及高胆固醇高甘油三酯血症遗传信息的传递方式是一种常染色体显性遗传。在八个家族性高脂血症家系中层于单基因者5个,其中高胆固醇血症1个,高甘油三酯血症4个,属于两种单基因在同一个体联合表现者3个。根据分离定律可予测单基因家系成员的发病机率,而两种单基因联合表现的家系成员的发病机率及其表现型则可根据自由组合定律予测。推断出的家系成员发病率与调查结果基本上一致,说明上述予测方法是合理的。关于家系成员基因型,本文首先从所测出子女及其父母的表现型推出其父母的基因型,再从父母的基因型判断子女的基因型。当一种表现型可能存在几种基因型时,则应参照血脂水平作出判断。(本文于1979.12月在湖北省遗传学会宣读)     

弹性酶治疗高脂血症疗效观察

我们在1996年以弹性酶治疗高脂血症，疗效较满意，报道如下。临床资料1病例选择：高脂血症56例，其中男性29例、女性27例；年龄30～75岁，平均59．7岁。入选血脂标准：血清总胆固醇（TC）＞598mol／L（230mg／dl），或甘油三酯（TG）≥2.2mmol／L（200mg／dl），或高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）男性≤1．04mmol／L（40mg/dl）、女性≤1.17mmol／L（45mg/dl）。纯合子家族性高胆固醇血症、急慢性肝炎、肝硬化、糖尿病、痛风、肾病综合征、甲状腺机能减退患者、孕妇及哺乳期妇女均予排除。全部病例均未用过嚷嚷类、p阻滞剂、甲状腺素、性…     

纯合子家族性高胆固醇血症患者的低密度脂蛋白受体异常

于1983～1984年在我国江苏省发现了5例纯合子家族性高胆固醇血症(FH)患者,进行了黄色瘤活检、血清脂蛋白含量和脂质含量测定,以及皮肤纤维母细胞LDL受体功能分析。5例患者均具有高胆固醇血症家族史及明显的青少年、儿童期的皮肤和肌腱黄色瘤,全部临床资料符合纯合子FH的诊断。血清脂蛋白各组分脂质含量均有异常,尤其是血清低密     

基于垂直密度梯度离心全自动血脂谱检测法的家族性高三酰甘油血症家系血脂亚组分分析

目的·分析家族性高三酰甘油血症（familial hypertriglyceridemia,FHTG）家系成员血脂亚组分的特征。方法·收集兰州大学第一医院1个符合FHTG家系诊断标准的FHTG家系,纳入该家系13位成员,根据家系成员三酰甘油（triacylglycerol,TAG）水平是否升高（≥2.26 mmol/L）分为高TAG组（n=7）和对照组（n=6）。通过面对面的调查,收集家系成员的年龄、性别、身高、体质量、体质量指数（body mass index,BMI）、腰围、生活习惯及病史等一般资料,并根据调查结果绘制家系系谱图。家系成员空腹8～12 h后,采集外周静脉血样本进行生化项目检测,并采用垂直密度梯度离心全自动血脂谱检测法（vertical auto profile,VAP）测定研究对象血清血脂亚组分,主要包括TAG、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、低密度脂蛋白[low-density lipoprotein,LDL]、极低密度脂蛋白（very-low-density lipoprotei...     

家族聚集性桥本病的遗传特征分析

桥本病 (ＨＤ)属于器官免疫的甲状腺自身免疫性疾病 ,临床常见散发。但具有明显家族聚集现象和典型遗传特征的家族性桥本病 (ＦＨＤ)文献报道较少。我们追踪调查了 3个家系 ,共计 6 7人 ,确诊患者 2 1人 ,发现该 3个家系均有明显的家族遗传特点。一、对象与方法1.对象 :调查组 6 7例家族成员。首先发现先证者 ,由先证者引导其直系和旁系各世代成员就诊而发现次级和三级患者 ,家族中≥ 2个ＨＤ患者称ＦＨＤ ;以先证者为核心 ,采用国际上通用的格式和符号绘制每个家系的患病情况分布图。采用系谱分析法确认该病患者可能的遗传方式。2 .病理检…     

报告两个不同遗传方式成骨不全症回族家系

报告二个成骨不全症回族家系。家系调查和系谱分析表明,一个家系连续三代都有发病的,26人中共有11人罹患本症,为常染色体显性遗传;另一个家系先证者的父母为姨表兄妹近亲联姻,家系中连续4代(包括先证者的7岁姐姐在内)无一人见有本症,考虑为常染色体隐性遗传。     

家族性高胆固醇血症纯合子患者低密度脂蛋白受体缺陷的研究

目的：研究家族性高胆固醇血症纯合子患者的发病机理。方法：在临床研究和家系调查的基础上, 培养患者皮肤成纤维细胞, 采用放射性配体结合受体分析技术研究其低密度脂蛋白受体。结果：患者低密度脂蛋白受体对低密度脂蛋白的高亲和性结合为正常人的７８．２％，高亲和性内移和降解则分别为正常人的３．６％和１．７％。结论：本例家族性高胆固醇血症纯合子患者的发病机制为低密度脂蛋白受体内移功能障碍。     

Analysis of low-density lipoprotein receptor gene mutations in a Chinese patient with clinically homozygous familial hypercholesterolemia

Objective To screen the point mutation of the low-density lipoprotein receptor （LDL-R） gene in Chinese familial hypercholesterolemia (FH) patients, characterize the relationship between the genotype and the phenotype and discuss the molecular pathological mechanism of FH. Methods A patient with clinical phenotype of homozygous FH and her parents were investigated for mutations in the promoter and all eighteen exons of the LDL-R gene. Screening was carried out using Touch-down PCR and direct DNA sequencing; multiple alignment analysis by DNASIS 2.5 was used to find base alteration, and the LDL-R gene mutation database was searched to identify the alteration. In addition, the apolipoprotein B gene (apo B) was screened for known mutations (R3500Q) that cause familial defective apo B100 (FDB) by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP).Results Two new heterozygous mutations in exons 4 and 9 of the LDL-R gene were identified in the proband (C122Y and T383I) as well as her parents. Both of the mutations have not been published in the LDL-R gene mutation database. No mutation of apo B100 (R3500Q) was observed. Conclusion Two new mutations (C112Y and T383I) were found in the LDL-R gene, which may result in FH and may be particularly pathogenetic genotypes in Chinese people.     

X-连锁淋巴细胞异常增生症一个中国人家系的临床和基因研究

目的 证实中国人X-连锁淋巴细胞异常增生症（XLP）发病及其遗传规律。方法 临床研究对象为先证者双亲家族三代成员共14人;回顾分析其中发病者的住院病史;现场询问无病者的生长发育史、既往史,进行体格检查,并建卡追踪。基因研究对象为先证者同胞姐姐、弟弟和双亲共4人,提取单个核淋巴细胞基因组DNA,PCR扩增获得SH2D1A基因片段,单链构象多态性分析（SSCP）检测获得发生突变的外显子片段,纯化后测序,检测基因突变情况。结果先证者及其胞兄发生伴病毒相关性噬血细胞综合征（VAHS）的致死性传染性单核细胞增多症（IM）,均于病程40d左右死亡。基因分析结果显示：先证者之胞弟SH2D1A基因cDNA第462位核苷酸C碱基突变为T碱基,形成终止密码TGA,随后临床确诊为朗格罕细胞组织细胞增多症（LCH）。先证者之母亲在SH2D1A基因同样部位为C碱基和T碱基的杂合子。先证者之父和胞姐未发现SH2D1A基因突变,他们及其家族其他成员无类似病史。结论（1）先证者及其胞兄弟可临床诊断为XLP患者。（2）先证者之胞弟可明确诊断为XLP患者,LCH可能也是XLP的一种新的临床表型。（3）先证者之母亲为突变基因的携带者。此家族XLP发病符合X性连锁隐性遗传规律。（4）本研究建立的SH2D1A基因检测分析方法可适用于我国XLP的诊治和研究。     

A novel mutation in proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 gene leads to familial hypercholesterolemia in a Chinese family

Background Familial hypercholesterolemia （FH） is an autosomal disorder associated with elevated plasma low density lipoprotein （LDL） levels leading to premature coronary heart disease （CHD）. As a result of long-term hyperlipemia, FH patients will present endarterium thickening and atherosclerosis. In the present study we scanned the related gene of a clinically diagnosed autosomal genetic hypercholesterolemia family for the possible mutations and established eukaryotic expression vector of mutation of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 （PCSK9） gene with gene recombination technique to investigate the contributions of the variation on low density lipoprotein receptor （LDL-R） metabolism and function alternation.Methods Mutation detection was conducted for LDL-R, apolipoprotein B100 （apoB100） and PCSK9 gene with nucleotide sequencing in a Chinese FH family. The full-length cDNA of wild type PCSK9 gene （WT-PCSK9） was obtained from Bel-7402. Site mutagenesis was used to establish the recombinant eukaryotic expression vector carrying pathogenic type of PCSK9 gene and the inserted fragment was sequenced. With the blank vector as control, liposome transfection method was used to transfect the Bel-7402 cells with recombinant plasmid. The expression of LDL-R mRNA was examined by RT-PCR. PCSK9 and the expression of LDL-R protein were determined by Western blotting. Results The G→T mutation at the 918 nucleotide of PCSK9 gene resulted in the substitution of the arginine by a serine at the codon 306 of exon 6. After sequencing, it was confirmed that the inserted fragment of established expression vector had correct size and sequence and the mutant was highly expressed in Bel-7402 cells. There was no significant variation in the levels of LDL-R mRNA. LDL-R mature protein was decreased by 57% after the cells were transfected by WT-PCSK9 plasmid. Mature LDL-R was significantly decreased by 12% after the cells were transfected by R306S mutant as evidenced by gray scale scanning, suggesting that the new mutant R306S can significantly decrease the expression of mature LDL-R protein.Conclusions A novel missense mutation of PCSK9 gene, R306S, was found and the eukaryotic expression vectors of mutant and wild-type of PCSK9 gene were established. There was no significant variation in the levels of LDL-R mRNA. The R306S mutation could significantly lead to the decrease of LDL-R mature protein expression, which might be the pathogenic gene of the FH family.     

EPB41基因突变导致遗传性椭圆形红细胞增多症一家系的分子诊断研究

  目的  对临床诊断为遗传性椭圆形红细胞增多症（HE）的一个家系进行遗传学病因分析。  方法  应用靶向捕获及高通量测序技术对先证者和家系中4名成员的外周血基因组DNA进行高通量测序,经过数据分析筛选可能的致病变异,同时使用生物信息学软件对变异进行功能预测,在家系中对检出的可疑致病性变异进行Sanger测序验证。同时对50例健康对照抽取外周血,进行正常人群突变位点检测。  结果  高通量测序结果显示临床表现为中度贫血的先证者和其母在EPB41基因第13外显子均存在杂合c.1215G>A（p.Trp405Ter）无义突变,为功能缺失型突变,有极强的致病性（very strong pathogenicity,PVS1）。该位点G碱基突变为A碱基,导致其编码的蛋白质链第405位的色氨酸的密码子变为终止密码子,使蛋白合成提前终止,形成截短蛋白,部分功能区域丧失。该变异在人群中极为罕见,为尚未报道的致病性突变。Sanger测序结果显示先证者外祖母亦携带这一杂合突变,且在此家系中观察到基因型和表型共分离。50例无亲缘关系的健康对照均未检测到突变。  结论  EPB41基因的c.1215G>A突变是本例HE家系的可疑致病原因。首次在中国HE家系中发现了EPB41基因致病性突变。     

一个遗传性无纤维蛋白原血症家系的基因分析

目的 对一例遗传性无纤维蛋白原血症家系进行基因分析。方法 用PCR法对该家系先证者纤维蛋白原基因FGA、FGB和FGG的所有外显子及其侧翼序列进行扩增,PCR产物纯化后直接测序,检测其基因突变。结果 先证者呈纤维蛋白原FGA基因g.1892-1899位AGTA／GTAA 4bp和g.1978-3215位1238bp复合杂合缺失。结论 纤维蛋白原FGA基因复合杂合缺失是引起该家系先证者无纤维蛋白原血症的原因。     

一个新的双重杂合突变Met306Val和Thr181Asn导致的遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症

目的 对1例遗传性凝血因子Ⅶ（FⅦ）缺乏症患者及其家系成员进行凝血因子Ⅶ（FⅦ）基因分析,揭示其发病的分子机制。方法提取先证者及其家系成员外周血基因组DNA,聚合酶链反应（PCR）法扩增FV0基因8个外显子及其侧翼序列,核苷酸序列分析检测FV0基因异常;将先证者突变序列、家系成员和100名正常人相应序列的PCR产物用限制性内切酶EC091I消化,以进一步确定基因突变位点并排除基因多态性;用蛋白质分子模型模拟软件对基因突变的分子结构病理学进行分析。结果先证者FV0基因8号外显子的10833位核苷酸发生A→G杂合突变,导致Met306Val;先证者7号外显子的9643位核苷酸发生C→A杂合突变,导致Thr181Asn。家系分析前者遗传于母亲,后者遗传于父亲,先证者胞妹为A10833G（Met306Val）杂合子。蛋白质空间构型模拟分析发现,Met306Val突变位于FⅦ分子的表面,产生空间位阻影响蛋白的结构和功能。结论FⅦ基因Met306Val和m18lAsn双重杂合突变是导致该遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症的分子机制;推测Met306Val突变改变了蛋白质分子的空间构型,从而影响FⅦ蛋白的功能。Met306Val突变是一种国际上尚未报道的新的突变类型。     

蛋白C基因复合杂合突变导致的肺栓塞及家系研究

目的了解1例肺栓塞患者及其家系成员发生蛋白C缺陷症的分子发病学机制。方法收集先证者及其家系成员的枸橼酸钠抗凝血,采用发色底物法检测PC活性(PC∶A)、蛋白S活性(FPS∶A)和抗凝血酶活性(AT∶A),采用ELISA方法检测PC抗原(PC∶Ag)水平。采用PCR方法对先证者PC基因所有9个外显子及其侧翼序列进行扩增、测序,发现突变后,对先证者家系成员的PC基因有关外显子片段进行PCR扩增和测序。结果先证者及其父亲、母亲和妹妹均为Ⅱ型PC缺陷症患者。PC基因测序结果显示先证者的PC基因分别出现了位于3号外显子第5540位碱基的G→A的杂合突变和位于第7号外显子第10230位碱基C→T的杂合突变,导致PC E29K和R147W双杂合突变。先证者父亲携带PC E29K杂合突变,而先证者母亲和妹妹均为PCR147W杂合突变的携带者。结论先证者为PC E29K和R147W基因复合杂合突变携带者,且这两种突变分别遗传自其父母。其中,PC E29K错义点突变为目前国际上尚未见报道的新突变,而PC R147W是一种已报道的常见于遗传性易栓症患者的可导致Ⅱ型PC缺乏的错义点突变。     

由ALK1基因内含子突变引起的遗传性出血性毛细血管扩张症

目的 探讨遗传性出血性毛细血管扩张症发病的分子机制。方法（1）用聚合酶链式反应-单链构像多态性分析（PCR-SSCP）寻找异常突变的外显子及其相邻剪接位点。（2）通过DNA测序确定突变的类型。（3）使用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法确定剪接方式。结果 用PCRSSCP方法发现扩增ALK1基因第4外显子及相邻的部分内含子片段有突变位点。对有突该片段,用DNA测序检测,发现第4外显子的给位剪接点相邻碱基A＞T（ⅣS4＋3a＞t）的突变,并用反向测序确认。用RT-PCR方法检测ALK1基因表达mRNA情况,电泳和测序发现第4外显子的丢失。结论 ALK1基因的ⅣS4＋3a＞1突变,导致ALK1基因表达异常,形成无功能截短蛋白,引起HHT2。     

一个遗传性抗凝血酶缺陷症家系的表型与基因突变分析

目的：对一例遗传性抗凝血酶（AT）缺陷症患者及其家系成员进行凝血指标和基因表型分析,初步探讨其分子发病机制。方法：在Stago仪器上检测家系各成员外周血的血浆AT活性（AT:A）、AT抗原（AT:Ag）等凝血指标;提取外周血DNA并测序,定位基因突变位点;利用生物信息学软件分析突变对蛋白功能的影响。结果：先证者及其外祖母、父亲、母亲和弟弟的AT:A均有不同程度降低,且AT:Ag同步下降,所有家系成员蛋白S活性（PS:A）和蛋白C活性（PC:A）指标均无明显异常,表现为I型AT缺陷症。基因分析显示：先证者SERPINC1 基因存在第1号外显子c.1A＞G杂合错义突变（p.Tyr2stop）以及第5号外显子c.1005G＞A杂合同义突变;其父亲携带c.1A＞G杂合错义突变,其外婆、母亲和弟弟携带c.1005G＞A杂合同义突变。保守性分析显示,Tyr2在同源物种间高度保守;MutationTaster、PolyPhen-2和LRT三个在线生物信息学软件分析均显示p.Tyr2stop突变为“致病的、有害的”;蛋白模型分析显示,p.Tyr2stop突变会引起AT基因翻译过程提前终止,产生截短蛋白。结论：该先证者及家系成员AT:A和AT:Ag不同程度降低与SERPINC1 基因上存在的c.1A＞G杂合错义突变和c.1005G＞A杂合同义突变有关。     

A novel CFTR mutation found in a Chinese patient with cystic fibrosis

Background Cystic fibrosis (CF) is rare in Chinese. We investigated the mutations in the gene of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator ( CFTR ) in a Chinese CF patient and reviewed the clinical features, gene mutations in Chinese CF cases. Methods Blood samples were collected from a previously reported CF girl and her parents. The 24 coding exons of CFTR of the proband were amplified and sequenced. Results A Chinese girl of 16 years old was diagnosed as CF at the age of 14. She had recurrent productive cough with bronchiectasis in bilateral upper lobes, parasinusitis and otitis media, but without pancreatic involvement. Her sweat chloride was (108.9 ±3.3) mmol/L. A heterozygous novel missense mutation of 699 C → A which results in the amino acid change of N189K was identified in exon 5. In addition, a heterozygous 3821-3823 delT mutation in exon 19 was found in CFTR . The mutation 699C → A was inherited from her father, and the 3821-3823delT mutation was from her mother. Twenty patients with CF in Chinese reported from 1974 to 2004 were also reviewed. DelF508 mutation was not found in the nine cases whose CFTR mutations were analyzed. Conclusions The CF proband carries two heterozygous mutations (699C → A and 3821-3823delT) in CFTR . 699C → A mutation is a novel mutation which is not reported previously. Review of reported Chinese cases suggests that the genotype of Chinese CF may be different from those of white cases. More studies are needed to understand the spectra of CFTR and clinical CF features in Chinese.