鼻咽癌核酸适配子的筛选及鉴定

目的利用指数富集的配套系统进化技术(SELEX)筛选人类疱疹病毒(EB病毒)阳性鼻咽癌细胞核酸适配子。方法体外合成长度为78个核苷酸的随机DNA文库,通过SELEX技术,以正常鼻咽上皮细胞为靶标进行消减筛选,以EB病毒阳性低分化鼻咽癌细胞为靶标进行10轮的筛选,克隆、测序,并对适配子进行鉴定。结果流式细胞仪检测亚文库与靶细胞的结合能力随着筛选轮数的增加荧光强度增强。聚类分析显示,适配子可以分为3个家族,1、2家族具有保守序列。结论初步建立EB病毒阳性鼻咽癌细胞适配子库,筛选到具有亲和力和特异性的核酸适配子。     

SELEX技术及寡核苷酸适配体的近期研究进展

指数富集的配体系统进化（SELEX）技术是一类具备蓬勃发展前景的体外筛选技术,在生物学、药学及化学领域已引起广泛关注。本文即针对2004年以来SELEX技术的发展特点,主要介绍两类新型SELEX策略,即毛细管电泳-SELEX和针对复杂靶标的SELEX方法,并简要总结了寡核苷酸适配体在生物医学和药学相关方面的最新应用进展。     

利用细胞-指数式富集的配体系统进化技术筛选肿瘤细胞DNA适配子

目的建立一种通用的细胞-指数式富集的配体系统进化（Cell—SELEX）技术平台,用于筛选特异性结合于肿瘤细胞的DNA适配子。方法采用PCR法建立随机双链DNA（dsDNA）寡核苷酸文库,用卵白素包被的琼脂糖珠从dsDNA库分离单链DNA（ssDNA）文库;以体外培养的肿瘤细胞作为正筛选的靶标,以相同组织来源的正常对照细胞作为负筛选的靶标,消减法进行Cell—SELEX筛选和PCR扩增以获取DNA适配子;流式细胞仪监测适配子的富集效率（亲和力）;采用常规分子生物学技术进行适西亡子的克隆、测序和序列分析。结果成功建立了ssDNA库,经过12轮Cell—SELEX筛选,获得了特异性结合于肿熘细胞的DNA适配子;挑选120个阳性克隆送测序,鉴定出21个适配子,采用NCBI网站提供的B]astn程序进行精确比对末发脱相似序列。结论本实验建立的技术平台可在较短时间内获取特异性结合于特定肿瘤细胞的DNA适配子。     

核酸适配体筛选方法研究进展

指数富集的配基数系统进化(SELEX)技术的基本过程是用化学方法合成一个单链寡核苷酸库,将之于与靶标物质混合,寡核苷酸链与靶标物质结合形成复合物,去除未结合的核酸链后,再将结合的核酸分子与靶标物质分离,以此寡核苷酸分子为模板进行PCR扩增,用其产物进行下一个循环的筛选。经过数次循环,即可得到能与靶标物质高亲和力高特异性结合的核酸适配体分子。本文综述了SELEX技术筛选核酸适配体技术的一些研究进展。     

噬菌体呈现技术在生物活体组织器官筛选中的应用

噬菌体呈现技术近年来得到了广泛的应用,靶标也由纯化的抗原、抗体等发展到病毒、活细胞,尤其是以正常活体组织器官及肿瘤组织血管作为靶标的亲和筛选,在动物体内的研究取得了可喜的进展,不久的将来有望进入临床辅助诊断及靶向化疗。     

核酸适体（aptamer）：一种具有潜力的肿瘤药物“靶向配基”

核酸适体（aptamer）可描述为化学抗体,是用配体指数富集法系统进化（SELEX）技术筛选获得的单链DNA或RNA,借其自身形成的空间结构与靶标分子特异性识别,具有靶分子广、亲和力高、特异性强、易改造修饰等特点。本文简述核酸适体作为肿瘤药物＂靶向配基＂的应用研究。     

核酸适配子在疾病诊断研究中的应用

核酸适配子是通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)
技术从单链随机寡核苷酸文库中筛选得到的单链寡核苷酸配体，其与靶标的结合具有高特异性及高亲和力等优点，
使其能广泛地应用于疾病诊断研究。适配子在生化检测、新肿瘤标志物发现、分子成像、病原微生物检测等领域的
研究应用中均有报道，并显示出良好的应用前景。     

重组 PBP2a 转肽酶区蛋白核酸适配体的筛选及鉴定

目的：筛选和鉴定重组青霉素结合蛋白2a（PBP2a）转肽酶区蛋白的核酸适配体。方法利用指数富集的配体系统进化技术（SELEX）,以重组 PBP2a 转肽酶区蛋白为靶标,从单链 DNA 文库中筛选能与之特异性结合的核酸适配体。筛选产物克隆测序后,对其进行结构分析和特性鉴定。结果经过11轮筛选,单链 DNA 文库与靶标蛋白的亲和力趋向稳定,将第8、10轮筛选产物克隆测序,对获得的40个适配体进行分析,一级结构分析显示40个适配体并无共同的保守序列,二级结构预测分析表明,其可分为3个家族。其中13号适配体与重组 PBP2a 蛋白亲和力最高,并能与之特异性结合。结论利用 SELEX 技术成功筛选出特异性结合重组 PBP2a 转肽酶区蛋白的核酸适配体,为探索耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的诊疗新途径奠定基础。     

乳腺癌分子成像靶标及成像技术的临床应用进展

随着分子成像技术的快速发展,越来越多的成像靶标被开发应用.乳腺癌的分子成像靶标大致可分为受体和代谢过程两大类.受体包括雌激素受体、孕激素受体、表皮生长因子受体、血管内皮生长因子受体、整合素受体等.此外,肿瘤特征也是开发肿瘤特异性示踪剂的对象.与正常细胞相比,肿瘤细胞的葡萄糖和胆碱代谢及DNA合成均增加.逃避细胞凋亡也是肿瘤细胞恶性生长的基本生理改变之一.这些特异的代谢过程也与受体一样可作为分子成像的靶标.本文就乳腺癌的特异分子靶标及各类靶标对应的成像方法的研究进展作一综述.     

琼脂磁珠消减SELEX技术筛选HIV gp41抗原适配体

目的 通过消减SELEX技术筛选得到高特异性、强亲和力的HIV gp41抗原适配体,为HIV的早期诊断提供了新的检测技术.方法 以琼脂磁珠为载体,HIV gp41抗原为靶标分子,利用消减SELEX技术和实时定量-PCR技术,筛选得到HIV gp41抗原适配体.结果 通过6轮筛选,筛选得到的次级ssDNA库通过PCR扩增得到dsDNA,dsDNA与pMDTM 18载体链接,进行克隆、测序,获得4条HIV gp41抗原适配体.获得的4条适配体亲和力(Kd)均在纳摩尔水平,其中15号适配体的亲和力最强,特异性检测表明筛选得到的适配体几乎只与HIV gp41抗原结合,不与其他非特异性蛋白结合.结论 利用随机单链寡核苷酸文库成功获得与HIV gp41抗原特异性结合的适配体,所获得的适配体具有拮抗HIV gp41抗原的能力.     

新生大鼠上丘脑组织培养研究

目的探讨新生大鼠上丘脑组织培养方法,并对其在培养过程中的变化进行观察。方法取出生4 d的SD乳鼠上丘脑组织,分别在鼠尾胶原玻片、多聚赖氨酸玻片和B iocoat培养小室上进行组织培养,使用相差显微镜动态观察组织块生长情况。48 h后观察组织块贴壁率,在培养5 d时使用图像分析仪观察细胞迁移情况,测量最大迁移距离。使用乳酸脱氢酶试剂盒,测量组织培养液中乳酸脱氢酶活性的动态变化。常规HE染色形态学观察,并使用透射电镜观察组织块超微结构。结果与传统的培养载体相比,上丘脑组织在B iocoat培养小室上进行培养可以获得较高的组织贴壁率和细胞迁移距离。上丘脑组织在接种后31~5 d,其培养液中乳酸脱氢酶活性保持在较低水平。培养早期上丘脑组织块边缘出现细胞突起,胶质细胞迁移,随着培养时间延长,细胞出现凋亡,组织结构破坏。结论B iocoat培养小室是进行新生大鼠上丘脑组织培养的理想载体,接种3 d后组织生长趋于旺盛,而在2周后多数组织的生长逐渐衰退。     

核酸适配体技术在海洋生物毒素检测中的应用

核酸适配体是利用指数富集的配基系统进化技术体外筛选得到的单链DNA或RNA片段,能高亲和、高特异性地结合氨基酸、糖类、蛋白质、细胞、细菌和病毒等多种目标物质,具有操作简单、灵敏度高和检测成本低等优点.在海洋生物毒素的检测和预防中,核酸适配体技术已显示出巨大的潜力.本文概述了核酸适配体技术的基本原理、目前的应用现状及优势,分析了海洋生物毒素分子的特点及现有检测手段的局限,并对核酸适配体技术在海洋生物毒素检测中的应用前景进行了展望.     

Cell-SELEX技术在肿瘤诊治中的应用进展

 Aptamers,selected by an in vitro process known as systematic evolution of ligands by exponential enrichment (SELEX),are single stranded DNA or RNA oligonucleotides with high selectivity,affinity and stability.Aptamers that can bind whole cells,especially cancer cells,are generated by a method called cell SELEX.Compared with antibodies,aptamers possess many advantages,including wide range of targets,quick and reproducible synthesis,nontoxicity and lack of immunogenicity,easy and controllable modification to fulfill the recognition of cancer cells.Aptamers conjugated nanomaterials gain more flexibility as cancer cell targeting tools.In this review,we discuss the application of cell-SELEX based aptamers in novel cancer biomarkers identification,cancer imaging,cancer therapy and enhanced targeting when conjugated with nanomaterials.     

适配子治疗获得性免疫缺陷综合征的研究进展

适配子(aptamer)是在体外人工合成的具有特定3级结构的单链DNA或RNA分子,从随机寡核苷酸文库中通过配体指数富集系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential Enrichment,SELEX)筛选出来,能与靶分子以高亲和力、高特异性结合。由于适配子和靶分子结合后可阻断靶分子的生物学活性,与相应抗体分子相比,适配子具有许多优越性,如分子量小、易于修饰、无免疫原性等,因而在各种疾病的治疗中具有广阔的应用前景。文中就适配子治疗人类免疫缺陷病毒1(human immunodeficiency virus 1,HIV-1)感染所致的获得性免疫缺陷综合征(acquired immune deficiency syndrome,AIDS)的研究进展作一综述,以深入研究适配子对病原体感染的治疗作用。     

揭膜法培养兔角膜内皮细胞的改进

目的探讨培养兔角膜内皮细胞的最佳方法。方法在手术显微镜下撕下兔角膜后弹力层及内皮细胞层并使之完整覆盖于盖玻片上,避免其卷曲和折叠并剪切成均匀小块,使内皮面向上置于培养瓶中进行培养。结果未加入任何促细胞分裂剂的情况下,细胞在体外生长良好,角膜内皮细胞很快自组织片迁移生长,1周后组织块周围长出细胞晕,2周内铺满瓶底,可以快速获取角膜内皮细胞。结论本法培养的内皮细胞不需用酶,具有组织片无折叠,贴壁更牢固,细胞更易移行、增殖等优点,可为角膜内皮的研究提供较多的纯内皮细胞。     

The Diagnosis of Leukemia by Tissue Culture

A shallow glass slide chamber technique has been used for the short-term tissue culture of peripheral leukocytes and marrow. Seventy-three normal persons and 105 patients with various hematologic disorders were studied. Characteristic culture patterns were observed in normal individuals and in patients with leukemia. The technique was found to be of value for distinguishing leukemia from conditions which mimic it and for defining the malignant nature of some of the myeloproliferative disorders. On the basis of repeated studies in 22 patients with leukemia while under treatment, the peripheral leukocyte tissue culture technique was not found to be a sensitive enough guide for the control of therapy.     

四种立体放射治疗技术的比较

目的：对二种不同形状的肿瘤靶区设野计算，比较四种立体放射治疗技术的剂量适形特点和正常组织受照剂量。方法：患者经过CT模拟定位后，行三维治疗计划勾画和计算。二个靶区，一个小而规则的肿瘤和一个大而不规则的肿瘤。用四种立体放射治疗技术对二靶区进行计算和比较：1、旋转治疗（ARC）：似传统的直线加速器的旋转治疗，用3－4个弧度；2、三维适形技术（3D）：用6个非共面固定野治疗；3、调强治疗（IMRTa):用5个共面固定野和多叶光栅调强治疗；4、IMRTb:用6个非共面固定野和多叶光栅调强治疗。IMRT由反向治疗计划系统计算。每个靶区和每种技术都经过剂量容积直方图计算。结果：对小而规则的肿瘤，四种技术的剂量适形度和正常组织的等剂量分布基本相似，IMRTa相对更加出色。对大而不规则的肿瘤，在靶区剂量适形度上IMRTb表现最好；在正常组织的高／低剂量分布上IMTRa最好。结论：与ARC和3D相比，调强技术能提高靶区剂量的适形度和减少正常组织的高／低受照剂量和范围，用立体放射技术治疗大而不规则的肿瘤靶区，调强技术可以提高治疗率。