同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞凋亡及半胱天冬酶-3表达的影响

目的：观察同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡以及半胱天冬酶-3（caspases-3）表达的影响。 方法： 采用组织贴块法体外培养人VSMCs，流式细胞术检测人VSMCs细胞凋亡，逆转录-聚合酶链反应法检测caspases-3 mRNA的表达。 结果： 体外培养的人VSMCs在终浓度为500 μmol/L Hcy的培养液中孵育0 h、6 h、12 h、24 h、48 h后的细胞凋亡率分别为2.39％±0.47％、2.45％±0.64％、7.58％±1.02％、13.37％±4.71％、17.69％±3.13％，caspases-3 mRNA与GAPDH扩增条带吸光度(A)比值分别为0.24±0.08、0.29±0.10、0.89±0.26、1.37±0.24、1.82±0.53，表明Hcy呈时间依赖性诱导人VSMCs细胞凋亡和 caspases-3 mRNA的表达上调；在终浓度为0、100、200、500、1 000 μmol/L Hcy的培养液中孵育24 h后的细胞凋亡率分别为2.68％±0.23％、2.79％±0.12％、8.45％±2.41％、13.37％±4.71％、23.75％±5.56％，表明Hcy呈浓度依赖性诱导人VSMCs细胞凋亡。 结论： Hcy诱导人VSMCs凋亡可能是由caspase-3参与的死亡信号通路介导的，诱导人VSMCs凋亡可能是Hcy致动脉粥样硬化作用的机制之一。     

一氧化氮诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡机制研究

目的:研究一氧化氮(NO)诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)凋亡的作用机制。方法:体外培养Wistar大鼠PASMC,加入NO供体硝普钠(SNP)于常氧和低氧条件下孵育12h或24h,通过流式细胞术碘化丙啶染色法观察PASMC细胞周期时段及凋亡亚二倍体峰变化,应用细胞免疫化学法检测PASMCcaspase-3和NF-κB的表达,同时行DNA断裂琼脂糖凝胶电泳。结果:SNP作用后PASMC出现剂量-依赖性促凋亡作用(P＜0.01),表现为凋亡指数与caspase-3表达的不同程度的增强。随凋亡的进展,出现PASMC凋亡核小体DNAladder,同时PASMCNF-κB阳性核表达较对照组少(P＜0.01)。结论:外源性NO诱导大鼠PASMC凋亡,caspase-3与NF-κB可能涉及PASMC凋亡的调控信号途径。     

半胱天冬酶天然抑制剂与细胞凋亡

在生物体内,细胞增殖与细胞凋亡总是处于动态平衡状态,从而保证了多细胞生物维系其结构稳定和内环境功能平衡及正常生长发育。正常的细胞凋亡可清除体内衰老的、磨损的或已完成功能的细胞,如胚胎细胞、胸腺细胞等;并能清除具有潜在危险的畸变细胞,如自身反应性淋巴细胞、突变细     

转录调节因子Ets-1在大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡中的作用

目的： 研究转录调节因子Ets-1对大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响及其可能的机制。 方法： 用定量细胞DNA片段的方法观察大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡。用Western印迹法检测磷酸化视网膜母细胞瘤（RB-P）蛋白表达。 结果： Ets-1抑制大鼠血管平滑肌细胞凋亡。反义P21WAF1/CIP1能够阻断Ets-1的抗凋亡作用，并抑制Ets-1诱导的平滑肌细胞增殖。Ets-1能够上调RB-P蛋白表达，反义P21WAF1/CIP1可以阻断Ets-1诱导的RB-P蛋白表达。 结论： 在大鼠血管平滑肌细胞中，Ets-1通过P21WAF1/CIP1旁路发挥抑制凋亡和促进增殖作用。     

bcl—2在一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的：对一氧化氮（NO）作用下血管平滑肌细胞（VSMC）中bcl-2蛋白表达的变化进行定量检测,并进一步探讨bcl-2过表达对NO诱导VSMC凋亡的影响,以确定bcl-2在NO诱导VSMC凋亡中的作用。方法以亚硝基乙酰青霉胺（SNAP）作为NO供体,将5－8代的大鼠VSMC接种于Petri培养皿中,条件培养液培养24－48h,换成含0．5mmol/LSNAP的条件培养液8－10h后,固定细胞、间接免疫荧光法检测抗原,借助粘附式细胞仪对细胞中bcl-2蛋白表达进行定量检测,通过逆转录病毒载体将bcl-2基因导入VSMC,使其过量表达,检测SNAP作用下细胞的凋亡率,并与未经转染的VSMC进行比较,结果：SNAP使得VSMC中B蛋白表达下调,而bcl-2过表达能够抑制SNAP作用下VSMC的凋亡。结论下调bcl-2表达是SNAP诱导VSMC凋亡的途径之一。     

3种钙激动剂促培养的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的：探讨不同来源的细胞内钙离子（[Ca²⁺]i）对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）介导的增殖反应的作用。方法：以培养的大鼠VSMCs为靶细胞,用血管紧张素II（Ang Ⅱ）剌激VSMCs跨膜Ca²⁺内流、三磷酸肌醇（IP₃）和雷尼丁（RY）剌激胞内Ca²⁺释放,[γ-³² P]-ATP掺入法和免疫印迹（Western blot）测MAPK活性及蛋白含量,氚-亮氨酸（[³H]-Leu）、氚-胸腺嘧啶（[³H]-TdR）掺入量作为VSMCs增殖的指标。结果：Ang Ⅱ、IP₃和RY均能显著增加VSMCs的[Ca²⁺]i浓度、MAPK活性及蛋白含量,并提高[³H]-Leu、[³H]-TdR掺入量,与对照组VSMCs相比差异显著（P<0.01）。结论：钙激动剂诱导的MAPK活性及含量的增加参与了VSMCs的增殖,VSMCs的肥大增殖与[Ca²⁺]i浓度增加有关,而与[Ca²⁺]i的来源无关。     

消斑肽加速氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞凋亡

目的：我们已经发现消斑肽能逆转平滑肌源性的泡沫细胞,阻抑C57BL/6J小鼠动脉粥样硬化斑块的形成,对已形成的斑块有消退作用。本文主要探讨消斑肽的作用机制。方法：体外培养的猪主动脉平滑肌细胞,先与15 mg/L的氧化低密度脂蛋白孵育72 h,再与0.1 mg/L消斑肽孵育24 h,应用荧光染色技术、激光共聚焦显微技术和流式细胞术,观察消斑肽对平滑肌细胞的作用。结果：氧化低密度脂蛋白能诱导血管平滑肌细胞发生凋亡;消斑肽能加速氧化低密度脂蛋白诱导的细胞凋亡。结论：综合以前的实验,消斑肽可能是通过加速斑块中细胞的凋亡发挥抗动脉粥样硬化效果。     

血管平滑肌细胞凋亡在血管再狭窄中作用的研究进展

血管平滑肌细胞构成新生内膜增生的重要部分,且在血管腔内治疗术后再狭窄的心血管疾病的发生和发展中具有重要作用。血管平滑肌细胞凋亡能有效抑制血管球囊损伤和血管旁路移植术后新生内膜增生,从而可为血管术后再狭窄提供治疗手段。     

钙敏感受体在缺氧-复氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的： 观察大鼠心肌钙敏感受体(CaSR) 在心肌缺氧/再灌注损伤时的表达情况及其介导的细胞内钙变化，以及其参与细胞凋亡的相关信号转导途径。方法： Lagendorff离体灌流方法复制心脏缺氧-复氧（anoxia-reoxygenation，A/R）模型；观察缺氧/再灌注及加入CaSR激动剂时CaSR的表达；应用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察大鼠心肌细胞正常、缺氧、缺氧/再灌注时［Ca2+］i变化；HE染色观察细胞形态学改变；TUNEL染色观察细胞凋亡； Western blotting检测心肌组织胞浆中caspase 3、caspase 9 的表达。结果： 心肌A/R组及加入CaSR激动剂时CaSR的表达明显增高，细胞内钙明显升高。HE染色发现A/R组和激动剂组损伤明显，TUNEL显示2组凋亡细胞大量存在。同时，A/R组和激动剂组胞浆中caspase 3和caspase 9的表达增加。结论： CaSR参与大鼠心肌A/R损伤时细胞内钙超载的形成，并促进A/R损伤时心肌细胞凋亡。     

虎杖甙对正常人血管平滑肌细胞内钙和膜电位的调节作用

目的和方法：观察虎杖甙（ＰＤ）对人脐带动脉平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）内游离钙、细胞膜电位的变化,以探讨ＰＤ对血管平滑肌的调节机制。用Ｆｌｕｏ－３－ＡＭ、ＤｉＢＡＣ４（３）标记培养的ＶＳＭＣ,在激光共聚焦显微镜上测定细胞内游离钙和膜电位变化。结果：给ＰＤ（０５ｍｍｏｌ／Ｌ）１０ｍｉｎ后,ＶＳＭＣ内游离钙浓度升高５６％±５６％。当ＰＤ加入前用维拉帕米和ＥＧＴＡ预处理后,则游离钙不再升高;ＥＧＴＡ和肝素预处理也抑制ＰＤ的升钙作用,而ＥＧＴＡ和普鲁卡因预处理则使细胞内钙显著升高。ＰＤ还可使ＶＳＭＣ膜电位去极化,加入钠通道阻断剂河豚毒素（２５μｍｏｌ／Ｌ）可完全阻断ＰＤ的去极化作用：加甲氰咪胍、维拉帕米、优降糖和利及丁预处理不能阻断ＰＤ去极化作用。结论：：ＰＤ可通过细胞外钙内流来增加细胞内游离钙浓度,并促进细胞外钠离子内流而导致细胞去极化     

辛伐他汀抑制胎牛血清及PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖及对抑癌基因PTEN表达的影响

目的:观察辛伐他汀(simvastatin)对血清及血小板源生长因子(PDGF-BB)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用及simvastatin对细胞周期和G₁/S周期转换重要调节基因PTEN蛋白表达的影响。方法:[³H]-胸腺嘧啶核苷酸掺入测定VSMCsDNA合成,流式细胞仪检测细胞周期情况,Western印迹杂交法检测PTEN蛋白表达。结果:Simvastatin以剂量依赖关系抑制血清及PDGF-BB诱导的VSMCs[³H]-胸腺嘧啶核苷酸掺入,使G₀/G₁期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,并上调PTEN蛋白表达,而3羟3甲戊二酰辅酶A代谢产物甲羟戊酸能抑制simvastatin上调PTEN的表达。结论:Simvastatin抑制血清及PDGF-BB诱导的VSMCs增殖阻滞细胞周期可能与上调PTEN表达有关,且simvastatin调节PTEN的表达可能通过抑制甲羟戊酸的合成而实现。     

OX-LDL及辛伐他汀对平滑肌细胞PKC活性和胞内Ca2+的影响

目的:探讨OX-LDL是否对大鼠主动脉平滑肌细胞(ASMC)蛋白激酶C(PKC)活性和胞浆内游离钙([Ca²⁺]i)水平有影响。方法:应用γ-[³²P]-ATP磷酸转移法和Fluo-3/Am荧光负载、流式细胞术分别检测PKC活性和胞内([Ca²⁺]i)水平。结果:OX-LDL呈剂量依赖方式促进ASMCPKC总活性增加,并可引起ASMC中PKC发生浆膜的转移。胞浆内[Ca²⁺]i以2个时相升高,即快速相和持续相。而辛伐他汀能明显抑制OX-LDL引起的ASMC中PKC活性的浆膜转移,并显著降低持续相胞浆内钙水平,而对快速相无影响。结论:OX-LDL能引起ASMC内信号通路PKC及[Ca²⁺]i的动态变化,二者密切相关。     

牛磺酸减轻β-甘油磷酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化氧化应激在反流物所致食管粘膜损伤中的作用

目的：观察牛磺酸对钙化的形成及逆转作用的影响，探讨牛磺酸在血管钙化发生中的作用。方法：利用β-甘油磷酸制备钙化血管平滑肌细胞（VSMCs），测定细胞钙含量、碱性磷酸酶活性、[⁴⁵Ca]沉积及[³H]-胸腺嘧啶。结果：与对照组相比，钙化细胞的钙含量、ALP活性和[⁴⁵Ca]沉积均明显升高（P<0.05），而牛磺酸与β-甘油磷酸同时孵育呈剂量依赖性地抑制钙化发生。在牛磺酸逆转实验中，钙化细胞的钙含量、ALP活性和[⁴⁵Ca]沉积均较换液前明显降低（P<0.01）；且牛磺酸呈剂量依赖性地逆转已钙化细胞。与对照组相比，钙化细胞的细胞数量和[³H]-TdR掺入量增加（P<0.01），牛磺酸早期干预组显著抑制钙化细胞的增殖，但牛磺酸对已钙化的细胞,增殖抑制效应不明显。结论：牛磺酸可抑制细胞钙化形成且能逆转已形成钙化。     

苯丙氨酸对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞内钙的影响

目的 探索苯丙氨酸对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞内钙的影响，方法 将ＳＨＲ和ＷＫＹ的血管平滑肌细胞在不同浓度苯丙酸培养液中培养一定时间后，加入（＾４５ＣａＣｌ２）温育一定时间后，测定进入细胞内（＾４５Ｃａ＾２＋）的量；而后将在不同浓度苯丙氨酸培养液中培养一定时间后的ＳＨＲ和ＷＫＹ的血管平滑肌细胞同ＰＳＳ液温育，采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光指示剂测定不同浓度苯丙氨酸对细胞内游离Ｃａ＾２＋的影响。结果     

氟伐他汀抑制大鼠血管平滑肌细胞迁移的机制

目的:研究氟伐他汀抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移的可能机制。方法:采用体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞;用特异性单克隆磷酸化热休克蛋白27(phospho-HSP27)抗体的Western blotting检测HSP27的活性;用FITC-鬼笔环肽标记F-actin并在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架的形态变化;采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验。结果:AngⅡ和PDGF-BB呈浓度依赖性诱导VSMCs的HSP27磷酸化,使VSMCs内F-actin数量明显增加,纵向平行排列,形成应力纤维丝,并促进细胞迁移。100μmol/L HSP27阻断剂槲皮素可阻抑AngⅡ、PDGF-BB刺激VSMCs后产生的应力纤维丝形成,对AngⅡ、PDGF-BB诱导的VSMCs迁移的抑制率分别为55.3%和53.6%,P0.01。氟伐他汀抑制AngⅡ和PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化,并有量效关系,抑制作用在10-5mol/L时最显著,最大抑制率分别为42.1%和58.5%,P0.01。结论:氟伐他汀可能通过抑制HSP27磷酸化影响VSMCs的迁移。     

金属硫蛋白抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:研究金属硫蛋白(MT)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖的影响及其作用机制。方法:以[³H]-TdR掺入法测定VSMCs增殖程度,免疫沉淀法测定VSMCs内丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性,[¹⁰⁹Cd]-血红蛋白饱和法测定MT含量,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,NADH氧化法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。结果:Hcy(10^-6-10^-4mmol/L)呈浓度依赖性的刺激培养大鼠VSMCs[³H]-TdR掺入,0.1mmol/LHcy刺激[³H]-TdR掺入比对照组高4.2倍(P＜0.01)。Hcy亦呈浓度依赖性地激活VSMCsMAPK活性、增加细胞MDA的生成和LDH的漏出(P均<0.01)。单独MT孵育,对VSMCs的上述指标均无明显影响(P＞0.05)。但MT(10^-6-10^-4mol/L)呈浓度依赖性抑制100μmol/LHcy的促增殖效应(r=0.98,P＜0.01)。MT显著抑制Hcy对VSMCs的MAPK活性、MDA生成和LDH漏出的激活作用(均P＜0.01)。以0.5mmol/LZnCl₂预孵育6h后,VSMCsMT含量比非诱导细胞高5.7倍(P＜0.01),这种内源性MT高表达的细胞,显著抵抗Hcy刺激的-TdR掺入和MAPK激活;抑制Hcy的促细胞MDA生成与LDH漏出效应(均P＜0.01)。结论:MT能有效抑制Hcy促大鼠VMSCs增殖作用,其机制可能与MT拮抗Hcy对MAPK的激活和其抗氧化作用有关。     

成年合成型血管平滑肌细胞的研究进展

The intermediate phenotype of vascular smooth muscle cell in adult is the dedifferentiation state returned from the high differentiation state , appeared on the damaged blood vessels. It is regulated by many factors. Its distribution, the characteristics of morphology and structure, the regulated transform factors and the molecular biological mechanism are introduced, and its functional significance and the role in vascular diseases are also discussed in this article.     

肾上腺髓质素对尾加压素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察肾上腺髓质素(ADM)对尾加压素Ⅱ(UⅡ)刺激的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:贴块法培养大鼠胸主动脉VSMC;[³H]-胸腺嘧啶([³H]-TdR)掺入测定反映VSMCDNA合成;[γ-³²P]-ATP标记的同位素法测定丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性。结果:UⅡ(10^-8mol/L)显著促进VSMC-TdR掺入和激活MAPK比对照组分别高38%(P＜0.05)和260%(P＜0.01)。UⅡ加10^-10、10^-9、10^-8mol/LADM组VSMC-TdR掺入分别较UⅡ组低7%(P＞0.05)、32%(P＜0.05)和41%(P＜0.01)。MAPK活性分别低24%(P＞0.05)、32%(P＜0.05)和36%(P＜0.05)。结论:肾上腺髓质素抑制UⅡ诱导的VSMC增殖,可能与其抑制MAPK活性有关。