脐血CD_3AK细胞的制备、生物活性测定及临床应用初探

 目的　研究用脐血单个核细胞制备CD3 AK细胞的抗肿瘤作用 ,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标。方法　分离脐血单个核细胞 ,分别用IL 2和IL 2 +CD3 Ab诱导LAK和CD3AK细胞 ,并测其扩增数量和对K5 6 2细胞的杀伤活性 ;测定肿瘤患者用CD3 AK细胞治疗前后外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性。结果　脐血LAK细胞和脐血CD3 AK细胞均于培养后第 11天时扩增倍数最高 ,分别是培养前的 18倍、2 4倍 ,对K5 6 2的杀伤活性分别是培养前的 2 .6倍和 3.2倍 ;肿瘤患者输注CD3 AK细胞一疗程后 ,其PBMC的NK杀伤活性由 6 2 %升高到 82 % ,平均升高 32 %。结论　 (1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3 AK细胞良好的前体细胞。 (2 )LAK和CD3 AK细胞的数量和杀伤能力在培养的第 11天时达高峰 ,而且CD3 AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞。 (3)CD3 AK细胞输注能明显提高肿瘤患者PBMC的NK活性。 (4 )肿瘤病人PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅲ CD3AK与常规LAK细胞的比较

抗CD3单抗激活的杀伤细胞(Anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cells.CD3AK)是用抗CD3单抗(Anti-monoclonal antibody,Anti-CD3 mAb)激活的一类杀伤细胞,具有较强的增殖能力和细胞毒活性。在CD3AK诱生扩增过程中除抗CD3单抗外也需要rIL-2作为生长因子,这就提出一个问题:用抗CD3单抗和rIL-2诱生扩增的CD3AK与单用rIL-2诱生扩增的LAK有什么区别。本文比较了抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增的CD3AK与常规LAK细胞在增殖动力学,细胞毒活性及表型特征上的差别,探讨了这些差别的发生机制及可能的理论意义。     

脐血CD3AK细胞治疗恶性肿瘤的临床应用研究

目的:研究用脐血单个核细胞制备CD3AK细胞的抗肿瘤作用,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标.方法:分离脐血单个核细胞,分别用IL-2和IL-2 CD3Ab诱导LAK和CD3AK细胞,并测其扩增数量和对K562细胞的杀伤活性;测定肿瘤患者用CD3AK细胞治疗前后外周血T淋巴细胞亚群绝对计数的变化情况和外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性.结果:脐血LAK细胞和脐血CD3AK细胞均于培养后11天时扩增倍数最高,分别是培养前的18倍、24倍,对K562的杀伤活性分别是培养前的2.6倍和3.2倍;肿瘤患者输注CD3AK细胞一疗程后,其外周血T淋巴细胞亚群绝对计数有明显升高:总T升高66.0%,Th升高68.0%,Ts升高58.0%;其PBMC的NK杀伤活性由63.0%升高到81.0%,平均升高28.0%.结论:1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3AK细胞良好的前体细胞.2)LAK和CD3AK细胞的数量和杀伤能力在培养的11天时达高峰,而且CD3AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞.3)CD3AK细胞输注能明显提高肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群绝对计数和PBMC的NK活性.4)肿瘤患者的外周血T淋巴细胞计数和PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数.     

CD3AK细胞的诱导及其体外抗肿瘤活性的实验研究

本研究采用抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)辅以少量的基因重组人白细胞介素2(rIL-2)和植物血凝素(PHA)诱导外周血淋巴细胞,成功地研制出具有抗肿瘤活性的CD3McAb激活的杀伤细胞(anti-CD3monoclonal antibody activated killer cells)简称CD3AK细胞.结果表明,微量的CD3McAb辅以少量的rIL-2和PHA就能诱导和大量扩增CD3AK细胞,30ng/ml的CD3McAb就能激活CD3AK细胞,而且激活作用为一次性完成,并能保持至少16天的增殖生长趋势;当CD3McAb浓度增加到100ng/ml时,细胞扩增倍数为27±3.67,与LAK细胞扩增倍数相接近;当CD3McAb浓度提高到300ng/ml时,CD3AK细胞的扩增倍数为192±9.36明显高于LAK细胞扩增倍数28±6.13(P<0.05);当CD3McAb浓度提高到500ng/ml时,CD3AK细胞扩增倍数可达864±9.31倍.CD3AK细胞是以CD3~ 、CD8~ 和CD4~ 为主的异质性细胞群,CD3~ 和CD8~ 细胞百分率随培养时间延长而增加.培养至第4天的CD3AK细胞已开始具有明显的杀伤活性,并逐渐增强,至第10天达到高峰,随后开始下降,其抗瘤效应最佳时期在     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅲ CD3AK与常规LAK细胞的比较

抗CD3单抗激活的杀伤细胞(Anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cells．CD3AK)是用抗CD3单抗(Anti-monoclonal antibody，Anti-CD3 mAb)激活的一类杀伤细胞，具有较强的增殖能力和细胞毒活性。在CD3AK诱生扩增过程中除抗CD3单抗外也需要rIL-2作为生长因子，这就提出一个问题。     

中高度恶性淋巴瘤在化疗的基础上应用CD3AK生物细胞治疗的疗效研究

CD3AK细胞是由抗CD3单克隆抗体和IL-2共同激活诱导的肿瘤细胞,具有高效激活与扩增、长期存活、低IL-2依赖性、体内外抗肿瘤活性高及低毒副反应的特点.其抗肿瘤机理:(1)直接杀伤肿瘤细胞;(2)CD3非特异性激活的淋巴细胞介导的MHL非限制性溶瘤作用;(3)CD3单抗通过识别T细胞表面的CD3/TCR复合体,促使其产生TNF和IFN等多种细胞因子而杀伤肿瘤细胞;(4)CD3诱导癌细胞程序性死亡[1,2].     

127例原发性肝癌免疫综合治疗临床研究

最近研究表明,白细胞介素_2(IL-2)在体外能够诱导产生被淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK),在适当IL-2存在条件下,这些LAK细胞能对肿瘤细胞产生强大的杀伤作用。然而IL-2附加LAK细胞治疗方案毒副作用太大,不宜用于临床。目前已有资料指出多种淋巴因子联合应用则抗肿瘤作用明显增     

可溶性结肠癌抗原与CD3mAb,IL-2联合诱导杀伤细胞的实验研究

IL-2诱导体外杀伤细胞扩增慢,高依赖IL-2,特异性差,影响了其疗效的发挥.根据报道CD3mAb与IL-2在杀伤细胞的诱导过程中有增强作用.为了获得具有高效,特异细胞毒活性的抗肿瘤效应细胞,我们采用CD3mAb、IL-2与可溶性肿瘤抗原(结肠癌抗原)联合诱导正常人外周血单个核细胞获得相对特异的杀伤细胞(TAK),并对TAK与LAK在增殖活性、杀伤活性及表型上进行了对比.     

脐血CIK细胞的体外增生及其抗肿瘤效应

 【摘要】　目的　研究脐血CIK细胞体外增生活性及对肿瘤细胞的杀伤活性，为CIK细胞在肿瘤过继免疫治疗中的应用提供实验依据。方法　脐血经密度梯度离心获得单个核细胞，以CD3单抗、重组人白细胞介素-2（rhIL-2）、重组人白细胞介素-1（rhIL-1）和重组人干扰素-γ（rhIFN-γ）为诱导剂制备多种细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）。并设只加IL-2诱导成的LAK细胞和未加细胞因子的脐血单个核细胞（CBMNC）作为对照。培养前后分别用显微镜观察细胞形态，流式细胞术测定细胞表型的改变，锥虫蓝拒染法测定细胞增生水平，四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定对肺癌细胞的杀伤活性。结果　实验发现，通过细胞因子的联合，可大量诱导出高活性的CIK细胞，CIK细胞在培养的第5天开始增生，第14天达到高峰，增生的细胞表型以CD+3 CD+56细胞为主。而LAK细胞的增生高峰出现在第7天，随后增生不明显；CBMNC表型无明显变化，增生不明显。CIK细胞针对肿瘤细胞的体外杀伤活性高于LAK细胞和CBMNC。结论　在体外细胞因子的联合作用下脐血能成功地诱导出大量的CIK细胞。脐血CIK细胞体外扩增快，杀伤活性强，对肿瘤细胞的作用优于传统的LAK细胞，为肿瘤的过继性免疫治疗提供了一个新的方向。     

人CD3AK细胞杀伤人肺腺癌细胞的形态学观察

抗CD3抗体激活的杀伤细胞(CD3AK细胞)是一种新型的免疫效应细胞，与LAK细胞相比具有广谱、较高的杀伤活性及低IL-2依赖性的特点，因而受到重视。关于其杀伤机制的研究目前尚无明确报道。本研究把体外培养中贴壁状态的人肺腺癌细胞与用抗CD3单克隆抗体激活的人外周血来源的CD3AK细胞共同培养，电镜下观察了两种细胞的相互作用和靶细胞被杀伤的过程．藉此对CD3AK细胞杀伤肿瘤细胞的机制作一探讨。     

CIK细胞的制备及检测

用细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是在CD3AK的基础上加入一些其他细胞因子激活的杀伤细胞.我们用外伤脾作CIK细胞源,与普通LAK细胞进行了实验对比,以期为临床治疗提供理论依据.结果表明,其细胞增殖率及抗肿瘤活性较LAK细胞强.应用外伤脾作CIK细胞源制备CIK细胞,     

CD3AK细胞的生物学特性及其抗肿瘤作用

CD3AK细胞是用抗T细胞表而CD3分子的单克隆抗体激活的新型杀伤细胞，在肿瘤的免疫疗法中愈来愈受到重视。本文用抗CD3单克隆抗体(北医太免疫室提供)和rIL-2(日本盐野义制药株式会社产品)共同刺激人外周血单个核细胞(PBMC)，诱导CD3AK细胞，系统地研究了其生物特性及其体外抗肿瘤活性并与LAK细胞作比较。     

白细胞介素-15与肿瘤的相关性

白细胞介素-15 (IL-15)是一种多功能的细胞因子,是T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、淋巴因子激活杀伤(LAK)细胞等细胞活化因子及诱导分泌细胞因子,有刺激造血干细胞增殖分化、增强免疫和抗肿瘤等作用.IL-15具有与白细胞介素-2(IL-2)类似的结构和功能,但许多活性作用强于IL-2,其与肿瘤的发生发展密切...     

树突状细胞与热休克处理抗原联合诱导抗肿瘤免疫的研究

目的建立体外培养与扩增脐血树突状细胞(DC)的方法,并利用DC与热休克处理的肿瘤抗原联合诱导产生一种高效特异的抗肿瘤免疫.方法用GM-CSF和IL-4联合刺激诱导脐血单个核细胞分化为DC,再用加热处理的肿瘤抗原负载,与同源的淋巴因子活化的杀伤(LAK)细胞共培养.用电镜观察DC形态,CD1a和HLA-DR试剂盒检测DC细胞表面CD1a和HLA-DR的表达情况,MTT法测定细胞杀伤活性.结果在体外,DC-LAK对同源的SPC-A-1细胞具有相对特异的杀伤作用,LAK和DC-L的作用不具有明显特异性,DC-LAK的细胞毒作用最强;加热抗原组作用明显优于未加热处理组.结论将DC与热休克处理的肿瘤抗原联合,可以诱导产生一种高效并具有相对特异性的抗肿瘤免疫活性细胞.     

白细胞介素12抗肿瘤治疗进展

白细胞介素(IL)12是由巨噬细胞等抗原提呈细胞产生的具有多种生物学活性的异二聚体细胞因子,可刺激自然杀伤(NK)细胞、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞的形成,增强机体对病原、肿瘤细胞的杀伤清除能力,诱导干扰素(INF)-γ、IL -2、IL-3、IL-8等细胞因子分泌和促进I型辅助性T细胞分化等多种生物学活性。国内外学者采用不同的治疗途径及不同的联合方案进行了大量尝试,以求获得最佳的抗肿瘤效应。     

IFN-α和IL-2联合激活的脐血对K562细胞的杀伤和净化作用研究

目的　探讨体外干扰素 α(IFN- α)联合白细胞介素 2 (IL- 2 )激活的脐血对慢性髓性白血病细胞株K5 62细胞的杀伤和净化作用。方法　采用细胞培养法和反转录聚合酶链反应法进行研究。结果　 IL- 2激活 3 d的脐血对 K5 62细胞具有显著的杀伤和净化作用 ,加用 IFN- α后这种作用得到明显增强。IL- 2单用或与 IFN- α联合对脐血 CFU- GM未见明显抑制作用。结论　 IFN- α可增强 IL- 2激活脐血对 K5 62的杀伤和净化作用。     

脐血、健康人及慢粒患者外周血来源的DC介导的抗白血病免疫效应研究

目的：观察脐血、健康人及慢性柱细胞性白血病(CML)患者外周血3种不同来源的树突状细胞(DC)及其抗白血病效应。方法：分离3种来源的单个核细胞(MNC)并在细胞因子(GM-CSF IL-4 TNF-α)作用下诱导培养DC。观察DC形态，流式细胞技术检测DC免疫表型(CD1α、CD80、CD83、HLA-DR)；将所得DC经CML细胞可溶性抗原负载后和其同源T细胞混合诱导抗原特异性CTL，MTT法检测其杀伤活性。结果：3种来源MNC在细胞因子作用下均可获得形态典型的DC，且高表达CD1α、CD80、CD83、HLA-DR，经抗原负载后的DC诱导的CTL对CML靶细胞的杀伤活性也较强。结论：脐血、健康人及CML患者外周血均为理想的DC来源；有较好的诱导CTL杀伤白血病细胞效应；应用DC瘤苗免疫治疗白血病必将成为一种崭新的肿瘤免疫治疗方法，有十分诱人的发展前景。     

IL-2和LAK细胞抗肿瘤免疫疗法的临床进展

内细胞介素-2/淋巴因子激活杀伤细胞疗法(以下简称IL-2/LAK细胞疗法)是近年来问世的以免疫调节为基础的抗肿瘤免疫疗法。这一疗法的临床研究及应用已取得了很大进展。     

CD3AK/iNOS细胞对白血病细胞体外杀伤的研究

背景与目的:LAK细胞已用于临床移植物净化。CD3AK细胞是CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞。本研究旨在经逆转录病毒介导iNOS基因转染人免疫活性细胞CD3AK建立CD3AK/iNOS细胞,并探讨其对白血病细胞株K562及其耐药株K562/ADM的杀伤作用。方法:培养PA317/pLNC-iNOS细胞获得病毒上清;CD3McAb联合小剂量的IL-2激活分离的外周血单个核细胞;含逆转录病毒颗粒的细胞培养上清感染靶细胞CD3AK细胞。测定CD3AK/iNOS、CD3AK细胞培养上清NO含量以及iNOS活性。MTT法观察CD3AK/iNOS、CD3AK对K562和K562/ADM细胞杀伤活性。结果:(1)CD3AK/iNOS、CD3AK中NO含量分别为(378.60±41.57)μmol/L,(98.07±22.31)μmol/L(P<0.001);CD3AK/iNOS、CD3AK中iNOS活性分别为(20.77±2.49)U/ml,(9.81±1.96)U/ml(P<0.001)。(2)MTT法观察CD3AK/iNOS对K562和K562/ADM杀伤活性分别为(64.85±18.13)%,(63.80±9.93)%。CD3AK杀伤活性分别为(45.66±17.46)%,(47.85±12.01)%。CD3AK/iNOS与CD3AK相比差异有显著性(P<0.05)。结论:CD3AK/iNOS分泌的NO含量、iNOS活性较CD3AK明显提高,且对K562及K562/ADM杀伤作用也更强;但CD3AK/iNOS对K562及K562/ADM杀伤作用无显著性差异。     

抗人CD3人/鼠嵌合抗体的表达及特性

将从HIT3a基因库分离克隆的功能性抗CD3轻重链可变区基因插入含有人k轻链及γ1重链恒定区基因的哺乳动物表达载体中，构建了抗CD3嵌合抗体基因,用Lipofectin将抗CD3人／鼠嵌合轻重链基因共转染SP2／0细胞表达，获得稳定传代和稳定表达抗CD3嵌合抗体的转染杂交瘤细胞株C-HIT3a，ELISA，免疫荧光和PCR实验证实嵌合抗体与原鼠CD3单抗有相同的特异性和亲和性。体外生物活性的初步分析表明嵌合抗体与鼠CD3单抗对人的PBMC细胞的增殖有相同类型的作用，高剂量抗体抑制人T细胞的增殖，低剂量显示明显的激活增殖作用，当与IL-2联合应用其激活增殖作用增加20倍。细胞毒实验表明嵌合CD3抗体或由该抗体介导的免疫活性细胞(CD3-AK)对多种肿瘤细胞有明显的杀伤活性，较单用IL-2或单用LAK细胞其杀伤活性增加25倍。